ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  TRẦN THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN SAU CAI SỮA TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH THÁI BÌNH VÀ CHẾ TẠO THỬ NGHIỆM AUTO - VACCINE PHÒNG BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Thái Nguyên - 2011 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  TRẦN THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN SAU CAI SỮA TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH THÁI BÌNH VÀ CHẾ TẠO THỬ NGHIỆM AUTO - VACCINE PHÒNG BỆNH CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y Mã Số: 60 62 50 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: TS Đặng Xuân Bình Thái Nguyên- 2011 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ Tác giả Trần Thị Huệ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt năm học tập, với nỗ lực thân, nhận giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể, đến luận văn hoàn thành Nhân dịp này, cho phép bày tỏ lòng biết ơn cảm ơn chân thành tới thầy giáo hướng dẫn TS Đặng Xuân Bình tận tình bảo, hướng dẫn, giúp đỡ suốt trình học tập hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới cán bộ, công nhân viên Bộ môn Công nghệ vi sinh – Viện Khoa học sống - Đại học Thái Nguyên, Ban chủ nhiệm Khoa Sau Đại học – Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình học tập nghiên cứu trường Tôi xin chân trọng cảm ơn Ban lãnh đạo Chi cục Thú y tỉnh Thái Bình, cán trạm thú y trang trại, gia trại chăn nuôi lợn huyện Hưng Hà, Kiến Xương,Thái Thụy tỉnh Thái Bình tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình thực đề tài Trong trình thực đề tài nhận quan tâm, động viên sâu sắc gia đình bạn bè đồng nghiệp Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành trước giúp đỡ quý báu Thái Bình, tháng năm 2011 Tác giả Trần Thị Huệ Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm bệnh phù đầu lợn 1.2 Vai trò vi khuẩn E coli bệnh phù đầu lợn 1.2.1 Đặc điểm sinh học vi khuẩn E coli 1.2.2 Đặc tính gây bệnh vi khuẩn E coli 1.2.3 Biện pháp phòng trị bệnh phù đầu lợn 15 1.3 Tình hình nghiên cứu nước 16 1.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 16 1.3.2 Tình hình nghiên cứu nước 19 Chƣơng 2: NỘI DUNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 22 2.1 Đối tượng, địa điểm thời gian nghiên cứu 22 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 22 2.1.2 Địa điểm nghiên cứu 22 2.1.3 Thời gian nghiên cứu 22 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn iv 2.2 Nội dung nghiên cứu 22 2.2.1 Điều tra số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn địa bàn tỉnh Thái Bình 22 2.2.2 Phân lập vi khuẩn E coli từ lợn mắc bệnh phù đầu 22 2.2.3 Chế tạo auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn 23 2.3 Vật liệu nghiên cứu 23 2.4 Phương pháp nghiên cứu 23 2.4.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ 23 2.4.2 Thu thập mẫu phân lập vi khuẩn 25 2.4.3 Xác địnhserotype kháng nguyên O chủng vi khuẩn phân lập 27 2.4.4 Phương pháp xác định yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập 28 2.4.5 Kiểm tra độc lực chủng vi khuẩn phân lập chuột bạch 31 2.4.6 Xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn phân lập 32 2.4.7 Chế tạo auto - vaccine 32 2.4.8 Phương pháp tiêm phòng: 35 2.4.9 Phương pháp xử lý số liệu 35 Chƣơng 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CƢ́U VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Điều tra số đặc điểm dị ch tễ bệnh phù đầu lợn nuôi địa bàn tỉnh Thái Bình 36 3.1.1 Tình hình bệnh phù đầu lợn năm 2008, 2009, 2010 36 3.1.2 Tình hình bệnh phù đầu theo địa điểm 37 3.1.3 Điều tra tình hình lợn chết mắc bệnh phù đầu 41 3.1.4 Điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo mùa 44 3.1.5 Điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi 46 3.2 Phân lập vi khuẩn E coli từ mẫu bệnh phẩm lợn mắc bệnh phù đầu 48 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn v 3.3 Giám định số đặc tính sinh vật, hóa học chủng vi khuẩn E coli phân lập 50 3.4 Xác định số serotype kháng nguyên O chủng phân lập 51 3.5 Xác định yếu tố bám dính chủng vi khuẩn E coli phân lập 53 3.6 Xác định khả gây dung huyết chủng vi khuẩn E coli phân lập 54 3.7 Xác định khả sản sinh độc tố đường ruột chủng vi khuẩn E coli phân