Đồ án Công nghệ LỜI MỞ ĐẦU Ngày nay, với phát triển mạnh mẽ Công nghệ sinh học, chế phẩm enzyme sản xuất nhiều sử dụng hầu hết lĩnh vực như: chế biến thực phẩm, nông nghiệp, chăn nuôi, y tế… Hàng năm lượng enzyme sản xuất giới đạt khoảng 300.000 với giá trị 500 triệu USD, phân phối lĩnh vực khác [4] Phần lớn enzyme sản xuất quy mô công nghiệp thuộc loại enzyme đơn cấu tử, xúc tác cho phản ứng phân hủy Khoảng 75% chế phẩm enzyme thủy phân sử dụng cho việc thủy phân chất tự nhiên Protease enzyme sử dụng nhiều số ngành sản xuất như: chế biến thực phẩm (đông tụ sữa làm mát, làm mềm thịt, bổ sung để làm tăng chất lượng sản phẩm sản xuất bia, xử lý phế phụ phẩm chế biến thực phẩm…), sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp… Qua nhiều năm, việc gia tăng sử dụng vi sinh vật nguồn cung cấp protease cải thiện đáng kể hiệu sản xuất sản phẩm tạo nhiều Tuy nhiên giá thành chế phẩm protease cao, hạn chế việc sử dụng rộng rãi enzyme sản xuất Các chế phẩm thu sau trình nuôi cấy sản xuất enzyme chưa phải chế phẩm có độ tinh khiết cao protein chiếm 20-30% [6] Vì vậy, việc nghiên cứu cải tiến phương pháp tách tinh chế enzyme nhằm thu chế phẩm có độ tinh khiết cao cần thiết Để tách tinh chế enzyme nói riêng protein nói chung thường có loạt phương pháp hóa-lý hóa học khác Có thể chia làm ba nhóm phương pháp sau: - Phương pháp kết tủa Trang: Đồ án Công nghệ - Phương pháp sắc ký - Phương pháp phân tách ê hai pha nước Protease phân bố thực vật, động vật, vi sinh vật Tuy nhiên nguồn enzyme vi sinh vật phong phú nhất, có hầu hết vi sinh vật vi khuẩn, nấm mốc xạ khuẩn… Có thể nói vi sinh vật nguồn nguyên liệu thích hợp để sản xuất enzyme quy mô lớn dùng công nghệ đời sống Trang: Đồ án Công nghệ Chương 1: TỔNG QUAN VỀ ENZYM PROTEASE 1.1 Tình hình nghiên cứu enzyme 1.1.1 Vấn đề nghiên cứu enzyme nước ta Hầu phản ứng hoá học thể sống cần phải có vai trò xúc tác enzyme - chất xúc tác sinh học Chính vậy, nghiên cứu enzyme thu hút quan tâm cán hoá sinh học, sinh học thực nghiệm nhiều nhà nghiên cứu lĩnh vực liên quan khác Các nghiên cứu nhằm theo hướng tách, tinh enzyme, tạo chế phẩm có độ khác nhau, nghiên cứu cấu trúc, mối liên quan cấu trúc hoạt tính sinh học enzyme, khả ứng dụng enzyme thực tế Nghiên cứu công nghệ enzyme tiến hành nhiều tác sử dụng phủ tạng lò mổ để sản xuất pancrease, pepsin, trypsin sử dụng mầm mạ để sản xuất amylase Đã có thử nghiệm công nghệ sản xuất amino acid từ nhộng tằm protease, bột protein thịt bromelain từ đọt dứa, lên men rượu enzyme cố định cột Cũng có nghiên cứu sử dụng peroxydase, cyt-P 450 chế tạo biosensor thuốc phát chất độc Trong lĩnh vực y dược, việc nghiên cứu sâu chế tác dụng số enzyme nhằm mục đích kiến tạo nên số thuốc dùng điều trị số bệnh đặc biệt tạo số chế phẩm thuốc chống suy dinh dưỡng trẻ em, đồng thời tiến hành sản xuất đại trà Đây đóng góp thiết thực kịp thời việc phòng chống suy dinh dưỡng nước ta 1.1.2 Công nghệ sản xuất enzyme giới Trong năm gần đây, giá trị thương mại enzyme công nghiệp toàn giới đạt khoảng tỷ USD, chủ yếu enzyme thủy phân (75%), protease mô êt ba nhóm enzyme lớn sử dụng công nghiệp (60%) [4] Trang: Đồ án Công nghệ 1.2 Tổng quan enzyme Protease 1.2.1 Giới thiệu chung Nhóm enzyme protease (peptit – hidrolase 3.4) xúc tác trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CO-NH-)n phân tử protein, polypeptit đến sản phẩm cuối axit amin Ngoài ra, nhiều protease có khả thuỷ phân liên kết este vận chuyển axit amin ﾧ Hình 1.1 Mô hình enzyme Protease thủy phân phân tử Protein Protease cần thiết cho sinh vật sống, đa dạng chức từ mức độ tế bào, quan đến thể nên phân bố rộng rãi nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm virus) đến thực vật (đu đủ, dứa ) động vật (gan, dày bê ) So với protease động vật thực vật, protease vi sinh vật có Trang: Đồ án Công nghệ đặc điểm khác biệt Trước hết hệ protease vi sinh vật hệ thống phức tạp bao gồm nhiều enzyme giống cấu trúc, khối lượng hình dạng phân tử nên khó tách dạng tinh thể đồng Cũng phức hệ gồm nhiều enzyme khác nên protease vi sinh vật thường có tính đặc hiệu rộng rãi cho sản phẩm thuỷ phân triệt để đa dạng Hình 1.2 Cấu trúc không gian enzyme Protease 1.2.2 Phân loại Protease Protease (peptidase) thuộc phân lớp lớp thứ (E.C.3.4) Peptidase (Protease) (E.C.3.4) Exopeptidase (E.C 3.4.11-17) Endopeptidase (E.C 3.4.21-99) Serine proteinase Aminopeptidase Cystein proteinase Carboxypeptidase Aspartic proteinase Metallo proteinase Trang: Đồ án Công nghệ Hình 1.3 Sơ đồ phân loại protease Protease phân chia thành hai loại: endopeptidase exopeptidase * Dựa vào vị trí tác động mạch polypeptide, exopeptidase phân chia thành hai loại: + Aminopeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu N tự chuỗi polypeptide để giải phóng amino acid, dipeptide tripeptide + Carboxypeptidase: xúc tác thủy phân liên kết peptide đầu C chuỗi polypeptide giải phóng amino acid dipeptide * Dựa vào động học chế xúc tác, endopeptidase chia thành bốn nhóm: + Serin proteinase: proteinase chứa nhóm –OH gốc serine trung tâm hoạt động có vai trò đặc biệt quan trọng hoạt động xúc tác enzyme Nhóm bao gồm hai nhóm nhỏ: chymotrypsin subtilisin Nhóm chymotrypsin bao gồm enzyme động vật chymotrypsin, trypsin, elastase Nhóm subtilisin bao gồm hai loại enzyme vi khuẩn subtilisin Carlsberg, subtilisin BPN Các serine proteinase thường hoạt động mạnh vùng kiềm tính thể tính đặc hiệu chất tương đối rộng + Cysteine proteinase: Các proteinase chứa nhóm –SH trung tâm hoạt động Cystein proteinase bao gồm proteinase thực vật papayin, bromelin, vài protein động vật proteinase ký sinh trùng Các cystein proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính, có tính đặc hiệu chất rộng Trang: Đồ án Công nghệ + Aspartic proteinase: Hầu hết aspartic proteinase thuộc nhóm pepsin Nhóm pepsin bao gồm enzyme tiêu hóa như: pepsin, chymosin, cathepsin, renin