TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y ĐỀ CƯƠNG MÔN VI SINH VẬT THÚ Y Câu 1: Đặc tính sinh học tụ cầu khuẩn Staphylococcus aureus? Trả lời: Tụ cầu khuẩn: Staphylococcus aureus a Hình thái : - Vi khuẩn hình cầu, đường kính 0,7-1 μm - Không sinh nha bào giáp mô, lông, không di động - Trong bệnh phẩm VK xếp thành đôi, đám nhỏ hình chùm nho - VK bắt màu Gram + b Đặc tính nuôi cấy : - Sống hiếu khí kỵ khí tùy tiện - Nhiệt độ thích hợp : 32 – 370C, pH : 7,2 – 7,6 - Dễ mọc môi trường nuôi cấy thông thường Môi trường Đặc điểm Nước thịt Sau 5-6h VK làm đục, sau 24h môi trường đục, lắng cặn nhiều, màng Thạch thường Sau 24h khuẩn lạc to dạng S, mặt ướt, bờ nhẵn, VK sinh sắc tố nên khuẩn lạc có màu vàng thẫm loài tụ cầu gây bệnh (aureus) trắng (albus), vàng chanh(citreus) loài tụ cầu có độc lực thấp, không gây bệnh Thạch máu Sau 24h vi khuẩn mọc tốt, khuẩn lạc dạng S Tụ cầu loại gây bệnh gây tượng dung huyết MT Sapman Phân lập kiểm tra độc lực tụ cầu Môi trường từ màu đỏ (pH= 8,4) sang màu vàng (pH= 6,8) tụ cầu gây bệnh Môi trường ko đổi màu ko gây bệnh MT Gelatin Cấy VK theo đường chích sâu, nuôi nhiệt độ 200C, sau 2-3 ngày gelatin bị tan chảy trông giống dạng hình phễu - Trên môi trường thạch máu : Tụ cầu có loại độc tố có khả làm tan hồng cầu số loài ĐV gọi dung huyết tố : α, β, δ, γ c Đặc tính sinh hóa : - Chuyển hóa đường: Lên men đường sau : + Glucoz + Levuloz + Lactoz + Manit + Saccaroz - Phản ứng catalaza (+) d Sức đề kháng: - Kém với nhiệt độ: 700 /1h, 800 / 10-30 phút, 1000 C sau vài phút - Các chất sát trùng thông thường diệt VK nhanh chóng - Ở nơi khô VK sống 200 ngày - VK có sức đề kháng nhiệt độ lạnh e Khả gây bệnh: *) Trong tự nhiên: - Tụ cầu thường kí sinh da người gia súc, có 30% người khỏe mang Staphylococcus aureus da, niêm mạc Khi sức đề kháng thể giảm có tổn thương da, niêm mạc, VK xâm nhập gây bệnh - Nhiễm trùng tụ cầu có nhiều biểu khác nhau: + Mưng mủ, apse, viêm cơ, viêm vú + Nhiễm trùng huyết, bại huyết + Hình thành độc tố ruột gây ngộ độc thực phẩm + Mức độ cảm nhiễm gia súc: Ngựa> bò> chó> lợn> cừu Ngoài người cảm nhiễm Chim ko mắc bệnh *) Trong phòng TN: - Thỏ cảm nhiễm nhất, tiêm 1-2 ml canh khuẩn tụ cầu 24h vào TM tai, sau 36-48h thỏ chết chứng huyết nhiễm mủ, mổ khám thấy nhiều ổ apxe phủ tạng - Nếu tiêm da cho thỏ gây áp xe da f Cấu trúc kháng nguyên: SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - kháng nguyên polysaccarit vách phức hợp mucopeptide – axit teichoic Khi gặp kháng thể tương ứng gây nên phản ứng ngưng kết - kháng nguyên protein (protein A) thành phần vách phía g Các chất tụ cầu gây bệnh tiết ra: - Các độc tố: +) Độc tố dung huyết: ( Hemolysin) + Dung huyết tố anpha ( α) : gây tan hồng cầu thỏ, hoại tử da gây chết Loại dung huyết tố có hầu hết tụ cầu độc + Dung huyết tố bêta ( β) : gây dung giải hồng cầu cừu + Dung huyết tố đenta ( δ) : gây dung giải hồng cầu người, thỏ, cừu, ngựa gây hoại tử da + Dung huyết tố gamma ( γ) : không dung giải hồng cầu ngựa +) Nhân tố diệt bạch cầu : + Bạch cầu tính di động, hạt nhân bị phá hủy, vai trò quan trọng chế sinh bệnh tụ cầu +) Độc tố ruột : Có loại, có loại biết : + Độc tố ruột A : tạo chủng phân lập trình nhiễm độc thức ăn + Độc tố ruột B : tạo chủng phân lập bệnh nhân viêm ruột - Các enzyme : + Men đông huyết tương ( Coagulaz) + Men làm tan tơ huyết ( Fibrinolyzin hay Staphylokinaz) + Men Deoxyribonucleaz: thủy phân axit dezoxyribonucleic gây thương tổn tổ chức + Men Hyaluronidaz: tác dụng men Penixilinaz làm cho penixilin tác dụng, chế kháng penixilin Câu 2: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh Staphylococcus gây ra? Gồm có bước: - Lấy bệnh phẩm: +) Phải tuân thủ quy tắc tuyệt đối vô trùng để tránh nhiễm VK khác +) Dùng tăm lấy mủ dịch viêm ổ mủ vết thương hở +) Dùng bơm tiêm hút mủ ổ apxe - Kiểm tra hình thái kính hiển vi: +) Làm tiêu bản, đem nhuộm Gram quan sát kính hiển vi +) Nếu tụ cầu: VK hình cầu, bắt màu Gram dương, tụ lại thành đám hình chùm nho - Nuôi cấy vào môi trường thích hợp: +) Bệnh phẩm nuôi cấy vào môi trường nước thịt, thạch máu, thạch Sapman - Tiêm ĐV thí nghiệm: +) Dùng thỏ để gây bệnh +) Để xác định tụ cầu gây bệnh phải dựa vào tính chất sau: + Lên men đường manit + Sinh sắc tố + Có dung huyết tố anpha + Có men Coagulaz + Một số trường hợp phát Dezoxyribonucleaz Fibrinolyzin Câu 3: Đặc tính sinh học Streptococcus suis? Trả lời: Liên cầu khuẩn: Streptococcus suis Hình thái: - VK hình cầu bầu dục, đường kính 0,5 - μm - VK xếp thành chuỗi ngắn có 6-8 VK, có chuỗi 12 VK - Bắt màu Gram + - Không sinh nha bào, không di động, có lớp giáp mô mỏng bên VK Đặc tính nuôi cấy: - VK hiếu khí hay yếm khí tùy tiện( môi trường thiếu O phát triển mạnh) - Thường kí sinh đường ruột gia súc - Nhiệt độ thích hợp: 370C; pH= 7,2-7,4 SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y Môi trường Đặc điểm Nước thịt Sau nuôi cấy 24h, môi trường suốt, đáy ống có cặn, mùi đặc biệt Thạch thường Sau nuôi cấy 24h, VK hình thành khuẩn lạc dạng S, khuẩn lạc nhỏ, tròn, lồi, bóng, màu xám Đường kính khuẩn lạc: 1-2 mm VK xếp thành chuỗi ngắn Thạch máu Sau nuôi cấy 24h, VK phát triển tốt, khuẩn lạc dạng S to môi trường thạch thường (thỏ,ngựa,cừu Những chủng gây bệnh có độc tố, gây dung huyết, môi trường thạch máu làm tan ) máu: týp β > týp α > týp γ - Trong môi trường thạch máu quan sát được: + Týp anpha (α): Khuẩn lạc bao quanh vòng hồng cầu nguyên hình màu xanh, xa khuẩn lạc chút có vòng tan máu Liên cầu dung huyết nhóm anpha, độc lực không cao + Týp bêta (β): Bao quanh KL vòng tan máu hoàn toàn suốt có bờ rõ ràng Liên cầu dung huyết nhóm bêta, độc lực cao + Týp gamma (γ): Xung quanh KL ko có thay đổi nào, hồng cầu giữ màu hồng nhạt Liên cầu khả dung huyết, thường VK không gây bệnh Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Lên men đường sau: + Glucoz + Saccaroz + Lactoz + Salixin + Trêhaloz - Không lên men đường sau: + Mannit + Inulin - Phản ứng sinh hóa khác: + Indol: (-) + Không làm đông vón huyết tương ( Coagulaz - ) + H2S: (-) Cấu trúc kháng nguyên: a KN thân (O) b KN giáp mô (K) c KN bám dính (H) - Nằm lớp màng TB - Là KN nằm màng - Nằm pili( lông) VK - Có vai trò định độc lực gây - số VK có KN giáp mô - Bám chặt vào TB vật chủ bệnh VK chia làm 22 nhóm VK từ A đến V Các chất liên cầu tiết ra: a Độc tố: - Liên cầu nhóm A sinh độc tố mà chất chúng Protein thường độc tố gây nốt ban đỏ da - Dung huyết tố: +) Streptolysin O: Đóng vai trò quan trọng, hầu hết loại liên cầu làm tan máu có độc tố + Dễ độc tố Oxy kháng thể thể (antistreptolysin O) + Định lượng kháng thể antistreptolyzin O có giá trị chẩn đoán bệnh liên cầu gây +) Streptolysin S: ko có ý nghĩa quan trọng, nhiều loại VK sản sinh độc tố + Không bị hoạt tính Oxy, có tính kháng nguyên yếu nên ‎ý nghĩa chẩn đoán bệnh b Enzyme: - Men làm tan tơ huyết ( streptokinaz): + Do liên cầu nhóm A, C, G sinh ra, làm tan tơ huyết + Tính kháng nguyên cao, kích thích thể hình thành kháng thể ( antistreptokinaz) - Streptodornaz: + Làm lỏng mủ đặc liên cầu độc tạo nên + Có loại A, B, C, D chúng có tác dụng có mặt ion Mg2+ - Hyaluronidaz: + Thủy phân axit hyaluronic chất mô liên kết, giúp VK dễ lan tràn + Kích thích thể hình thành kháng thể đặc hiệu dùng chẩn đoán bệnh - Diphotpho-Pyridin-Nucleotidaz + Các liên cầu A, C, G làm chết bạch cầu - Proteinaz: SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y + Phân hủy protein, tiêm liều cao gây thương tổn tim Sức đề kháng: Liên cầu khuẩn có sức đề kháng với nhiệt độ hóa chất - Nhiệt độ: 700C/ 35-40ph, 1000C/ 1ph - Các chất sát trùng thông thường dễ tiêu diệt liên cầu Tính gây bệnh: a Trong tự nhiên: - Chúng cư trú họng ruột, số có khả gây bệnh: - Ở người: nhiễm khuẩn Eczema, mưng mủ phủ tạng, viêm họng, mẩn đỏ - Ở ĐV: chứng mưng mủ, bệnh biến chung hay cục bộ( viêm vú) + Ở ngựa: bệnh viêm hạch