I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN VIN KHOA HC V CễNG NGH VIT NAM VIN HO HC NGUYN TIN DNG NGHIấN CU PHN TCH MT S HP CHT HU C VềNG Bẫ BNG PHNG PHP HPLC-MS V NMR LUN VN THC S KHOA HC H Ni - nm 2012 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN VIN KHOA HC V CễNG NGH VIT NAM VIN HO HC NGUYN TIN DNG NGHIấN CU PHN TCH MT S HP CHT HU C VềNG Bẫ BNG PHNG PHP HPLC-MS V NMR Chuyờn ngnh: HểA PHN TCH Mó s: CH 1001190 LUN VN THC S KHOA HC Ngi hng dn khoa hc: PGS TS NGUYN VN TUYN H Ni - nm 2012 Lời cảm ơn! Để hoàn thành chơng trình cao học viết luận văn này, nhận đợc hớng dẫn, giúp đỡ góp ý nhiệt tình quý thầy cô trờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà nội Viện hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt nam Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến Phó Giáo s - Tiến sĩ Nguyễn Văn Tuyến Viện trởng - Trởng phòng Hóa dợc - Viện hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt nam giành nhiều thời gian tâm huyết hớng dẫn nghiên cứu giúp hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin chân thành cảm ơn cô anh chị tập thể phòng Hóa dợc, Phòng thí nghiệm Khối phổ - Viện hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt nam tạo điều kiện để học tập hoàn thành tốt luận văn Đồng thời xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo Khoa Hóa học Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà nội, ngời thân bạn bè giúp đỡ quý báu, tận tình trình học tập nghiên cứu Khoa hóa học - Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà nội Tôi xin chân thành cảm ơn tài trợ đề tài thuộc chơng trình hợp tác FWO-NAFOSTED (mã số: 01/2010) hỗ trợ kinh phí để hoàn thành luận văn Mặc dù có nhiều cố gắng hoàn thiện luận văn tất nhiệt tình lực mình, nhiên tránh khỏi thiếu sót, mong nhận đợc đóng góp quí báu quí thầy cô bạn Hà nội ngày 12 tháng 12 năm 2012 Học viên Nguyễn Tiến Dũng MC LC DANH MC CC CC HèNH i DANH MC CC S .ii M U CHNG TNG QUAN .2 1.1 BETA LACTAM 1.2 TNG HP BETA LACTAM 1.2.1 Phn ng Staudinger .3 1.2.2 C ch phn ng v iu khin chn lc lp th .4 1.3 PHN TCH CC NG PHN I QUANG 1.3.1 Phng phỏp tỏch cỏc ng phõn i quang bng enzym 1.3 Tỏch cỏc ng phõn i quang nh tỏc nhõn bt i b tr 1.3.3 Tỏch ng phõn i quang bng cỏc phng phỏp húa lý hin i 1.3.4 Phõn tớch cỏc i quang nh phng phỏp NMR 1.4 SC Kí LNG HIU NNG CAO (HPLC) .17 1.4.1 Khỏi nim 17 1.4.2 Phõn loi 17 1.4.3 Pha tnh sc ký pha o .17 1.4.4 Pha ng sc ký pha o 18 1.4.5 DETECTOR DAD 19 1.4.6 DETECTOR MS 20 c Cac loai u dũ khụi phụ .21 CHNG THC NGHIM 22 2.1 Phng phỏp nghiờn cu v trang thit b 22 2.1.1 Cỏc phng phỏp tng hp hu c .22 2.1.2 Dung cu v hoa chõt 22 2.1.3 nh tớnh