BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG LÊ THỊ MINH PHƢƠNG NGHIÊN C U CHI T T CH VÀ H C ĐỊNH THÀNH PH N HỌC TRONG M T S ỊCH CHI T C MU NG HOÀNG N TẠI ĐÀ NẴNG QU Chuyên ngành: Hóa hữu Mã số: 60 44 01 14 T M TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHO HỌC Đà Nẵng – Năm 2016 Cơng trình hồn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: TS Trần Mạnh Lục Phản biện 1: TS.Nguyễn Đình Anh Phản biện 2: TS.Bùi Xuân Vững Luận văn bảo vệ trước Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học họp Đại Học Đà Nẵng vào ngày 20 tháng năm 2016 Có thể tìm hiểu Luận văn tại: - Trung tâm Thông tin-Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xa xưa dân gian ta truyền cho kinh nghiệm quý báu chữa bệnh loại thuốc có rừng Nó đóng vai trị khơng thể thiếu dân ta chưa tiếp cận với kĩ thuật y học đại việc sử dụng loại dược liệu có thiên nhiên ngày đóng vai trị quan trọng Tuy nhiên, việc sử dụng dược liệu đơn xuất phát từ kinh nghiệm nên có mặt hạn chế có tác dụng phụ gây nguy hiểm, chí tử vong Theo lương y Huỳnh Văn Quang “Với lồi cây, rễ cây, hạt…có loại có cơng dụng trị bệnh, có loại gây độc, độc Ngay với loại cây, rễ, có cơng dụng chữa bệnh, khơng biết dùng, dùng bừa bãi trở thành độc dược gây chết người”[35] Vì vậy, việc nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học có tác dụng chữa bệnh từ cỏ thiên nhiên đáng quan tâm Nước ta vùng nhiệt đới gió mùa, ánh sáng nhiều, lượng mưa lớn, độ ẩm cao nên thực vật phát triển mạnh Thảm thực vật nước ta đa dạng phong phú với hàng nghìn họ, hàng vạn lồi, nguồn dược liệu quý giá cần nghiên cứu khai thác.Trong số phải kể đến chi Cassia chi lớn đa dạng mặt hình thái, có nhiều lồi dùng làm thuốc chữa bệnh Muồng hoàng yến (danh pháp khoa học: Cassia fistula L.) lồi số Lồi muồng có nguồn gốc từ miền nam châu Á, từ miền nam Pakistan kéo dài phía đơng qua Ấn Độ tới Đơng Nam Á phía nam tới Sri Lanka Cũng y học ghi chép từ lâu dược điển Ấn Độ Tất phận có tác dụng làm thuốc chữa chứng sốt cao, viêm khớp, táo bón Tuy nhiên thành phần vị thuốc [6] Mặc dù có nhiều giá trị sử dụng Việt Nam Muồng hoàng yến biết đến nhiều để trồng cảnh Các cơng trình nghiên cứu thành phần hố học, hoạt tính Muồng hồng yến chưa hồn tồn đầy đủ có tính hệ thống Vì vậy, chọn đề tài: “Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học số dịch chiết Muồng hoàng yến Đà Nẵng” làm đề tài luận văn Thạc sĩ Đối tượng mục đích nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Quả Muồng hoàng yến thu hái Liên Chiểu - Đà Nẵng tháng 6/2015 2.2 Mục đích nghiên cứu - Xác định số thơng số hóa lý cơm Muồng hồng yến - Tìm điều kiện chiết tách thích hợp chất từ cơm Muồng hoàng yến Đà Nẵng dung môi phân cực khác - Xác định thành phần hóa học số dịch chiết từ cơm Muồng hoàng yến Nội dung nghiên cứu 3.