ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM LÊ THỊ THANH HUYỀN ẢNH HƯỞNG CỦA 2,4 – D VÀ HORMONE FSH ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU Ở PHÔI GÀ VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO MẦM TINH HOÀN GÀ LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN - 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM LÊ THỊ THANH HUYỀN ẢNH HƯỞNG CỦA 2,4 – D VÀ HORMONE FSH ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU Ở PHÔI GÀ VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO MẦM TINH HOÀN GÀ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS TỪ QUANG TÂN THÁI NGUYÊN - 2012 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn2 i LỜI CẢM ƠN Sau trình học tập nghiên cứu, với giảng dạy bảo tận tình thầy cô giáo, đến hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Ban giám hiệu, khoa Sau đại học, khoa Sinh-KTNN trường Đại học Sư phạm – Đại học Thái Nguyên Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Từ Quang Tân trực tiếp hướng dẫn đưa nhiều ý kiến quý báu cho suốt trình thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn cán thuộc Phòng phân tích sinh hóa Phòng khám Đa khoa Trung tâm Thái Nguyên, Phòng thí nghiệm Sinh lý người động vật - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên, Phòng thí nghiệm Sinh lý người động vật - Viện Khoa học động vật - Đại học Chiết Giang, Trung Quốc Công ty TNHH Tribeco miền Bắc – nơi công tác - tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn tới cha mẹ, người thân gia đình toàn thể bạn bè, đồng nghiệp động viên, giúp đỡ vật chất tinh thần để hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Tác giả Lê Thị Thanh Huyền Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn3 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả Lê Thị Thanh Huyền Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn4 iii NHỮNG TỪ VIẾT TẮT VÀ KÝ HIỆU Endocrine Disrupting Chemicals EDCs 2,4 – Dichlorophenoxy acetic acid 2,4 – D Hemoglobin Hb Kilodalton kDa Follicle-stimulating hormone FSH Testosteron T 3-(4,5-dimethylthazol-2-yl)-2,5- MTT diphenyl tetrazolium bromide International Unit IU Diaminobenzidine DAB 10 Insulin – Transferrin - Selenite ITS 11 Proliferating Cell Nuclear Antigen PCNA 12 Fetal calf serum (huyết bê) FCS 13 Albumin/Globulin A/G 14 Phosphate Buffered Saline PBS 15 Tris-Buffer-Saline TBS 16 ER Estrogen Receptor 17 IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry Nomenclature Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn5 iv DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1 Ảnh hưởng dung dịch nuôi cấy đến khả sinh sản tế bào tinh hoàn……………………………………………… 33 Bảng 3.2 Ảnh hưởng 2,4-D đến số lượng hồng cầu, bạch cầu hàm lượng huyết sắc tố máu phôi gà…………………………………………… 35 Bảng 3.3 Ảnh hưởng 2,4-D đến hàm lượng protein huyết tiểu phần protein huyết thanh……………………………………… 36 Bảng 3.4 Ảnh hưởng 2,4-D nồng độ khác đến hoạt tính khả sinh sản tế bào………………………………………………… 38 Bảng 3.5 Ảnh hưởng FSH đến số lượng hồng cầu, bạch cầu hàm lượng huyết sắc tố máu phôi gà…………………………………………… 40 Bảng 3.6 Ảnh hưởng FSH đến hàm lượng protein tiểu phần protein huyết 41 Bảng 3.7 Ảnh hưởng FSH đến khả sinh sản tế bào 42 Bảng 3.8 Số lượng tế bào/mm2 bổ sung T T + FSH vào môi trường nuôi cấy 44 Bảng 3.9 Chỉ số PCNA (%) bổ sung T T + FSH vào môi trường nuôi cấy 46 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cấu trúc hóa học 2,4-D………………………………………… 13 Hình 2.4 Phương pháp đếm hồng cầu bạch cầu…………………………… 28 Hình 3.1 Đặc điểm hình thái tế bào tinh hoàn sau 48 nuôi cấy……… 41 Hình 3.2 Chỉ số PCNA tế bào tinh hoàn phôi gà sau 48 nuôi cấy…… 43 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn6 v DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ 3.1 Ảnh hưởng dung dịch nuôi cấy khác đến hoạt tính khả sinh sản tế bào tinh hoàn 33 Biểu đồ 3.2 Ảnh