phn ng v kim tra tinh khit ca dn xut bng sc kớ lp mng.23 2.1.4 Cỏc phng phỏp phõn tớch cu trỳc .23 - MY HPLC 24 + Húa cht, thit b dựng cho mỏy HPLC .24 + t iu kin cho h thng 24 2.2 Tng hp cỏc hp cht -lactam 25 2.2.1 Tng hp dn xut 2-phenoxy clorua axetic 25 2.2.2 Tng hp dn xut imine 26 2.2.3 Tng hp cỏc dn xut - lactam 27 2.3 Ph cng hng t ht nhõn 1H v 13C ca cỏc hp cht 9a, 9b, 9c, 9d, 9e, 9f .28 CHNG KT QU V THO LUN 31 3.1 TNG HP CC HP CHT -LACTAM 31 3.2 PHN TCH CU TRC HP CHTcis--LACTAM 32 3.2.1 Phõn tớch ph 1H-NMR ca hp cht 9a 32 3.2.2 Phõn tớch ph 1H NMR ca hp cht 9b 33 3.2.3 Phõn tớch ph 1H-NMR ca hp cht 9c 33 3.2.4 Phõn tớch ph 1H-NMR ca hp cht 9d 34 3.2.5 Phõn tớch ph 1H-NMR ca hp cht 9e 35 3.2.6 Phõn tớch ph 1H-NMR ca hp cht 9f .35 3.3 XC NH T L CC NG PHN LP TH BNG HPLC-MS 37 3.3.1 Kho sỏt bc súng hp th i vi cỏc cht nghiờn cu .37 3.3.2 Kho sỏt ph MS 40 3.3.3 Kho sỏt chng trỡnh dung mụi cho quỏ trỡnh sc ký 41 3.4.4 Kt qu v tho lun quỏ trỡnh phõn tớch sc ký 43 KT LUN .48 TI LIU THAM KHO .49 DANH MC CC CC HèNH Hỡnh 1.1 Cu trỳc c s -lactam Hỡnh 1.2 Ph 1H-NMR ca hn hp este Mosher (S)-1-phenylbutan-1-ol v (R)-1phenylbutan-1-ol 10 Hỡnh 1.3 Ph 1H-NMR ca este Mosher (R)-1-phenylbutan-1-ol v (S)-1phenylbutan-1-ol 10 Hỡnh 1.4 Ph 1H-NMR ca (-)-enriched v hn hp (-)-enriched vi CSA 12 Hỡnh 1.5 Tớn hiu 1H-NMR ca CH3 mt s trng hp 13 Hỡnh 1.6 Cp tớn hiu Fiedel 14 Hỡnh 1.7 S túm tt quỏ trỡnh phõn tớch cu trỳc bng phng phỏp X-Ray 14 Hỡnh 1.8 Ph CD ca hp cht A v B 16 Hỡnh 1.9 Cu trỳc ca ct ODS .18 Hỡnh 1.10 S nguyờn lý h iot quang .19 Hỡnh 1.11 Cỏc bin phỏp ci tin tng nhy ca detector (ci tin flowcell) 20 Hỡnh 3.1 Ph 1H ca hp cht 9a 32 Hỡnh 3.2 Ph 1H ca hp cht 9b 33 Hỡnh 3.3 Ph 1H ca hp cht 9c .33 Hỡnh 3.4 Ph 1H ca hp cht 9d 34 Hỡnh 3.5 Ph 1H ca hp cht 9e .35 Hỡnh 3.6 Ph 1H ca hp cht 9f .35 Hỡnh 3.7 Ph hp th electron ca hp cht 9a 37 Hỡnh 3.8 Ph hp th electron ca hp cht 9b 38 Hỡnh 3.9 Ph hp th electron ca hp cht 9c 38 Hỡnh 3.10 Ph hp th electron ca hp cht 9d 38 Hỡnh 3.11 Ph MS ca hp cht 9c ch Positive 40 Hỡnh 3.12 Ph MS ca hp cht 9c ch Negative 40 Hỡnh 3.13 Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient 42 Hỡnh 3.14 Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient 42 Hỡnh 3.15 Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient 42 Hỡnh 3.16 Sc ký ca hp cht 9a 43 Hỡnh 3.17 Ph MS ca pic (hp cht 9a) 44 Hỡnh 3.18 Ph MS ca pic (hp cht 9a) 44 Hỡnh 3.19 Sc ký ca hp cht 9b .45 Hỡnh 3.20 Sc ký ca hp cht 9c 46 Hỡnh 3.21 Sc ký ca hp cht 9d .47 i DANH MC CC S S 1.1 Phn ng Staudinger S 1.2 C ch phn ng Staudinger .4 S 1.3 Con ng hỡnh thnh lactam S 1.4 S dng mui (12) tng hp -lactam S 1.5 Sorbyl