Header Page of 16 ` ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - HOÀNG THỊ THAO NGHIÊN CỨU QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU XANH [Vigna radiata (L.) Wilczek] LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC THÁI NGUYÊN – 2010 Footer Page of 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC - - HOÀNG THỊ THAO NGHIÊN CỨU QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU XANH [Vigna radiata (L.) Wilczek] Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN VŨ THANH THANH THÁI NGUYÊN - 2010 Footer Page of 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Thái Nguyên, ngày 26 tháng 10 năm 2010 Tác giả luận văn Hoàng Thị Thao Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 i http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên tận tình hướng dẫn tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn PGS TS Chu Hoàng Mậu tài trợ phần kinh phí tạo điều kiện để hoàn thành kết luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Lê Văn Sơn, ThS Đỗ Tiến Phát- Phòng Công nghệ tế bào thực vật - Viện Công nghệ Sinh học hết lòng giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ kỹ thuật viên phòng thí nghiệm sinh học – Khoa khoa học sống - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên Bộ môn Sinh học phân tử, Công nghệ gen Viện Khoa học Sự sống - Đại học Thái Nguyên Qua đây, xin cảm ơn Bộ môn Hệ thống canh tác - Viện nghiên cứu Ngô cung cấp số giống đậu xanh giúp thực luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè nhiệt tình ủng hộ động viên suốt trình thực luận văn Công trình thực với tài trợ kinh phí dự án TRIG Tác giả xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Tác giả luận văn Hoàng Thị Thao Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 ii http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Những chữ viết tắt vi Danh mục bảng .vii Danh mục hình viii MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.CÂY ĐẬU XANH 1.1.1 Nguồn gốc phân loại đậu xanh 1.1.2 Đặc điểm nông sinh học đậu xanh 1.1.3 Tầm quan trọng đậu xanh 1.1.4 Đặc điểm hoá sinh hạt đậu xanh 1.1.4.1 Protein 1.1.4.2 Lipid 1.2 NGHIÊN CỨU QUAN HỆ DI TRUYỀN Ở THỰC VẬT 1.2.1 Một số phương pháp sinh học phân tử phân tích quan hệ di truyền thực vật 1.2.1.1 Kỹ thuật RAPD 1.2.1.2 Kỹ thuật AFLP 12 1.2.1.3 Kỹ thuật RFLP 12 1.2.1.4 Kĩ thuật SSR 13 1.2.1.5 Bản đồ QTL 14 1.2.2 Nghiên cứu quan hệ di truyền thực vật sử dụng kỹ thuật RAPD 14 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 1.2.3 Nghiên cứu quan hệ di truyền đậu xanh sử dụng kỹ thuật RAPD 19 1.3 NHẬN XÉT CHUNG 21 Chƣơng 2: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 22 2.1.1 Vật liệu thực vật 22 2.1.2 Hoá chất thiết bị 24 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu 24 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Phương pháp hoá sinh 24 2.2.1.1 Định lượng lipid tổng số 24 2.2.1.2 Định lượng protein 25 2.2.2 Phương pháp sinh học phân tử 27 2.2.2.1 Phương pháp tách chiết DNA tổng số 27 2.2.2.2 Phương pháp xác định hàm lượng độ tinh DNA tổng số 28 2.2.2.3 Phương pháp RAPD 29 2.2.2.4 Phân tích số liệu RAPD 31 2.2.3 Phương pháp xử lý kết số liệu 31 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 ĐẶC ĐIỂM HÌNH THÁI, HOÁ SINH HẠT CỦA CÁC GIỐNG ĐẬU XANH NGHIÊN CỨU 32 3.1.1 Đặc điểm hình thái khối lượng 1000 hạt 30 giống đậu xanh 32 3.1.2 Hàm lượng protein, lipid 30 giống đậu xanh nghiên cứu 34 3.2 PHÂN TÍCH ĐA HÌNH DNA BẰNG KỸ THUẬT RAPD 38 3.2.1 Kết tách chiết DNA tổng số từ đậu xanh 38 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 3.2.2 Kết nghiên