truyền nhiễm Adenitis Equorum + Ở bò: bệnh viêm buồng vú truyền nhiễm bò sữa, bệnh bại liệt bê + Ở dê: chứng nung mủ, viêm vú, viêm phổi ngoại tâm mạc b Trong phòng thí nghiệm: - Thỏ ĐVTN dễ cảm thụ - Tiêm vào da cho thỏ: Áp xe nơi viêm - Tiêm vào tĩnh mạch hay phúc mạc: thỏ chết nhanh nhiễm khuẩn huyết - Có thể dùng chuột nhắt để gây bệnh Câu 4: Đặc tính sinh học trực khuẩn Đóng dấu lợn? Trả lời: Trực khuẩn đóng dấu lợn: Erysipelothrix rhusiopathiae a Hình thái: - Trực khuẩn nhỏ, thẳng, có cong, kích thước – 1,5 X 0,2 – 0,4 µm - VK lông, không di động, không hình thành nha bào giáp mô, sinh sản trực phân, sống hiếu khí - Từ canh khuẩn già bệnh phẩm lợn mắc bệnh mạn tính thấy VK có hình sợi tơ dài, cong queo - Trong bệnh phẩm VK đứng riêng lẻ hay đôi một, có nằm bạch cầu - Bắt màu Gram + , nhuộm với tất thuốc nhuộm kiềm Anilin b Đặc tính nuôi cấy: - VK hiếu khí( sinh trưởng môi trường yếm khí), nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,6 Môi trường sau 24h, môi trường đục trong, lắc có vẩn mây bay trở lại cũ, đáy nước thịt ống có cặn trắng nhày màu tro Nếu cho thêm đường glucozo 10% huyết vào môi trường VK mọc tốt Chú ý: nuôi lâu nước thịt ra, có giống lại làm môi trường vẩn đục có mùi thối Thạch thường sau 24h, VK hình thành khuẩn lạc nhỏ, bóng láng( dạng S) hình tròn, rìa gọn, giọt sương Thạch máu Không dung huyết, sau 24 – 48h, thấy xuất khuẩn lạc nhỏ, tròn, óng ánh hạt sương Thạch huyết khuẩn lạc nhỏ li ti, giống hạt sương, màu xanh lơ nhạt, nhìn qua ánh sáng thấy khuẩn lạc 10% to có màu xanh lơ rõ, khuẩn lạc nhỏ có màu lơ nhạt Môi trường hình thành khuẩn lạc nhỏ mịn, dạng S khuẩn lạc dạng R, to hơn, bề mặt packer không đục Thạch lỏng VK phát triển tốt, ko di động Gelatin Cấy sâu nuôi 280C sau ngày đường cấy chích sâu thấy VK mọc ngang lông nhỏ màu xanh tro giống hình bàn chải rửa ống nghiệm Gelatin ko tan chảy, để lâu, mặt gelatin xung quanh vết cấy khô c Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: Phản ứng thử MT đường có 10% huyết thị màu andrat xanh bromotymon + Lên men đường: glucoz, galactoz, levuloz, mannoz + Không lên men đường: saccaroz, mantoz, arabinoz, xyloz, dechtrin, mantion, socbiton, dunxiton, glyxeron, inositon, trihaloz, inulin, xalixin - Phản ứng sinh hóa: + Phản ứng VP: + Phản ứng MR: + Indol: + Sinh H2S: + SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y + Không sinh ure, không gây dung huyết + Catalase: d Sức đề kháng: - Vk sống 17-35 năm môi trường dịch thể nút kín miệng ống nghiệm - Trong phủ tạng lợn chết: tháng; lợn chết chôn đất: tháng - Sấy khô Vk chết tuần - Chỗ ẩm, tối 370C: sống tháng - Có ánh sáng mặt trời sống 12 ngày - Nhiệt độ cao dễ dàng giết VK: canh khuẩn đun 700C/ phút; 1000C chết Thịt có VK cắt dày 15 cm phải nấu sôi 1000C/ 2h30ph chưa diệt VK - Những chất hóa học sát trùng thông thường diệt Vk: clorua vôi 1%, NaOH 5%, axit pheic 1% e Tính gây bệnh: - Trong tự nhiên: + Lợn đặc biệt lợn con, lợn 3-4 tháng tuổi năm tuổi mẫn cảm + Loài chim cảm thụ mức độ nặng nhẹ theo thứ tự: Bồ câu, gà, vịt, ngan, ngỗng, vẹt, sáo, chim sẻ + Triệu chứng chim: mào tái, suy nhược, ỉa chảy Bệnh tích: xuất huyết niêm mạc bắp thịt, gan lách tụ máu, sưng to + Trâu, bò, dê, chó mắc + Người mắc: sốt cao, nốt đỏ da, đầu khớp xương hạch sưng - Trong phòng thí nghiệm: + Chuột bạch: cảm thụ Tiêm S.C chuột canh khuẩn 24h với liều 0,3-0,4 ml sau từ 2-6 ngày tuổi chuột bị bại huyết chết, trước chết chuột sợ ánh sáng, viêm sưng giác mạc Bệnh tích: phổi sưng, tụ máu, lách sưng, gan màu tro, nát + Bồ câu: mẫn cảm Tiêm S.C I.M canh khuẩn 24h liều 1ml Sau 3-4 ngày chết Trước chết: chân bại, thở khó Bệnh tích: chỗ tiêm sưng tụ máu, tim sưng, viêm ngoại tâm mạc có tích nước, gan thận viêm tụ máu Có thể tăng độc lực VK qua tiêm truyền nhiều lần qua bồ câu + Thỏ: cảm thụ Tiêm vi khuẩn vào I.V, thỏ chết sau 3-6 ngày, kết ko chắn Câu 5: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh trực khuẩn Đóng dấu lợn? Trả lời: a Lấy bệnh phẩm: - Thể cấp mạn tính lấy máu tim lách - Bại huyết lấy gan, thận - Mắc bệnh cấp tính bại huyết mà không chết, chuyển sang thể mạn tính lấy tủy sương ( tốt đốt sống 3-5) b Kiểm tra KHV: - Lấy bệnh phẩm làm tiêu nhuộm gram Vrait thấy VK ngắn, nhỏ, tập trung nhiều bạch cầu - Ở lợn mắc bệnh mạn tính VK có hình sợi dài c Nuôi cấy vào môi trường thích hợp: - Dùng bệnh phẩm cấy vào môi trường Packer tốt - Nếu bệnh phẩm thối đem nghiền với nước sinh lý tiêm S.C bồ câu ( không I.M) sau phân lập VK lấy từ máu tim gan bồ câu chết Nuôi cấy vào môi trường quan sát tính chất mọc, thử phản ứng sinh hóa: VP, MR, Indol, H2S d Tiêm ĐVTN: - Tiêm canh khuẩn hay bệnh phẩm S.C cho chuột bạch, S.C hay I.M cho bồ câu, theo dõi triệu chứng, thời gian chết mổ khám xem bệnh tích Câu 6: Chẩn đoán huyết học bệnh Đóng dấu lợn? SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y Câu 7: Đặc tính sinh học Pasteurella multocida? Trả lời: Tụ huyết trùng: Pasteurella multocida Hình thái: + Cầu trực khuẩn nhỏ, hình trứng hình bầu dục, đầu tròn, kích thước 0,25 – 0,4 x 0,4 – 1,5 µm, + Không có lông, không di động, nha bào hình thành lớp giáp mô mỏng thể vật bệnh, khó thấy - Bắt màu Gram – - Tiêu làm từ bệnh phẩm thấy VK bắt màu xẫm đầu (do tốc độ sinh sản lớn) nên gọi VK lưỡng cực - Tiêu từ canh trùng thấy VK đứng riêng lẻ thành chuỗi ngắn Đặc tính nuôi cấy: - VK khí yếm khí tùy tiện, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,4 Mọc yếu môi trường thông thường, môi trường có bổ sung huyết máu VK mọc tốt + Môi trường nước thịt: sau cấy 24h, môi trường đục vừa, lắc có vẩn sương mù lại mất, đáy ống nghiệm có cặn nhầy, mặt môi trường có lớp màng mỏng Môi trường có mùi đặc biệt giống mùi nước dãi khô + Môi trường thạch thường: hình thái khuẩn lạc dạng S nhỏ, suốt long lanh hạt sương, mặt khuẩn lạc vồng Trong môi trường P.multocida phát triển thành dạng khuẩn lạc sau: ++ Dạng S: Khuẩn lạc dạng trơn, bóng láng, long lanh, mặt vồng, có dung quanh sắc cầu vồng, dạng khuẩn lạc có độc lực mạnh, tạo thành lớp giáp mô nhiều loại khuẩn lạc dạng xù xì ++ Dạng R: Khuẩn lạc thường dẹt, có rìa nhám xù xì, trơn nhám, có dung quanh màu xanh, dạng khuẩn lạc có độc lực yếu ++ Dạng M: Khuẩn lạc nhày ướt, có kích thước to nhất, có rìa nhẵn, dung quanh sắc cầu vồng yếu dạng S + Môi trường thạch máu: VK không dung huyết, phát triển tốt, khuẩn lạc to thạch thường Thường dùng để nhân giữ giống VK + Môi trường nước thịt pepton: Sau 24h VK làm đục môi trường, vài ngày sau môi trường trở nên trong, đáy có cặn nhày, lắc khó tan + Môi trường thạch có huyết huyết cầu tố: Gồm: thạch martin: 100ml, huyết cầu tố cừu dê 1/10: 1ml, huyết bò, cừu dê: 4ml Sau 24h, quan sát khuẩn lạc KHV thị giác có hệ số giác X20 góc chiếu ánh sáng đèn 450, khuẩn lạc có tượng phát huỳnh quang, tùy theo độc lực VK mà màu sắc huỳnh quang khuẩn lạc khác nhau: ++ Nếu VK có độc lực cao: màu xanh mạ chiếm 2/3 diện tích khuẩn lạc phía đèn, 1/3 lại có màu vàng cam Khuẩn lạc gọi dạng Fg ( Fluorescent green) ++ Nếu VK có độc lực vừa: khuẩn lạc có 1/3 diện tích có màu xanh mạ, 2/3 màu vàng cam Gọi dạng Fo (F orange) ++ Nếu VK có độc lực yếu: khuẩn lạc không phát huỳnh quang, dạng Fn (No Fluorescent) Hiện tượng phát huỳnh quang xem rõ sau nuôi cấy 24h, để lâu sau 72h huỳnh quang Chỉ áp dụng với P.boviseptica P.suiseptica Với P.aviseptica, chủng có độc lực cao khuẩn lạc phát huỳnh quang dạng Fo + Môi trường gelatin: Dọc theo đường cấy trích sâu, VK mọc thành khuẩn lạc mịn, hình hạt, không làm tan chảy gelatin Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: + Lên men đường ko sinh hơi: glucoz, saccaroz, mannit, sozbit, xylo + Không lên men đường: lactoz, maltoz, arabino, rammo, salixin, dunxid, adonit - Các phản ứng sinh hóa khác: + Indol: + H2S: +, + VP: + Catalaz: + + MR: + Oxydaz: + Thành phần kháng nguyên: - P.multocida