TR I H C QU C GIA HÀ N I NG I H C KHOA H C T NHIểN NGUY N KH C SINH NGHIểN C U PHÂN L P M T S H P CH T SAPONIN Cị HO T TệNH KHỄNG T BÀO UNG TH T H I SÂM CERCODEMAS ANCEPS Chuyên ngƠnh: Sinh h c Th c nghi m Mƣ s : 60.42.0114 CÁN B H NG D N: TS NGUY N XUÂN C NG PGS TS HOÀNG TH M NHUNG HÀ N I, 2016 M CL C M U Ch ng ậ T NG QUAN 1.1 Saponin .9 ì à C à à M à 1.1.1 1.1.2 1.1.3 1.2 à à à 10 à à 13 Saponin t h i sơm 13 H N 1.2.1 1.2.2 1.3 à 13 M t s ph à 14 ng pháp phơn l p vƠ xác đ nh c u trúc h p ch t hóa h c 15 1.3.1 ì à 15 1.3.2 ì à 16 1.3.3 P à à àN àM àR àì àNMR 16 1.3.3.1 Ph 1H-NMR 16 1.3.3.2 Ph 13C-NMR 16 1.3.3.3 Ph DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) 17 1.3.3.4 Ph 2D-NMR 17 1.4 Ung th .18 19 1.5 Các mô hình sƠng l c thu c ch ng ung th Error! Bookmark not defined M M M 1.5.1 1.5.2 1.5.3 à à à à à à à à Error! Bookmark not defined Error! Bookmark not defined Error! Bookmark not defined Ch ng ậ IT NG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U Error! Bookmark not defined 2.1 i t ng nghiên c u Error! Bookmark not defined L à àCercodemas anceps Error! Bookmark not defined M à à Error! Bookmark not defined D à à à àì -180 Error! Bookmark not defined D à à àMCF Error! Bookmark not defined D à à à à àHCT Error! Bookmark not defined C à àì Error! Bookmark not defined 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 2.1.5 2.1.6 2.2 Hoá ch t, thi t b Error! Bookmark not defined 2.2.1 2.2.2 2.2.3 2.3 Ph H T D Error! Bookmark not defined Error! Bookmark not defined à à à Error! Bookmark not defined ng pháp nghiên c u Error! Bookmark not defined 2.3.1 P à 2.3.2 X à Bookmark not defined à à à à à Error! Bookmark not defined à à Error! 2.3.3 P defined 2.3.4 P not defined 2.3.5 P defined 2.3.6 P not defined 2.3.7 C not defined à à à à à à à à à à à à à à à à à à à à à à àCPìH à à Error! Bookmark not Error! Bookmark not à Error! Bookmark à Error! Bookmark à Error! Bookmark Ch ng ậ K T QU Error! Bookmark not defined 3.1 K t qu phơn l p h p ch t t h i sơm Cercodemas anceps Error! Bookmark not defined 3.2 K t qu xác đ nh c u trúc hóa h c h p ch t phơn l p đ c Error! Bookmark not defined 3.3 Error! Bookmark not defined K t qu th đ c tính v i t bƠo c a hai ch t phơn l p Error! Bookmark not defined 3.4 K t qu đánh giá tác đ ng c a CPSH mô hình in vitro vƠ in vivo Error! Bookmark not defined K T LU N Error! Bookmark not defined KI N NGH Error! Bookmark not defined TÀI LI U THAM KH O 20 DANH M C HỊNH MINH H A Hình 1.1: Các đ c tr ng c b n c a t bƠo ung th 19 Hình 1.2: Quá trình ch t theo ch ng trình (apoptosis) Error! Bookmark not defined Hình 1.3: S bi u hi n s m PS mƠng t bƠo ch t theo ch ng trình Error! Bookmark not defined Hình 1.4: M t s dòng t bƠo ung th vƠ d ng s ng c a chúng Error! Bookmark not defined Hình 1.5: Cách phơn lo i 11 l p h p ch t saponin Error! Bookmark not defined Hình 2.1: LoƠi h i sơm Cercodemas anceps nghiên c u Error! Bookmark not defined Hình 2.2: T bƠo ung th mô liên k t Sarcoma-180 nghiên c u Error! Bookmark not defined Hình 2.3: T bƠo ung th vú MCF7 nghiên c u Error! Bookmark not defined Hình 2.4: T bƠo ung th bi u mô ru t k t HCT116 nghiên c u Error! Bookmark not defined Hình 2.5: Chu