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết - Tham khảo cơng trình nghiên cứu giới loài nghiên cứu - Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu, tư liệu nguồn nguyên liệu, thành phần hóa học ứng dụng Muồng hoàng yến - Tổng hợp tài liệu phương pháp lấy mẫu, chiết tách xác định thành phần hóa học chất từ thực vật 3.2 Phương pháp nghiên cứu thực nghiệm - Xác định độ ẩm phương pháp trọng lượng - Xác định hàm lượng kim loại phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử - Chiết tách dung môi cồn tuyệt đối - Chiết tách chất dung môi khác theo phương pháp chiết lỏng lỏng - Dùng phương pháp GC-MS để xác định chất dịch chiết - Phân lập chất từ cao chiết chloroform; dichlomethane phương pháp sắc kí cột, sắc kí lớp mỏng Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài - Những kết nghiên cứu cơng trình góp phần cung cấp thơng tin có ý nghĩa khoa học thành phần hóa học cấu tử chiết tách từ lồi Cassia fistula, qua góp phần nâng cao giá trị ứng dụng chúng ngành dược liệu Bố cục đề tài Ngoài phần mở đầu (3 trang) kết luận kiến nghị (2 trang) luận văn gồm chương Chương Tổng quan (16 trang) Chương Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu (33 trang) Chương Kết thảo luận (30 trang) CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 1.1.1 Đặc điểm chung hình thái họ Đậu (Fabaceae) a Bộ rễ b Thân c Lá d Hoa 1.1.2 Đặc diểm chung chi Cassia a Cassia grandis L (Muồng hoa đào, Bồ cạp đồng) b Cassia javanica L (Muồng java, Bồ cạp java) c Cassia fistula L ( ồng hoàng yến, Bồ cạp vàng) 1.2 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY MUỒNG HỒNG YẾN 1.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 2.1.1 Nguyên liệu Nguyên liệu nghiên cứu Muồng hoàng yến thu hái vào tháng 6/2015 Liên Chiểu - Đà Nẵng 2.1.2 Xử lý nguyên liệu Quả Muồng hoàng yến sau hái, chọn chín, già, hình trụ có màu đen sẫm, có đốt, để khơ tự nhiên Sau tách riêng hạt, vỏ cơm Bảo quản cơm bao polyetylen đựng lọ thủy tinh có nắp 2.1.3 Thiết bị, dụng cụ, hóa chất a Thiết bị, dụng cụ b Hóa chất 2.1.4 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm Hình 2.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 2.2 XÁC ĐỊNH CÁC THƠNG SỐ HĨA LÝ 2.2.1 Xác định độ ẩm 2.2.2 Xác định hàm lượng tro 2.2.3 Xác định hàm lượng kim loại 2.3 KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA SỐ LẦN CHIẾT 2.3.1 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi ethanol 2.3.2 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi hexane 2.3.3 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi chloroform 2.3.4 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi dichlomethane 2.4 CHIẾT TÁCH VÀ XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CÁC DỊCH CHIẾT BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LỎNG - LỎNG 2.5 PHÂN LẬP VÀ XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MỘT SỐ CHẤT CÓ TRONG CAO CHIẾT CHLOROFORM, DICHLOMETHANE CỦA CƠM QUẢ MUỒNG HOÀNG YẾN 2.5.1 Sắc ký mỏng 2.5.2 Sắc ký cột 2.5.3 Phân lập phân đoạn cao chiết chloroform 2.5.4 Phân lập phân đoạn cao chiết dichlomethane CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐỘ ẨM, HÀM LƯỢNG TRO VÀ HÀM LƯỢNG KIM LOẠI 3.1.1 Độ ẩm Độ ẩm trung bình cơm Muồng hoàng yến 17.86 %.Qua kết ta thấy độ ẩm trung bình cơm tươi thấp, tránh tạo điều kiện cho vi sinh vật côn trùng gây hại phát triền làm hư mẫu Do bảo quản để sử dụng lâu dài 3.1.2 Hàm lượng tro Hàm lượng