phức tạp cấu trúc loại kháng nguyên thay đổi Gồm loại kháng nguyên: kháng nguyên giáp mô (K) kháng nguyên thân (O) - Kháng nguyên thân (O): + Đóng vai trò quan trọng trình hình thành miễn dịch vật + Phức hợp protein – lipit – polysaccarit + Đóng vai trò quan trọng việc gây bệnh VK SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Kháng nguyên giáp mô (K) : + Tránh thực bào kháng thể + Chia nhóm theo paster Kí hiệu : A, B, D, E, F + VK sinh khuẩn lạc dạng S tạo kháng nguyên K + Cấu tạo thành phần: Protein + polysaccarit + lipopolysaccarit + Có khả gắn kết với thụ thể hồng cầu Tính gây bệnh VK a Trong tự nhiên : - P.multocida gây chứng bại huyết kèm theo tụ huyết, xuất huyết cho gia súc, gia cầm - P.boviseptica gây bệnh THT cho trâu, bò với triệu chứng thủy thũng sưng hạch hầu, viêm phổi Bệnh từ trâu, bò lây sang ngựa Ở nước ta trâu nặng bò Trong ổ dịch thấy trâu, bò rừng, hươu nai, sơn dương, lợn thỏ rừng mắc bệnh - P.suiseptica gây bệnh THT cho lợn, lợn – tháng tuổi mắc nhiều, vật bị bệnh thường có bệnh tích : phổi viêm có nhiều vùng gan hóa, viêm ngoại tâm mạc có tích nước, hạch hầu viêm, thủy thũng Bệnh lợn lây sang trâu, bò gà - P Aviseptica gây bệnh THT cho gia cầm, gà vịt thường bị bệnh hay gây vụ dịch lớn, giết chết nhiều Bệnh tích chủ yếu tim sưng, viêm ngoại tâm mạc, có tích nước, mỡ vành tim xuất huyết, gan tụ máu, có hoại tử điểm đầu mũi kim, đầu đinh ghim, màu vàng nhạt - VK có khả gây bệnh cho người, nhiễm trùng cục bộ, bị ĐV bệnh cắn, cào vết thương bị nhiễm khuẩn b Trong phòng TN : - Chuột bạch thỏ cảm nhiễm : + Với thỏ : tiêm da, phúc mạc tĩnh mạch canh trùng 24h, thỏ chết sau 24 – 48h Bệnh tích thể : nơi tiêm tụ máu, lồng ngực tích đầy nước, lách sưng to, phổi sưng tụ máu, khí quản xuất huyết Sức đề kháng : - VK THT dễ bị tiêu diệt sức nóng, ánh sáng mặt trời chất sát trùng - VK bị diệt đun 580C/20ph, 800C/10ph, 1000C chết - Ánh sáng MT chiếu trực tiếp, diệt VK canh trùng sau ngày - Trong tổ chức ĐV bệnh bị thối nát VK sống – tháng chất sát trùng thông thường diệt VK nhanh chóng : axit phenic 5%, crezit 3%, nước vôi 1%, formol 2% - VK sống lâu sinh sản đất ẩm thiếu ánh sáng có nhiều muối nitrat chất hữu - Trong chuồng nuôi súc vật đồng cỏ VK sống hàng tháng có hàng năm Câu 8: Chẩn đoán vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng gà? a Lấy bệnh phẩm : - Có thể lấy máu tim, gan, lách, tủy xương, phổi, dịch thủy thủng b Kiểm tra KHV : - Tiến hành lấy bệnh phẩm, làm thành tiêu bản, nhuộm Gram Nếu có P.multocida, vi khuẩn nhỏ, ngắn hình trứng, bắt màu thẫm hai đầu, Gram âm, không nha bào, lông, có giáp mô khó phát thấy xem nhuộm Trường hợp bệnh mạn tính hay bệnh phẩm thối khó phát VK KHV, cần đem bồi dưỡng môi trường tiêm ĐVTN c Nuôi cấy vào môi trường thích hợp: - Cấy vào môi trường nuôi cấy thích hợp, quan sát tính chất mọc xác định phản ứng sinh hóa cần thiết, khả không dung huyết d Tiêm ĐVTN: - Dùng thỏ hay chuột bạch để tiêm - Nếu bệnh phẩm có P.multocida sau tiêm 24 – 48h vào da hay phúc mạc, ĐV chết với bệnh tích tụ huyết, xuất huyết - Mổ khám quan sát bệnh tích Câu 9: Đặc tính sinh học VK brucella? Trả lời: a Hình thái tính chất bắt màu: - Trực khuẩn nhỏ, đầu tròn kích thước 0,6 – 1,5 x 0,5 – 0,7 µm - Không di động, không sinh nha bào, có giáp mô - Bắt màu gram – SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y b Đặc tính nuôi cấy: - Vi khuẩn hiếu khí, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 6,8 – 7,4 - VK mọc tốt môi trường cho thêm huyết thanh, máu, gan Mọc chậm môi trường nuôi cấy thông thường Môi trường nước thịt Đục đều, có váng nhỏ mặt, sau lắng cặn lầy nhầy đáy Môi trường thạch nước gan Khuẩn lạc hạt sương, tròn, lồi, ướt, màu sắc Môi trường thạch huyết Cấy theo đường trích sâu, sau 3-6 ngày cách mặt thạch 0,5 cm trở xuống VK đứng mọc theo đường cấy 1-2 cm, khuẩn lạc màu trắng, trắng xám Môi trường khoai tây Sau 40h, VK mọc thành khuẩn lạc màu nâu Môi trường gelatin Không làm tan chảy gelatin c Đặc tính sinh hóa: - Không lên men đường - Có khả phân giải ure nhờ men ureaz - Có khả năg sinh H2S dựa vào tính chất ức chế thuốc nhuộm đặc biệt: Thionin vfa fucsin phân biệt loại brucella d Cấu trúc kháng nguyên: - Có phức hợp kháng nguyên: + Kháng nguyên A kháng nguyên M, typ có tượng ngưng kết chéo + Tỉ lệ kháng nguyên A kháng nguyên M typ Brucella khác e Miễn dịch: - Brucellosis có khả miễn dịch, gia súc người mắc bệnh brucella khỏi không mắc bệnh lại - Miễn dịch chống Brucella miễn dịch qua trung gian tế bào, lympho T đại thực bào đóng vai trò thể đáp ứng miễn dịch thể - Các yếu tố: opsonin, ngưng kết tố, kháng thể kết hợp bổ thể hạn chế tác hại VK f Sức đề kháng: - VK có sức đề kháng tương đối cao, điều kiện 00C/8 tháng - Ở 600C/30ph, 750C/5-10ph, đun sôi VK bị diệt ngay( khử trùng sữa 700C/30ph) - Trong nước VK sống từ 5-6 tháng, sữa 6-8 tháng, lông 1,5-4 tháng, phân 45 ngày - Các chất sát trùng thông thường diệt VK dễ dàng: Axit phenic, focmon 4% diệt VK từ vài phút đến 1h, nước vôi 5%/2h g Tính gây bệnh: - Trong tự nhiên: + Ổ chứa VK: dê, cừu, bò, trâu, lợn, chó, thú rừng, loài chim, loài chuột + Bệnh truyền từ đực sang gây sảy thai Con đực, VK xâm nhập vào tuyến sinh dục mắc bệnh thể ẩn + Người mắc chăm sóc ĐV bị sảy thai, tay bị nhiễm VK đưa vào niêm mạc miệng chiếm 70% 30% uống sữa tươi, ăn phó mát tươi bò, dê, cừu, lây ăn rau tươi bị nhiễm khuẩn - Trong phòng thí nghiệm: + ĐVCT: chuột lang, thỏ, khỉ, chuột nhắt + Gây bệnh tiêm bệnh phẩm hay canh khuẩn S.C hay phúc mạc Sau tiêm gây nhiễm khuẩn huyết, xuất sớm + Nếu tiêm vào phúc mạc sau 10-15 ngày theo độc lực thấy hạch bẹn sưng, nung mủ, tổn thương khớp, xuất mụn lao, nang lao giả lách, gan, hạch, phổi Câu 10: Chẩn đoán bệnh xảy thai truyền nhiễm Brucellosis phản ứng ngưng kết? Câu 11: Đặc tính chung giống Salmonella hình thái, nuôi cấy, sinh hóa, độc tố? Trả lời: Hình thái: - Salmonella trực khuẩn hình gậy ngắn, hai đầu tròn, kích thước 0,4 – 0,6 x – µm - Không hình thành giáp mô nha bào - Đa số loài Salmonella có khả di động mạnh có 7-12 lông xung quanh thân( trừ S.gallinarum – pullorum) - VK nhuộm màu với thuốc nhuộm thông thường - Bắt màu Gram -, bắt màu toàn thân đậm hai đầu Tính chất nuôi cấy: SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Salmonella vừa hiếu khí vừa kỵ khí không bắt buộc, dễ nuôi cấy, nhiệt độ 370C, – 420C, pH= 7,6, phát triển pH: – - Salmonella gây bệnh gia súc, sinh trưởng tốt điều kiện hiếu khí, điều kiện kỵ khí Môi trường nước thịt cấy vài đục nhẹ, sau 18h đục đều, nuôi lâu đáy ống nghiệm có cặn, môi trường có màng mỏng Môi trường thạch thường Vk mọc thành khuẩn lạc tròn, sáng xám, nhẵn bóng, lồi lên giữa, nhỏ trắng khuẩn lạc E Coli ( đường kính: – 1,5 mm) Thạch pepton Sau 1-2 ngày khuẩn lạc hình thành bờ chất dính lầy nhầy xung quanh Thỉnh thoảng có thấy khuẩn lạc dạng R, nhám, mặt không bóng, không đều, mờ.