ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN MẠNH CƢỜNG Tên đề tài: TỐI ƢU CÁC ĐIỀU KIỆN NHÂN GIỐNG CẤP NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Khóa học : 2012-2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN MẠNH CƢỜNG Tên đề tài: TỐI ƢU CÁC ĐIỀU KIỆN NHÂN GIỐNG CẤP NẤM ĐÔNG TRÙNG HẠ THẢO CORDYCEPS MILITARIS KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH-CNTP Lớp : K44 - CNSH Khóa học : 2011 - 2015 Giảng viên hƣớng dẫn: TS Dƣơng Văn Cƣờng : ThS Bùi Tuấn Hà Khoa CNSH-CNTP - Trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2016 i Lời cảm ơn Trong suốt trình thực tập Phòng nghiên cứu sản xuất nấm Đông trùng hạ thảo - Viện Khoa Học Sự Sống - Đại học Thái Nguyên, em nhận đƣợc nhiều giúp đỡ từ Ban chủ nhiệm Khoa CNSH - CNTP, thầy cô hƣớng dẫn, bạn bè gia đình Trƣớc hết, em xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới TS Dƣơng Văn Cƣờng, ThS Bùi Tuấn Hà giảng viên Khoa CNSH - CNTP, hƣớng dẫn tận tình tạo điều kiện tốt giúp em hoàn thành khoá luận Em xin gửi lời cảm ơn tới ThS Ma Thị Trang, KS Vũ Hoài Nam ngƣời hƣớng dẫn em số thao tác thực hành vận hành thiết bị giúp em hoàn thành tốt khoá luận Em xin chân thành cảm ơn đến thầy cô Khoa CNSH - CNTP, trƣờng Đại học Nông Lâm Thái Nguyên tận tình bảo, giúp đỡ em trình học tập hoàn thành khoá luận Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời bên cạnh động viên giúp đỡ em suốt thời gian thực khoá luận Em xin chân thành cảm ơn! Thái nguyên, tháng 05 năm 2016 Sinh viên thực Nguyễn Mạnh Cƣờng i DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Một số tên gọi nấm Cordyceps militaris Bảng 2.2 Hợp chất axit nucleic thu đƣợc từ nấm Cordyceps militaris 10 Một số hoạt chất quan trọng mang giá trị dƣợc liệu 11 Tổng hợp số công dụng nấm Cordyceps militaris .14 Bảng 4.1 Đƣờng kính sinh trƣởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris môi trƣờng PDA CB .29 Bảng 4.2 Đƣờng kính sinh trƣởng hệ sợi nấm Cordyceps militaris môi trƣờng có bổ sung nhộng tằm với tỷ lệ khác 33 Bảng 4.3 Đƣờng kính sinh trƣởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện nhiệt độ khác 37 Bảng 4.4 Đƣờng kính sinh trƣởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện pH khác 40 ii DANH MỤC HÌNH Trang Hình 2.1 Nấm Codyceps militaris .5 Hình 2.2 Sự phân bố nấm Cordyceps militaris Hình 4.1 Nấm Cordyceps militaris phát triển số môi trƣờng 28 Hình 4.2 Biểu đồ thể sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris môi trƣờng PDA CB .31 Hình 4.3 Sự phát triển nấm Cordyceps militaris hai môi trƣờng PDA CB sau 25 ngày nuôi cấy 32 Hình 4.4 Biểu đồ thể sinh trƣởng hệ sợi nấm Cordyceps militaris môi trƣờng có bổ sung nhộng tằm với tỷ lệ khác 34 Hình 4.5 Sự phát triển nấm Cordyceps militaris môi trƣờng PDA môi trƣờng P10 sau 25 ngày nuôi cấy .36 Hình 4.6 Biểu đồ thể sinh trƣởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện nhiệt độ khác 38 Hình 4.7 Sự sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris hai điều kiện nhiệt độ khác 25 ngày 39 Hình 4.8 Biểu đồ thể sinh trƣởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện pH khác 41 Hình 4.9 Sự sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris hai môi trƣờng có pH lần lƣợt 5,6 42 iii DANH MỤC CÁC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT CB :Môi trƣờng dinh dƣỡng gồm (Glucose, Yeast, Peptone, Sucrose) C sinensis :Cordyceps sinensis CT :Công thức ĐTHT :Đông trùng hạ thảo H sinensis : Hirsutella sinensis O sinensis : Ophiocordyceps sinensis PDA :Potato Dextrose Agar Spp : species pluriel T armoricanus : Thitarodes armoricanus iv MỤC LỤC Trang Phần Mở đầu 1.1.Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Yêu cầu 1.4 Ý nghĩa đề tài 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần TổNG QUAN TÀI LIệU 2.1 Cơ sở khoa học 2.1.1 Tên gọi Đông trùng hạ Thảo 2.1.2 Nấm Cordycep militaris 2.2 Giá trị dƣợc liệu nấm 2.3 Tình hình nghiên cứu nƣớc 15 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.3.2 Tình hình Nghiên cứu nƣớc 18 Phần ĐốI TƢợNG, NộI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CứU 21 3.1 Đối tƣợng (vật liệu) 21 3.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 21 3.1.2 Vật liệu nghiên cứu 21 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 21 3.2.1 Địa điểm 21 3.2.2 Thời gian tiến hành 22 3.3 Nội dung nghiên cứu 22 3.4 Phƣơng pháp nghiên cứu 22 3.4.1 Những môi trƣờng đƣợc sử dụng 22 v 3.4.2 Phƣơng pháp tiến hành 23 3.4.3 Chỉ tiêu theo dõi, phƣơng pháp thu thập xử lý số liệu 26 Phần KếT QUả NGHIÊN CứU VÀ THảO LUậN 28 4.1 Kết nghiên cứu sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris môi trƣờng để xác định môi trƣờng tối ƣu 28 4.2 Kết Nghiên cứu ảnh hƣởng Nhộng tằm đến sinh trƣởng phát triển nấm Cordyceps militaris 33 4.3 Kết Nghiên cứu ảnh hƣởng nhiệt độ không khí đến sinh trƣởng phát triển nấm Cordyceps militaris 37 4.4 Kết Nghiên cứu ảnh hƣởng pH bƣớc đầu đến sinh trƣởng phát triển nấm Cordyceps militaris 40 Phần KếT LUậN VÀ Đề NGHị 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Đề nghị 44 Phần Mở ĐầU 1.1 Đặt vấn đề Đông trùng hạ thảo (ĐTHT) có chất loài nấm ký sinh nhộng ấu trùng số loài côn trùng Nấm đƣợc gọi Đông trùng hạ thảo trình sinh trƣởng phát triển tự nhiên chúng Vào mùa đông, bào tử nấm xâm nhiễm, ký sinh vào thể ấu trùng sống lòng đất Đến mùa hè, nhiệt độ độ ẩm tăng lên đạt đến điều kiện thích hợp, hệ sợi nấm phát triển sử dụng chất dinh dƣỡng sâu hình thành thể nhú lên khỏi mặt đất nhƣng gốc dính liền vào thân sâu Đông trùng hạ thảo dƣợc liệu quý hiếm, đƣợc sử dụng 2000 năm y học cổ truyền Trung Quốc [23] Đã có nhiều báo khoa học chứng nhận đƣợc thể nấm có chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học cao nhƣ : Cordycepin, Adenosine, Polysaccharide, Mannitol, … [12] Cordycepin (3’-deoxyadenosine) chất tƣơng tự nucleoside có hoạt tính sinh học bao gồm kháng khuẩn, kháng nấm, kháng u, hoạt động kháng virus [5],[39] Ngoài ra, Cordycepin có tiềm điều trị ung thƣ u ác tính [12] Adenosine có nhiều tác dụng dƣợc lý, điều trị suy tim mãn tính Hơn nữa, có nghiên cứu adenosine có tác dụng ức chế bệnh thần kinh, bao gồm quy định giấc ngủ, mức độ hƣng phấn, giảm đau [33] Mannitol đƣợc sử dụng nhƣ loại thuốc lợi tiểu, chống chứng ho máu [23] ĐTHT có chứa nhiều loại vitamin (trong 100g ĐTHT có 0,12g vitamin B12; 29,19mg vitamin A; 116,03mg vitamin C; vitamin B2; vitamin E; vitamin K…), có khoảng 25 – 30 % protein Trên giới nhà khoa học nghiên cứu nấm ĐTHT từ sớm Những hợp chất quý có nấm đƣợc nghiên cứu kĩ để sử dụng cho mục đích y học Lƣợng nấm thu hoạch thiên nhiên năm không nhiều, chƣa đủ đáp ứng nhu cầu thị trƣờng nên việc nghiên cứu để nuôi trồng nhân tạo đƣợc quan tâm Với khoa học công nghệ phát triển, nhiều