clorua (16) tng hp -lactam .6 S 1.6 Tng hp -lactam t imine v vinylketene .7 S 2.1 Tng hp dn xut 2-phenoxy clorua axetic 26 S 2.2 Tng hp dn xut imin 26 S 2.3 Tng hp dn xut cis--lactam .27 S 3.1 Tng hp dn xut 2-phenoxy clorua axetic 31 S 3.2 C ch hỡnh thnh cht 5a,b 32 ii BNG Kí HIU CC CH VIT TT STT Ký hiu Chỳ thớch SKPB Sc ký phõn b SKPD Sc ký pha o SKPT Sc ký pha thun HPLC High-performance liquid chromatography MS Mass spectrometry NMR Nuclear magnetic resonance iii iv M U Vi s bin i khụng ngng ca vi khun, hng lot thuc khỏng sinh khụng cũn s dng c hoc ph tỏc dng hp li kh nng khỏng thuc ca vi khun Lm gim hiu qu iu tr bnh v gõy nhng bin chng khụng mong mun cho ngi bnh Azetidin-2-ones (-lactams) i din cho nhúm thuc khỏng sinh quan trng [9] v ng dng lm cỏc synthon tng hp hu c [13] to nhng loi thuc mi, cú hiu lc iu tr cao v cha b vi khun khỏng li, thỡ vic tng hp v bỏn tng hp -lactam mi l mt vic lm rt quan trng Mt khỏc, nh ta ó bit hot tớnh sinh hc ca cỏc ng phõn quang hc (ng phõn i quang hoc ng phõn lp th khụng i quang) l rt khỏc v vic tỏch cỏc ng phõn ú thỡ rt tn kộm, tn rt nhiu thi gian Vỡ vy vic tng hp chn lc lp th cỏc ng phõn quang hc l rt quang trng, lm gim chi phớ cho thc hin quỏ trỡnh tỏch, tng hiu qu iu tr Vỡ vy lun ny, chỳng tụi trung vo vic phõn tớch cu trỳc v xỏc nh chn lc lp th ca cỏc hp cht -lactams, thu c t phn ng tng hp theo phng phỏp Staudinger, bng cỏc phng phỏp hin i nh HPLC-MS v NMR Mt in t ca nhúm th R1 ca ketene úng vai trũ chớnh vic hỡnh thnh cỏccis--lactam hay trans--lactam [15]., [19] Trong nghiờn cu ny, chỳng tụi tin hnh tng hp cỏc -lactam t cỏc dn xut ketene cú gn cỏc nhúm th khỏc (R1- l nhúm phenoxy- hoc m-clophenoxy), thy rng nhõn thm benzen ca nhúm th R1 gim in t hn cú nhúm th clo thỡ sn phm to thnh l cis--lactam, cú l l nhúm ny cú hiu ng cha mnh nh hng n mõt in t ca phc phc trung gian, nờn enolat to thnh cú tớnh nucleophin mnh xỳc tin phn ng vũng húa to thnh vũng lactam theo nh hng cis 3.3 XC NH T L CC NG PHN LP TH BNG HPLC-MS i vi cỏc loi mỏy HPLC-MS m chỳng tụi nghiờn cu, h thng cú hai detector: detector DAD v detector MS 3.3.1 Kho sỏt bc súng hp th i vi cỏc cht nghiờn cu Chỳng tụi tin hnh o ph UV-Vis i vi cỏc loi mu nghiờn cu dung mụi metanol v thu c kt qu nh hỡnh sau: Hỡnh 3.7 Ph UV-Vis ca hp cht 9a 37 Hỡnh 3.8 Ph UV-Vis ca hp cht 9b Hỡnh 3.9 Ph UV-Vis ca hp cht 9c Hỡnh 3.10 Ph UV-Vis ca hp cht 9d T cỏc hỡnh trờn cú th nhn thy cỏc hp cht 9a, 9b, 9c, v 9d u cú hai cc i hp th vo khong 210 nm v 260 nm 38 Cu trỳc cỏc hp cht 9a, 9b, 9c v 9d nh hỡnh v sau: Kớ hiu cht Cụng thc 9a 9d 9b 9c Ta nhn thy rng, phõn t cỏc hp cht trờn u cú vũng benzen M vũng benzen cú cỏc di hp th: =180nm; =203nm; =256nm V vũng benzen cú cỏc nhúm th cú hiu ng +C thỡ cỏc di hp th c chuyn v cỏc bc súng di 39 Mt khỏc metanol li cú hai di hp th vo khong 150nm v 183nm Vỡ vy chỳng tụi ó chn bc súng 260nm lm bc súng nghiờn cu 3.3.2 Kho sỏt ph MS chn iu kin cho bn phỏ MS cỏc hp cht -lactam theo phng phỏp ESI, chỳng tụi kho sỏt c hai ch positive v negative thu c cỏc pic ion gi phõn t tng ng u tiờn, chỳng tụi tin hnh kho sỏt i vi hp cht 9c v thu c kt qu nh sau: Hỡnh 3.11 Ph MS positive ca hp cht 9c Hỡnh 3.12 Ph MS negative ca hp cht 9c 40 Qua ph MS trờn ta thy rng vi iu kin ch Negative khụng cú mnh ion gi phõn t phự hp vi hp cht nghiờn cu; ch Positive thỡ cho ta pic ion gi phõn t [2M+Na]+ = 810,10 phự hp vi cụng thc phõn t ca hp cht 9c Vy chn ch positive cho detector MS nghiờn cu cỏc hp cht 9a, 9b, 9d v u thu c mnh ion gi phõn t [2M+Na] + tng ng vi tng hp cht nghiờn cu (ph lc 25, 26, 31, 32, 34, 35) 3.3.3 Kho sỏt chng trỡnh dung mụi cho quỏ trỡnh sc ký T vic nghiờn cu ti liu [8]., chỳng tụi nhn thy rng vic phõn tớch cỏc ng phõn quang hc cú mt tõm bt i bng cỏc iu kin dung mụi, ct tỏch thụng thng l rt khú Nhng nhng phõn t nghiờn cu cú hai trung tõm bt i thỡ vic phõn tớch tr nờn d dng Do ú chỳng tụi tin hnh phõn tớch cỏc ng phõn bng gradient pha ng v tin hnh kho sỏt cỏc gradient bng cỏch tng % kờnh B (gim phõn cc ca pha ng) theo bng sau: Bng 3.2.1 Bng thay i thnh phõn pha ng cỏc gradient Min 10 15 16 17 30 Gradient Gradient %B 15 30 30 50 100 100 100 100 Gradient %B 20 20 50 70 100 100 100 Gradient %B 20 30 60 80 100 100 100 100 Chỳng tụi s dng loi gradient: Gradient 1, gradient 2, v gradient trờn mu 9c v thu c cỏc kt qu sau: 41 Hỡnh 3.13.Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient Hỡnh 3.14.Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient Hỡnh 3.15.Sc ký ca hp cht 9c chy vi pha ng Gradient 42 T cỏc sc ký ta thy rng, gim phõn cc ca pha ng, s lm gim thi gian lu, v lm gim kh nng tỏch cht iu ú cú th gii thớch l do, cỏc cht nghiờn cu u l cỏc cht kộm phõn cc, nu ta lm gim phõn cc s lm gim thi gian lu T kt qu trờn chỳng tụi chn gradien nghiờn cu v phõn tớch cỏc cht 3.4.4 Kt qu v tho lun quỏ trỡnh phõn tớch sc ký a Kt qu phõn tớch hp cht 9a Chỳng tụi ỏp dng cỏc iu kin ó kho sỏt c trờn v tin hnh phõn tớch hp cht 9a v thu c kt qu sc nh sau: Hỡnh 3.16 Sc ký ca hp cht 9a Kt qu v din tớch pic: Trờn sc kớ pớc cú tR = 22,319 phỳt cú ph lng vi pớc ion gi phõn t l 839,0 tng ng vi [M+M+Na]+ (hỡnh 3.17) 43 Hỡnh 3.17: Ph MS ca pic (hp cht 9a) Pic cú thi gian lu 24,124 phỳt cng cú pớc ion gi phõn t l 839,6 tng ng vi [M+M+Na]+ (hỡnh 3.18) Khng nh pic v pic l hai ng phõn lp th dng cis