tro trung bình cơm Muồng hồng yến 0.817 % Cho thấy cơm Muồng hoàng yến chứa lượng chất vơ cơ, có mặt muối số kim loại hàm lượng kim loại có cơm Muồng hồng yến không đáng kể 3.1.3 Hàm lượng kim loại Bảng 3.1 Hàm lượng kim loại cơm Muồng hoàng yến TT Kim loại Pb Cu Zn As Cd Phương pháp thử (AAS) AOAC 999.11 AOAC 999.11 AOAC 999.11 AOAC 986.15 AOAC 971.21 Kết (mg/l) Kết (mg/kg) 0.0082 0.093 0.18 0.0025 0.00016 0.41 4.65 0.125 0.008 Hàm lượng cho phép (mg/kg) [1] 30 40 0,03 Căn vào tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) cho vệ sinh thực phẩm (theo định y tế số 867/BYT-QĐ ngày 04 tháng năm 1998) hàm lượng kim loại nặng tối đa cho phép rau sấy khô, chúng tơi nhận thấy hàm lượng kim loại nặng có cơm Muồng hoàng yến thấp nhiều so với hàm lượng tối đa cho phép Do sử dụng an toàn cơm Muồng hoàng yến làm dược liệu, không ảnh hưởng đến sức khoẻ người Tuy nhiên ảnh hưởng điều kiện sinh thái thời tiết mùa hàm lượng kim loại cơm Muồng hoàng yến địa phương theo thời gian lấy mẫu khác 3.2 KẾT QUẢ KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA SỐ LẦN CHIẾT 3.2.1 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi ethanol Phổ UV - VIS dịch chiết ethanol từ cơm muồng hoàng yến sau lần chiết thể hình 3.1 Chú thích: 0.400 0.35 0.30 0.25 A 0.20 0.15 0.10 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.05 0.000 590.0 600 620 640 660 680 700 nm 720 740 760 780 800.0 Hình 3.1 Phổ hấp thụ phân tử UV-VIS với dịch chiết ethanol ÄNhận xét: Qua hình 3.1 cho thấy lần chiết thích hợp để thu dịch chiết cơm Muồng hồng yến với dung mơi ethanol lần thứ nồng độ chất tan cịn lượng khơng đáng kể 3.2.2 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi hexane Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi hexane từ tổng cao ethanol cơm muồng hoàng yến thể hình 3.2 Chú thích: Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.800 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 A 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 0.05 0.000 590.0 600 620 640 660 680 700 720 740 760 780 800.0 nm Hình 3.2 Phổ hấp thụ phân tử UV-VIS với dịch chiết hexane ÄNhận xét: Qua hình 3.2 cho ta thấy lần chiết thích hợp để thu dịch chiết cơm Muồng hoàng yến với dung mơi hexane lần thứ nồng độ chất tan cịn lượng khơng đáng kể 3.2.3.Ảnh hưởng số lần chiết dung môi chloroform Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi chloroform từ tổng cao ethanol cơm muồng hồng yến thể hình 3.3 Chú thích: 6.00 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 A 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 0.5 0.00 400.0 450 500 550 600 nm 650 700 750 800.0 Hình 3.3 Phổ hấp thụ phân tử UV-VIS với dịch chiết chloroform ÄNhận xét: Qua hình 3.3 cho ta thấy lần chiết thích hợp để thu dịch chiết cơm Muồng hồng yến với dung mơi chloroform lần thứ nồng độ chất tan cịn lượng khơng đáng kể 3.2.4 Ảnh hưởng số lần chiết dung môi dichloromethane Phổ UV - VIS dịch chiết lỏng - lỏng với dung môi dichloromethane từ tổng cao ethanol cơm muồng hoàng yến thể hình 3.4 Chú thích: Dịch chiết lần Dịch chiết lần Dịch chiết lần 6.00 