Các aspartic proteinase có chứa nhóm carboxyl trung tâm hoạt động thường hoạt động mạnh pH trung tính + Metallo proteinase: Metallo proteinase nhóm proteinase tìm thấy vi khuẩn, nấm mốc vi sinh vật bậc cao Các metallo proteinase thường hoạt động vùng pH trung tính hoạt độ giảm mạnh tác dụng EDTA Ngoài ra, protease phân loại cách đơn giản thành ba nhóm: - Protease acid: pH 2-4 - Protease trung tính: pH 7-8 - Protease kiềm: pH 9-11 Trang: Đồ án Công nghệ Chương 2: NGUỒN THU NHẬN ENZYM PROTEASE 2.1 Nguồn động vật: - Tụy tạng: nguồn enzyme sớm nhất, lâu dài có chứa nhiều enzyme - Dạ dày bê: Trong ngăn thứ tư dày bê có tồn enzyme thuộc nhóm Protease tên renin Enzyme từ lâu sử dụng phổ biến công nghệ phomat Renin làm biến đổi cazein thành paracazein có khả kết tủa môi trường sữa có đủ nồng độ Ca2+ Đây trình đông tụ sữa điển hình, nghiên cứu ứng dụng đầy đủ Trong thực tế nhiều chế phẩm renin bị nhiểm pepxin (trong trường hợp thu chế phẩm renin bê Khi dày bê phát triển đầy đủ có khả tiết pepxin) khả đông tụ sữa Gần có nghiên cứu sản xuất protease từ vi sinh vật có đặc tính renin loài Eudothia Parasitica Mucor Purillus 2.2 Nguồn thực vật: Có loại protease thực vật Bromelain, Papain Ficin Papain thu từ nhựa lá, thân, đu đủ (Carica papaya) Bromelain thu từ quả, chồi dứa, vỏ dứa (Pineapple plant) Các enzyme sử dụng để chống lại tượng tủa trắng bia làm lạnh (chilling proofing) kết tủa protein Những ứng dụng khác protease thực vật công nghệ làm mềm thịt mục tiêu tiêu hoá Ficin thu từ nhựa cọ (Ficus carica) Enzyme sử dụng thuỷ phân protein tự nhiên Trang: Đồ án Công nghệ Hình 2.1 Nguồn thu enzyme Protease từ thực vật 2.3 Nguồn vi sinh vật: Enzyme Protease phân bố chủ yếu vi khuẩn, nấm mốc xạ khuẩn…gồm nhiều loài thuộc Aspergillus, Bacillus, Penicillium, Clotridium, Streptomyces số số loại nấm men  Vi khuẩn Lượng protease sản xuất từ vi khuẩn ước tính vào khoảng 500 tấn, chiếm 59% lượng enzyme sử dụng [6] Protease động vật hay thực vật chứa hai loại endopeptidase exopeptidase, riêng vi khuẩn có khả sinh hai loại trên, protease vi khuẩn có tính đặc hiệu chất cao Chúng có khả phân hủy tới 80% liên kết peptide phân tử protein [6] Trong chủng vi khuẩn có khả tổng hợp mạnh protease Bacillus subtilis, B mesentericus, B thermorpoteoliticus số giống thuộc chi Clostridium Trong đó, B subtilis có khả tổng hợp protease mạnh (Nguyễn Trọng Cẩn cs, 1998) Các vi khuẩn thường tổng hợp protease hoạt động thích hợp vùng pH trung tính kiềm yếu Các protease trung tính vi khuẩn hoạt động khoảng pH hẹp (pH 5-8) có khả chịu nhiệt thấp Các protease trung tính tạo dịch thủy phân protein thực phẩm đắng so với protease động vật tăng giá trị dinh dưỡng Các protease trung tính có khả lực cao amino acid ưa béo thơm Chúng sinh nhiều B subtilis, B mesentericus, B thermorpoteoliticus số giống thuộc chi Clostridium Trang: Đồ án Công nghệ Hình 2.2 Clostridium Protease Bacillus ưa kiềm có điểm