v trans vi dng cis l chim u th (cu dng cis ó c chng minh bng ph NMR) Hỡnh 3.18: Ph MS ca pic (hp cht 9a) T ú cú th thy rng phng phỏp HPLC cho phộp tỏch v phõn tớch hai ng phõn cis v trans ca hp cht beta-lactam 9a T ú ta tớnh c chn lc lp th ca hp cht 9a l: de = %diasteroisomerA %diasteroisomerB %diasteroisomerA + %diasteroisomerB 44 de= 100% = 97,6128% b Kt qu phõn tớch hp cht 9b i vi hp cht 9b phõn tớch bng mỏy HPLC chỳng tụi thu c sc : Hỡnh 3.19 Sc ký ca hp cht 9b Kt qu v din tớch pic: Tng t hp cht 9b cng c tỏch v phõn tớch bng phng phỏp HPLC, kt qu phõn tớch thu c chn lc lp th l: de = 96,6672 % c Kt qu phõn tớch hp cht 9c Sc ca hp cht 9c phõn tớch bng mỏy HPLC: 45 Hỡnh 3.20 Sc ký ca hp cht 9c Din tớch pic tng ng: Tng t hp cht 9c cng c tỏch v phõn tớch bng phng phỏp HPLC, kt qu phõn tớch thu c chn lc lp th l de = 96,7716 % 46 d Kt qu phõn tớch hp cht 9d Sc ký ca hp cht 9d Hỡnh 3.21 Sc ký ca hp cht 9d Din tớch pic tng ng: Tng t hp cht 9d cng c tỏch v phõn tớch bng phng phỏp HPLC, kt qu phõn tớch thu c chn lc lp th l de = 96,3116 % Túm li, phng phỏp HPLC ó c s dng hiu qu tỏch cỏc ng phõn lp th cis trans ca cỏc hp cht beta-lactam 9a-d Cỏc cht ny cú chn lc lp th rt cao (de = 96,3116 97,6128 %) Nh vy, tng hp betalactam theo phng phỏp Staudinger s dng cỏc nhúm giu in t, cho phộp nhn c sn phm vi chn lc lp th cao (de ~ 97%) 47 KT LUN Tng hp chn lc lp th thnh cụng dn xut cis--lactam: 9a, 9b, 9c, 9d, 9e, 9f bng phng phỏp Staudinger vi vic s dng cỏc nhúm th giu in t Cu trỳc cỏc dn xut ca cis -lactam c chng minh bng phng phỏp H-NMR v 13C-NMR qua vic so sỏnh hng s J ca hai H lin k Bng phng phỏp HPLC ó tỏch c cỏc ng phõn cis v trans -lactam Bng phng phỏp HPLC ó xỏc nh chn lc lp th (de) ca ca cỏc hp cht -lactam 9a-d tng ng l: 97,6128; 96,6672 ; 96,7716 v 96,3116 % 48 TI LIU THAM KHO I Trang web [1] http://www.chm.bris.ac.uk/ms/theory/ [2] http://www.waters.com/waters/nav.htm?cid=10073251&locale=en_US [3] http://www2.chemistry.msu.edu/faculty/reusch/VirtTxtJml/Spectrpy/nmr/nmr1.htm II Ti liu tham kho ting Vit [4] Nguyn Hu nh Trn Th , ng dng mt s phng phỏp ph nghiờn cu cu trỳc phõn t (1999), Nh xut bn giỏo dc [5] Nguyn Kim Phi Phng, Khi Ph lý thuyt bi bi gii (2004), Nh xut bn i hc quc gia TP H Chớ Minh [6] Nguyn Kim Phi Phng, Ph NMR s dng phõn tớch hu c lý thuyt bi ph - bi gii (2005), Nh xut bn i hc quc gia TP H Chớ Minh [7] Pham Thi Thm, Phm Th Chớnh, Hong Th Phng, Phm Anh Tuõn, ng Th Tuyt Anh, Ngụ Th Thun, Nguyn Vn Tuyn, Tap chi hoa hoc (s 4B 50, 2012) [8] Nguyn Vn Tuyn, Húa hc hu c nõng cao Cỏc phng phỏp tng hp hu c hin i (2012), Nh xut bn khoa hc v k thut III Ti liu tham kho ting Anh [9] Ahmed Abouabdellah, Jean-Pierre Bộguộ, Daniốle Bonnet-Delpon, Truong Thi Thanh Nga J.Org.Chem.,62, 8826-8833, 1997 [10] Brady, W T.; Gu, Y Q J Org Chem 1989, 54, 2838 [11] (a) Cossio, F P.; Ugalde, J M.; Lopez, X.; Lecea, B.; Palomo, C J Am Chem Soc 1993, 115, 995 (b) Arrieta, A.; Lecea, B.; Cossỡo, F P J Org Chem 1998, 63, 5869 [12] For a selection of recent reviews on the biological activity of -lactams, see: (a) von Nussbaum, F.; Brands, M.; Hinzen, B.; Weigand, S.; Ha ăbich, D Angew Chem., Int Ed 2006, 45, 5072 (b) Singh, G S Mini-Re Med Chem 2004, 4, 69 (c) Singh, G S Mini-Re Med Chem 2004, 4, 93 (d) Buynak, J D Curr Med Chem 2004, 11, 1951 (e) Veinberg, G.; Vorona, M.; Shestakova, I.; Kanepe, I.; Lukevics, E Curr Med Chem 2003, 10, 1741 (f) Kidwai, M.; Sapra, P.; Bhushan, K R Curr Med Chem 1999, 6, 195 [13] For selected reviews on the -lactam synthon method, see: (a) Alcaide, B.; Almendros, P.; Aragoncillo, C Chem Re 2007, 107, 4437 (b) Deshmukh, A.R.A.S.; Bhawal, B M.; Krishnaswamy, D.; Govande, V 49 V.; Shinkre, B A.; Jayanthi, A Curr Med Chem 2004, 11, 1889 (c) Alcaide, B.; Almendros, P Curr Med Chem 2004, 11, 1921 (d) Ojima, I F.; Delaloge, F Chem Soc Re 1997, 26, 377 [14] For some previous general reviews on the topic, see: (a) Coates, C.; Kabir, J.; Turos, E Sci Synth 2005, 21, 609 (b) Walton, J C Top Curr Chem 2006, 264, 163 (c) Singh, G S Tetrahedron 2003, 59, 7631 (d) Magriotis, P A Angew Chem., Int Ed 2001, 40, 4377 (e) Go `mez-Gallego, M.; Manchen o, M J.; Sierra, A M Tetrahedron 2000, 56, 5743 (f) Barrett, A G M.; Sturgess, M A Tetrahedron 1988, 44, 5615 [15] Hashim Mahamed; Bimal K Banik Heteroletters special issue,1, 23-26, 2011 [16] Hegedus, L S.; Montgomery, J.; Narukawa, Y.; Snustad, D C J Am Chem Soc 1991, 113, 5784 [17] Hu, L.; Wang, Y.; Li, B.; Du, D.-M.; Xu, J Tetrahedron 2007, 63, 9387 [18] Kirmse, W.; Rondan, N G.; Houk, K N J Am Chem Soc 1984, 106, 7989 [19] Lei Jiao, Yong Liang; Jiaxi Xu J.AM.Chem.Soc., 128, 6060-6069, 2006 [20] Li, B.; Wang, Y.; Du, D.-M.; Xu, J J Org Chem 2007, 72, 990 [21] Liang, Y.; Jiao, L.; Zhang, S.; Xu, J J Org Chem 2005, 70, 334 [22] Pacansky, J.; Chang, J S.; Brown, D W.; Schwarz, W J Org Chem 1982, 47, 2233 [23] Shaikh, A L.; Puranik, V G.; Deshmukh, A R A S Tetrahedron Lett 2006, 5993 [24] Sharma, A K.; Kumar, R S.; Mahajan, M P Heterocycles 2000, 52, 603 [25] Sordo, J A.; Gonzalez, J.; Sordo, T L J Am Chem Soc 1992, 114, 6249 [26] Staudinger, H Justus Liebigs Ann Chem 1907, 356, 51 [27] Wang, Y.; Liang, Y.; Jiao, L.; Du, D M.; Xu, J J Org Chem 2006, 71, 6983 [28] Weatherwax, A.; Abraham, C J.; Lectka, T Org Lett 2005, 7, 3461 50 PH LC 51