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 A 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.00 400.0 450 500 550 600 nm 650 700 750 800.0 Hình 3.4 Phổ hấp thụ phân tử UV-VIS với dịch chiết dichloromethane ÄNhận xét: Qua hình 3.4 cho ta thấy lần chiết thích hợp để thu dịch chiết cơm Muồng hoàng yến với dung mơi dichloromethane lần thứ nồng độ chất tan cịn lượng khơng đáng kể Kết luận: Qua đo phổ hấp thụ phân tử UV-VIS ta xem xét thay đổi nồng độ chất tan có dịch chiết qua lần chiết Và xác định số lần chiết thích hợp để thu lượng cao chiết tối đa 10 Hình 3.6 Sắc ký đồ GC dịch chiết hexane cơm Muồng hồng yến Bảng 3.3 Thành phần hóa học dịch chiết hexane cơm Muồng hoàng yến TT Thời gian lưu (phút) 3.504 Tỉ lệ % 0.05 11.163 0.69 15.100 0.12 16.672 0.44 Tên gọi Furfural (C5H4O2) 2-Furancarboxaldehyde, 5(hydroxymethyl)(C6H6O3) Benzaldehyde, 3-hydroxy4-methoxy (C8H8O3) Phenol, 4-(ethoxymethyl)2-methoxy (C10H14O3) Cơng thức hóa học 11 TT Thời gian lưu (phút) Tỉ lệ % Tên gọi Bicyclo[3.1.1]heptane, 2,6,6-trimethyl-, [1R(1.alpha.,2.beta.,5.alph a.)] (C10H18) n-Hexadecanoic acid (C16H32O2) Hexadecanoic acid, ethyl ester (C18H36O2) Heptadecanoic acid, ethyl ester (C19H38O2) Phytol (C20H40O) 26.487 0.08 30.108 3.45 30.472 3.46 33.221 0.20 33.740 0.49 10 35.286 1.81 cis-13-Octadecenoic acid (C18H34O2) 11 35.500 0.29 9,12-Octadecadienoic acid, ethyl ester (C20H36O2) 12 35.772 1.71 Ethyl Oleate (C20H38O2) 13 35.890 0.39 Octadecanoic acid (C18H36O2) 14 36.409 0.30 Octadecanoic acid, ethyl ester (C20H40O2) Cơng thức hóa học 12 Thời gian lưu (phút) Tỉ lệ % 15 42.913 0.12 Piperine (C17H19NO3) 16 45.683 0.98 Campesterol (C28H48O) 17 45.956 0.62 Stigmasterol (C29H48O) 18 46.978 17.0 β-sitosterol (C29H50O) TT Tên gọi Cơng thức hóa học @Nhận xét: Kết cho thấy dịch chiết với dung môi hexane, phương pháp GC-MS định danh 18 cấu tử với tỉ lệ khác Các cấu tử định danh chiếm 32,29% cấu tử chưa định danh chiếm 67,71%.Từ bảng thống kê ta thấy cấu tử có dịch chiết hexane chủ yếu cấu tử khơng phân cực gồm hidrocacbon, axit hữu mạch dài este chúng Các cấu tử có hàm lượng lớn bao gồm βsitosterol (17.09%); Hexadecanoic acid, ethyl ester (3.46%); nHexadecanoic acid (3.45%) Các cấu tử cịn lại có hàm lượng thấp hợp chất khác tạm thời chưa thể định danh b Kết xác định thành phần dịch hóa học chất dịch chiết chloroform Sắc ký đồ GC dịch chiết chloroform từ cơm Muồng hồng yến thể hình 3.7 Kết xác định thành phần hóa học dịch chiết chloroform từ cơm Muồng hoàng yến đưa bảng 3.4 13 Hình 3.7 Sắc ký đồ GC dịch chiết chloroform cơm Muồng hoàng yến Bảng 3.4 Thành phần hóa học dịch chiết chloroform cơm Muồng hoàng yến Thời TT gian Tỉ lệ lưu % Tên gọi Cơng thức hóa học (phút) 21 11.115 2.04 Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)( C6H6O3) 15.095 0.29 Benzaldehyde, hydroxy-4-methoxy 3- 14 Thời TT gian Tỉ lệ lưu % Tên gọi Cơng thức hóa học (phút) (C8H8O3) 16.346 1.10 L-Glutamic acid (C5H9NO4) 3-Hydroxy-4- 16.426 0.73 methoxybenzyl alcohol (C8H10O3) 7-Hydroxy-6- 29.329 1.53 methoxy-2H-1benzopyran-2-one (C10H8O4) 29.742 2.45 n-Hexadecanoic acid (C16H32O2) Hexadecanoic 30.370 3.92 ethyl ester (C18H36O2) 33.676 0.59 35.683 1.89 10 45.645 0.52 Phytol (C20H40O) Ethyl Oleate (C20H38O2) Campesterol (C28H48O) acid, 15 Thời TT gian Tỉ lệ lưu % Tên gọi Cơng thức hóa học (phút) 11 45.956 0.43 12 46.778 14.53 Stigmasterol ( C29H48O) β-sitosterol (C29H50O) @Nhận xét: Từ kết bảng 3.4 cho thấy phương pháp GC-MS xác định 12 cấu tử với tỉ lệ khác dịch chiết chloroform từ cơm Muồng hoàng yến Các cấu tử định danh chiếm 30.02% tổng số cấu tử phát Trong 12 cấu tử phát có cấu tử trùng lặp với dung mơi hexane phát cấu tử Các cấu tử có hàm lượng lớn bao β-sitosterol (14.53%); Hexadecanoic acid, ethyl ester (3.92%); n-Hexadecanoic acid (2.45%); 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl) - (2.04%) c Kết xác định thành phần hóa học chất dịch chiết dichloromethane Sắc ký đồ GC dịch chiết dichloromethane từ cơm Muồng hoàng yến thể hình 3.8 Kết xác định thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane từ cơm Muồng hoàng yến đưa bảng 3.5 16 Hình 3.8 Sắc ký đồ GC dịch chiết dichlomethane cơm Muồng hoàng yến Bảng 3.5 Thành phần hóa học dịch chiết dichlomethane cơm Muồng hoàng yến STT Thời gian lưu (phút) Tỉ lệ % Tên gọi Cơng thức hóa học 4H-Pyran-4-one, 2,3dihydro-3,5-dihydroxy6-methyl(C6H8O4) 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)( C6H6O3) 9.361 0.31 11.201 1.68 12.976 0.25 2-Methoxy-4vinylphenol (C9H10O2) 15.116 0.26 Benzaldehyde, hydroxy-4-methoxy(C8H8O3) 3- 17 19.887 1.01 3-Hydroxy-4methoxybenzoic acid (C8H8O4) 24.011 0.19 4-((1E)-3-Hydroxy-1propenyl)-2methoxyphenol (C10H12O3) 29.434 1.35 7-Hydroxy-6-methoxy2H-1-benzopyran-2-one (C10H8O4) 29.893 1.34 n-Hexadecanoic acid (C16H32O2) 30.413 3.3 10 33.697 0.49 11 35.013 0.61 12 35.462 0.25 13 35.716 1.74 14 44.523 0.36 Vitamin E 15 45.683 0.76 Campesterol (C28H48O) 16 45.956 0.54 Stigmasterol (C29H48O) 17 46.978 15.21 β-sitosterol (C29H50O) Hexadecanoic acid, ethyl ester (C18H36O2) Phytol (C20H40O) cis-13-Octadecenoic acid (C18H34O2) 9,12-Octadecadienoic acid, ethyl ester (C19H34O2) 9-Octadecenoic acid, methyl ester,(E) (C19H36O2) 18 @Nhận xét: Từ kết bảng 3.5 cho thấy phương pháp GC-MS xác định 17 cấu tử dịch chiết dichloromethane từ cơm Muồng hoàng yến với tỉ lệ % khác Chiếm 30.26% tổng số cấu tử phát Có cấu tử trùng lặp với cao hexane, chloroform, phát cấu tử Trong cấu tử cấu tử có hàm lượng lớn 9-Octadecenoic acid, methyl ester,(E); cấu tử có hàm lượng nhỏ 4-((1E)-3-Hydroxy-1-propenyl)-2-methoxyphenol Tổng hợp có mặt chất định danh có dịch chiết dung mơi trình bảng 3.6 Bảng 3.6 Thành phần hóa học dịch chiết thu từ cơm Muồng hoàng yến TT Chất Cao chiết C6H6 CHCl2 CHCl3 Furfural (C5H4O2) 0.05% - - Benzaldehyde, 3-hydroxy-4-methoxy (C8H8O3) 0.12% 0.26% 0.29% Phenol, 4-(ethoxymethyl)-2-methoxy (C10H14O3) 0.44% - - 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl) – (C6H6O3) 0.69% 1.68% 2.04% Bicyclo [3.1.1] heptane, 2,6,6-trimethyl-, [1R(1.alpha.,2.beta.,5.alpha.)] (C10H18) 0.08% - - n-Hexadecanoic acid (C16H32O2) 3.45% 1.34% 2.45% Hexadecanoic acid, ethyl ester (C18H36O2) 3.46% 3.3% 3.92% Heptadecanoic acid, ethyl ester (C18H36O2) 0.20% - - Phytol