đẳng điện 11, khối lượng phân tử từ 20.000-30.000 Ổn định khoảng pH 6-12 hoạt động khoảng pH rộng 7-12 Hình 2.3 Bacillus  Nấm Nhiều loại nấm mốc có khả tổng hợp lượng lớn protease ứng dụng công nghiệp thực Trang: 10 Đồ án Công nghệ Trang: 31 Đồ án Công nghệ - Phương pháp sắc ký trao đổi ion Phương pháp sắc ký trao đổi ion dựa vào khác điện tích tổng số protein enzyme Hay nói cách khác, phương pháp dựa sở phản ứng trao đổi ion protein tan nước dung dịch đệm loãng tác nhân trao đổi ion Tác nhân (hay nguyên liệu) trao đổi ion chất nhựa có tích nhóm sinh ion chất ionit Đây chất giá trơ, không tan nước, có chất cellulose chất gel dextran có lưới phân nhánh (Sephadex, Molselect) chất nhựa polystirol Chất giá thể thường kết hợp với nhóm ion hóa Các chất trao đổi ion có chất giá cellulose, sephadex, molselect thông thường dùng để tách protein enzyme, chất trao đổi ion có chất giá polystirol (ví dụ Dowex, Amberlite) dùng để tách peptid có trọng lượng phân tử nhỏ Anionit DEAE - cellulose (diethylamino - ethyl - cellulose) dẫn xuất este cellulose.) C2H5 Trang: 32 Đồ án Công nghệ Đây chất trao đổi anion Nếu chất giá sephadex có chất trao đổi ion sephadex Đó loại DEAE - sephadex CM - sephadex Ưu điểm loại vừa tách protein enzyme kích thước điện tích tổng số protein enzyme Trường hợp CM - sephadex chất giá sephadex có gắn nhóm COO- Trang: 33 Đồ án Công nghệ Đây chất trao đổi cation Ngoài có phương pháp : - Phương pháp dùng chất hấp phụ - Phương pháp dùng chất hấp phụ đặc hiệu sinh học phương pháp sắc ký lực (affinity chromatography) 3.1.6.3 Phương pháp tách hệ hai pha nước Cơ sở kỹ thuật dựa vào phân bố khác hỗn hợp dung dịch hai pha không hòa tan vào Các hệ hai pha đặc trưng cách trộn Trang: 34 Đồ án Công nghệ hệ dung môi vào để tạo thành hai pha riêng biệt Hệ dung môi sử dụng phương pháp polymer/polymer như: polyethylene glycol (PEG) dextran polymer/muối PEG potassium phosphate, sodium sulphate, sodium phosphate, Các protein mảnh vỡ tế bào có khả hòa tan khác hai pha, phương pháp dùng cho hai trường hợp: phân tách protein khỏi mảnh vỡ tế bào phân chia enzyme suốt trình tinh protein Hệ hai pha nước xem phương pháp tốt cho việc phân tách tinh hỗn hợp, phân tách chất lỏng có mật độ khác dễ dàng phân tách chất rắn khỏi chất lỏng So với phương pháp tinh khác hệ hai pha nước có số ưu điểm như: có độ hòa tan nước hai pha lớn (70-80%), đạt độ tinh cao, hiệu suất cao, dễ dàng sử dụng quy mô lớn đặc biệt polymer tái sử dụng Sự phân tách đạt hiệu cao tùy thuộc vào thông số khối lượng phân tử điện tích đối tượng nghiên cứu, nồng độ khối lượng phân tử polymer, nhiệt độ, pH, thời gian, lực ion hỗn hợp diện loại muối đa hóa trị phosphaste sulphate Trang: 35 Đồ án Công nghệ Protease tạp chất PEG PPB ( ( (( ( Trộn Sau phân tách PEG: polyethylene glycol PPB: potassium phosphate buffer ( ( ( (( ( ( tạp chất Hình 3.9 Phương pháp tách hệ hai pha nước 3.2 Thu nhận enzyme từ hạt cốc