cứu quan hệ di truyền DNA kĩ thuật RAPD 40 3.2.3 Mối quan hệ di truyền giống đậu xanh dựa phân tích RAPD 57 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 62 KẾT LUẬN 62 ĐỀ NGHỊ 62 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page of 16 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page of 16 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczek] ba đậu đỗ nhóm đậu ăn hạt, đứng sau đậu tương lạc Đậu xanh trồng có vị trí quan trọng nông nghiệp nhiều nước, có Việt Nam [9], [17] Trồng đậu xanh cung cấp nguồn thực phẩm giàu đạm, đáp ứng nhu cầu dinh dưỡng người vật nuôi, mà có tác dụng cải tạo bồi dưỡng đất rễ đậu xanh có nốt sần chứa số loài vi sinh vật cố định đạm sống cộng sinh [3], [4] Vấn đề đặt cần nghiên cứu chọn tạo giống đậu xanh có chất lượng tốt, phục vụ nhu cầu nước xuất Hiện nay, việc nghiên cứu chọn tạo giống trồng nói chung đậu xanh nói riêng nhờ thị phân tử áp dụng rộng rãi Các nhà khoa học sử dụng số kỹ thuật sinh học phân tử RAPD, AFLP, RFLP, SSR…để xác định quan hệ di truyền trồng nhằm tạo sở khoa học cho công tác chọn tạo giống trồng Trên giới, kỹ thuật RAPD nhiều tác giả sử dụng để nghiên cứu quan hệ di truyền số giống đậu xanh như: Afzal cs (2004), Betal cs (2004), Lakhanpaul cs (2000) [33], [35], [45] Ở Việt Nam, kỹ thuật RAPD tác giả Chu Hoàng Mậu, Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Điêu Thị Mai Hoa sử dụng để xác định quan hệ di truyền giống đậu xanh đột biến, giống đậu xanh chịu hạn, giống đậu xanh chín tập trung không tập trung [8], [20], [26] Nhằm tạo sở cho việc lựa chọn giống đậu xanh có chất lượng tốt phục vụ công tác lai tạo giống, lựa chọn tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu quan hệ di truyền số giống đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczek ]” Footer Page of 16 Header Page of 16 Mục tiêu nghiên cứu - Đánh giá chất lượng hạt số giống đậu xanh nghiên cứu thông qua phân tích số tiêu hoá sinh - Khảo sát đa dạng mối quan hệ di truyền 30 giống đậu xanh kỹ thuật RAPD Nội dung nghiên cứu - Phân tích số đặc điểm hình thái như: màu gốc thân mầm, màu vỏ hạt, hình dạng hạt, khối lượng 1000 hạt giống đậu xanh nghiên cứu - Phân tích số tiêu hoá sinh: hàm lượng lipid, protein tan tổng số giống đậu xanh nghiên cứu - Tách chiết DNA tổng số 30 giống đậu xanh nghiên cứu - Phân tích đa hình DNA nhân ngẫu nhiên, xác định mức sai khác cấu trúc DNA hệ gen giống đậu xanh nghiên cứu - Thiết lập mối quan hệ di truyền 30 giống đậu xanh nghiên cứu Footer Page of 16 Header Page 10 of 16 Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CÂY ĐẬU XANH 1.1.1 Nguồn gốc phân loại đậu xanh Cây đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczeck] thuộc ngành Magnoliophyta, lớp Magnoliopsida, Fabales, họ Fabaceae, chi Vigna Chi Vigna chi lớn họ Đậu, bao gồm chi phụ: Vigna, Haydonia, Plactropic, Macrhyncha, Ceratotropic, Lasiospron, Sigmaidotrotopis Đậu xanh theo quan điểm lấy hạt nhân dân ta bao gồm loài thuộc hai chi phụ Ceratotropic, gọi nhóm đậu châu Á, bao gồm 16 loài hoang dại loài trồng trọt V radiata, V mungo, V aconitifolia, V angularis, V umbellata [9], [17] Đậu xanh có NST 2n = 22, loại ăn hạt, thân thảo Theo Vavilov, đậu xanh có nguồn gốc từ Ấn Độ, phân bố rộng rãi nước Đông Nam Á, khu vực Đông Dương Dạng dại V radiata tìm thấy Madagasca, bên bờ Ấn Độ Dương, Đông Phi [9] 1.1.2 Đặc điểm nông sinh học đậu xanh Đậu xanh loại trồng cạn thu hạt Cây đậu xanh thuộc loại thân thảo bao gồm phận rễ, thân, lá, hoa, quả, hạt  Đặc điểm rễ Rễ đậu xanh thuộc loại rễ cọc bao gồm rễ rễ phụ Rễ thường ăn sâu khoảng 20 - 30 