t nh t tr ng Swiss (Mus musculus) nghiên c u Error! Bookmark not defined Hình 2.6: C u trúc hoá h c mu i MTS vƠ s n ph m mƠu Formazan Error! Bookmark not defined Hình 2.7: T l gi a đ h p th ánh sáng 490 nm v i s l ng t bƠo Error! Bookmark not defined Hình 2.8: B trí thí nghi m MTS Error! Bookmark not defined Hình 2.9: Xác đ nh ch s IC50 Error! Bookmark not defined Hình 2.10: Annexin V g n mƠng t bƠo ch t theo ch ng trình Error! Bookmark not defined Hình 2.11: Hình nh c t d c c u trúc da Error! Bookmark not defined Hình 2.12: Thu c 6MP (Purinethol hay Mercaptopurine) Error! Bookmark not defined Hình 2.13: Th c k p caliper Error! Bookmark not defined Hình 3.1: Ph 13C-NMR c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.2: Ph H-NMR c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.3: Ph HSQC c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.4: Ph HMBC c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.5: Ph COSY c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.6: Ph ROESY c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.7: C u trúc hóa h c c a h p ch t ậ h p ch t colochiroside A Error! Bookmark not defined Hình 3.8: Ph 13C-NMR c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.9: Ph 1H-NMR c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.10: Ph HMBC c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.11: Ph HSQC c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.12: Ph COSY c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.13: Ph ROESY c a ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.14: C u trúc hóa h c c a h p ch t ậ h p ch t philinopside A Error! Bookmark not defined Hình 3.15: ng cong đáp ng li u c a t bƠo HCT116 v i hai ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.16: ng cong đáp ng li u c a t bƠo Sar-180 v i hai ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.17: ng cong đáp ng li u c a t bƠo MCF7 v i hai ch t Error! Bookmark not defined Hình 3.18: ng cong đáp ng li u c a Sar.180 (A) vƠ MCF7 (B) đ i v i CPSH Error! Bookmark not defined Hình 3.19: M u C TB Sar.180 v i Annecxin V Error! Bookmark not defined Hình 3.20: M u C TB Sar.180 v i PI Error! Bookmark not defined Hình 3.21: M u C TB MCF7 v i Annecxin V Error! Bookmark not defined Hình 3.22: M u C TB MCF7 v i PI Error! Bookmark not defined Hình 3.23: T bƠo Sar.180 nhu m Annexin V sau v i CPSH Error! Bookmark not defined Hình 3.24: T bƠo Sar.180 nhu m nhơn PI sau v i CPSH Error! Bookmark not defined Hình 3.25: T bƠo MCF7 nhu m Annexin V sau v i CPSH Error! Bookmark not defined Hình 3.26: T bƠo MCF7 nhu m nhơn PI sau v i CPSH Error! Bookmark not defined Hình 3.27: U th c nghi m d i da c a m t s chu t thí nghi m Error! Bookmark not defined Hình 3.34: th bi u di n s t ng tr ng l ng lô ung th trình thí nghi m Error! Bookmark not defined Hình 3.29: Hình nh kh i u chu t t i lô thí nghi m vƠo ngƠy th 32 sau c y u Error! Bookmark not defined Hình 3.30: th t ng tr ng kích th c trung bình c a u r n lô thí nghi m Error! Bookmark not defined DANH M C B NG B ng 2.1: Hóa ch t s d ng thí nghi m Error! Bookmark not defined B ng 2.2: Thi t b s d ng thí nghi m Error! Bookmark not defined B ng 2.3: D ng c vƠ v t t dùng thí nghi m Error! Bookmark not defined B ng 2.4: D i n ng đ thu c s d ng thí nghi m MTS Error! Bookmark not defined B ng 2.5: Quy trình ti n hƠnh thí nghi m MTS Error! Bookmark not defined B ng 2.6: S đ thí nghi m xác đ nh t bƠo ch t theo ch ng trình Error! Bookmark not defined B ng 2.7: Quy trình ti n hƠnh thí nghi m mi n d ch hu nh quang Error! Bookmark not defined B ng 2.8: Lô vƠ thông s trình thí nghi m Error! Bookmark not defined B ng 2.9: Thang đánh giá hi u l c kháng u c a H Itokawa Error! Bookmark not defined B ng 3.1: S li u ph 1H-NMR (500 MHz, Pyridine-d5) vƠ 13C-NMR 125 MHz, Pyridine-d5) ph n aglycon c a h p ch t 1, vƠ ch t tham kh o Error! Bookmark not defined B ng 3.2: S li u ph 1H-NMR (500 MHz, Pyridine-d5) vƠ 13C-NMR (125 MHz, Pyridine-d5) ph n chu i đ ng c a h p ch t 1, vƠ ch t tham kh o Error! Bookmark not defined B ng 3.3: T ng h p tr ng l ng trung bình c a chu t lô thí nghi m Error! Bookmark not defined B ng 3.4: Theo dõi kích th c kh i u trình th nghi m Error! Bookmark not defined B ng 3.5: T ng h p k t qu kh o sát tác d ng kháng u c a CPSH chu t mang u r n Sar.180 Error! Bookmark not defined B ng 3.6: Các ch s huy t h c c a chu t lô thí nghi m vƠ đ i ch ng Error! Bookmark not defined B NG DANH M C T VI T T T T vi t t t T đ yđ ADN (DNA) Deoxyribonucleic acid TBUT T bƠo ung th PS Phosphatidylserine SKLM S c ký l p m ng HPLC High Performance Liquid Chromatography CPSH Ch ph m sinh h c UT Ung th CDM i ch ng dung môi CSH i ch ng sinh h c EGF Epidermal growth factor HeLa Henrietta Lacks' 'Immortal' cell line IC50 Inhibited Concentration at 50% LD50 Lethal Dose at 50% TLCT Tr ng l MMP-9 Matrix metallopeptidase MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4- ng c th sulfophenyl)-2H-tetrazolium) NMR Nuclear Magnetic Resonance (C ng h OD Optical Density ng t h t nhơn) M U Ba t USD lƠ s ti n kh ng l mƠ nhƠ sáng l p m ng xƣ h i Facebook - Mark Zuckerberg cam k t hi n t ng cho khoa h c, nh m m c đích gi i quy t lo i b nh nguy hi m nh t th k t i M t b n lo i b nh lƠ b nh ung th B nh ung th không ph i b nh m i xu t hi n nh ng th k g n đơy, đƣ đ c ghi nh n t n m 3000 đ n 1500 tr c Công nguyên Nh v y, b nh ung th đƣ t n t i ng i su t chi u dƠi l ch s Tuy đƣ hi u đ c b n ch t c a b nh ung th nh ng vi c phòng tránh vƠ ch a tr ung th v n lƠ thách th c to l n cho t t c Nhi u n m qua, th gi i đƣ có r t nhi u công trình nghiên c u khoa h c v ung th , kèm theo nh ng s li u th ng kê đáng l u ý Theo báo cáo c a T ch c Y t th gi i (WHO) s 297, tháng n m 2011, ung th lƠ nguyên nhơn gơy t vong hƠng đ u toƠn th gi i S l ng ng i t vong ung th n m 2008 lƠ 7,6 tri u ng i t ng s 57 tri u ca t vong b nh t t toƠn c u (chi m 13%) Riêng Hoa K n m 2008 có t i 1,5 tri u ca m c m i ung th T ch c Y t th gi i d đoán đ n n m 2030, loƠi ng i s ph i đ i m t v i s ng i t vong b nh ung th t ng lên h n 11 tri u ng i toƠn th gi i T i Vi t Nam, theo thông tin đ c đ a t i h i th o khoa h c Ung b u qu c gia l n th VII vƠo n m 2013, m i n m Vi t Nam có kho ng 150.000 ng i m i m c ung th vƠ 75.000 ng i t vong c n b nh nƠy, t c 205 ng i/ ngƠy vƠ s nƠy d báo s ngƠy cƠng t ng cao N u có d p đ t chơn đ n B nh vi n K s th y rõ ung th đƣ tr