(S.paratyphi B, S.cholerae suis) - Không làm tan chảy gelatin Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: MT kiểm tra MT nước thịt pepton cho thêm loại đường với tỉ lệ 0,5% chất thị màu xanh bromotymon, tím bromocrezon, đỏ phenon + Phần lớn Salmonella lên men đường có sinh hơi: glucoz, mannit, mantoz, galactoz, levuloz, arabinoz, xyloz, dechtrin, dunxit, ramnoz,…Một số lên men ko sinh hơi: S.typhi suis, S.typhi, S cholerae suis( ko lên men arabinoz) + Tất Salmonell ko lên men: lactoz, saccarroz - MT có kali xyanua: tất Salmonella ko mọc - Khử cacboxyn: lyzyn, octinin, acginin - Không phân giải urê - Indon, VP: - Phân giải xanh metylen - Catalaz, MR: + ( trừ S.cholerae suis, S gallinarum – pullorum) - H2S: + ( trừ S.paratyphi A, S.typhi suis, S.abortus equi) - Dùng môi trường đặc biệt EMB, Kauffman, SS, để phân lập Sal Độc tố: a Nội độc tố: + Rất mạnh, liều thích hợp I.V giết chết chuột bạch, chuột lang 48h Bệnh tích: ruột non sung huyết, mảng payer phù nề, hoại tử + Độc tố ruột gây ngộ độc thần kinh, gây hôn mê, co giật, nội độc tố có hai loại: gây sung huyết mụn loét b Ngoại độc tố: + Hình thành điều kiện invitro nuôi cấy kị khí + Ngoại độc tố tác dụng vào thần kinh ruột + Chế giải độc tố cách trộn focmon 5% để 370C 20 ngày Khi tiêm cho thỏ tạo kháng thể ngưng kết nên thỏ có khả trung hòa với độc tố VK Câu 12: Cấu trúc kháng nguyên giống Salmonella? Cấu trúc kháng nguyên Salmonella gồm: - Kháng nguyên O - Kháng nguyên H - Kháng nguyên vỏ K Kháng nguyên O: - Rất phức tạp, tìm thấy 65 yếu tố khác Một Salmonella có nhiều yếu tố yếu tố - Chia thành 34 nhóm: A, B, C1, C2, C3, … - Mỗi nhóm VK có KN O cấu tạo số thành phần định kí hiệu số La mã + Yếu tố đặc hiệu: loài có + Yếu tố ko đặc hiệu: chung cho vài loài Ví dụ: Nhóm A: ( II, IX, XII) Yếu tố đặc hiệu: II ; Yếu tố ko đặc hiệu: XII Nhóm B: ( I, IV, XII, XXVII) yếu tố đặc hiệu: IV; yếu tố ko đặc hiệu: XII Nhóm D: ( I, IX, XII) yếu tố đặc hiệu: IX; yếu tố ko đặc hiệu: XII Kháng nguyên H: - Chỉ có Salmonella có lông ( trừ S.gallinarium – pullorum) - Kháng nguyên H chia làm pha ( Phase): SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y + Pha có tính chất đặc hiệu, gồm 28 loại KN lông biểu thị chữ mẫu Latinh thường: a, b, c, d, f, g, h,…z + Pha ko có tính chất đặc hiệu, ngưng kết với loại khác( gặp Escherichia) biểu thị chữ số Ả rập 1,2,3,4,5,6 hay chữ Latinh thường e,n,x… Kháng nguyên vỏ K: - Kháng nguyên K Salmonella ko phức tạp, có Kn vỏ biết KN Vi có typ S.typhi S.para typhi KN Vi gặp KT Vi gây nên tượng ngưng kết chậm xuất hạt nhỏ - Bản chất KN Vi phức hợp gluxit – lipid – polypeptide gần giống KN O, KN Vi không tham gia vào trình gây bệnh Câu 13: Đặc tính sinh học trực khuẩn E.coli? Trả lời: Escherichia coli a Hình thái: - Trực khuẩn hình gậy ngắn, kích thước – x 0,6 µm - Trong thể, có hình trực khuẩn đứng riêng lẻ xếp thành chuỗi ngắn - Trong canh khuẩn già có trực khuẩn dài – µm - Phần lớn di động có lông xung quanh thân, số không di động - VK không sinh nha bào, có giáp mô b Tính chất bắt màu: - Bắt màu Gram -, bắt màu sẫm hai đầu, khoảng nhạt - Lấy VK từ khuẩn lạc nhầy để nhuộm có giáp mô, soi tươi ko có - Dưới KHV điện tử E.coli có nhân, khối tối nằm nguyên sinh chất màu sáng c Đặc tính nuôi cấy: - Trực khuẩn hiếu khí yếm khí tùy tiện, sinh trưởng – 400C, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,4; phát triển 5,5 – Môi trường nước thịt phát triển tốt, môi trường đục, có cặn màu tro nhạt lắng xuống đáy, có màu xám nhạt mặt môi trường, môi trường có mùi phân thối Môi trường thạch thường sau 24h, hình thành khuẩn lạc tròn, ướt, không suốt, màu tro trắng nhạt, lồi đường kính – mm Nuôi lâu khuẩn lạc trở thành gần nâu nhạt mọc rộng ra, quan sát dạng R M Môi trường Mule Kopman ( Muller E.Coli không mọc Kauffman), Môi trường lục Malasit E.coli không mọc Môi trường Endo E.coli có khuẩn lạc màu đỏ Môi trường EMB E.colicó khuẩn lạc tím đen Môi trường thạch SS E Coli có khuẩn lạc đỏ Môi trường Vinson-Blai E Coli bị ức chế d Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: + Lên men sinh đường: fructoz, glucoz, levuloz, galactoz, xyloz, ramnoz, maniton, mannit, lactoz + Không lên men: andonit, inozit - Các phản ứng khác: + Sữa: đông sau 24 – 72h 370C + Gelatin, huyết đông, lòng trắng trứng đông: không tan chảy + H2S: + VP: + MR: + + Indon: + + Khử nitrat thành nitrit + Có men decacboxylaz với lyzin, denitin, acginin glutamic e Cấu trúc kháng nguyên: - Kháng nguyên O: I, II, III, IV, … có gần 150 typ + Tính chất giống kháng nguyên O vi khuẩn đường ruột khác SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 10 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y + Kháng nguyên K bao phủ kín kháng nguyên O nên Vk ko gây ngưng kết với kháng nguyên O tương ứng - Kháng nguyên H: + Chỉ có pha biểu thị số: 1, 2, 3, - Kháng nguyên K: gồm loại KN: L, A, B + Kháng nguyên L: ngăn ko cho tượng ngưng kết O VK sống xảy 100 0C/1h bị phá hủy + Kháng nguyên A: Ngăn tượng ngưng kết O, gây nên tượng phình vỏ 1200C/2h bị phá hủy + Kháng nguyên B: ngăn không cho ngưng kết O, 1000C/1h bị phá hủy phần Gồm B1, B2, B3, B4, B5 *) Trong 28 typ huyết phổ biến có chủng gây bệnh: O111B4, O86B7, O55B6, O26B6, O127B8, O128B12, 408 145 f Sức đề kháng: - E.coli không chịu nhiệt độ, đun 550C/1h, 600C/30ph, 1000C chết - E.coli bị chất sát trùng thông thường diệt: axit phenic, biclorua thủy ngân, focmon, hydroperoxit 0/00 - Môi trường bên E.coli độc tồn tháng g Tính gây bệnh: - E.coli có sẵn ruột ĐV, tác động gây bệnh sức đề kháng vật giảm sút( chăm sóc, nuôi dưỡng, cảm lạnh, cảm nắng) - Bệnh E.coli xảy bệnh truyền nhiễm kế phát sở thiếu vitamin mắc bệnh virus kí sinh trùng - E.coli gây bệnh gia súc đẻ – ngày – ngày - Bệnh Colibacillosis E.coli gây ngựa, bê, cừu, lợn gia cầm non Biểu bệnh bê 3-12 ngày tuổi: sốt cao, tháo phân, tháo dạ, phân lúc đầu vàng đặc sệt, mùi chua, sau chuyển sang màu trắng xám, hôi thối, dính máu, bê ỉa nhiều lần rặn nhiều - Gia cầm: tháo dạ, phân xanh hôi thối, có tượng viêm kết mạc mắt, viêm cuống phổi, viêm niêm mạc mũi làm GC thở khó - Lợn con: giống bê, lây lan cho ổ ổ khác ĐV lớn: VK gây bệnh viêm phúc mạc, gan, thận, bàng quang, túi mật, bầu vú, khớp xương - Người, trẻ em tuổi: Vk gây viêm dày ruột, gây nhiễm độc, viêm túi mật, bàng quang, đường niệu sinh dục viêm não, nhiễm khuẩn huyết trầm trọng *) Trong phòng TN: Tiêm S.C chuột bạch, chuột lang, thỏ viêm cục bộ, liều lớn gây bại huyết, giết chết vật Câu 14: Đặc tính sinh học trực khuẩn phó thương hàn lợn? Trả lời: a Hình thái: - Salmonella cholerae suis ( Bacillus cholerae suis) trực khuẩn hình gậy ngắn, hai đầu tròn, kích thước 0,4 – 0,6 x – µm - Không hình thành giáp mô nha bào - Có khả di động mạnh có 7-12 lông xung quanh thân - VK nhuộm màu với thuốc nhuộm thông thường - Bắt màu Gram – - Bắt màu toàn thân đậm hai đầu b Tính chất nuôi cấy: - Salmonella cholerae suis vừa hiếu khí vừa kỵ khí không bắt buộc, dễ nuôi cấy, nhiệt độ 370C, – 420C, pH= 7,6, phát triển pH: – - Salmonella gây bệnh gia súc, sinh trưởng tốt điều kiện hiếu khí, điều kiện kỵ khí Môi trường nước thịt Môi trường thạch thường Thạch pepton cấy vài đục nhẹ, sau 18h đục đều, nuôi lâu đáy ống nghiệm có cặn, môi trường có màng mỏng Vk mọc thành khuẩn lạc tròn, sáng xám, nhẵn bóng, lồi lên giữa, nhỏ trắng khuẩn lạc E Coli ( đường kính: – 1,5 mm) Sau 1-2 ngày khuẩn lạc hình thành bờ chất dính lầy nhầy xung quanh Thỉnh thoảng có thấy khuẩn lạc dạng R, nhám, mặt không bóng, không đều, mờ - Không làm tan chảy gelatin c Tính biến dị: - Trong môi trường nuôi cấy, Sal biến dị khuẩn lạc kháng nguyên: SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 11 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y + Biến dị khuẩn lạc S thành R: VK có khuẩn lạc dạng S có kháng nguyên O đặc hiệu chủng qua thời gian nuôi cấy, VK phát sinh biến dị khuẩn lạc thành dạng R KN O không đặc hiệu + Biến dị khuẩn lạc O thành H: ảnh hưởng axit phenic VK lông sinh biến dị nên VK KN O - Biến chủng Sal.cholerae suis chủng Kunzendorf KN lông pha 1( phâ đặc hiệu): S VI, VII:-1,5 d Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: MT kiểm tra MT nước thịt pepton cho thêm loại đường với tỉ lệ 0,5% chất thị màu xanh bromotymon, tím bromocrezon, đỏ phenon + Lên men đường không sinh hơi: glucoz, mannit, mantoz, galactoz, levuloz, arabinoz, xyloz, dechtrin, dunxit, ramnoz,… + Ko lên men: lactoz, saccarroz - MT có kali xyanua: tất sal ko mọc - khử cacboxyn: lyzyn, octinin, acginin - Không phân giải ure - Indon, VP, MR: - Catalaz: + - H2S: + - Dùng môi trường đặc biệt EMB, Kauffman, SS, để phân lập Sal e Sức đề kháng: - Sal tồn nước thường tuần, nước đá 2-3 tháng Trong xác ĐV chết chôn bùn 2-3 tháng - Nhiệt độ: Đề kháng yếu: 500C/1h; 700/20ph; 1000/5ph, khử theo phương pháp Pasteur bị