hưởng nồng độ 2,4-D đến khả sinh sản hoạt tính tế bào tinh hoàn 39 Biểu đồ 3.3 Ảnh hưởng FSH đến khả sinh sản tế bào sau 48 nuôi cấy 42 Biểu đồ 3.4 Tác động cộng gộp T FSH (0,5 IU/ml) đến khả sinh sản tế bào 45 Biểu đồ 3.5 Tác động cộng gộp T FSH (0,5 IU/ml) đến số PCNA tế bào tinh hoàn phôi gà 47 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn7 vi MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1 ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .2 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TÍNH CHẤT LÝ, HÓA HỌC VÀ CHỨC NĂNG CHÍNH CỦA MÁU 1.1.1 Tính chất lý học, chức thành phần máu 1.1.2 Tính chất sinh hóa học máu 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẤT GÂY RỐI LOẠN NỘI TIẾT .10 1.2.1 Khái niệm chất gây rối loạn nội tiết 10 1.2.2 Nguồn gốc nồng độ gây hại chất gây rối loạn nội tiết 10 1.2.3 Cơ chế tác động chất gây rối loạn nội tiết 11 1.3 CHẤT GÂY RỐI LOẠN NỘI TIẾT 2,4-D 11 1.3.1 Lịch sử phát 2,4-D 11 1.3.2 Đặc điểm hóa học 2,4-D 12 1.3.3 Ảnh hưởng 2,4-D đến thực vật, môi trường sức khỏe người 13 1.4 TỔNG QUAN VỀ HORMONE FSH VÀ TESTOSTERON .15 1.4.1 Tổng quan hormone 15 1.4.2 Ảnh hưởng kích tố setoid đến phát triển quan sinh dục 17 1.4.3 Thụ thể kích tố điều tiết trình phát triển tuyến sinh dục 18 1.4.4 Hormone nội tiết FSH 19 1.4.5 Hormone testosterone 20 1.5 VÀI NÉT VỀ SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA TUYẾN SINH DỤC 20 1.5.1 Trục quan hệ vùng đồi – tuyến yên – tuyến sinh dục 20 1.5.2 Enzyme điều khiển tuyến sinh dục 21 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn8 vii 1.6 CẤU TẠO VI THỂ TINH HOÀN GÀ 22 1.7 TỔNG QUAN VỀ TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU THUỘC LĨNH VỰC CỦA ĐỀ TÀI 23 1.7.1 Tình hình nghiên cứu giới 23 1.7.2 Tình hình nghiên cứu nước 24 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 26 2.2 ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 26 2.3 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 26 2.3.1 Thiết bị 26 2.3.2 Hóa chất 26 2.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.4.1 Nghiên cứu tiêu sinh lý, sinh hóa máu 27 2.4.2 Phương pháp tách tế bào tinh hoàn 31 2.4.3 Phương pháp nuôi cấy tế bào 31 2.4.4 Phương pháp hóa miễn dịch PCNA 32 2.4.5 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC DUNG DỊCH NUÔI CẤY KHÁC NHAU ĐẾN SINH SẢN CỦA TẾ BÀO TINH HOÀN 33 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA 2,4-D ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO TINH HOÀN 35 3.2.1 Ảnh hưởng 2,4-D đến tiêu sinh lý máu 35 3.2.2 Ảnh hưởng 2,4-D đến tiêu sinh hóa máu 36 3.2.3.Ảnh hưởng 2,4-D đến sinh sản hoạt tính tế bào mầm tinh hoàn 38 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE FSH ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO MẦM TINH HOÀN .39 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn9 viii 3.3.1 Ảnh hưởng hormone FSH đến tiêu sinh lý máu 39 3.3.2 Ảnh hưởng FSH đến tiêu sinh hóa máu 40 3.3.3 Ảnh hưởng FSH đến khả sinh sản tế bào mầm tinh hoàn 42 3.4 TÁC DỤNG CỦA TESTOSTERON VÀ FSH ĐẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA TẾ BÀO MẦM 43 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn10 data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read ... TÁC D NG VÀ ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC DUNG D CH NUÔI CẤY KHÁC NHAU ĐẾN SINH SẢN CỦA TẾ BÀO TINH HOÀN 33 3.2 ẢNH HƯỞNG CỦA 2, 4- D ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO TINH HOÀN... Ảnh hưởng 2, 4- D đến tiêu sinh lý máu 35 3.2.2 Ảnh hưởng 2, 4- D đến tiêu sinh hóa máu 36 3.2.3 .Ảnh hưởng 2, 4- D đến sinh sản hoạt tính tế bào mầm tinh hoàn 38 3.3 ẢNH HƯỞNG CỦA HORMONE. .. PHẠM LÊ THỊ THANH HUYỀN ẢNH HƯỞNG CỦA 2,4 – D VÀ HORMONE FSH ĐẾN CÁC CHỈ TIÊU SINH LÝ, SINH HÓA MÁU Ở PHÔI GÀ VÀ SỰ SINH SẢN CỦA TẾ BÀO MẦM TINH HOÀN GÀ Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã