ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM –––––––––––– –––––––––– Phạm Ngọc Tri “Nghiên cứu phân lập tuyển chọn vi sinh vật phân giải lân có hiệu lực cao đất thoái hoá nghèo chất dinh dưỡng Lục Ngạn - Bắc Giang” LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Thái Nguyên - 2010 Số hóa trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM Phạm Ngọc Tri “Nghiên cứu phân lập tuyển chọn vi sinh vật phân giải lân có hiệu lực cao đất thoái hóa nghèo chất dinh dưỡng Lục Ngạn - Bắc Giang” Chuyên Ngành: Lâm học Mã số: 60.62.60 LUẬN VĂN THẠC SĨ LÂM NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Phạm Quang Thu Thái Nguyên – 2010 Số hóa trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết luận văn hoàn toàn trung thực, chƣa đƣợc sử dụng để bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn đƣợc cảm ơn Các thông tin, tài liệu trình bày luận văn đƣợc rõ nguồn gốc TÁC GIẢ Phạm Ngọc Tri Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Đƣợc đồng ý Ban Giám hiệu trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, Khoa Sau Đại học, với giúp đỡ hƣớng dẫn Tiến sĩ Phạm Quang Thu, thực đề tài “Nghiên cứu phân lập tuyển chọn vi sinh vật phân giải lân có hiệu lực cao đất thoái hoá nghèo chất dinh dưỡng Lục Ngạn - Bắc Giang” Trong trình thực đề tài, nhận đƣợc quan tâm giúp đỡ thầy cô giáo bạn đồng nghiệp Nhân dịp hoàn thành đề tài cho phép đƣợc bày tỏ lòng biết ơn đến thầy cô giáo anh chị phòng Thí nghiệm Viện Khoa học Lâm nghiệp Việt Nam Đặc biệt xin trân trọng cảm ơn bảo giúp đỡ tận tình thầy giáo hƣớng dẫn PGS TS Phạm Quang Thu Cuối xin chân thành cảm ơn quan tâm giúp đỡ gia đình, bạn bè tạo điều kiện vật chất tinh thần để hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn ! Hà Nội, ngày 02 tháng 05 năm 2010 Học viên Phạm Ngọc Tri Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Nội dung Trang TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH ix CHƢƠNG 1: MỞ ĐẦU 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa khoa học thực tiễn 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 2.2 Nghiên cứu Việt Nam 2.3 Tổng quan khu vực nghiên cứu 2.3.1 Điều kiện tự nhiên 2.3.2 Điều kiện kinh tế - xã hội 10 CHƢƠNG 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Đối tƣợng 14 3.2 Nội dung nghiên cứu 14 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn iv 3.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải lân khó tan có hiệu lực cao vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn từ đất 14 3.2.2 Mô tả giám định chủng vi sinh vật phân giải lân khó tan có hiệu lực cao vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn 14 3.2.3 Nghiên cứu khả tập hợp chủng vi sinh vật chế phẩm hỗn hợp 14 3.2.4 Nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố dinh dƣỡng môi trƣờng đến trình nhân sinh khối vi sinh vật phân giải lân khó tan, vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật phân giải lân 14 3.2.5 Đánh giá hiệu lực chế phẩm Bạch đàn giai đoạn vƣờn ƣơm 14 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 15 3.3.1 Phƣơng pháp phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải lân khó tan, vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn 15 3.3.1.1 Phƣơng pháp phân lập 15 3.3.1.2 Phƣơng pháp tuyển chọn chủng phân giải lân có hiệu lực cao, vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh Bạch đàn 17 3.3.1.3 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng lân dễ tiêu vi khuẩn phân giải 18 3.3.2 Phƣơng pháp mô tả đặc điểm giám định loài vi sinh vật 18 3.3.2.1 Phƣơng pháp mô tả vi sinh vật 18 3.3.2.2 Phƣơng pháp giám định vi sinh vật 18 3.3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu khả tập hợp chủng vi sinh vật chế phẩm hỗn hợp 19 3.3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng yếu tố dinh dƣỡng môi trƣờng đến trình nhân sinh khối vi sinh vật phân giải lân khó tan, vi sinh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn v vật đối kháng nấm gây bệnh xây dựng quy trình sản xuất chế phẩm vi sinh vật phân giải lân 19 3.3.4.1 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến sinh trƣởng phát triển vi sinh vật 19 3.3.4.2 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến mật độ tế bào vi sinh vật 21 3.3.4.3 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng tốc độ lắc đến mật độ tế bào vi sinh vật 21 3.3.4.4 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng độ pH môi trƣờng dinh dƣỡng đến mật độ tế bào vi sinh vật 21 3.3.4.5 Phƣơng pháp nghiên cứu ảnh hƣởng loại giá thể rắn (chất mang) đến mật độ tế bào vi sinh vật 22 3.3.5 Phƣơng pháp đánh giá hiệu lực chế phẩm bạch đàn giai đoạn vƣờn ƣơm 23 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ PHÂN TÍCH KẾT QUẢ 24 4.1 Kết phân lập, tuyển chọn định loại chủng vi sinh vật phân giải lân, vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh từ đất rừng nghèo kiệt 24 4.1.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn phân giải lân 24 4.1.2 Kết tuyển chọn chủng vi khuẩn có hiệu lực phân giải lân cao 26 4.1.3 Kết phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn đối kháng nấm gây bệnh Bạch đàn 28 4.1.4 Kết định loại chủng vi sinh vật phân giải lân có hoạt tính cao chủng vi sinh vật đối kháng với nấm gây bệnh kỹ thuật phân tử 30 4.1.4.1 Kết tách chiết DNA chạy phản ứng PCR 30 4.1.4.2 Kết xác định chủng vi sinh vật 31 4.2 Nghiên cứu khả tập hợp chủng vi sinh vật để sản xuất chế phẩm hỗn hợp 36 4.2.1 Đánh giá mật độ tế bào chủng vi sinh vật phân giải lân vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn sau hợp chủng 36 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn vi 4.2.2 Nghiên cứu hoạt tính sinh học chủng vi sinh vật phối hợp chủng 37 4.3 Nghiên cứu ảnh hƣởng số yếu tố dinh dƣỡng môi trƣờng đến trình nhân sinh khối chủng vi khuẩn phân giải lân khó tan 39 4.3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng đến mật độ tế bào vi khuẩn 39 4.3.2 Ảnh hƣởng thời gian nuôi cấy đến mật độ tế bào vi khuẩn 41 4.3.3 Ảnh hƣởng tốc độ lắc đến mật độ tế bào vi sinh vật 43 4.3.4 Ảnh hƣởng độ pH môi trƣờng dinh dƣỡng đến mật độ tế bào vi sinh vật 45 4.3.5 Ảnh hƣởng loại giá thể rắn (chất mang) đến mật độ tế bào 47 4.4 Xây dựng quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm vi sinh hỗn hợp dạng viên nén cho bạch đàn 50 4.4.1 Thành phần chế phẩm vi sinh hỗn hợp 50 4.4.2 Xây dựng quy trình công nghệ sản xuất chế phẩm vi sinh hỗn hợp dạng viên nén cho Bạch đàn 50 4.4.3 Bảo quản chế phẩm 52 4.5 Đánh giá hiệu lực chế phẩm sinh trƣởng bạch đàn giai đoạn vƣờn ƣơm 53 4.5.1 Thí nghiệm nhiễm chế phẩm với bạch đàn trắng Eucalyptus camaldulensis 53 4.5.2 Thí nghiệm nhiễm chế phẩm với bạch đàn nâu Eucalyptus urophylla 56 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 5.1 Kết luận 60 5.2 Kiến nghị 62 TÀI LIỆU THAM KHẢO 63 Tài liệu tiếng Việt 63 Tài liệu tiếng Anh 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT CFU : Mật độ số khuẩn lạc CT : Công thức Dpg : Đƣờng kính vòng phân giải DTB : Đƣờng kính trung bình PCR : Chạy phản ứng kỹ thuật phân tử PGL : Phân giải lân Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http//: www.lrc-tnu.edu.vn data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read data error !!! can't not read ... 3.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi sinh vật phân giải lân khó tan có hiệu lực cao vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh cho Bạch đàn từ đất 14 3.2.2 Mô tả giám định chủng vi sinh vật phân giải lân. .. 24 4.1 Kết phân lập, tuyển chọn định loại chủng vi sinh vật phân giải lân, vi sinh vật đối kháng nấm gây bệnh từ đất rừng nghèo kiệt 24 4.1.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn phân giải lân 24... Kết tuyển chọn chủng vi khuẩn có hiệu lực phân giải lân cao 26 4.1.3 Kết phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn đối kháng nấm gây bệnh Bạch đàn 28 4.1.4 Kết định loại chủng vi sinh vật phân