thƠnh v n n n c a xƣ h i C n c vƠo nh ng hi u bi t c a ng i v ung th , nhƠ khoa h c th gi i đ nh h ng nghiên c u theo nhi u h ng khác Trong đó, xu h ng sƠng l c ch t tách chi t t đ ng v t, th c v t di n m nh m vƠ n i b t nh t Hi n nay, hƠng tr m ch t đƣ đ c tìm v i tác d ng có kh n ng ch ng l i t bƠo ung th Vi t Nam, kho ng h n 90 ch t đƣ đ c s d ng.M t ch t có th có kh n ng ch a tr nh t đ nh cho m t s ng i vƠ m t s lo i ung th nên vi c ph i h p nhi u lo i thu c s mang đ n hi u qu cao h n, tránh đ c vi c quen thu c c a t bƠo ung th H n n a, ung th l i lƠ nhóm b nh vô ph c t p, có th tác đ ng đ n h u kh p c quan c th , nên vi c ti p t c tìm ch t m i vƠ b sung hoƠn thi n cho ch t đ c nghiên c u v n lƠ vi c vô quan tr ng vƠ đ c u tiên hƠng đ u Trong đó, nhi u nghiên c u th gi i ch r ng h p ch t saponin có ti m n ng gơy đ c v i nhi u dòng t bƠo ung th ng i.Nh ng saponin lƠ nhóm h p ch t có c u trúc r t ph c t p vƠ tác d ng c ng r t khác gi a nhóm h p ch t saponin góp ph n lƠm rõ h n v tác d ng c a h p ch t saponin, Ti n s Nguy n Xuơn C ng c a Vi n Hóa sinh bi n thu c Vi n HƠn lơm Khoa h c vƠ Công ngh Vi t Nam đ nh h ng nghiên c u v loƠi h i sơm v i ti m n ng mang nhi u h p ch t saponin Cùng v i nhóm Nghiên c u Ung th h c th c nghi m, Khoa Sinh h c, Tr ng i h c Khoa h c T nhiên, i h c Qu c Gia HƠ N i, ti n hƠnh th c hi n đ tƠi: “Nghiên c u phơn l p m t s h p ch t saponin có ho t tính kháng t bƠo ung th t h i sơm Cercodemas anceps” v i m c đích: Phơn l p vƠ xác đ nh c u trúc t đ n h p ch t saponin t loƠi h i sơm Cercodemas anceps ánh giá đ c ho t tính di t t bƠo ung th c a ch t phơn l p đ dòng t bƠo ung th vƠ mô hình đ ng v t in vivo c m t s Ch 1.1 ng – T NG QUAN Saponin 1.1.1 Saponin kh n ng kháng u Saponin lƠ m t nhóm h p ch t đ c phơn b r t r ng rƣi t nhiên, có đ c tính ho t đ ng b m t vƠ không bay h i Cái tên saponin có ngu n g c ti ng Latin lƠ t “sapo”, có ngh a lƠ “xƠ phòng” ch t nƠy t o b t d ng nh xƠ phòng rung l c m nh v i n c Hi n t ng đ c gi i thích v m t c u trúc lƠ saponin g m aglycone không phơn c c k t h p v i m t ho c nhi u g c monosaccharide S k t h p gi a thƠnh ph n c u trúc phơn c c vƠ không phơn c c phơn t c a chúng gi i thích chúng t o b t n c Saponin thông th ng có th c v t vƠ th ng có nhi u r , thơn, lá, hoa vƠ h t C th h n, h p ch t nƠy đ c ghi nh n lƠ có h n 100 h th c v t vƠ có nh t 150 saponin t nhiên đ c cho lƠ có kh n ng kháng ung th (anti-cancer) [11] B khung c a saponin đ u có ngu n g c t ti n ch t oxidosqualene (Hình 1.1) đ c tr ng b i 30 carbon g n thêm glycosyl.D a b khung carbon, saponin đ c chia thƠnh triterpenes vƠ steroid.S khác gi a l p nƠy lƠ steroid b m t nhóm methyl nên b khung ch có 27 carbon, triterpenes có đ 30 carbon Các thƠnh ph n glycone c a chúng th ng lƠ oligosaccharide, chúng đ c s p x p d ng th ng ho c phơn nhánh, vƠ th ng liên k t v i nhóm hydroxyl thông qua liên k t acetal [16] D a b khung carbon, k t h p v i đ ng sinh t ng h p triterpenes vƠ steroid, Jean-Paul Vincken vƠ c ng s đƣ chia thƠnh 11 l p saponin khác bao g m: dammaranes, tirucallanes, lupanes, hopanes, oleananes, taraxasteranes, ursanes, cycloartanes, lanostanes, cucurbitanes vƠ steroids [11](Hình 1.1).Các nhóm nƠy