tiêu diệt - Ánh sáng mặt trời chiếu trực tiếp: sau 5h nước trong; 9h nước đục - Các chất sát trùng thông thường dễ phá hủy VK hoàn toàn: Phenon 5%, HgCl 1/500, formon 1/500 diệt 15-20 phút Các chất cristal violet, lục malachit, natri hyposunfit, dixitrat, muối mật gây độc cho E.coli ko ảnh hưởng Sal - Thịt ướp nồng độ muối 29% sống 4-8 tháng t0:6-120C - Xử lý miếng thịt nhiễm trùng hơ lửa hay nướng ảnh hưởng Sal bên f Cấu tạo kháng nguyên: - Cấu trúc kháng nguyên S.VI, VII: c-1,5 - Kháng nguyên thân O: VI, VII - Kháng nguyên tiêm mao H: + Pha 1: c + Pha 2: 1,5 g Độc tố: - Nội độc tố: + Rất mạnh, liều thích hợp I.V giết chết chuột bạch, chuột lang 48h Bệnh tích: ruột non sung huyết, mảng payer phù nề, hoại tử + Độc tố ruột gây ngộ độc thần kinh, gây hôn mê, co giật, nội độc tố có hai loại: gây sung huyết mụn loét - Ngoại độc tố: + Hình thành điều kiện invitro nuôi cấy kị khí + Ngoại độc tố tác dụng vào thần kinh ruột + Chế giải độc tố cách trộn focmon 5% để 370C 20 ngày Khi tiêm cho thỏ tạo kháng thể ngưng kết nên thỏ có khả trung hòa với độc tố VK h Tính gây bệnh: - Trong tự nhiên: + VK theo thức ăn nước uống vào đường tiêu hóa + Gây bệnh thương hàn phó thương hàn cho lợn, bò, gà, người, vịt,… số ĐV khỏe mạnh điều kiện sức đề kháng ĐV giảm sút, VK xâm nhập vào máu nội tạng gây bệnh Sự giảm sút SĐK thời tiết, chăm sóc nuôi dưỡng, mắc bệnh truyền nhiễm + Gây bệnh phó thương hàn cho lợn từ - tháng tuổi tỷ lệ tử vong 25% có đến 95%, mạn tính gây chết + Bệnh đơn thuần: vật sốt, tháo phân, mùi tanh, thối đặc biệt, dính vào khoeo, đuôi + Bệnh tích: lách sưn to, dai cao su, gan tụ máu hoại tử, niêm mạc dày ruột viêm đỏ, tụ máu có có nốt loét SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 12 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Trong phòng thí nghiệm: chuột bạch cảm nhiễm nhất, chuột lang, thỏ cảm nhiễm + Tiêm canh khuẩn S.C phúc mạc, chỗ tiêm S.C phát sinh thủy thũng, sưng mủ, loét, sau 4-5 ngày 8-10 ngày vật gầy dần chết Bệnh tích: tụ máu, lách sưng, viêm ruột, bệnh kéo dài gan lách có điểm hoại tử - Tính gây miễn dịch: + Sau khỏi bệnh tiêm vacxin, thể ĐV sản sinh miễn dịch tương đối dài Trong dịch thể ĐV miễn dịch xuất ngưng kết tố, kết tủa tố, kháng thể kết hợp với bổ thể Kháng nguyên O có gây đáp ứng MD rõ rệt, KN H ko có khả năg Câu 15: Chẩn đoán huyết học bệnh thương hàn gà phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính? Trả lời: - Dùng phản ứng ngưng kết để phát gà mắc bệnh hay gà mang vi khuẩn làm lây lan bệnh Ở đàn gà tiến hành gà - tháng tuổi Phản ứng tiến hành - tháng 1đợt, đượt - lần cách - tuần lễ ảnh hưởng hoạt lực VK - Phản ứng tiến hành sau: + Chuẩn bị - phiến kính, làm gạch men trắng chia ô + Dùng ống hút, nhỏ từ - giọt kháng nguyên lên ô nhỏ giọt máu gà nghi( dùng que cấy bạch kim có vòng cấy thích hợp, đường kính - mm cho tỉ lệ máu với kháng nguyên 1/5) + Lấy máu cách chọc kim lên chóp mào gà, dùng kéo cắt chóp mào gà, lấy máu tĩnh mạch cánh + Sau trộn hỗn dịch máu với kháng nguyên nước sinh lý giọt máu gà khỏe đối chứng dương gồm kháng nguyên kháng huyết chuẩn - Phản ứng dương tính: thấy có tượng ngưng kết hạt bông, trông thấy mắt thường - Phản ứng âm tính: hỗn dịch coa màu trộn máu kháng nguyên, không xuất hạt ngưng kết Câu 16: Đặc tính sinh học trực khuẩn nhiệt thán Bacillus anthracis? Trả lời: Trực khuẩn nhiệt thán: Bacillus anthracis Hình thái: - Trực khuẩn to, đầu bằng, kích thước: – 1,5 x – µm - Không có lông, khả di động - Bắt màu gram (+): màu tím xếp thành chuỗi - Khả sinh nha bào hình thành gia súc bệnh Sinh nha bào không làm thay đổi kích thước - VK có khả sinh giáp mô: Có thể bao bọc 1,2 tế bào đứng cạnh a Điều kiện hình thành nha bào: - Đủ oxy - Môi trường nghèo chất dinh dưỡng - Nhiệt độ thích hợp: 370C - Độ ẩm thích hợp - Độ pH thích hợp: pH: – - Điều có vi khuẩn thể động vật Để nhuộm nha bào, dùng phương pháp Zichl – Nielsen b Điều kiện hình thành giáp mô: - Giáp mô có chất protit, polyme D – glutamic Giáp mô hình thành thể súc vật môi trường có 20% huyết - Giáp mô yếu tố độc lực vi khuẩn, giúp VK tránh thực bào - Giáp mô đề kháng cao với thối rữa cấu trúc vi khuẩn Giáp mô có chứa kết tủa tố nguyên giúp cho trình chẩn đoán, muốn nhuộm giáp mô dùng phương pháp Hiss Giáp mô : Kết tủa tố nguyên → Kích thích thể → Đáp ứng miễn dịch → Kết tủa tố Tạo phức hợp kháng nguyên không tan Nuôi cấy : - Hiếu khí, dễ nuôi cấy, nhiệt độ thích hợp : 370C, (12 – 420C), pH : 7,2 – 7,4; (6 – 9) - Môi trường nước thịt : 18 – 24h có sợi lơ lửng dọc ống nghiệm, lắng xuống đáy thành cặn, có mùi thơm bánh bích quy bơ - Môi trường thạch thường : khuẩn lạc dạng R, to, nhám, xù xì, đường kính – mm SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 13 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Môi trường thạch máu : VK không gây dung huyết, mọc tốt môi trường thạch thường, khuẩn lạc dạng S nhiều dạng R - Môi trường gelatin : Cấy chích sâu, nuôi 280C sau – ngày, VK mọc thành nhánh ngang trông giống tùng lộn ngược Đặc tính sinh hóa : - Khả lên men đường : lên men ko sinh đường: glucoza, mantoza, saccaroza, manit - Các phản ứng khác : + Indol : + H2S: + MR: + + VP: + Sức đề kháng: - VK đề kháng với nhiệt độ hóa chất: 600C/15ph; 750C/2ph - Trong xác chết thối, chết sau ngày - Nha bào có sức đề kháng: Formol 3% sau 2h nha bào tiêu diệt ( tính độc formol 0/00 ) Nước vôi pha đặc sau 48h diệt nha bào - Trên gia súc vật có nha bào ngâm vôi, muối nha bào tồn - Dùng formol 10% / 4h30ph để khử trùng da - Tồn lâu tự nhiên: 20 – 35 năm, nguồn lây bệnh nguy hiểm Kháng nguyên: a Kháng nguyên vỏ: K - Có giáp mô VK nhiệt thán, có cấu tạo hóa học polypeptit, polyme axit D- glutamic, phương diện miễn dịch, KN K bán KN b Kháng nguyên thân: O - Có thân VK nhiệt thán, cấu tạo polyozit, phương diện miễn dịch, KN O bán KN c Kháng nguyên phức hợp hòa tan - Cấu tạo Nucleoproteit, KN hoàn toàn, gây miễn dịch tiêm Tính gây bệnh: a Trong tự nhiên: - Những loài ĐV ăn cỏ trâu, bò, ngựa, dê, cừu, lạc đà, hươu nai,… mẫn cảm, thường bại huyết mà chết + Lợn, chó cảm nhiễm, thường bị bệnh cục họng hạch + Loài chim không cảm nhiễm + Người cảm nhiễm thường gặp thể lâm sàng: thể da, thể ruột, thể phổi ++ Thể da: VK xâm nhập vào da, chỗ xâm nhập xuất nốt phỏng, đen hoại tử gọi nốt mủ ác tính Hay gặp, mức độ bệnh nhẹ ++ Thể phổi: người bị mắc bệnh hít phải nha bào nhiệt thán Ít gặp hơn, mức độ nặng ++ Thể ruột: người mắc bệnh ăn phải thịt gia súc mắc bệnh nhiệt thán Ít gặp, mức độ nặng - Có đường truyền bệnh chính: + Qua đường tiêu hóa: ăn phải nha bào lẫn thức ăn nước uống Ở người ăn thịt gia súc ốm bệnh + Qua da: da bị tổn thương giới côn trùng mang mầm bệnh đốt phải Trong trường hợp vai trò ruồi, nhặng, ve mòng lớn Ở người hay gặp: công nhân thuộc da, lò sát sinh, bác sỹ thú y… + Qua đường hô hấp: hít phải nha bào Ở người làm nghề thuộc da, cắt xén lông cừu, chế biến len sợi - Bệnh nhiệt thán phát quanh năm hay gặp mùa nóng ẩm, tháng mưa nhiều vào mùa ngập lụt lúc nha bào có điều kiện phát tán - Ở miền núi bệnh hay phát vào mùa hanh khô cỏ, gia súc gặm cỏ sát đất ăn phải nha bào, mặt khác vào mùa khô, nước cạn nên thường tập trung nhiều nha bào ao tù nước đọng, gia súc uống nước uống phải nha bào - Bệnh thường xảy vùng gọi vùng nhiệt thán, nơi súc vật bị bệnh mà phương pháp xử lý môi trường không tốt nên nha bào có điều kiện tồn lưu cữu để bệnh lây lan - Trong tự nhiên nha bào đóng vai trò quan trọng trình truyền bệnh - Ở nơi chôn súc vật chết bệnh nơi nhiễm chất tiết súc vật ốm máu, phân, nước tiểu, VK nhiệt than hình thành nha bào tồn thời gian dài, giun đất ăn phải nha bào đùn lên mặt đất SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 14 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y theo phân Khi mưa xuống, nha bào theo nước mưa phát tán xa bám vào cỏ, ĐV ăn phải nha bào, vào