nƣớc nuôi trồng thành công nấm chất rắn áp dụng cho quy mô sản xuất công nghiệp Tại Việt Nam, công trình nghiên cứu nấm ĐTHT hạn chế Các công trình đƣợc công bố loài nấm dƣợc liệu quý dừng lại việc phát số chủng có tự nhiên Để nuôi trồng nhân tạo thành công nấm ĐTHT, cần phải có chủng giống tốt môi trƣờng thích hợp để nhân nuôi hệ sợi Hiện nay, tài liệu nghiên cứu giai đoạn hạn chế Hơn nữa, bƣớc quan trọng có ảnh hƣởng trực tiếp tới thành công trình nuôi trồng nhân tạo nấm Xuất phát từ thực tiễn đó, nhƣ góp phần vào nghiên cứu môi trƣờng nuôi cấy Đông trùng hạ thảo Việt Nam tiến hành thực đề tài : “Tối ƣu điều kiện nhân giống cấp nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris” 1.2 Mục đích - Tối ƣu đƣợc điều kiện nhân giống cấp nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 1.3 Yêu cầu - Xác định đƣợc môi trƣờng tối ƣu cho nấm Cordyceps militaris phát triển - Xác định đƣợc ảnh hƣởng nhộng tằm đến trình nuôi nấm Cordyceps militaris giai đoạn phát triển hệ sợi 36 Để dễ quan sát sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris môi trƣờng có bổ sung tỉ lệ nhộng tằm phù hợp Chúng tiến hành chụp ảnh lại sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris sau 25 ngày đem so sánh với môi trƣờng chƣa bổ sung nhộng tằm PDA P10 Hình 4.5: Sự phát triển nấm Cordyceps militaris môi trường PDA môi trường P10 sau 25 ngày nuôi cấy Từ hình 4.5 nhận thấy, nấm Cordyceps militaris phát triển môi trƣờng P10 tốt trƣờng PDA ban đầu nhiều sợi nấm nhiều, mọc đan xen vào mọc nhiều, sợi nấm có màu cam rõ ràng bên môi trƣờng PDA Sự khác biệt nhộng có hoạt chất ảnh hƣởng trực tiếp đến phát triển nấm Cordyceps militaris Hơn nữa, Nhộng tằm vật ký chủ nấm Cordyceps militaris tự nhiên nên có thành phần thích hợp cho nấm sử dụng Nhƣ vậy, ta thấy nấm Cordyceps militaris sinh trƣởng tốt môi trƣờng PDA có bổ sung 10% nhộng tằm Kết có ý nghĩa lớn, sở cho việc nghiên cứu ảnh hƣởng nhộng đến hình thành phát triển thể nhƣ việc lựa chọn môi trƣờng để nhân nuôi giống nấm Từ 37 kết nghiên cứu này, tiếp tục sử dụng môi trƣờng P10 làm môi trƣờng nghiên cứu cho thí nghiệm 4.3 Kết Nghiên cứu ảnh hýởng nhiệt ðộ không khí ðến sinh trýởng phát triển nấm Cordyceps militaris Để xác định đƣợc ảnh hƣởng nhiệt độ đến sinh trƣởng hệ sợi nấm Cordyceps militaris giai đoạn nhân giống, tiến hành nuôi cấy nấm thang nhiệt độ khác Môi trƣờng đƣợc sử dụng môi trƣờng P10, pH =6,5, không chiếu sáng Sự sinh trƣởng hệ sợi nấm điều kiện nhiệt độ khác đƣợc thể bảng 4.3 hình 4.4 Bảng 4.3 Đường kính sinh trưởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện nhiệt độ khác Nhiệt độ nuôi Đƣờng kính sinh trƣởng sau ngày nuôi (mm) ngày 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày 18 12,07 24,25 35,41 44,23 55,43 20 14,05 28,41 41,52 51,17 63,51 22 15,73 32,11 45,34 58,35 67,72 24 14,84 29,62 42,38 53,47 62,43 26 10,45 19,63 27,21 35,51 45,43 Đƣờng kính sinh trƣởng (mm) 38 Ngày Hình 4.6: Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện nhiệt độ khác Từ bảng 4.3 hình 4.6 cho thấy, sinh trƣởng hệ sợi nấm Cordyceps militaris thang nhiệt độ không khí khác rõ rệt Sau ngày nuôi cấy, nấm sinh trƣởng tốt nhiệt độ 20oC, 22oC, 24oC Trong đó, hệ sợi nấm Cordyceps militaris sinh trƣởng tốt nhiệt độ 22oC: - Sau ngày đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 15,73mm - Đến ngày thứ 10, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 32,11mm tăng thêm 16,38mm - Ngày thứ 15, tốc độ sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris giữ mức ổn định đạt mức 45,34mm - Đến ngày thứ 20, đƣờng kính sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris đạt 58,35mm - Ngày thứ 25, đƣờng kính sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris đạt 67,72mm Ở nhiệt độ 26 oC, nấm phát triển : 39 - Sau ngày nuôi cấy, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 10,45mm - Sau 10 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 19,63mm - Sau 15 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 27,21mm - Sau 20 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 35,51mm - Sau 25 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 45,43mm Sự sinh trƣởng nấm hai điều kiện nhiệt độ có chênh lệch lớn Từ trƣớc đến nay, yếu tố nhiệt độ điều kiện quan trọng ảnh hƣởng đến sinh trƣởng nấm Mặc dù loại sinh trƣởng khoảng nhiệt độ rộng, nhƣng với khoảng nhiệt độ khác cho kết riêng biệt Để dễ cho việc quan sát, có chụp lại phát triển nấm thang nhiệt độ khác nhau, dƣới ảnh chụp lại kết nuôi nấm dƣới điều kiện 22oC 26oC : T = 22oC T = 26oC Hình 4.7: Sự sinh trưởng nấm Cordyceps militaris hai điều kiện nhiệt độ khác 25 ngày 40 Từ hình 4.7 nhận thấy nấm thích hợp nhiệt độ 22oC nhiệt độ tăng lên tới 26oC hệ sợi nấm bị ảnh hƣởng dẫn đến việc chậm phát triển Sau thứ tự xếp đƣờng kính sinh trƣởng giảm dần theo thang nhiệt độ : 22oC>24oC >20oC >18 oC >26 oC Nhƣ vậy, hệ sợi nấm Cordyceps militaris sinh trƣởng tốt nhiệt độ 22 oC Từ kết nghiên cứu này, tiến hành nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng khác đến sinh trƣởng hệ sợi nấm điều kiện nhiệt độ 22oC 4.4 Kết Nghiên cứu ảnh hýởng pH býớc ðầu ðến sinh trýởng phát triển nấm Cordyceps militaris Để xác định ảnh hƣởng pH môi trƣờng đến sinh trƣởng hệ sơi nấm Cordyceps militaris giai đoạn nhân giống, tiến hành nuôi cấy nấm thang pH khác Nấm đƣợc nuôi môi trƣờng P10 nhiệt độ 22oC, không chiếu sáng Sự sinh trƣởng hệ sợi nấm thang pH đƣợc thể bảng 4.4 hình 4.5 Bảng 4.4: Đường kính sinh trưởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện pH khác PH Môi trƣờng Đƣờng kính sinh trƣởng sau ngày nuôi (mm) ngày 10 ngày 15 ngày 20 ngày 25 ngày 9,65 17,34 26,42 34,15 48,64 5,5 15,12 30,17 43,12 50,63 63,42 16,25 34,62 48,53 59,21 69,29 6,5 15,73 32,11 45,34 56,35 67,72 11,42 23,71 30,46 46,32 53,44 Đƣờng kính sinh trƣởng (mm) 41 Ngày Hình 4.8: Biểu đồ thể sinh trưởng hệ sợ nấm Cordyceps militaris điều kiện pH khác Từ bảng 4.4 hình 4.8 nhận thấy, nấm Cordyceps militaris sinh trƣởng đƣợc khoảng pH rộng từ – 7,5, nhƣng thang pH khác sinh trƣởng hệ sợi nấm Cordyceps militaris lại có khác Nấm sinh trƣởng tốt môi trƣờng có điều kiện pH môi trƣờng 6: - Sau ngày, nấm Cordyceps militaris có đƣờng kính sinh trƣởng trung bình đạt 16,25mm cao thang PH thử nghiệm - Ngày thứ 10, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris tăng thêm 18,37mm lên đến 34,62mm - Ngày thứ 15, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris tăng thêm 13,91mm đạt 48,53mm - Ngày thứ 20, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris tăng thêm 10,68mm đạt 59.21mm - Ngày thứ 25, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris tăng thêm 10,08mm để đạt đƣờng kính 69,29mm 42 Nhìn chung, nấm phát triển nhanh sinh trƣởng nhanh 10 ngày sau có chậm dần Trên giá trị pH khác nấm phát triển hơn, nhiên hệ sợi nấm Cordyceps militaris phát triển mạnh môi trƣờng có điều kiện PH 5,5 6,5 Với môi trƣờng có pH = 5, hệ sợi nấm phát triển : - Sau ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 9,65mm - Sau 10 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 17,34mm - Sau 15 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 26,42mm - Sau 20 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 34,15mm - Sau 25 ngày, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình nấm Cordyceps militaris đạt 48,64mm Để dễ dàng nhận thấy đƣợc ảnh hƣởng pH đến trình sinh trƣởng nấm Cordyceps militaris Chúng chụp ảnh phát triển nấm Cordyceps militaris hai môi trƣờng có giá trị pH lần lƣợt : pH = pH= Hình 4.9: Sự sinh trưởng nấm Cordyceps militaris hai môi trường có pH 5,6 43 Từ hình 4.9 cho thấy sinh trƣởng nấm môi môi trƣờng có khác rõ rệt Cụ thể, đƣờng kính sinh trƣởng trung bình hệ sợi nấm sau 25 ngày nuôi cấy giảm dần theo thứ tự pH môi trƣờng sau: 6>6,5>5,5>7>5 Tuy nhiên, sau thí nghiệm nhận thấy nấm Cordyceps militaris phát triển tốt môi trƣờng có pH Đây điều kiện pH đƣợc lựa chọn cho môi trƣờng giai đoạn nhân giống nấm Cordyceps militaris 44 Phần KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận - Môi trƣờng : thích hợp để nấm Cordyceps militaris sinh trƣởng phát triển PDA - Tỉ lệ Nhộng Tằm bổ sung : thích hợp 10% để nhân giống nấm Cordyceps militaris - Nhiệt độ : thích hợp để nuôi cấy nấm Cordyceps militaris 22oC - pH : thích hợp để nuôi cấy nấm Cordyceps militaris 5.2 Đề nghị Nấm Cordyceps militaris loại nấm dƣợc liệu quý chƣa đƣợc nghiên cứu nhiều - Tiếp tục nghiên cứu yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng phát triển sợi nấm nhƣ độ ẩm, cƣờng độ chiếu sáng để tối ƣu hóa quy trình nuôi cấy nấm môi trƣờng nhân tạo TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiếng Việt Phạm Quang Thu (2009), "Điều tra phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn Động – Bắc Giang", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn,(4) Phạm Quang Thu (2009), "Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps gunni Berk Tại vƣờn quốc gia Tam Đảo tỉnh Vĩnh Phúc", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn,(6), tr 96-99 Phạm Quang Thu Nguyễn Mạnh Hà (2009), "Phát nấm nhộng trùng hạ thảo Cordyceps militaris LINK vƣờn quốc gia Hoàng Liên tỉnh Lào Cai", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển Nông thôn(9) II Tiếng Anh 4.Aarons CB, MD, Philip A Cohen, MD, Adam Gower, MS, Karen L Reed, PhD, Susan E Leeman, PhD, Arthur F Stucchi, PhD, and James M Becker, MD, FACS (2007), "Statins (HMG-CoA reductase inhibitors) decrease postoperative adhesions by increasing peritoneal fibrinolytic activity", Ann Surg 245, tr 176-84 Ahn YJ, Park SJ Lee SG (2000), "Cordycepin: selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp", J Agric Food Chem 48, tr 2744-8 Akaki J, Matsui Y Kojima H (2009), "Structural analysis of monocyte activation constituents in cultured mycelia of Cordyceps sinensis", Fitoterapia 80, tr 182-187 Bello M, Viviana Barrera-Perez, Dexter Morin, Lynn Epstein (2012), "The Neurospora crassa mutant NcDEgt-1 identifies an ergothioneine biosynthetic gene and demonstrates that ergothioneine enhances conidial survival and protects