cm, điều kiện thuận lợi ăn sâu tới 70 - 100 cm, rễ phụ thường gồm 30 - 40 cái, dài khoảng 20 - 25 cm [12] Trên rễ phụ có nhiều lông hút biểu bì rễ biến đổi thành, có vai trò tăng cường sức hút nước chất dinh dưỡng cho Tuy nhiên, rễ đậu xanh yếu nhiều so với đậu đỗ khác nên khả chịu hạn chịu úng đậu xanh tương đối Nếu rễ phát triển Footer Page 10 of 16 Header Page 64 of 16 Mồi RA40 Mồi RA40 khuếch đại phân đoạn với kích thước từ 0,2 - 1,6 kb Biểu đa hình giống đậu xanh nghiên cứu thể băng kích thước 1,6 kb Ở ba kích thước lại (0,2 kb, 1,0 kb, 1,4 kb) không biểu đa hình Ảnh điện di thể qua hình 3.12 10 11 1213 14 15 16 1718 19 20 M MM 1,5 kb 1,0 kb 0,75 0,5 kb kkmk mkkk 0,25 kb kkkkk kkbkk kkkkk Hình 3.13 Ảnh điện di sản phẩm RAPD với mồi RA40 từ mẫu T1kkkbk đến mẫu bkb T20 Ký hiệu: M: Marker 1kb 1.T1, 2.T2, 3.T3, 4.T4, 5.T5, 6.T6, 7.T7, 8.T8, 9.T9, 10.T10, 11.T11, 12.T12, 13.T13, 14.T14, 15.T15, 16.T16, 17.T17, 18.T18, 19.T19, 20.T20 3.2.3 Mối quan hệ di truyền giống đậu xanh dựa phân tích RAPD Từ kết phân tích hình ảnh điện di sản phẩm RAPD, thống kê băng điện di (xuất = 1, không xuất = 0) xử lý số liệu phân tích RAPD phần mềm NTSYSpc version 2.0i nhằm xác định khoảng cách di truyền mẫu đậu xanh nghiên cứu thông qua hệ số tương đồng di truyền biểu đồ hình Footer Page 64 of 16 57 Header Page 65 of 16 Để xác định quan hệ di truyền, tiến hành xác định giá trị tương quan kiểu hình theo ba phương pháp tính hệ số di truyền giống (phương pháp Jaccard, SM Dice) với bốn kiểu phân nhóm (WPGMA, UPGMA, liên kết hoàn toàn liên kết đơn lẻ) (bảng 3.7) Biểu đồ hình thiết lập dựa giá trị tương quan cao với giá trị r  0,9: tương quan chặt, 0,8 ≤ r < 0,9: tương quan chặt, 0,7 ≤ r < 0,8: tương quan tương đối chặt, r < 0,7: tương quan không chặt Bảng 3.7 Giá trị tương quan kiểu hình (r) UPGM WPGMA Liên kết hoàn toàn Liên kết đơn lẻ SM A0.8794 0.8352 TO toàn 0.7439 0.8600 Dice 0.8741 0.8331 0.7737 0.8418 Jaccard 0.8733 0.8228 0.7549 0.8324 Kết bảng 3.7 cho thấy, giá trị tương quan kiểu hình (r) 30 mẫu đậu xanh nghiên cứu cao, phạm từ tương quan tương đối chặt đến tương quan chặt Cụ thể giá trị (r) dao động từ 0,7439 đến 0,8794 Giá trị tương quan kiểu hình (r) lớn 0,8794 tính theo hệ số di truyền SM kiểu phân nhóm UPGMA Vì vậy, sơ đồ hình thiết lập theo hệ số di truyền giống SM kiểu phân nhóm UPGMA (hình 3.14) Kết xác định hệ số đồng dạng di truyền thể bảng 3.8 Hệ số đồng dạng di truyền phản ánh mối quan hệ di truyền giống đậu xanh với Các giống đậu xanh gần mặt di truyền hệ số đồng dạng di truyền chúng lớn ngược lại, giống có hệ số đồng dạng di truyền thấp mối quan hệ di truyền chúng xa Footer Page 65 of 16 58 Header Page 66 of 16 Bảng 3.8 Bảng hệ số tương đồng di truyền 30 giống đậu xanh nghiên cứu Giống T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11 T12 T13 T14 T15 T16 T17 T18 T19 T20 T21 T22 T23 T24 T25 T26 T27 T28 T29 T1 1,00 T2 0,82 1,00 T3 0,85 0,91 1,00 T4 0,76 0,83 0,82 1,00 T5 0,74 0,79 0,80 0,83 1,00 T6 0,61 0,65 0,67 0,68 0,70 1,00 T7 0,79 0,80 0,79 0,84 0,74 0,69 1,00 T8 0,82 0,83 0,86 0,85 0,79 0,70 0,90 1,00 T9 0,59 0,66 0,65 0,71 0,73 0,81 0,72 0,70 1,00 T10 0,80 0,83 0,82 0,85 0,79 0,71 0,91 0,90 0,71 1,00 T11 0,82 0,79 0,82 0,83 0,83 0,68 0,80 0,83 0,68 0,81 1,00 T12 0,84 0,80 0,86 0,83 0,81 0,70 0,88 0,87 0,68 0,90 0,85 1,00 T13 0,77 0,76 0,81 0,82 0,80 0,69 0,77 0,82 0,65 0,80 0,88 0,86 1,00 T14 0,82 0,81 0,86 0,85 0,83 0,71 0,82 0,85 0,68 0,85 0,90 0,89 0,93 1,00 T15 0,80 0,81 0,86 0,83 0,81 0,66 0,82 0,85 0,64 0,83 0,81 0,89 0,84 0,85 1,00 T16 0,74 0,81 0,80 0,85 0,81 0,64 0,78 0,81 0,66 0,79 0,79 0,83 0,80 0,85 0,87 1,00 T17 0,76 0,81 0,80 0,85 0,79 0,66 0,80 0,81 0,68 0,81 0,79 0,81 0,80 0,85 0,87 0,89 1,00 T18 0,68 0,76 0,75 0,76 0,78 0,70 0,79 0,76 0,74 0,80 0,74 0,76 0,75 0,80 0,78 0,78 0,82 1,00 T19 0,77 0,80 0,79 0,86 0,80 0,69 0,79 0,82 0,72 0,80 0,82 0,80 0,83 0,86 0,82 0,86 0,90 0,81 1,00 T20 0,77 0,82 0,81 0,86 0,80 0,67 0,79 0,82 0,69 0,80 0,86 0,82 0,85 0,88 0,80 0,84 0,90 0,79 0,92 1,00 T21 0,72 0,77 0,78 0,81 0,73 0,58 0,72 0,75 0,58 0,75 0,79 0,77 0,80 0,83 0,77 0,73 0,77 0,70 0,74 0,78 1,00 T22 0,80 0,83 0,83 0,83 0,81 0,68 0,80 0,83 0,66 0,83 0,83 0,85 0,86 0,90 0,85 0,83 0,83 0,80 0,84 0,82 0,83 1,00 T23 0,79 0,80 0,85 0,83 0,78 0,63 0,77 0,82 0,65 0,80 0,82 0,84 0,83 0,88 0,82 0,80 0,78 0,75 0,81 0,81 0,82 0,90 1,00 T24 0,74 0,77 0,84 0,81 0,75 0,58 0,74 0,77 0,62 0,77 0,81 0,81 0,78 0,81 0,77 0,73 0,71 0,70 0,76 0,78 0,85 0,83 0,88 1,00 T25 0,83 0,84 0,89 0,86 0,82 0,69 0,83 0,80 0,69 0,86 0,88 0,88 0,89 0,93 0,84 0,80 0,82 0,79 0,85 0,87 0,84 0,93 0,92 0,86 1,00 T26 0,81 0,86 0,87 0,86 0,82 0,69 0,83 0,86 0,69 0,86 0,84 0,86 0,83 0,86 0,86 0,80 0,84 0,79 0,87 0,89 0,76 0,88 0,87 0,84 0,89 1,00 T27 0,73 0,80 0,79 0,86 0,78 0,65 0,83 0,80 0,72 0,82 0,82 0,82 0,81 0,88 0,78 0,80 0,80 0,79 0,85 0,85 0,78 0,88 0,85 0,84 0,89 0,83 1,00 T28 0,80 0,85 0,86 0,89 0,81 0,71 0,84 0,87 0,71 0,87 0,85 0,85 0,86 0,89 0,87 0,83 0,85 0,82 0,86 0,86 0,79 0,89 0,88 0,81 0,90 0,91 0,86 1,00 T29 0,78 0,85 0,84 0,59 0,81 0,70 0,88 0,85 0,75 0,87 0,85 0,87 0,84 0,90 0,85 0,87 0,87 0,86 0,90 0,88 0,81 0,89 0,88 0,83 0,90 0,88 0,93 0,92 1,00 T30 0,70 0,79 0,76 0,85 0,83 0,64 0,78 0,79 0,70 0,81 0,83 0,81 0,82 0,85 0,79 0,83 0,81 0,76 0,86 0,86 0,77 0,82 0,78 0,75 0,84 0,82 0,86 0,85 0,89 Footer Page 66 of 16 59 T30 1,00 Header Page 67 of 16 Kết phân tích bảng 3.8 cho thấy, hệ số tương đồng di truyền 30 giống đậu xanh nghiên cứu dao động từ 0,58 đến 0,93 Trong đó, cặp giống có hệ số đồng dạng di truyền cao (0,93) là: T13 T14, T14 T25, T22 T25, T27 T29 cặp giống có hệ số đồng dạng di truyền nhỏ (0,58) là: T6 T21, T6 T24, T9 T21 P II Nhóm II Nhóm I PI Hình 3.14 Sơ đồ quan hệ di truyền 30 giống đậu xanh Sơ đồ hình tính theo hệ số SM kiểu phân nhóm UPGMA (hình 3.14) mức độ sai khác di truyền 30 giống đậu xanh Mức độ khác biểu hệ số sai khác giống Các giống có hệ số di truyền giống tương tự xếp thành nhóm, nhóm lại có liên hệ với Footer Page 67 of 16 60 Header Page 68 of 16 Biểu đồ hình tạo phân tích 30 giống đậu xanh với 10 mồi ngẫu nghiên chia làm nhóm chính: * Nhóm I: Bao gồm giống T6 có nguồn gốc từ Xuất Hoá - Bắc kạn T9 có nguồn gốc từ Hàm Yên - Tuyên Quang, hai giống có hệ số tương đồng 0,81 có hệ số di truyền sai khác so với giống khác thuộc nhóm II 33% (1 - 0,67) * Nhóm II: Bao gồm 28 giống lại tiếp tục phân thành nhánh phụ (PI PII): + Nhánh phụ I: Gồm giống T18 có nguồn gốc từ Đình Bảng - Bắc Ninh, giống có hệ số di truyền sai khác với giống nhánh phụ II 23% (1 - 0,77) + Nhánh phụ II: Gồm 27 giống lại, chia thành cụm: - Cụm I: Gồm giống T21, T24, có hệ số tương đồng di truyền 0,85 có hệ số di truyền sai khác với cụm II 21% (1 - 0.79) - Cụm II, gồm 25 giống lại, cặp giống T13 T14, T14 T25, T22 T25, T27 T29 giống nhiều cả, hệ số sai khác chúng 7% (1 - 0,93) Từ kết phân nhóm nhận thấy tính đa hình 30 giống đậu xanh phạm vi phân tích 10 mồi ngẫu phản ứng RAPD chứng minh cho khác cấu trúc DNA giống đậu xanh Tuy nhiên, đậu xanh tự thụ phấn hệ gen bảo thủ, hệ số sai khác giống nghiên cứu thấp Điều này, thể kết Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2008) Điêu Thị Mai Hoa (2006) nghiên cứu quan hệ di truyền đậu xanh [8], [26] Footer Page 68 of 16 61 Header Page 69 of 16 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN 1.1 Khối lượng 1000 hạt giống đậu xanh dao động từ 40,27g đến 65,44g Trong đó, giống T8 có khối lượng hạt cao (65,44g), thấp giống T15 (40,27g) 1.2 Đánh giá chất lượng hạt cho thấy, hàm lượng protein lipid đạt mức trung bình Hàm lượng protein hạt 30 giống đậu xanh dao động khoảng 19,27% đến 29,12%, hàm lượng lipid khoảng 1,7% đến 4,2% 1.3 Đã tách chiết DNA tổng số từ non 30 giống đậu xanh nghiên cứu Qua kiểm tra cho thấy, mẫu DNA tổng số tách chiết có chất lượng tốt, sử dụng cho nghiên cứu 1.4 Bằng kỹ thuật RAPD với việc sử dụng 10 mồi ngẫu nhiên nhận 1208 phân đoạn DNA nhân ngẫu nhiên từ hệ gen 30 giống đậu xanh Trong 10 mồi ngẫu nhiên sử dụng có 10 mồi biểu tính đa hình 1.5 Kết phân tích cho thấy, 30 giống đậu xanh nghiên cứu chia thành nhóm chính, hệ số tương đồng di truyền nhóm 67% (tức sai khác 33%) ĐỀ NGHỊ Cần tiếp tục sử dụng kỹ thuật RAPD với nhiều mồi ngẫu nhiên kết hợp nhiều kỹ thuật khác SSR, AFLP, RFLP để xác định mối quan hệ di truyền giống đậu xanh có độ tin cậy nhằm tạo sở cho việc lai tạo giống đậu xanh có hiệu Footer Page 69 of 16 62 Header Page 70 of 16 CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Hoàng Thị Thao, Đỗ Tiến Phát, Chu Hoàng Mậu (2010), “ Phân tích mối quan hệ di truyền số giống đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczek) dựa thị RAPD” (Bài gửi đăng tạp chí khoa học công nghệ Đại học Thái Nguyên) Footer Page 70 of 16 63 Header Page 71 of 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Đái Duy Ban (2006), Công nghệ gen, NXB KH & KT Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn Thị Hiền, Phùng Gia Tường (1998), Thực hành Hoá sinh học, NXB Giáo dục Nguyễn Mạnh Chính, Nguyễn Mạnh Cường (2008), Trồng đậu xanh, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội, tr 3-9 Đường Hồng Dật (2006), Cây đậu xanh Kỹ thuật thâm canh biện pháp tăng suất, chất lượng sản phẩm, NXB Lao Động - Xã Hội, tr - 31 Trần Thị Ngọc Diệp (2009), Nghiên cứu tính đa dạng di truyền số giống ngô (Zea mays L.), Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên Vũ Anh Đào (2009), Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống đậu tương (Glycine max (L.) Merrill) địa phương, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên Phạm Thành Hổ (2006), Di truyền học NXB Giáo dục Điêu Thị Mai Hoa (2006), Nghiên cứu số đặc điểm nông học, sinh lý sinh học phân tử liên quan đến tính trạng chín tập trung đậu xanh Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, tr.51-63 Nguyễn Đăng Khôi (1997), “Các đậu ăn hạt Việt Nam”, Tạp chí Sinh học, số 2, tr - 10 Kết nghiên cứu khoa học đậu đỗ 1991 - 1995 (1996), Viện Khoa học kỹ thuật Nông nghiệp, Việt Nam, tr - 188 11 Kết nghiên cứu khoa học nông nghiệp 2000 (2001), NXB Nông Nghiệp 12 Trần Văn Lài, Trần Nghĩa, Ngô Quang Thăng, Lê Trần Trung, Ngô Đức Dương (1993), Kỹ thuật gieo trồng đậu lạc vừng, NXB NN Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 71 of 16 64 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 72 of 16 13 Võ Thị Thương Lan cộng (1999), “Nghiên cứu tính đa dạng số loài rong câu vùng ven biển miền nam Việt Nam kỹ thuật RAPD - PCR”, Báo cáo khoa học hội nghị toàn quốc, tr 1321 - 1327 14 Nguyễn Thị Kim Liên (2003), Nghiên cứu định vị locus số tính trạng hình thái lúa cạn phục vụ cho việc chọn dòng lúa chịu hạn, Luận án Tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học Hà Nội, tr 24 - 34 15 Trần Thị Phương Liên (1999), Nghiên cứu đặc tính hoá sinh sinh học phân tử số giống đậu tương có khả chịu nóng, chịu hạn Việt Nam, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 16 Đỗ Tất Lợi (1997), Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB KH & KT Hà Nội 17 Trần Đình Long, Lê Khả Tường (1998), Cây đậu xanh, NXB NN 18 Lê Đình Lương, Quyền Đình Thi (2002), Kỹ thuật di truyền ứng dụng, NXB Đại học Quốc Gia, Hà Nội 19 Chu Văn Mẫn (2003), Ứng dụng tin học sinh học, NXB Đại học Quốc Gia, Hà Nội, tr 20 - 215 20 Chu Hoàng Mậu (2001), Sử dụng phương pháp đột biến thực nghiệm để tạo dòng đậu tương đậu xanh thích hợp cho miền núi Đông Bắc Việt Nam, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 21 Chu Hoàng Mậu, Nông Thị Man, Lê Xuân Đắc, Đinh Thị Phòng, Lê Trần Bình (2002), “Đánh giá genome số dòng đậu tương đột biến kỹ thuật phân tích đa hình DNA nhân ngẫu nhiên”, Tạp chí sinh học 22, tr 21 - 27 22 Đinh Thị Phòng (2001), Nghiên cứu khả chị hạn chọn dòng chịu hạn lúa công nghệ tế bào thực vật, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 72 of 16 65 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 73 of 16 23 Nguyễn Minh Quế (2009), Đánh giá mối quan hệ di truyền số mẫu dẻ nghiên cứu bảo tồn nguồn gen dẻ Trùng Khánh - Cao Bằng kỹ thuật nuôi cấy mô - tế bào thực vật, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên 24 Khuất Hữu Thanh (2006), Kỹ thuật gen nguyên lý ứng dụng, NXB KH & KT 25 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2003), Nghiên cứu thành phần hoá sinh hạt tính đa dạng di truyền số giống đậu xanh có khả chịu hạn khác nhau, Luận văn thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên 26 Nguyễn Vũ Thanh Thanh (2008), Nghiên cứu tính đa dạng di truyền phân lập số gen liên quan đến tính chịu hạn đậu xanh (Vigna radiata (L.) Wilczeck), Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 27 Phạm văn Thiều (1997), Cây đậu xanh kỹ thuật trồng chế biến sản phẩm, NXB Nông nghiệp 28 Nguyễn Thị Tâm (2003), Nghiên cứu khả chịu cóng chọn dòng chịu nóng lúa công nghệ tế bào thực vật, Luận án tiến sĩ Sinh học, Viện Công nghệ Sinh học, Hà Nội 29 Nguyễn Hải Tuất, Ngô Kim Khôi (1996), Xử lý thống kê kết nghiên cứu thực nghiệm nông lâm ngư nghiệp máy vi tính, NXB Nông nghiệp Hà Nội 30 Vũ Thanh Trà, Trần Thị Phương Liên (2006), “Nghiên cứu đa dạng di truyền số giống đậu tương địa phương có phản ứng khác với bệnh gỉ sắt thị SSR” Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, tr 21, 30 - 32 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 73 of 16 66 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 74 of 16 31 Trương Quang Vinh, Nguyễn Thị Tâm, Đỗ Tiến Phát, Nguyễn Thành Danh (2008), “Đánh giá đa hình DNA số giống khoai tây (Solanum tuberosum L.) kỹ thuật RAPD”, Tạp chí nông nghiệp phát triển nông thôn, số 32 Vander Maesen L J G (1996), Tài nguyên thực vật Đông Nam Á, Tập Các đậu ăn hạt, NXB KH & KT, tr 16 - 86 TÀI LIỆU TIẾNG ANH 33 Afzal M.A., Muynul Haque M., and Shanmugasundaram S (2004), “Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD) analysys of selected mung bean (Vigna radiata L Wilczek) cultivars”, Asian Journal of Sciences, 3(1), pp 20 - 24 34 Awan F S., (2007), “Study of genetic divergence among wheat genotypes through random amplied polymorphic DNA, centre of Agricultural biochemistry and biotechnology”, Unversity of Agricultural Faisalabad Pakistan, 6(3), pp 476 - 481 35 Betal S., (2004) Roy C.P., Kundu S., Sen R.S, “Estimation of geneetic variability of Vigna radiata cultivars by RAPD analysis”, Biologia plantrum, 48(2), pp 205 - 209 36 Chen Y., Wang D., Arelli P., Ebrahimi