cho th y hi u qu kháng u thông qua nhi u đ ng khác Trên th gi i đƣ có nhi u nghiên c u v c ch c a saponin c ng nh s t ng quan gi a c u trúc vƠ ch c n ng d i c p đ phơn t vƠ t bƠo đ hi u v c ch tác đ ng hóa sinh h c c a saponin M t s saponin đ c bi t v i kh n ng kháng u m nh nh ginsenoside thu c lo i dammarane đƣ cho th y kh n ng c ch hình thƠnh kh i u b ng cách kìm gi m t s thƠnh ph n nh t bƠo n i mô m ch máu vƠ ng n c n s neo bám, xơm l n vƠ di c n c a t bƠo kh i u Dioscin lƠ thƠnh ph n lo i steroid c ng đ c nghiên c u sơu v i kh n ng kháng kh i u thông qua ng n c n chu trình t bƠo vƠ apoptosis Nhi u phơn t quan tr ng 10 khác thu c v oleanane saponin nh avicin, platycodon, sailosaponin, soysaponin v i tubeimosides c ng cho th y vai trò quan tr ng c a [11] Các nghiên c u hi n đ i cho th y saponin có kh n ng kháng kh i u nhi u dòng t bƠo ung th nh LA795 [13], MCF7 vƠ MDA-MB-231 [10] VƠi lo i saponin c ch s phát tri n c a t bƠo kh i u thông qua vi c lƠm d ng chu trình vƠ kích thích apoptosis v i giá tr IC50 kho ng 2,5 µM đ n µM [10] i v i đ ng v t, m t s saponin đ c nghiên c u có giá tr LD50 khác nh polyphyllin D thu c lo i steroid có giá tr LD50 lƠ 2,73 mg/kg [10], hay saponin tách chi t t Citrullus colocynthis có giá tr LD50 lƠ 200 mg/kg [24] Trong đó, saponin k t h p u tr li u pháp kháng u cho k t qu c i thi n h n r t nhi u H n n a, s hi u bi t m t cách rõ rƠng v m i liên quan gi a c u trúc c a saponin v i y u t khác s giúp vi c s d ng saponin hi u qu h n 1.1.2 C ch kháng u c a m t s saponin Saponin r t đa d ng v c u trúc nên tác đ ng kháng ung th c a t ng l p c ng r t đa d ng Nhi u l p th hi n tính kháng u r t rõ r t v i nhi u đ ng khác Cycloartanes: Lo i saponin nƠy cho th y kh n ng kháng ung th nh ng chúng có th đ c s d ng k t h p u tr hóa tr kh i u Chúng lƠm gi m bi u hi n c a d u chu n ung th ru t HCC (human colon cancer) lƠ -fetoprotein vƠ ng n c n s phát tri n c a t bƠo HepG2 b ng cách c m ng trình ch t theo ch ng trình vƠ u n đ ng tín hi u c a NF-kB ph thu c ERK (ERK-independent NF-kB) [11] Dammeranes: h u h t lo i saponin nƠy cho th y kh n ng kháng ung th Nh ng saponin lo i nƠy th ng có tác d ng m nh v i t bƠo ung th di c n h n t bƠo không ác tính.IC50 đ i v i t bƠo không ác tính g p t i 40 đ n 150 l n IC50 đ i v i t bƠo ác tính B ng nh ch p hi n vi n t vƠ bi n pháp hóa sinh, saponin nƠy đ c ch ng minh lƠ phá h y mƠng vƠ mƠng ngoƠi c a ty th c a c t bƠo ung th t y vƠ b ch c u ng i, d n đ n lƠm m t kh n ng v n chuy n qua mƠng, lƠm t ng canxi n i bƠo, qua kích ho t đ ng ch t theo ch ng trình thông qua canxi [11] Oleananes: lƠ lo i đ c tìm th y nhi u nh t t nhiên vƠ có kh n ng kháng ung th qua nhi u đ ng nh kháng u, ch ng l i kh n ng di c n, kích thích mi n d ch M t s ch t nh Avincin có ngu n g c t cơy Acacia victoriae sam c Australia có 11 kh n ng dephosphoryl hóa Stat3 nhi u dòng t bƠo ung th vƠ d n đ n lƠm gi m ho t đ ng c a Stat3, qua lƠm gi m ho t đ ng c a nhi u protein nh c-myc, cyclin D1, Bcl2, survivin vƠ VEGF Avincin D vƠ G gơy c ch s phát tri n c a t bƠo lympho T, c m ng kh i đ ng đ ng ch t theo ch ng trình vƠ đ y t bƠo vƠo đ ng ch t ki u t th c bƠo [11].Ch t Tubeimoside có hi u qu gơy đ c v i t bƠo ung th