nảy mầm Malt loại hạt hoà thảo nảy mầm điều kiện nhân tạo (nhiệt độ, độ ẩm, thời gian) xác định gọi qui tắc ủ malt Quá trình sản xuất malt bao gồm khâu sau:  Thu nhận, xử lý, làm sạch, phân loại bảo quản hạt  Rửa, sát trùng ngâm hạt  Ươm mầm ta thu malt tươi  Sấy malt tươi  Xử lý bảo quản malt khô Hoạt tính proteaza hạt ban đầu không đáng kể nảy mầm tăng lên 4÷8 lần, tăng nhanh hoạt tinh amylaza đạt cực đại vào khoảng ngày nảy mầm thứ Sự thuỷ phân protein bắt đầu tác dụng proteinaza để tạo thành albumoza, polypeptit, pepton sau tác dụng peptidaza tạo thành axit amin Tuy nhiên biến đổi thường không hoàn toàn Trang: 36 Đồ án Công nghệ điều kiện nảy mầm thường điều kiện tối thích cho hoạt động hệ enzyme proteaza hạt Tuy nhiên, nhiệt độ nẩy mầm tương đối thấp thời gian nảy mầm tương đối dài có thuỷ phân protein tương đối sâu sắc để tạo thành lượng đáng kể polypeptit axitamin Tác động diễn với nội nhũ, protein lớp ngăn cách nội nhũ với vỏ phần vỏ malt không bị biến đổi trình chế biến sau 3.3 Thu nhận enzyme protease từ thực vật 3.3.1 Họ dứa (Bromalaceae) Bao gồm tất nòi dứa trồng lấy quả, lấy sợi (kể nòi dứa dại) Các nghiên cứu nguyên liệu lấy khô nhiệt độ 400 0C giữ hoạt tính enzyme tốt so với nguyên liệu bảo quản lạnh nhiệt độ 40C  Nguyên tắc chung để thu nhận Bromelain Phế liệu dứa  làm dập  chiết lọc  ly tâm  kết tủa  ly tâm  lọc  chế phẩm kỹ thuật  sắc ký trao đổi ion  sấy thăng hoa  sản phẩm tinh khiết  Thu nhận Bromelain phương pháp nhanh sử dụng CMC CMC tẩm ướt dung dịch đệm photphat 0,05M, pH= 6,1 Cho dịch chồi dứa vào, khuấy trộn Enzyme lên bề mặt CMC Sau lấy vắt nước loại bỏ cặn bẩn bám vào CMC, rữa trôi protein enzyme đệm photphat pH= 6,5 Sau cho phần hấp thụ lần Dung dịch phần hấp thụ đệm photphat pH= 7,1, NaCl 0,5 N khuấy trộn Sau lấy vắt dung dịch đậm đặc chứa Bromelain Tiếp tục phần hấp thụ lần thứ gộp chung dịch chiết hai lần kết tủa enzyme axeton hay lạnh  Ứng dụng Thủy phân gan bò Trang: 37 Đồ án Công nghệ Làm đông sữa Sử dụng Bromelain để thu nhận chất ức chế proteaza 3.3.2 Nhựa đu đủ (Carica Papaya L) Đây loại ăn phổ biến nước nhiệt đới Từ tươi thân thu nhựa (latex) chế phẩm papain thô để từ tinh chế thành papain thương phẩm Hiện người ta tạo giống đu đủ có sản lượng mủ hoạt tính papain cao để khai thác có hiệu nguồn enzyme Papain có M= 20.700, Top= 800C, pHop= 5÷ 5,5 Bị ức chế hoạt tính H 2O2, Iodoaxetat, I2, fericianua Được hoạt hoá –CN, cystein, H2S glutation  Thu nhận papain thô: Dùng loại đu đủ non, đu đủ già (chưa chín), dùng khăn lau vỏ, lấy dao cạo nhũng đường không sâu, hứng nhựa vào cốc làm khô Kết cho thấy hoạt tính papain sau chiết tách cao để tháng  Thu nhận papain thương phẩm: Ngâm papain thô hòa tan nhựa tươi (catex) nước cất có bổ sung glyxerin để tăng độ hòa tan, lọc qua vải Kết tủa axeton lạnh với tỷ lệ 2:1 so với thể tích dịch lọc Ly tâm lạnh lấy kết tủa, sấy 45- 500C, đem nghiền thành bột  Ứng dụng: làm đông sữa, thuỷ phân protein sản xuất bột cá thực phẩm, sản xuất nước mắm ngắn ngày, làm mềm thịt Trang: 38 Đồ án Công nghệ Chương 4: ỨNG DỤNG ENZYM PROTEASE Protease sử dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp công nghiê êp thực phẩm, công nghiệp nhẹ, công nghiệp dược phẩm nông nghiệp… Trong công nghiệp chế biến thịt, protease dùng làm mềm thịt nhờ thủy phân phần protein thịt, kết làm cho thịt có độ mềm thích hợp có vị tốt Protease sử dụng để làm mềm thịt tăng hương vị thịt (ngâm thịt vào dinh dưỡng protease pH nhiệt độ xác định- phương pháp phổ biến thuận lợi nhất; Tẩm hỗn hợp làm mềm thịt (enzyme, muối, bột ngọt) Tiêm dung dịch enzyme vào thịt; tiêm dung dịch enzyme vào vật trước giết mổ) Sử dụng protease để sản xuất dịch đạm: từ Streptomyces fradiae tách chế phẩm keratineza thuỷ phân keratin có giá trị để sản xuất dịch đạm từ da, lông vũ Nếu dùng axit để thuỷ phân hoàn toàn axit amin chứa lưu huỳnh, dùng kiềm để thuỷ phân bị raxemic hoá (chuyển dạng L sang D làm giảm giá trị sinh học axit amin) Để thuỷ phân sâu sắc triệt để protein (trong nghiên cứu, chế tạo dịch truyền đạm y tế) cần dùng protease có tính đặc hiệu cao tác dụng rộng, muốn người ta thường dùng phối hợp loại protease loài: vi khuẩn, nấm mốc, thực vật với tỷ lệ tổng cộng 1- 2% khối lượng protein cần thuỷ phân Ưu điểm việc thuỷ phân protease enzyme bảo toàn vitamin nguyên liệu, không tạo sản phẩm phụ, không làm sẫm màu dịch thuỷ phân Trong chế biến thuỷ sản: Khi sản xuất nước mắm (và số loài mắm) thường thời gian chế biến thường dài nhất, hiệu suất thuỷ phân (độ đạm) lại phụ thuộc nhiều địa phương, phương pháp gài nén, nguyên liệu cá Nên quy trình sản xuất nước mắm ngắn ngày hoàn thiện sử dụng chế Trang: 39 Đồ án Công nghệ phẩm enzyme thực vật (bromelain papain) vi sinh vật để rút ngắn thời gian làm cải thiện hương vị nước mắm Tuy nhiên số tồn cần phải hoàn thiện thêm công nghệ Trong công nghiệp sữa, protease dùng sản xuất phomat nhờ hoạt tính làm đông tụ sữa chúng Protease từ số vi sinh vật A candidus, P roquerti, B mesentericus,… dùng sản xuất mát Trong công nghiệp sản xuất bánh mì, bánh quy protease làm giảm thời gian trộn, tăng độ dẻo làm nhuyễn bột, tạo độ xốp nở tốt Trong sản xuất bia, chế phẩm protease có ý nghĩa quan trọng việc làm tăng độ bền bia rút ngắn thời gian lọc Protease A oryzae dùng để thủy phân protein hạt ngũ cốc, tạo điều kiện xử lý bia tốt Trong công nghiệp da, protease sử dụng làm mềm da nhờ thủy phân phần protein da, chủ yếu collagen, thành phần làm cho da bị cứng Kết loại bỏ khỏi da chất nhớt làm cho da có độ mềm dẻo định, tính chất hoàn thiện sau thuộc da Trước đây, để làm mềm da người ta dùng protease phân lập từ quan tiêu hóa động vật Hiện nay, việc đưa protease tách từ vi khuẩn (B mesentericus, B subtilis), nấm mốc (A oryzae, A flavus) xạ khuẩn (S fradiae, S griseus, S rimosus ) vào công nghiệp thuô êc da đem lại nhiều kết chiếm vị trí quan trọng Trong công