M., Nelson R.L., (2006), “Molecular marker diversity of SCN-resistant sources in soybean”, Genome; 49, 8; ProQuest Central 37 Dey N., Subarsana B., Chaudhuri T.R.,Dey S.R., mitu De,Ghose T.K., (2005), “RAPD - base genetic diversity analysis of aromatic rice”, Cababstractsplus, 6(3/4), pp 133 - 142 38 Doldi M., Vollmann J., Lellry T., (1997), Genetic doversity in soybean as determined by RAPD and microsatellite analysis, pp 331 - 335 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 74 of 16 67 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 75 of 16 39 Foolad M R., Arulsekar S., Rodrigues R.L.,(1995), “Application of polymerase chain reaction (PCR) in plant genome analysys”, In:Gamborg OL, Pjillips GC (eds), Fundamental methods of plant cell, tissue and organ culture and laboratory operation, Springer Verlag, Berlin, Heidelberg-New York-Tokyo, pp 281 - 298 40 Gawel N.J., Jarret R.H., (1991), Geneomic DNA isolation 41 Humphry M.E., Magner T., McIntyre C.L., Aitken E.A., Liu C.J., (2003), “Identification of a major locus conferring resistance to powdery mildew (Erysiphe polygoni DC) in mungbean [Vigna radiata (L.) Wilczek] by QLT analysis”, Geneome, 46(5), pp 738 - 744 42 Hyung - Jin Baek, Jung - Hoon Kang, Tae - San Kim, Nam - Chon Paek (2008), “Genetic Diversity and Population Structure of Korean Soybean Landrace [Glycine max (L.) Merrill]”, J Crop Sci Biotech (June) 11 (2), pp 83 - 90 43 Jorge (2003), “Genetic diffrentiation of Portugues tea plant using RAPD markers”, Hrt Science, 38(6), pp 1191 - 1197 44 Karuppanapandian T., Karuppudurai T., Sinha P B., Kamarul Haniya A, Ma noharan K (2006), “Genetic diversity in green gram (Vigna radiata L.) landraces analyzed by using random amplified polymorphic DNA (RAPD)”, African Jounal of Biotechnology, pp 1214 - 1219 45 Lakhanpaul S., Chadha S., Bhat K.V (2000), “Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis in Indian mung bean (Vigna radiata L Wilczek) cultivars”, Genetica, 109(3), pp 227 - 234 46 Lambrides C J., Lawn R J., Godwin I D., Manners J., Imrie B C (2004), “Two genetic linkage maps of mungbean (Vigna radiata L Wilczek) using RFLP and RAPD markers”, Australian Journal of Agricultural Research , 51(4), pp 415 - 425 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 75 of 16 68 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 76 of 16 47 Li Z., Nelson R.L., (2002), “RAPD Marker Diversity among Cultivated and Wild Soybean Accessions from Four Chinese Provinces”, Crop Science, 42, pp 1737 - 1744 48 Moretzsohn M.C., Hopkins M.S., Mitchell S.E., Kresovich S, valls J.F., Ferreira M.E (2004), “Genetic diversity of peanut (Arachis hypogaea L.) and its wild relatives based on the analyis of hypervariable regions of the genome”, BMC plant Biol, 14,4(1) 49 Muthusamy S., Kanagarajan S., Ponnusamy S.(2008), “Efficiency of RAPD and ISSR markers system in accessing genetic variation of rice bean (Vigna umbellata) Landraces”, Electronic Journal of Biotechnology, 11(3) 50 Orozco C., Chalmers K J., Powell W., Waugh R., (1996), “RAPD and organelle specific RCR re-affirms taxonomic relationships within the genus Coffea”, Plant Cell Reports, 15(5), pp 337 - 341 51 Paulo S., (2004), “Genetic diversity among maize (Zea mays L.) landraces assessed by RAPD markers”, Genetics and molecular biology, 27(2) 52 Raghunathachari P., Khanna V K., Singh U S., Singh N K., RAPD analysis of genetic variability in Indian Scented germplasm (Oryza sativa L.) 53 Raina S.N.V, Kojima T., Ogihara Y., Singh K.P., Devarumath R.M., (2001), “RAPD and ISSR figerprints