c t cung HeLa thông qua c ch lƠm r i lo n ho t đ ng c a ty th ho c gơy ch t t bƠo b ng c ch lên l i n i ch t vƠ c ch trùng h p tubulin NgoƠi ra, ch t Saikosaponin A lƠm gi m kh n ng s ng vƠ kh n ng phơn chia c a t bƠo MCF7, kh i phát ch t theo ch ng trình vƠ d ng chu trình t bƠo pha G1 Hay ch t saponin đ c tách chi t t cơy Platycodon grandiflorumtác đ ng đ n ho t đ ng c a thoi vô s c nên lƠm d ng phơn chia t bƠo, c ch ho t đ ng c a telomerase thông qua can thi p vƠo trình phiên mƣ hTERT c a telomere Spirostanes cho th y kh n ng kháng u m nh vƠ kích thích h mi n d ch Trong đó, ch t Polyphyllin D nhi u nghiên c u g n đơy cho th y ti m n ng gơy ch t theo ch ng trình thông qua đ ng ty th vƠ l i n i ch t nh m t s ch t khác Bên c nh đó, ch t Dioscin nghiên c u ti n lơm sƠng l i cho th y kh n ng c ch ho t đ ng phơn chia c a h u h t dòng t bƠo ung th máu vƠ kh i u r n Phơn tích proteomic cho th y ch t nƠy thúc đ y apoptosis thông qua đ ng ty th vƠ m t s đ ng khác Trong th c t , ch t Formosanin C nhóm nƠy có tác đ ng lên đáp ng mi n d ch vƠ đ c s d ng h tr cho ch t 5-fluorouracil (ch t đƣ đ c s d ng u tr ung th ) Con đ ng nh h ng c a Formosanin C lƠ ch t nƠy ho t hóa caspase-2, bi n đ i ho t đ ng c a ty th (trong t bƠo ung th ru t k t HT29) [11] 12 Hình 1.1: Cách phân lo i 11 l p h p ch t saponin 13 1.1.3 M i liên quan gi a c u trúc ch c n ng kháng u c a saponin S khác c u trúc c a saponin lƠ khác v lo i, v trí, vƠ s l ng g c đ ng g n liên k t glycoside t i v trí khác vòng, qua có th quy t đ nh đ c tính tác d ng đáp ng sinh h c c a saponin đó, đ c bi t lƠ kh n ng kháng u Chúng ta có th th y m t s m i liên quan gi a c u trúc vƠ ho t đ ng nh sau: Tác d ng c a aglycone kh n ng kháng u c a saponin: so sánh s khác v v trí vƠ s l ng nhóm hydroxyl aglycone cho th y kh n ng khác c a saponin TubeimosideII có C-16 nhóm hydroxyl đóng vai trò quan tr ng vi c u ch nh ho t đ ng sinh h c c a tubeimosideII vƠ gi m kh n ng gơy đ c c a Nh ng C17 nhóm hydroxyl có kh n ng gơy đ c h n vƠ C-27 hydroxyl có kh n ng kháng u nh t [11] - Tác d ng c a chu i đ ng c u trúc c a saponin: liên k t đ ng, s l ng vƠ th t s p x p đ ng nh h ng đ n kh n ng c a saponin Ví d : v i lo i aglycone vƠ đ dƠi chu i đ ng nh ng c u n i liên k t s cho ti m n ng kháng u khác disaccharide v i 1-3 c u n i cho tác d ng h n 1-2 ho c 1-4 c u n i S l ng g c đ ng nh h ng đ n kh n ng kháng u c a saponin Ho t đ ng c a ginsenoside có tác đ ng theo th t : monosaccharide glycoside > disaccharide glycoside > trisaccharide glycoside > tetrasaccharide glycoside [11] Tóm l i, s phát hi n vƠ phát tri n c a saponin đóng góp r t l n vƠo li u pháp ung th vƠ nhi u thƠnh ph n, s cho đ n đƣ đ c ng d ng th nghi m lơm sƠng H u h t t t c saponin đ u gơy c m ng ch t theo ch ng trình cho t bƠo kh i u, chúng lƠ thu c đ c a dùng li u pháp ch a ung th lo i tr t bƠo kh i u b ng apoptosis lƠ bi n pháp h u ích đ t ng hi u qu cho b nh nhơn, tránh vi c b ho i t M ng ki n th c quan tr ng c a c ch kháng u c a saponin lƠ c n thi t cho vi c c i thi n tr c ti p li u pháp ch ng kh i u d a saponin t ng lai.M t khác, nghiên c u vƠ th nghi m nên đ c t p trung vƠo vi c k t h p gi a saponin vƠ thu c kháng u khác 1.2 Saponin t