C20H40O) 0.49% 0.49% 0.59% 10 cis-13-Octadecenoic acid (C18H34O2) 1.81% 0.61% - 11 9,12-Octadecadienoic (C20H36O2) 0.29% 0.25% - acid, ethyl ester 19 TT Chất 12 Ethyl Oleate (C20H38O2) 13 Cao chiết Octadecanoic acid (C18H36O2) C6H6 CHCl2 CHCl3 1.71% - 1.89% 0.39% - - 14 Octadecanoic acid, ethyl ester(C20H40O2) 0.30% - - 15 Piperine (C17H19NO3) 0.12% - - 0.98% - 0.52% 16 Campesterol (C28H48O) 17 Stigmasterol (C29H48O) 0.62% 0.54% 0.43% 18 β-sitosterol (C29H50O) 17.09% 15.21% 14.53% 19 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy6-methyl- (C6H8O4) - 0.31% - 20 2-Methoxy-4-vinylphenol (C9H10O2) - 0.25% - 21 3-Hydroxy-4 methoxybenzoic acid (C8H8O4) - 1.01% - 22 4-((1E)-3-Hydroxy-1-propenyl)-2methoxyphenol (C10H12O3) - 0.19% - 23 7-Hydroxy-6-methoxy-2H-1-benzopyran-2one (C10H8O4) - 1.35% 1.53% - 1.74% - 24 9-Octadecenoic acid, methyl ester,(E) (C19H36O2) 25 Vitamin E - 0.36% - 26 L-Glutamic acid (C5H9NO4) - - 1.10% 27 3-Hydroxy-4-methoxybenzyl (C8H10O3) - - 0.73% 28 Benzaldehyde, (C8H8O3) - 0.26% - Chú thích: alcohol 3-hydroxy-4-methoxy- - Cấu tử khơng có mặt dịch chiết 20 ÄNhận xét chung: Bằng phương pháp GC-MS định danh 28 cấu tử, dịch chiết hexane 18 cấu tử, dịch chiết dichloromethane 17 cấu tử, dịch chiết chloroform 12 cấu tử Trong dịch chiết có cấu tử có mặt dịch chiết với hàm lượng khác nhau, cụ thể là: Bảng 3.7 Cấu tử có mặt dịch chiết STT Chất C6H6 CHCl2 CHCl3 Benzaldehyde, 3-hydroxy-40.12% 0.26% 0.29% methoxy 2-Furancarboxaldehyde, 50.69 1.68% 2.04% (hydroxymethyl)% n-Hexadecanoic acid 3.45% 1.34% 2.45% 3.46% Hexadecanoic acid, ethyl ester 3.3% 3.92% Phytol Stigmasterol 0.49% 0.62% 0.49% 0.59% 0.54% 0.43% 17.09 15.21 14.53 % % % 3.4 KẾT QUẢ PHÂN LẬP PHÂN ĐOẠN CAO CHIẾT CLOROFORM, DICHLOROMETHANE TỪ TỔNG CAO ETHANOL 3.4.1 Kết phân lập phân đoạn cao chiết chloroform a Phân tách phân đoạn sắc kí cột Với lượng cao chloroform (2.934g) từ tổng cao ethanol, sử dụng cột sắc kí có d = 3.5 cm h = 50 cm thu phân đoạn từ hệ dung môi dichlomethane : ethyl acetate = 9:1 phân đoạn từ hệ dung môi dichlomethane : ethyl acetate = 7:3 Kết thăm dò phân lập cao chiết chloroform trình bày sơ đồ hình 3.9 β-sitosterol 21 Hình 3.9 Kết phân lập phân đoạn cao chiết chloroform b Định danh thành phần hóa học phân đoạn MHY.CII2 Sắc ký đồ GC kết định danh thành phần hóa học phân đoạn MHY.CII2 thể hình 3.10 kết định danh thành phần trình bày bảng 3.8 Hình 3.10 Sắc kí đồ GC phân đoạn MHY.CII2 22 Bảng 3.8 Thành phần hóa học phân đoạn MHY.CII2 Thời gian lưu (phút) 29.852 36.77 n-hexadecanoic acid 35.960 37.11 Octadecanoic acid TT Tỉ lệ % Tên Cơng thức hóa học Nhận xét: Từ bảng 3.8, phương pháp GC-MS định danh cấu tử với tỉ lệ khác chiếm 73,88%.Kết sau tinh chế sắc ký cột lần, hàm lượng n-hexadecanoic acid sản phẩm thu tăng từ 2,45% lên 36,77% tách thêm đồng phân hexadecanoic acid Octadecanoic acid chiếm 37,11% 3.4.2 Kết phân lập phân đoạn cao chiết dichlomethane a Phân tách phân đoạn sắc kí cột Với lượng cao dichlomethane (5.308g) từ tổng cao ethanol, sử dụng cột sắc kí có d = 3.5 cm h = 50 cm rửa giải hệ dung môi chloroform : ethyl acetate = 7:3 thu phân