as useful genetic marker for analysis of genetic diversity, varietal identification, and phylogenetic relationships in peanut (Arachis hypogaea L.) cultirs and wild species”, Genome, 44(5), pp 763 - 72 54 Ranade R., Gopalakrishna T (2001), “Characterization of blackgram [Vigna mungo (L.) Hepper] varieties using RAPD”, Plant varieties & Seeds, 14(3), pp 227-233 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 76 of 16 69 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 77 of 16 55 Saini A., Reddy S K., Jawali N., (2004), “Evaluation of long primers for AP-PCR analysis of mungbean [Vigna radiata (L.) Wilczek]: Genetic relationships and fingerprinting of some genotypes”, Indian Journal of Biotechnology, pp 511 - 518 56 Sangsiri C., Sorajjapinun W, Srinivesc P., (2005) “Gamma Radiation Induced Mutations, function, gene expression and regulation” Colloids and surface, B Biointerfaces, 45(3-4), pp 131 - 135 57 Santalla M., Power J B, Davey M R., (1998), “Genetic diversity in mung bean [Vigna radiata (L.) Wilczek] germplasm revealed by RAPD markers”, Plant Breeding, pp 473 - 478 58 Li Z., Nelson R.L., (2002), “RAPD Marker Diversity among Cultivated and Wild Soybean Accessions from Four Chinese Provinces”, Crop Science, 42, pp 1737 - 1744 59 Sholihin, Hautea D.M., (2002), “Molecular mapping of drought resistance in mungbean (Vigna radiata L.): 1.QTL linked to drought resistance, 2.Linkage map in mungbean using AFLP markers”, Jurnal Bioteknologi Pertanian, 7(1-2), pp 17 - 61 60 Singh S., Reddy K.S., Jawali N., (2000), “PCR analysis of mungbean genotypes using anchored simple sequence repeat primer”, In: DAE-BRNS symposium on the use of nuclear and molecular techniques in crop improvement, BARC, pp 359 - 369 61 Subramanian V., Gurtu S., Nageswara R.C., Nigam S N., (2000), “Identification of DNA polymorphism in cultivated groundnut using random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay”, Maharastra Hybrid Seeds Company (MAHYCO) Ltd., Andhra Pradesh, India, 43(4), pp 656 - 660 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 77 of 16 70 http://www.lrc-tnu.edu.vn Header Page 78 of 16 62 Venkata C L., Sreedhar R.V., Bhagyalakshmi N., (2007), “The use of genetic markers for detecting DNA polymorphism among banana cultivars”, Plant Cell Biotechnology Department, Central FoodTechnological Research Institute, KRS Road, Mysore, Karnataka 570 020, India, 18(12) 63 William J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V., (1990), “DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers”, Nucleic Acids Reseach, pp 6531 - 6535 64 Young N.D, Kumar L., Menancio - Hautea, Danesh D., Talekar N.S,Shanmugasundarum S., Kim D.H., (1992), “RFLP mapping of a major bruchid resistance gene in mungbean (Vigna radiata L Wilczek)”, Theoretical and Applied genetics, 44(7-8), pp 839 - 844 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Footer Page 78 of 16 71 http://www.lrc-tnu.edu.vn ... - HOÀNG THỊ THAO NGHIÊN CỨU QUAN HỆ DI TRUYỀN CỦA MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU XANH [Vigna radiata (L.) Wilczek] Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI... lai tạo giống, lựa chọn tiến hành nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu quan hệ di truyền số giống đậu xanh [Vigna radiata (L.) Wilczek ]” Footer Page of 16 Header Page of 16 Mục tiêu nghiên cứu - Đánh... định quan hệ di truyền giống đậu xanh [26] Trên giới, việc áp dụng kỹ thuật RAPD để nghiên cứu quan hệ di truyền có phần đa dạng Năm 1998, Santalla M cs nghiên cứu tính đa dạng di truyền đậu xanh