h i sâm 1.2.1 H i sâm x H i sơm hay đ c g i lƠ d a bi n, sơm bi n, đ a bi n, lƠ loƠi đ ng v t không ng s ng Thơn có d ng ng dƠi nh qu d a, phình gi a vƠ thon nh hai đ u 14 v i nh ng gai th t nh Phía tr c có mi ng v i vƠnh tua rõ r t, phía sau lƠ h u môn D c thơn lƠ dƣy chơn ng Da m m có phi n x ng n m r i rác d i da H i sơm lƠ đ ng v t phơn tính, tr m t s loƠi thu c b Không chơn (Apoda) Tr ng th tinh vƠ phát tri n ngoƠi c th m Chúng s ng bò n n đáy, đ sơu khác nhau, ch có m t s loƠi thu c h Pelagothuridae lƠ b i l i H i sơm có kh n ng tái sinh r t cao vƠ s c ch u đ ng b n b (có th s ng d in c t i đ sơu 6.000m) Có nhi u lo i h i sơm thu c chi Holothuria, Actinopyga, Stichopus Trong đó, hai loƠi h i sơm đen vƠ tr ng đ c s d ng r ng rƣi h n:  H i sơm đen (Holothuria vagabunda) có thơn mƠu đen, b ng nh t mƠu h n, dƠi 30-40cm  H i sơm tr ng (H scabra) có l ng mƠu xám, nh t d n 40-50cm, có đ n 60-70cm Trên th gi i, h i sơm có hƠng nghìn loƠi, phơn b hai bên, b ng tr ng, dƠi nhi u n c nh Trung Qu c, Nh t B n, Úc, n , Malaysia, vùng ông Phi Vi t Nam, có b n loƠi đƣ đ c phát hi n ph bi n lƠ h i sơm đen, h i sơm tr ng, h i sơm vú (Microthele nobilis Selenka) vƠ h i sơm mít (Actinopyga echinites Jaeger) Chúng có kh p n bi n t b c vƠo nam, nhi u nh t Phú Yên, Khánh Hòa, V ng TƠu, Côn o, Phú Qu c, Kiên Giang Chúng th ng s ng d i nông ven b đ n đ sơu kho ng 5-7m, ch y u v nh vƠ nh ng n i nhi u đá ng m Chúng di chuy n b ng cách ph t n c ho c co du i c ; n đ ng v t, th c v t nh đáy vƠ ch t bƣ h u c Các nghiên c u v thƠnh ph n hóa h c đƣ cho th y h i sơm ch a r t nhi u ch t có ho t tính quý báu nh ho t tính gơy đ c t bƠo, ch ng oxy hóa, kháng MAO c bi t lƠ s có m t c a h p ch t triterpenes saponin (holothurin) có ho t tính gơy đ c t bƠo r t m nh đ i v i nhi u dòng t bƠo ung th ng ph m có tác d ng phòng vƠ tr b nh ung th i, h a h n cho vi c phát tri n d c 1.2.2 Ngu n saponin t h i sâm Tr c đơy, Saponin đƣ đ c phơn tách t nhi u loƠi sinh v t bi n nh h i sơm (Nigrelli 1952; Yamanouchi 1955), bi n (Mackie vƠ Turner 1970), h i miên (Thompson 1985).Trong h i sơm, saponin lƠ ch t chuy n hóa th c p V m t c u trúc , chúng lƠ glycoside triterpene đ c t o thƠnh t chu i oligosaccharide vƠ aglycone lƠ holostane-3b-ol, đóng vai trò quan tr ng tác d ng d c lý c a h i 15 sơm Trên th gi i, nhóm nghiên c u đƣ tìm nh t 59 gylcoside tritecpen.Nhi u saponin xu t hi n nhi u loƠi h i sơm khác nh ng c ng có nhi u saponin r t đ c hi u cho loƠi Trong c th h i sơm, saponin phơn b khác vƠ n ng đ saponin c ng khác khoang c th Saponin đ c tìm th y c quan tiêu hóa, c , l p bi u bì, bu ng tr ng vƠ tinh hoƠn (thay đ i theo chu k sinh s n) vƠ ng Cuvierian Saponin tách t h i sơm th hi n d c tính cao v i kh n ng kháng u, kháng viêm, kháng khu n, kháng virut, kháng n m, Vi t Nam, m t vƠi nhóm nghiên c u đƣ phơn l p saponin t h i sơm.Trong có nhóm nghiên c u c a Nguy n H i ng thu c vi n Hóa h c h p ch t thiên nhiên đƣ phơn tách đ c hai h p ch t m i t loƠi h i sơm Holothuria scabravƠo n m 2007 Trong đó, nhóm nghiên c u đƣ s d ng kh i ph vƠ c ng h ng t h t nhơn đ xác đ nh c u trúc hóa h c c a hai h p ch t Holothurin A3 vƠ Holothurin A4 v i ho t tính gơy đ c lên dòng t bƠo ung th