against peroxide toxicity during conidial germination", Fungal Genet Biol 49, tr 160-72 Carmans S Jerome J.A Hendriks, Helena Slaets, Kristof Thewissen, Piet Stinissen, Jean-Michel Rigo, Niels Hellings (2013), "Systemic treatment with the inhibitory neurotransmitter gamma-aminobutyric acid aggravates experimental autoimmune encephalomyelitis by affecting proinflammatory immune responses", J Neuroimmunol 255, tr 45-53 Chatterjee R, Srinivasan KS Maiti PC (1957), "Cordyceps sinensis (Berkeley) Saccardo: structure of cordycepic acid", J Am Pharm 46, tr 114-8 10 Cheah I Halliwell B (2012), "Ergothioneine; antioxidant potential, physiological function and role in disease", Biochim Biophys Acta 1822, tr 784-93 11 Choi SB, Park HC, Choi MK, Jun DW, Park S (2004), "Improvement of Insulin Resistance and Insulin Secretion by Water Extracts of Cordyceps militaris, Phellinus linteus, and Paecilomyces tenuipesin 90% pancreatectomized rats", Biosci Biotechnol Biochem 68(11), tr 2257-2264 12 Cui JD (2014), “Biotechnological production and applications of Cordyceps militaris,a valued traditional Chinese medicine”, Critical Reviews in Biotechnology, 35(4), tr 1-10 13 Cunning ham KG, Manson W, Spring FS (1951), "Cordycepin, a metabolic product from cultures of Cordyceps militaris (Linn.) Link Part I Isolation and characterization", J Chem Soc, tr 2299-2300 14 Das ShK, Mina Masuda, Akihiko Sakurai, Mikio Sakakibara (2010), " Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects.", Fitoterapia 81, tr 961-8 15 Dong JZ, C Lei, Xun R Ai, Y Wang (2012), "Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components", Appl Biochem Biotechnol 166, tr 1215-24 16 Gu YX, Wang Z.Sh, Li SX, Yuan Q.Sh (2007), "Effects of multiple factors on accumulation of nucleosides and bases in Cordyceps militaris", Food Chem 102, tr 1304-9 17 Huang L, Li QZ Chen YY (2009), "Determination and analysis of cordycepin and adenosine in the products of Cordyceps spp", Afr J Microbiol Res 3, tr 957-61 18 Kang C, Wen TC, Kang JC, Ze-Bing Meng, Li GR, and Kevin D Hyde (2014), "Optimization of large-scale culture conditions for the production of cordycepin with Cordyceps militaris by liquid static culture", ScientificWorldJournal 2014, tr 510-627 19 Khan Md A Tania M, Zhang DZh Chen HCh (2010), "Cordyceps mushroom: a potent anticancer nutraceutical", Open Nutraceut J 3, tr 179-83 20 Kim JR, Yeon SH, Kim HS and Ahn YJ (2002), "Larvicidal activity against Plutella xylostella of cordycepin from the fruiting body of Cordyceps militaris", Pest Management Sci 58, tr 713-7 21 Kredich NM Guarino AJ (1961), "Homocitrullyl aminoadenosine, a nucleoside isolated from Cordyceps millitaris", J Biol Chem 236, tr 3300-2 22 LekTeng Lim, ChiaYen Lee EngThuan Chang (2012), "Optimization of Solid State Culture Conditions for the Production of Adenosine, Cordycepin, and D-mannitol in Fruiting Bodies of Medicinal Caterpillar Fungus Cordyceps militaris", International Journal of Medicinal Mushrooms 14(2), tr 181–187 23 Li SP , Yang FQ Karl WK Tsim (2006), "Quality control of Cordyceps sinensis, a valued traditional Chinese medicine", J Pharm Biomed Anal 41(5), tr 1571-1584 24 Liu JM cộng (1989), "Chemical constituent of Cordyceps militaris (L.) Link", Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 14, tr 608-9 25 Liu ZY, Yao YJ Liang ZQ (2001), "Molecular evidence for the anamorph-teleomorph connection in Cordyceps sinensis", Mycol Res 105, tr 827-32 26 Lo HC, Chienyan Hsieh, Fang-Yi Lin, and Tai-Hao Hsu (2013), “A Systematic Review of the Mysterious Caterpillar Fungus Ophiocordyceps sinensis in Dong-ChongXiaCao (冬蟲夏草 Dōng Chóng Xià Cǎo) and Related Bioactive Ingredients”, J Tradit Complement Med 3(1): 16–32 27 Patel K.J R.S Ingalhalli (2013), "Cordyceps militaris (L.: Fr.) Link An Important Medicinal ", Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry Mushroom 2(1), tr 315-319 28 Peterson RRM (2008), "Cordyceps-a traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory", Phytochem 69, tr 1469-95 29 Reis FS, Barros L Calhelha RC (2013), "The methanolic extract of Cordyceps militaris (L.) Link fruiting body shows antioxidant, antibacterial, antifungal and antihuman tumor cell lines properties", Food Chem Toxicol 62, tr 91-8 30 Shrestha B, Zhang W, Zhang Y, (2012), “The medicinal fungusCordyceps militaris: research and development”, Mycological Progress DOI: 10.1007/s11557-012-0825-y 31 Sung J.H cộng (2007), "Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi", Studies in Mcology 57, tr 5-59 32 Suzuki R cộng (2012), "Beneficial effects of γ-aminobutyric acid on right ventricular pressure and pulmonary vascular remodeling in experimental pulmonary hypertension", Life Sci 91, tr 693-8 33 Thomas V Dunwiddie Susan A Masino (2001), " The role and regulation of adenosine in the central nervous system.", Annual Reviews 24, tr 31–55 34 Wang L, Zhang WM Hu B (2008), "Genetic variation of Cordyceps militaris and its allies based on phylogenetic analysis of rDNA ITS sequence data", Fungal Divers 31, tr 147-55 35 Won SY Park EH (2005), "Anti-inflammatory and related pharmacological activities of cultured mycelia and fruiting bodies of Cordyceps militaris", J Ethnopharm 96, tr 555-561 36 Yu R cộng (2004), "Isolation and biological properties of polysaccharide CPS-1 from Fitoterapia 75, tr 465-472 cultured Cordyceps militaris", 37 Zheng ZL, Huang CH Cao L (2011), "Agrobacterium tumefaciens mediated transformation as a tool for insertional mutagenesis in medicinal fungus Cordyceps militaris", Fungal Biol 115, tr 265-74 38 Zhou XW, Li LJ Tian EW (2013), "Advances in research of the artificial cultivation of Ophiocordyceps sinensis in China", Crit Rev Biotechnol 39 Zhou XX cộng (2002), "Effect of cordycepin on interleukin-10 production of human peripheral blood mononuclear cells", Eur J Pharmacol 453, tr 309-17 40 Tang JP, L Yiting Z Li (2014), "Optimization of fermentation conditions and purification of cordycepin from Cordyceps militaris", Prep Biochem Biotechnol 44(1), tr 90-106 ... hạ thảo Cordyceps militaris 1. 2 Mục đích - Tối ƣu đƣợc điều kiện nhân giống cấp nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris 1. 3 Yêu cầu - Xác định đƣợc môi trƣờng tối ƣu cho nấm Cordyceps militaris. .. triển nấm ĐTHT giai đoạn cấp 1. 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Kết tối ƣu điều kiện nhân giống cấp nấm Đông trùng hạ thảo Cordyceps militaris khoa học giúp cho việc hoàn thiện quy trình sản xuất nấm phục... trồng nhân tạo nấm Xuất phát từ thực tiễn đó, nhƣ góp phần vào nghiên cứu môi trƣờng nuôi cấy Đông trùng hạ thảo Việt Nam tiến hành thực đề tài : Tối ƣu điều kiện nhân giống cấp nấm Đông trùng hạ