đường tiêu hóa niêm mạc bị tổn thương( dị vật, thức ăn cứng, kí sinh trùng…) nha bào qua vết thương vào máu mọc thành VK mà gây bệnh b Trong phòng thí nghiệm: - Chuột lang, chuột bạch, thỏ dễ cảm nhiễm - Tiêm da canh khuẩn hay bệnh phẩm sau 12h vật bị sốt, nơi tiêm bị thủy thũng; sau 24h vật mệt nhọc, khó thở, nhiệt độ hạ xuống 30 – 280C sau – ngày chết - Bệnh tích: + Nơi tiêm thủy thũng, có chất keo nhày lòng trắng trứng + Hạch lympho sưng đỏ, thủy thũng xung quanh + Máu đen, đặc, khó đông + Lá lách sưng to, nhũn bùn + Tất quan tụ máu, bàng quang tích nước tiểu đỏ Câu 17: Chẩn đoán VK học bệnh nhiệt thán? a Lấy bệnh phẩm: - Do tính chất nguy hiểm bệnh, lấy bệnh phẩm phải tiến hành KT cẩn thận để tránh rơi vãi môi trường gây ô nhiễm, VK nhanh chóng hình thành nha bào, khó diệt - Với GS nghi mắc nhiệt thán tuyệt đối không mổ - Nếu vật sống lấy máu TM tai, trước lấy máu phải sát trùng cồn iod 5%, đợi khô, đâm kim thẳng vào TM cho máu chảy thẳng vào ống nghiệm Sau lấy máu xong, sát trùng kỹ chỗ lấy máu cồn iod 5% - Nếu vật chết cắt lấy mẩu da tai cho vào lọ, sát trùng đốt vết cắt - Trường hợp cần thiết lấy lách: dùng cồn sát trùng vùng gian sườn số bên trái, dùng dao rạch đường nhỏ, lấy panh kẹp lách, lôi ra, cắt mẩu nhỏ cho vào lọ nút kín - Đốt kĩ chỗ mổ dùng tẩm cồn iod 5% nút kín chỗ mổ b Làm tiêu bản, nhuộm Gram tìm VK: - Nếu bệnh phẩm máu: làm tiêu bản, cố định cồn etylic, sau nhuộm giemsa - Nếu bệnh phẩm lách: làm tiêu bản, cố định nhiệt, nhuộm gram - Sau nhuộm: + Trực khuẩn nhiệt thán to, đầu vuông, đứng riêng lẻ thành chuỗi ngắn, có giáp mô bao bọc xung quanh, bắt màu gram dương c Nuôi cấy bệnh phẩm vào môi trường: - Môi trường nước thịt, thạch thường, thạch máu quan sát tính chất mọc d Tiêm ĐVTN: - Phương pháp quan trọng chẩn đoán bệnh - Dùng chuột lang hay chuột bạch để gây bệnh - Nếu bệnh phẩm tươi, đem nghiền pha với nước sinh lý cấy vào nươc thịt, nuôi 24h 37 0C tiêm vào da mặt đùi chuột - Nếu bệnh phẩm thối có tạp khuẩn khía da bụng bôi - Bệnh phẩm có VK, chuột chết sau – ngày Mổ khám thấy nơi tiêm thủy thũng cục bộ, có chất keo nhày giống lòng trắng trứng Hạch lympho sưng đỏ, thủy thũng, máu đen, đặc khó đông, lách sưng to, mềm, tất quan tổ chức tụ máu, bàng quang chứa đầy nước tiểu đỏ Câu 18: Trình bày phản ứng kết tủa Ascoli để chẩn đoán bệnh nhiệt thán? a Nguyên lý: - Trong giáp mô VK có kháng nguyên gọi kết tủa tố nguyên có khả kích thích thể động vật sản sinh kháng thể đặc hiệu gọi kết tủa tố Khi kết tủa tố nguyên gặp kết tủa tố tạo phức hợp kháng nguyên kháng thể chất cặn không tan - Ứng dụng: với loài VK có nha bào b Các bước chuẩn bị: - Chuẩn bị kháng nguyên nghi: + bệnh phẩm lách, đem nghiền nhỏ, cho vào 10 phần nước sinh lý, đun sôi cách thủy 15 – 20 phút, để nguội, lọc kỹ, ly tâm lấy nước + Bệnh phẩm da, lông, xương, đem hấp ướt 1200C 30 phút để khử trùng, cắt nhỏ, cho vào 10 phần nước sinh lý, để tủ lạnh 50C 24h, lọc kỹ, lấy nước SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 15 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Chuẩn bị kháng nguyên âm: + lấy gan, lách gia súc khỏe để chế kháng nguyên âm, cách làm tương tự kháng nguyên nghi - Chuẩn bị kháng thể: kháng thể huyết kháng nhiệt thán chế cách gây tối miễn dịch cho ngựa c Tiến hành: - Dùng ống nghiệm nhỏ, ống làm thí nghiệm, ống làm đối chứng - Cho 0,5ml kháng nguyên nghi vào ống thứ 1, 0,5ml kháng nguyên âm vào ống thứ - Dùng ống hút có đầu nhỏ dài hút huyết kháng nhiệt thán cho vào ống 0,5ml, ý phải cho đầu hút sát đáy ống nghiệm từ từ thả huyết kháng nhiệt thán xuống, huyết đội kháng nguyên lên Để yên 10 – 15 phút phòng thí nghiệm đọc kết + Phản ứng dương tính: nơi tiếp xúc hai lớp kháng nguyên kháng thể xuất vòng kết tủa màu trắng, chứng tỏ bệnh bệnh phẩm có mặt kháng nguyên + Phản ứng âm tính: không xuất vòng kết tủa màu trắng Có thể làm phản ứng kết tủa khuếch tán đĩa thạch phiến kính thạch để chẩn đoán nhiệt thán Câu 19: Đặc tính sinh học trực khuẩn uốn ván Từ đề biện pháp phòng trị bệnh? Trả lời: Trực khuẩn uốn ván: Clostridium tetani Đặc tính sinh học: a Hình thái tính chất bắt màu - Trực khuẩn to, ngắn, thẳng cong, đầu tròn, kích thước 0,5 – 0.8 x – µm - Trong tổ chức, canh khuẩn đứng riêng lẻ, có chuỗi nuôi cấy - Trong canh khuẩn già từ 36h trở lên mủ Vk có hình gậy, đầu có nha bào - VK có khả di động nhanh có nhiều lông xung quanh thân, đình hoạt động có oxy nguyên tử - Bắt màu gram + nuôi cấy lâu có số trở thành gram -, có màng bọc VK bắt màu nha bào vòng rỗng đầu VK b Đặc tính nuôi cấy: - VK yếm khí tuyệt đối, nhiệt độ thích hợp 370C, pH: 7,2 – 7,4 không cần nguồn dinh dưỡng lớn chuyển hóa đơn giản MT Brewer Vk phát triển MT có chất khử oxy natri thioglycolat glutathion MT nước thịt gan yếm khí Sau 2-4h môi trường vẩn đục đều, có mùi thối hay mùi sừng cháy, để lâu đóng cặn đáy, nước bên trong, MT có óc làm đen óc MT thạch máu glucoz VK làm dung huyết, có khuẩn lạc nhám hình sợi tơ dài bắt chéo tóc rối, khuẩn lạc có loại hình nhện nhỏ, tròn, nhẵn bóng Thạch đứng VF Khuẩn lạc hình thành vẩn màu trắng đục, VK sinh nên môi trường bị nứt, vỡ nút bị đẩy lên c Đặc tính sinh hóa: - Chuyển hóa đường: sinh amoniac nên trung hòa môi trường + Lên men đường sinh hơi: glucoz, levuloz, galactoz, saccaroz, arabinoz - Các phản ứng khác: + H2S: + + Indon: + + NH3: + + Gelatin tan chảy chậm sữa đông chậm c Độc tố: - Ngoại độc tố tan môi trường hay thể dịch mạnh, liều gây chết tối thiêu cho 1g thể chuột bạch ng, 0,83 ng chuột lang - Tetanoslysin: tan HC thỏ, người, ngựa, hoại tử - Tetanospasmin: độc tố TK, gây triệu chứng bệnh uốn ván - Chế độc tố nuôi giống VK nước thịt gan, máu 37 0C, lọc lấy độc tố vào ngày thứ 15 sau cấy - Độc tố bị phá hủy 650C/5ph, 600/20ph, ánh sáng mặt trời sau 15-18h Cồn, nước mật diệt độc tố, focmon, iot làm độc tính độc tố giữ tính kháng nguyên Dùng focmon 4% giải độc tố uốn ván tháng d Sức đề kháng: - Đề kháng yếu với nhân tố lý, hóa, đun sôi 1000C/5ph giết chết VK SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 16 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Ở thể nha bào, VK có sức chống đỡ mạnh, đun 1000C/ – 3h, axit phenic 15%/5h, focmon 3%/ 24h giết Ánh sáng trực tiếp tháng giết nha bào - Sự sấy khô bảo tồn nha bào lâu, phơi khô gỗ sau 11 năm sống, chỗ tối nha bào tồn 10 năm e Tính gây bệnh: - TKUV gây bệnh độc tố hình thành thể bị nhiễm trùng *) Trong tự nhiên: - Ngựa, cừu, dê, bò, người dễ mắc; lợn, chó, mèo mắc; gia cầm ko mẫn cảm - Ở người: nơi bị thương, bị căng đau, nhai, mặt bị căng co thắt, gáy, lưng cứng đờ tới thành ngực, bụng chi làm cho lưng cổ uốn cong, ván bị cong - Gia súc: cứng cổ, cứng hàm, khó thở, đuôi cong, lưng thẳng, bốn chân thẳng cứng gỗ, bắp thịt hằn dõ - Bệnh xảy nha bào UV nhiễm vào vết thương VK tiết ngoại độc tố VK vết thương( mủ, chất keo nhày) quan khác - Hai điều kiện cần để nha bào phát triển thành VK: yếm khí, không bị thực bào *) Trong phòng thí nghiệm: - ĐVCN: chuột bạch con, thỏ, chuột lang - Tiêm S.C, I.M sau ngày thấy vật cứng đuôi, chân móng chân duỗi thẳng, bắp thịt co quắp, sau ngày chết đủ liều - Thỏ, chuột lang sau – 10 ngày chết Phòng trị bệnh: a Phòng bệnh - Bằng giải độc tố huyết kháng độc tố uốn ván - Bệnh UV có tính chất vùng - Gia súc thường hay bị bệnh sau phẫu thuật, đặc biệt sau thiến, cần phòng ngừa chặt chẽ sau phẫu thuật - Tiêm S.C 1ml giải độc tố trước thiến tháng sau phẫu thuật lần - Con vật bị thương, trước phẫu thuật tiêm 15000-30000UI cho GS lớn, 3000-6000 GS nhỏ - Kháng huyết nên dùng sớm không để 12h sau bị thương - Gia súc lớn tiêm 1ml giải độc tố, GS nhỏ tiêm 0,5 ml giải độc tố - Hiệu lực miễn dịch ngựa 3-6 tháng, GS khác năm b Điều trị: - Nguyên tắc: phối hợp trung hòa độc tố tiêu diệt tác nhân gây bệnh ngăn chặn biểu thần kinh cách ức chế TKTW + Xử lý vết thương ngoại khoa: mở rộng vết thương, căt