đoạn Kết phân lập phân đoạn cao chiết chloroform trình bày hình 3.11 Hình 3.11 Sơ đồ kết phân lập phân đoạn cao chiết dichlomethane 23 b Định danh thành phần hóa học phân đoạn MHY.DIII1 Sắc ký đồ GC kết định danh thành phần hóa học phân đoạn MHY.DIII1 thể hình 3.12 kết định danh thành phần trình bày bảng 3.9 Hình 3.12 Sắc kí đồ GC phân đoạn MHY.DIII1 Bảng 3.9 Thành phần hóa học phân đoạn MHY.DIII1 Tỉ lệ (%) Tên cấu tử Thời gian lưu (phút) 22.564 0.31 Cyclohexanenbutanoic acid 35.766 0.84 Cis-vaccenic acid 46.775 0.23 Cholestan-3-ol, methylene-,(3 beta, 5alpha)- 47.051 0.19 Cholestane, 4,5-epoxy-, (4 alpha, alpha)- TT Cấu trúc Nhận xét: Từ bảng 3.9 cho thấy sau tinh chế sắc kí cột lần, phương pháp GC-MS định danh cấu tử với hàm lượng khác Trong cấu tử có cấu tử Cis-vaccenic acid chiếm tỉ lệ cao 0.84%, cấu tử có tỉ lệ phần trăm thấp Cholestane, 4,5-epoxy-, (4 alpha, alpha)- chiếm 0.19%.Trong phân đoạn MHY.DIII1 có 1,57% cấu tử định danh lại 98,43% chưa định danh 24 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ A Kết luận: Qua trình nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học cơm Muồng hồng yến thu hái Liên Chiểu-Đà Nẵng, đề tài thu kết sau: - Một số tiêu lý hóa: độ ẩm trung bình cơm Muồng hồng yến là: 17.86%, hàm lượng tro trung bình là: 0.817%, hàm lượng kim loại Pb, Cu, Zn, As, Cd thấp, phù hợp với tiêu hàm lượng kim loại, đáp ứng tiêu chuẩn Việt Nam (TCVN) cho vệ sinh thực phẩm (theo định y tế số 867/BYT-QĐ ngày 04 tháng năm 1998) hàm lượng kim loại nặng tối đa cho phép rau sấy khơ Tìm số lần chiết tối ưu cho q trình chiết tách số hợp chất từ cơm Muồng hoàng yến phương pháp chiết song song với loại dung môi sau: Ethanol (lần thứ 4), hexane (lần thứ 3), chloroform (lần thứ 2) , dichlomethane (lần thứ 2) Bằng phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ xác định số thành phần hóa học dịch chiết từ cơm Muồng hoàng yến Từ dịch chiết: Hexane, dichlomethane, chloroform định danh tổng số 28 cấu tử, bao gồm acid hữu cơ, ester, steroid, dẫn xuất phenol, flavonoid Trong dịch chiết có chung số cấu tử hàm lượng cao gồm β-sitosterol; n-Hexadecanoic acid; Hexadecanoic acid, ethyl ester chúng có hoạt tính sinh học cao Phân lập số phân đoạn phương pháp sắc kí cột silicagel B Kiến nghị - Tiếp tục nghiên cứu chiết tách, xác định thành phần hóa học cơm Muồng hoàng yến dung môi khác thổ nhưỡng khác - Xác định hết thành phần chưa định danh phương pháp khác - Tiếp tục nghiên cứu chiết tách chất tinh khiết chất có hoạt tính sinh học cao có cơm Muồng hồng yến để ... HÌNH NGHIÊN CỨU VỀ CÂY MUỒNG HỒNG YẾN 1.2.1 Tình hình nghiên cứu giới 1.2.2 Tình hình nghiên cứu Việt Nam CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN... học số dịch chiết từ cơm Muồng hoàng yến Nội dung nghiên cứu 3.1 Phương pháp nghiên cứu lý thuyết - Tham khảo cơng trình nghiên cứu giới loài nghiên cứu - Thu thập, tổng hợp, phân tích tài liệu,... tài luận văn Thạc sĩ Đối tượng mục đích nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Quả Muồng hoàng yến thu hái Liên Chiểu - Đà Nẵng tháng 6/2015 2.2 Mục đích nghiên cứu - Xác định số thơng số hóa lý