lập 55 3.8 Xác định độc lực chủng vi khuẩn phân lập 57 3.9 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh hóa dược vi khuẩn E coli phân lập 58 3.10 Chế tạo kiểm nghiệm auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn 61 3.10.1 Bồi dưỡng kháng nguyên phục vụ chế auto - vaccine 61 3.10.2 Kiểm tra đánh giá chất lượng auto - vaccine phòng thí nghiệm 62 3.11 Thử nghiệm an toàn auto - vaccine lợn thí nghiệm 63 3.12 Khảo sát đáp ứng miễn dịch lợn thí nghiệm sử dụng auto - vaccine 64 3.13 Thử nghiệm khả bảo hộ lợn thí nghiệm auto - vaccine với chủng E coli phân lập 65 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 Kết luận 67 Đề nghị 68 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH KHOA HỌC LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Cs : Cộng CFU : Colony Forming Unit ĐC : Đối chứng E : Escherichia EDP : Edema Disease Principle ETEC : Enterotoxigenic E coli BHI : Brain Heart Infusion broth P : Độ tin cậy PCR : Polymerase Chain Reaction LT : Heat Labile toxins N : Dung lượng mẫu KHT : Kháng huyết RR : Relative Risk PBS : Phosphate Buffered Saline ST : Heat Stable toxins Stx : Shiga toxin TN : Thí nghiệm VT : Verotoxin Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Tình hình bệnh phù đầu lợn năm 2008, 2009, 2010 36 Bảng 3.2 Kết điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu huyện thuộc tỉnh Thái Bình năm 2010 38 Bảng 3.3 So sánh nguy mắc phù đầu lợn huyện tỉnh Thái Bình 40 Bảng 3.4 Kết điều tra tình hình lợn chết mắc bệnh phù đầu 41 Bảng 3.5 So sánh nguy chết lợn mắc bệnh phù đầu sau cai sữa huyện 43 Bảng 3.6 Kết điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo mùa 44 Bảng 3.7 Kết điều tra tình hình lợn mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi 46 Bảng 3.8 Kết phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm lợn mắc bệnh phù đầu sau cai sữa 48 Bảng 3.9 Kết giám định đặc tính sinh hóa chủng vi khuẩn E coli phân lập 50 Bảng 3.10 Kết xác định serotype kháng nguyên O vi khuẩn E coli phân lập 52 Bảng 3.11 Kết xác định yếu tố bám dính chủng vi khuẩn E coli phân lập 53 Bảng 3.12 Kết xác định khả gây dung huyết chủng vi khuẩn E coli phân lập 54 Bảng 3.13 Kết xác định khả sản sinh độc tố chủng vi khuẩn E coli phân lập 56 Bảng 3.14 Kết thử độc lực chủng vi khuẩn E coli phân lập 57 Bảng 3.15 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh hóa dược vi khuẩn E coli phân lập 59 Bảng 3.16 Kết bồi dưỡng kháng nguyên E coli chế tạo auto - vaccine Thái Bình 61 Bảng 3.17 Kết kiểm nghiệm chất lượng auto - vaccine phòng thí nghiệm 62 Bảng 3.18 Kết thử an toàn auto - vaccine lợn thí nghiệm 63 Bảng 3.19 Kết khảo sát hiệu giá kháng thể lợn thí nghiệm sau tiêm auto – vaccine 64 Bảng 3.20 Kết bảo hộ lợn thí nghiệm auto – vaccine 65 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn viii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 1.1 Cơ chế gây bệnh phù đầu lợn E coli (Bertschinger H U, Nielsen N O, 1992) Hình 2.1 Sơ đồ phân lập giám định vi khuẩn E coli 26 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm đánh giá hiệu bảo hộ vắc xin thực địa 35 Hình 3.1 Biểu đồ vể tỷ lệ mắc bệnh phù đầu lợn sau cai sữa 03 huyện tỉnh Thái Bình 39 Hình 3.2 Biểu đồ tỷ lệ lợn chết mắc bệnh phù đầu 03 huyện tỉnh Thái Bình 42 Hình 3.3 Biểu đồ tỷ lệ mắc bệnh phù đầu lợn theo mùa vụ 45 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn tỷ lệ mắc bệnh phù đầu theo lứa tuổi lợn 47 Hình 3.5 Biểu đồ tỷ lệ phân lập vi khuẩn E coli từ lợn mắc bệnh phù đầu 49 Hình 3.6 Biểu đồ tỷ lệ đề kháng E coli với loại kháng sinh 61 Số hóa Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc-tnu.edu.vn data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read ... HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM  TRẦN THỊ HUỆ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ BỆNH PHÙ ĐẦU Ở LỢN SAU CAI SỮA TRÊN ĐỊA BÀN TỈNH THÁI BÌNH VÀ CHẾ TẠO THỬ NGHIỆM AUTO - VACCINE. .. Điều tra số đặc điểm dịch tễ bệnh phù đầu lợn địa bàn tỉnh Thái Bình 22 2.2.2 Phân lập vi khuẩn E coli từ lợn mắc bệnh phù đầu 22 2.2.3 Chế tạo auto - vaccine phòng bệnh phù đầu lợn ... thực địa 35 Hình 3.1 Biểu đồ vể tỷ lệ mắc bệnh phù đầu lợn sau cai sữa 03 huyện tỉnh Thái Bình 39 Hình 3.2 Biểu đồ tỷ lệ lợn chết mắc bệnh phù đầu 03 huyện tỉnh Thái Bình