bỏ tổ chức hoại tử, rửa chất giầu oxy: thuốc tím, nước oxy già… + Tiêm kháng độc tố + Dùng kháng sinh để giết VK + Ức chế TK thuốc an thần, thuốc làm giãn thuốc trợ tim Câu 20: Đặc tính sinh học trực khuẩn Lao? Trả lời: Trực khuẩn Lao: Mycobacterium tubercullosis a Hình thái tính chất bắt màu: - Trực khuẩn hình gậy mảnh, cong, có kích thước 0,2 – 0,5 x 1,5 – 5µm - Đầu tròn, ko có lông, ko có nha bào, ko có giáp mô - Canh khuẩn non Vk lao xếp thành chuỗi cong chữ S, canh khuẩn già có hình sợi, có nhánh - VK bắt màu không đều, có hạt tròn mầu sẫm xếp với nhau, có khoảng sáng - Vk có nhiều lipit, phức hợp lipit axit béo chất sáp làm cho VK khó thấm nước, có tính kháng cồn, kháng axit nên khó nhuộm màu Dùng phương pháp nhuộm Ziehl Nielsen VK bắt màu đỏ xanh b Đặc tính nuôi cấy: - Trực khuẩn lao loại hiếu khí, yếm khí mọc thưa cằn, nhiệt độ 370C, pH: 6,7 – - Môi trường nuôi cấy VK lao phải giàu chất dinh dưỡng, nhiều muối khoáng có glyxerin VK lao sinh trưởng chậm, sớm sau – tuần mọc sau cấy 10 – 15 ngày, VK mọc, mặt có màng mỏng dính lại với Môi trường nước thịt nhau, nước thịt suốt, lắc có mảnh nhỏ chìm xuống đáy thành glyxerin hình đậu trắng Môi trường thạch glyxerin ( sau cấy – 10 ngày hình thành khuẩn lạc khô hình hạt nhỏ, hay vảy khô SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 17 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y trắng xám, thành cục bướu thô dính chặt vào môi trường – 3%) VK mọc hình thành khuẩn lạc hình vảy khô, hình hạt, đông lại thành Môi trường khoai tây lớp dày không đều, hình bướu, màu xám nhạt glyxerin (5%) VK mọc sau khoảng tháng tạo thành khuẩn lạc khô, nhăn nheo trông Môi trường Lovensten ( giống hình súp lơ Loweinstein) - Khi VK lao kháng thuốc, khuẩn lạc bóng hơn, nhẵn hơn, có sinh sắc tố VK bị biến dị c Sinh sản: - Sinh sản theo phương thức nảy chồi nấm - Sinh sản theo kiểu trực phân: VK dài ra, phân chia thắt lại thành VK mới, xảy chậm 24h lần d Sức đề kháng: - Đề kháng với nhiệt độ tia tử ngoại: 650C/15ph; 70-800C/5-10ph Tia tử tiêu diệt nhanh chóng - Đề kháng cao với hóa chất có chất sáp bảo vệ: axit phenic 5% diệt Vk 24h, focmon 1%/12h, NaOH 2% tác dụng tốt - Ánh sáng mặt trời làm độc lực 8h Ở chỗ tối: phân sống tháng, đờm sống đến vài tháng - Trong bụi, đất, nước,… sống vài ngày tới vài tháng e Tính gây bệnh: *) Trong tự nhiên: - M.t.humanus: typ lao người gây bệnh lao cho người như: lao phổi, lao xương, khớp, thận, ruột, quan sinh dục, da, màng não, tủy,… Có thể gây lao chó, mèo, bò, vượn - M.t.bovinus: typ lao bò, gây bệnh cho bò, người, lợn, chó, mèo - M.t.avium: typ lao gia cầm gây bệnh gia cầm, người, lợn, chó - Đường xâm nhập: + Hô hấp: mầm bệnh dính vào bọt nước lơ lửng không khí, phân đờm khô đi, mầm bệnh dính vào hạt bụi GS khỏe hít phải + Tiêu hóa: Bê, lợn Mầm bệnh từ thể bị lao thải lẫn vào thức ăn, nước uống, GS khỏe ăn phải nên bị lây + Bệnh lây qua bú sữa, núm nhau, đường sinh dục mầm bệnh tử cung hay dọc đường dẫn tinh vào *) Trong phòng thí nghiệm: - Chuột lang: mẫn cảm typ lao người bò + Tiêm S.C sau 6-10 ngày hạch lâm ba chỗ tiêm sưng, 8-12 ngày tuần vật chết + Mổ khám: hạch sưng, mủ chất keo đặc, lách sưng to gấp 10 lần, hình thùy, màu vàng, gan sưng to có hạt, tụ máu có đốm vàng lách, phổi có hạt Typ gà làm cho phát bệnh cục - Thỏ: mẫn cảm typ lao bò, gà + Tiêm S.C sau 3-10 tuần thỏ chết mắc lao toàn thân + Typ lao người gây bệnh cục Câu 21: Dùng phản ứng dị ứng để phát lao bò( nguyên lý, phương pháp tiêm nội bì)? Trả lời: a Nguyên lý: - Khi VK lao xâm nhập vào thể, kích thích thể sinh kháng thể đặc hiệu, có kháng thể tế bào, kháng thể chất gây dị ứng lao, chất gặp VK lao hay chất chiết VK lao gây nên phản ứng dị ứng theo kiểu mẫn - Nếu người, ĐV có phản ứng dị ứng bị nhiễm VK lao - Để phát dị ứng lao, người ta dùng VK lao hay chất chiết từ VK lao, chất chiết từ VK lao thường sử dụng Tuberculin b Chiết Tuberculin: - Trong nước lọc canh khuẩn nuôi cấy Vk lao có Tuberculin, thành phần hóa học gồm: Anbumin, nucleoprotein, lipit, polyozit - Có loại : + Tuberculin thô: Nuôi VK MT nước thịt Glyxerin 6-8 tuần, lấy nước lọc môi trường đun 1000C/1h, cô đặc 800C 1/10 thể tích ban đầu, thu Tuberculin thô có nhiều tạp chất nên làm phản ứng dễ gây tượng dương tính giả + Tuberculin tinh chế: từ Tuberculin thô loại bỏ hết tạp chất giữ lại thành phần protein polysaccarit - Phát lao GS: tuberculin chiết từ typ lao bò, typ lao GC là: TbPPDM, TbPPDA - Phát lao người: tuberculin chiết từ typ lao người SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 18 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y c Phương pháp tiến hành: - Làm theo phương pháp: tiêm da, nhỏ mắt, tiêm da - Khi tiêm Tuberculin vào da người hay ĐV có nhiễm khuẩn sau 48-72h nơi tiêm xuất phản ứng dị ứng đặc hiệu da Biểu hiện: nơi tiêm xuất nốt sần, sung huyết, có cứng rõ Nếu người ĐV chưa mắc lao ko có biểu - Phát lao bò: *) Phương pháp tiêm da: - Tiêm mũi vào da bên cổ với loại Tuberculin: TbPPDM, TbPPDA nhằm xác định chủng lao gây nhiễm thuộc typ lao GC hay typ lao bò Mycobacterium khác bò - Cắt lông vị trí tiêm, rửa nước sinh lý đo độ dày da - Liều tiêm cho mũi 0,2 ml + 0,2 ml TbPPDM tương đương 3500 đv + 0,2 ml TbPPDA tương đương 2500 đv - Vị trí tiêm mũi: + Mũi 1: cổ bên phải, cách xương bả vai phía trước 10 cm, tiêm TbPPDM + Mũi 2: cách mũi phía trước 10 cm, tiêm TbPPDA + Mũi 3: cổ bên tráo, cách xương bả vai phía trước 10 cm, tiêm TbPPDA + Mũi 4: cách mũi phía trước 10 cm, tiêm TbPPDM - Sau tiêm tính độ dày da trung bình mũi tiêm loại TbPPDM mũi tiêm TbPPDA trước sau tiêm 72h + Mức tăng độ dày da sau loại TbPPDM loại TbPPDA + Hiệu số mức tăng độ dày da loại TbPPDM – TbPPDA - Kết quả: +) Với loại TbPPDM: + Phản ứng dương tính: độ dày da ≥ 3,5 mm , đường kính chỗ tiêm lớn 20 mm Mức tăng độ dày da ≥ mm + Phản ứng nghi ngờ: độ dày da 2,5 – 3,4 mm , đường kính chỗ tiêm 10 - 19 mm + Phản ứng âm tính: độ dày da ≤ 2,5 mm , đường kính chỗ tiêm < 10 mm +) Với loại TbPPDA: + Phản ứng dương tính: độ dày da ≥ mm , đường kính chỗ tiêm lớn 20 mm Mức tăng độ dày da ≥ mm + Phản ứng nghi ngờ: độ dày da – 4,9 mm , đường kính chỗ tiêm 10 - 19 mm + Phản ứng âm tính: độ dày da ≤ 3mm , đường kính chỗ tiêm < 10 mm - Sau 45-60 ngày làm lại phản ứng *) Phương pháp nhỏ mắt: - Cột gia súc vào nơi tránh gió lùa, nhỏ 3-4 giọt khuẩn tố tuberculin vào kết mạc mắt, sau 4h, đọc kết - Phản ứng dương tính: Kết mạc mắt có mủ, kết mạc mắt sưng đỏ rõ rệt, mí mắt có thấm chất nước tích tụ lại có chất dính hay mủ đặc - Phản ứng nghi ngờ: Kết mạc mắt sưng, màu đỏ không rõ rệt, có nước mắt chảy - Phản ứng âm tính: thay đổi - Phản ứng ngi ngờ sau 2-7 ngày làm lại phản ứng lần thứ mắt *) Phương pháp tiêm da: - Kiểm tra thân nhiệt ngày trước thử, nhiệt độ không 38,60C tiêm da cổ 1ml Tuberculin, sau 6h 2h lấy nhiệt độ lần, thường 12-16h sau nhiệt độ lên đến mức cao - Phản ứng dương tính: Nhiệt độ tăng bình thường 0,50C trở lên, vật mệt, ăn, chỗ tiêm sưng - Phản ứng nghi ngờ: nhiệt độ tăng từ 0,1 đến 0,50C - Phản ứng âm tính: thay đổi - Ít dùng thực tế không mẫn cảm *) Phát lao cho khác: Phát lao Tiêm tuberculin từ chủng lao bò vào da Tiêm 0,1ml tuberculin vào da gốc cho lợn tai lợn, sau 24 – 48h độ dày da ≥5mm dương tính Phản ứng nhạy 3-9 tuần lễ sau nhiễm bệnh Phát lao Tiêm tuberculin GC, tiêm 0,1 – 0,2 ml vào da yếm gà( mào gà) Sau 36-48h, độ dày da tăng cho gà lên 2-3mm chỗ tiêm sưng cứng phản ứng dương tính SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 19 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y Phát lao Tiêm tuberculin người, tiêm 0,1 ml vào da Sau 48-72h, chỗ tiêm có nốt sần, cứng cho người đường kính nốt sần ≥ 10mm coi dương tính Câu 22: Đặc tính sinh học Leptospira? Trả lời: Trực khuẩn xoắn khuẩn: Leptospira a Hình thái tính chất bắt màu: - Có 212 serotyp Leptospira, hình thái