nghiêp dệt: Proteinase vi sinh vật sử dụng để làm tơ tằm, tẩy tơ nhân tạo (các sợi nhân tạo dung dịch cazein, gelatin) để sợi được bóng, dể nhuộm Protease có tác dụng thủy phân lớp protein serisin làm dính bết sợi tơ tự nhiên, làm bong tách rời loại tơ tằm, làm giảm lượng hoá chất để tẩy trắng Ngoài ra, protease ứng dụng rộng rãi nhiều ngành khác như: Trang: 40 Đồ án Công nghệ - Điều chế dịch đạm thủy phân dùng làm chất dinh dưỡng, chất tăng vị thực phẩm sản xuất số thức ăn kiêng - Protease nấm mốc vi khuẩn phối hợp với amylase tạo thành hỗn hợp enzyme dùng làm thức ăn gia súc có độ tiêu hóa cao, có ý nghĩa lớn chăn nuôi gia súc gia cầm - Điều chế môi trường dinh dưỡng vi sinh vật để sản xuất vaccine, kháng sinh,… Hình 4.1 Sản xuất thuốc - Sản xuất keo động vật, chất giặt tổng hợp để giặt tẩy chất bẩn protein, sản xuất mỹ phẩm,… Hình 4.2 Sản xuất xà phòng KẾT LUẬN Trong trình thực Trang: 41 Đồ án Công nghệ Đồ án Công nghệ 1: “Sự phân bố, thu nhận ứng dụng enzyme Protease” đạt kết sau: - Hiểu ý nghĩa,vai trò enzyme Protease sản xuất đời sống xã hội, đặc biệt tương lai công nghệ sinh học phát triển - Biết phân bố nắm số phương pháp thu nhận enzyme - Biết số nhóm vi sinh vật sản xuất enzyme Protease - Nắm vài đặc điểm sinh lý vi sinh vật Trang: 42 Đồ án Công nghệ TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Trần Xuân Ngạch (2007), Công nghệ enzym, Trường Đại Học Bách Khoa Đà Nẵng Nguyễn Trọng Cẩn, Nguyễn Thị Hiền, Đỗ Thị Giang, Trần Thị Luyến (1998), Công nghệ enzyme, Nhà xuất nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh Lương Đức Phẩm (2004), Công nghệ vi sinh vật, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Lưu Thị Nguyệt Minh(2007), “Phân tách Protease Bacillus Subtilis hệ hai pha Polyethylene glycol/ Potassium phosphate”, Đồ án tốt nghiệp Lê Xuân Phương (2001), Vi sinh vật công nghiệp, NXB Xây dựng, Hà Nội TÀI LIỆU MẠNG http://www.zuova.cz/informace/nrlpab23.php http://en.wikipedia.org/wiki/Protease 3.http://vietsciences2.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/images/xakhuan_baotu0 03.jpg 4.http://images.google.com.vn/imgres? imgurl=http://www.chf.de/eduthek/projektarbeiten/abb/waschmittelvergl http://faculty.ircc.edu/faculty/tfischer/images/transformation.jpg ﾧ Trang: 43 Đồ án Công nghệ Trang: 44 Đồ án Công nghệ Trang: 45 ... định cần thiết Chương 3: THU NHẬN VÀ LÀM SẠCH ENZYM PROTEASE TỪ VI SINH VẬT VÀ THỰC VẬT 3.1 Thu nhận làm enzyme Protease từ vi sinh vật chọn cảiyếu tạo giống Nguồn thu proteaseTuyển vi sinh vậtvàchủ... giải Phương pháp bảo quản có hiệu với nhiều nhóm vi sinh vật khác nấm sợi, nấm men, vi khuẩn, xạ khuẩn virut Đặc biệt với phương pháp bảo quản lạnh sâu nitơ lỏng phương pháp vạn Phương pháp thích... hợp phương pháp khác nhau: phương pháp biến tích chọn lọc nhờ tác dụng nhiệt độ pH môi trường, Trang: 27 Đồ án Công nghệ phương pháp kết tủa phân đoạn muối trung tính dung môi hữu cơ, phương pháp