loại xoắn khuẩn nhỏ, mỏng, kích thước: – 20 x 0,1 – 0,2 µm - Hai đầu uốn cong tựa móc câu, có nhiều vòng lượn sát nhau, di động mạnh - Khó bắt màu phương pháp nhuộm thông thường, nhuộm Môrôsôp xoắn khuẩn bắt màu nâu đen, nhuộm giemsa: xoắn khuẩn bắt màu đỏ tím b Đặc tính nuôi cấy: - Vk hiếu khí, nhiệt độ thích hợp 28 – 300C, pH kiềm: 7,2 – 7,4 - Leptospira mọc môi trường nhân tạo thông thường, môi trường nuôi cấy phải cho thêm – 10 % huyết tươi MT Terskich, Korthoff, EMJH… - Trong môi trường Terskich, sau cấy – ngày xoắn khuẩn mọc, khoảng tuần, môi trường đục nhẹ, có vẩn khói lắc - Cấy vào màng niệu đệm phôi thai gà 10 ngày tuổi, sau cấy ngày phôi gà chết, bệnh tích không điển hình c Cấu tạo kháng nguyên: - Hiện biết có 60 chủng leptospira - Leptospira có loại kháng nguyên: xảy phản ứng chéo + Một kháng nguyên chính: tác dụng định với thân nó, trở thành kháng nguyên phụ xoắn khuẩn khác + Một kháng nguyên phụ trở thành kháng nguyên xoắn khuẩn - Chẩn đoán huyết dùng 12 chủng, nước ta dùng chủng để sản xuất vacxin 12 chủng là: L.australis; L.autumnalis; L.bataviae; L.canicola; L.grippotyphosa; L.hebdomadis; L.icterohemorrhagiae; L.mitis; L.poi; L.pomosa; L.saxrobing; L.sejroe chủng dùng là: L.bataviae; L.canicola; L.grippotyphosa ; L.icterohemorrhagiae; L.mitis; L.pomosa d Sức đề kháng: - Leptospira tương đối yếu so với xoắn khuẩn khác có sức đề kháng cao - Nhiệt độ: Leptospira nhạy cảm: 560C/10ph, 600C/5ph, -300C không chết, 40C gan chuột lang sống 26 ngày ko giảm độc lực - Nhạy cảm với độ pH axit, dày sau 10ph chết, Leptospira không mọc môi trường axit - Các chất sát trùng thông thường diệt xoắn khuẩn nhanh chóng: axit phenic 0,5%/5ph, focmon 0,25%/5ph, axit sunfuric 0,05%/10ph, biclorua thủy ngân 1/2000 sau 10-15 ph leptospira bị ngừng di động tan dần - Nước muối: dung dịch 2,8%/15ph Penixillin tác dụng tốt với Leptospira e Tính gây bệnh: *) Trong tự nhiên: - Gây bệnh cho bò, chó( nhiều nhất), ngựa, cừu, dê, lợn, mèo, báo, người mắc súc vật truyền qua - Các ổ chứa tự nhiên: + Ổ chứa thường xuyên: chủ yếu loài gặm nhấm, gồm tất loại chuột, đặc biệt chuột lớn, chủ yếu L.bataviae + Ổ chứa không thường xuyên: Chủ yếu GS, thải qua nước tiểu lúc có lúc không + Ổ chứa thiên nhiên: Chủ yếu thú rừng: cầy, cáo, nhím, thải qua nước tiểu, từ truyền cho GS người - Với GS: Gây bệnh sau: L.icterohemorrhagiae, L.canicola, L.pomona, L.mitis, L.bataviae,… - Với người: L icterohemorrhagiae L grippotyphosa - Bệnh gây mang tính nghề nghiệp như: công nhân vệ sinh cống rãnh, công nhân chăn nuôi, bsty, Biểu hiện: Sốt cao, đau cơ, mệt mỏi, mắt đỏ ngàu có có xuất huyết, da vàng, anbumin niệu, viêm màng não - Đường lây: qua chỗ xây sát da niêm mạc, qua da niêm mạc *) Trong phòng thí nghiệm: - ĐVCT: chuột lang( non), thỏ non, chuột bạch, chuột - Tiêm leptospirs vào xoang bụng S.C để gây bệnh Sau 2-3 ngày chuột sốt, nhiệt độ cao 40,5 – 41,50C ngày, vật gày, niêm mạc mắt da có màu vàng, xuất huyết, sau – 12 ngày thân nhiệt hạ, chuột chết SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 20 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y - Bệnh tích điển hình: vàng da, niêm mạc, phủ tạng, gan sưng to, lấy nước xoang bụng, máu tim, gan, thận kiểm tra thấy xoắn khuẩn Câu 23: Chẩn đoán Leptospira phản ứng ngưng kết tan với kháng nguyên sống phiến kính? Trả lời: a Nguyên lý phản ứng: - Khi trộn huyết GS nghi mắc Leptospirosis với hỗn dịch canh khuẩn Leptospira, huyết có kháng thể Leptosipra ngưng kết chụm lại hình hay hình mạng nhện, hay cụm nhỏ Nếu huyết có nhiều kháng thể Leptospira bắt đầu bị ngưng kết, sau tan thành mảnh nhỏ, nên phản ứng gọi phản ứng ngưng kết tan - Dùng kháng nguyên chủng Leptospira sống, thực phản ứng phiến kính đọc kết KHV có tụ quang đen b Chuẩn bị: - Kháng thể nghi: Lấy máu GS nghi mắc bệnh khoảng 2ml để đông, chắt lấy huyết thanh, pha loãng huyết với nước sinh lý thành nồng độ 1/200 ( nên lấy máu từ ngày thứ sau vật ốm) - Kháng nguyên: Là canh khuẩn chủng Leptospira, xoắn khuẩn phải khỏe, hình thái rõ, có từ 150-300 xoắn khuẩn vi trường Thường dùng 12 chủng Leptospira, chủng giữ nuôi cấy riêng môi trường Terskich hay EMJH, kháng nguyên giữ nhiệt độ 20 0C, sau 7-15 ngày phải cấy chuyển sang môi trường Terskich mới(EMJH mới) sau tháng phải tiếp đời qua chuột lang lần c Tiến hành phản ứng: - Mỗi mẫu huyết dùng phiến kính, phiến kính chia làm ô Tất 12 ô cho 12 chủng tiến hành chẩn đoán nhiều mẫu huyết lúc, mẫu dùng phiến kính, ghi thứ tự phiến kính: 1, 2, góc phiến kính bên phải, góc bên trái phiến kính ghi số mẫu huyết cần chẩn đoán - Nhỏ lên ô giọt huyết pha loãng, cho vào ô giọt canh khuẩn chủng Leptospira Dùng đũa thủy tinh vô trùng trộn đều, để nhiệt độ phòng thí nghiệm 15-20 ph Đọc kết KHV có tụ quang đen d Kết quả: - Để đánh giá kết người ta dùng kí hiệu: + L tượng tan xoắn khuẩn + L+ ngưng kết yếu, có từ 3-5 cụm ngưng kết, có nhiều xoắn khuẩn tự + L++ ngưng kết yếu, có từ 6-12 cụm ngưng kết, có nhiều xoắn khuẩn tự + L+++ ngưng kết vừa, có 20-30 cụm ngưng kết hình nhện, có xoắn khuẩn tự + L++++ ngưng kết xảy mạnh, có 30 cụm ngưng kết hình nhện, ko có xoắn khuẩn tự - Phản ứng dương tính: Ô có ngưng kết mức L+++ trở lên kháng nguyên ô tạm coi chủng gây bệnh - Phản ứng âm tính: Không có ngưng kết, bơi rời rạc - Do đặc điểm Leptospira có kháng nguyên chung dễ gây tượng ngưng kết chéo chủng, chủng Leptospira gây bệnh cho hiệu giá kháng thể cao chủng Leptospira khác - Muốn xác định chủng gây bệnh chắn phải pha loãng huyết cao nũa: 1/400, 1/800, 1/1600, 1/3200 làm lại phản ứng ngưng kết với chủng Leptospira vừa ngưng kết + Bò, lợn, chó: hiệu giá từ 1/400 trở lên chủng coi gây bệnh, 1/200 nghi ngờ + Ngựa: hiệu giá từ 1/800 trở lên chủng coi gây bệnh, 1/400 nghi ngờ - Nếu nghi ngờ sau 7-10 ngày lấy máu lần để làm phản ứng SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 21 TRƯỜNG ĐH NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI KHOA THÚ Y Câu 43: Kể tên phương pháp chẩn đoán bệnh: Newcastle, dại, dịch tả lợn, viêm gan vịt, cúm gia cầm, Gumboro, Đóng dấu lợn? Chẩn đoán virus học: - Newcaste - Dại - Dịch tả lợn - Viêm gan vịt - Cúm gia cầm - Gumboro Chẩn đoán vi khuẩn học: Đóng dấu lợn Chẩn đoán huyết học: a Newcastle: - Phản ứng ngưng kết HC gà hay phản ứng HA - Phản ứng ngăn trở ngưng kết HC gà hay phản ứng HI b Dại: - Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp gián tiếp c Dịch tả lợn: - Thí nghiệm trung hòa thỏ - Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch - Phản ứng ngưng kết gián tiếp HC - Phản ứng miễn dịch huỳnh quang d Viêm gan vịt: - Phản ứng trung hòa - Phản ứng kết hợp bổ thể - Phản ứng AGP - Phản ứng ELISA e Cúm GC: - Phản ứng HA - Phản ứng HI - Phản ứng ELISA - Phản ứng trung hòa - Kĩ thuật IF f Gumboro: - Phản ứng kết tủa khuếch tán thạch AGP - Phản ứng trung hòa virus - Phản ứng miễn dịch đánh dấu ELISA g Đóng dấu lợn: Phản ứng ngưng kết: - Phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính - Phản ứng ngưng kết ống nghiệm - Phản ứng ngưng kết nhanh với máu h PRRS: - Phản ứng ELISA - Phản ứng kháng thể huỳnh quang gián tiếp ( IFA) - Phản ứng PCR phân tích từ máu lấy giai đoạn đầu bệnh để xác định có mặt virus SV: LƯƠNG QUỐC HƯNG Email: lqhungtyak53@gmail.com 22 ... bệnh nhân vi m ruột - Các enzyme : + Men đông huyết tương ( Coagulaz) + Men làm tan tơ huyết ( Fibrinolyzin hay Staphylokinaz) + Men Deoxyribonucleaz: th y phân axit dezoxyribonucleic g y thương... Ả rập 1,2,3,4,5,6 hay chữ Latinh thường e,n,x… Kháng nguyên vỏ K: - Kháng nguyên K Salmonella ko phức tạp, có Kn vỏ biết KN Vi có typ S.typhi S.para typhi KN Vi gặp KT Vi g y nên tượng ngưng kết... nắng) - Bệnh E.coli x y bệnh truyền nhiễm kế phát sở thiếu vitamin mắc bệnh virus kí sinh trùng - E.coli g y bệnh gia súc đẻ – ng y – ng y - Bệnh Colibacillosis E.coli g y ngựa, bê, cừu, lợn gia