KB vƠ Hep-G2 v i IC50 l n l t lƠ 0,87 vƠ 0,32 µg/ml (đ i v i ch t Holothurin A3); 1,12 vƠ 0,57 µg/ml (đ i v i ch t Holothurin A4) 1.3 M t s ph ng pháp phân l p xác đ nh c u trúc h p ch t hóa h c 1.3.1 S c ký c t ơy lƠ ph ng pháp s c kí ph bi n nh t, đ n gi n nh t, ch t h p ph lƠpha t nh g m lo i silica gel (có kích th c h t khác nhau) pha th ng vƠ phađ o YMC, ODS, Dianion Ch t h p ph đ c nh i vƠo c t (c t có th b ng thu tinh ho c kim lo i, ph bi n nh t lƠ c t thu tinh) m n c a ch t h p ph r tquan tr ng, ph n ánh s đ a lí thuy t hay kh n ng tách c a ch t h p ph Kích th c c a ch t h p ph cƠng nh s đ a lí thuy t cƠng l n, kh n ngtách cƠng cao, vƠ ng c l i.Tuy nhiên, n u ch t h p ph có kích th c h t cƠngnh t c đ ch y cƠng gi m, có th gơy hi n t ng t c c t (dung môi khôngch y đ c).Khi ng i ta ph i s d ng áp su t, v i áp su t trung bình (MPC)ho c áp su t cao (HPLC) Trong s c kí c t, t l đ ng kính (D) so v i chi u cao c t (L) r t quantr ng, th hi n kh n ng tách c a c t.T l L/D ph thu c vƠo yêu c u tách,t c lƠ ph thu c vƠo h n h p ch t c th Trong s c kí, t l gi a quƣng đ ng c a ch t c n tách so v i quƣng đ ng c a dung môi g i lƠ Rf, v i m i m t ch t s có m t Rf khác Nh vƠo s khác v Rf nƠy mƠ ta có th tách t ng ch t kh i h n h p.T l ch t so v i t l ch t h p ph c ng r t quan tr ng Tu theo yêu c utách mƠ ta có t l khác nhau: 16 Tách thô t l nƠy th p (1/5 ậ 1/10), tách tinhthì t l nƠy cao h n vƠ tu vƠo h s tách (t c ph thu c vƠo s khác Rfc a ch t), mƠ h s nƠy kho ng 1/20 ậ 1/30 Có hai cách đ a ch t h p ph lên c t: Cách 1: Nh i c t khô: Theo cách nƠy, ch t h p ph đ c đ a tr c ti p vƠo c t khô, sau dùng que m m đ gõ nh lên thƠnh c t đ ch t h p ph s p x p ch t trongc t Sau dùng dung môi ch y c t đ ch y c t đ n c t su t Cách 2: Nh i c t t: Ch t h p ph đ c hoƠ tan dung môi ch y c t tr c v i l ng dung môi t i thi u, sau đ a d n lên c t đ n đ l ng c n thi t Khi chu n b c t ph i l u ý không đ c đ b t khí bên (n u có b t khí gơy nên hi n t ng ch y r i c t, gi m hi u qu tách) vƠ c t không đ c n t, gƣy, dò T c đ ch y c a dung môi c ng nh h ng đ n hi u qu tách N u t c đ dòng ch y l n s lƠm gi m hi u qu tách Còn n u t c đ dòng ch y quáth p s kéo dƠi th i gian tách vƠ nh h ng đ n ti n đ công vi c 1.3.2 S c kí l p m ng S c kí l p m ng (SKLM) th ng đ c s d ng đ ki m tra vƠ đ nhh ng cho s c kí c t SKLM đ c ti n hƠnh b n m ng tráng s n silica geltrên đ nhôm hay đ thu tinh NgoƠi ra, SKLM dùng đ u ch thu ch ttr c ti p B ng vi c s d ng b n SKLM u ch (b n đ c tráng s n silica geldƠy h n), có th đ a l ng ch t nhi u h n lên b n vƠ sau ch y s c kí, ng ita có th c o riêng ph n silica gel có ch a ch t c n tách r i gi i h p ph b ngdung môi thích h p đ thu đ c t ng ch t riêng bi t Có th phát hi n ch t trênb n m ng b ng đèn t ngo i, b ng ch t hi n mƠu đ c tr ng cho t ng l p ch tho c s d ng dung d ch H2SO4 10% 1.3.3 Ph c ng h ng t h t nhân (Nuclear Magnetic Resonance SpectroscopyNMR) 1.3.3.1 Ph 1H-NMR Trong ph H-NMR,đ d ch chuy n hoá h c ( ) c a protonđ c xácđ nh thang ppm t 0-14ppm, tu thu c vƠo m cđ lai hoá c a nguyên t c ng nh đ c tr ng riêng c a t ng ph n D a vƠo nh ngđ c tr ng c ađ d chchuy n hoá h c vƠ t ng tác spin mƠ ta có th xácđ nhđ c c u trúc hoá h cc a h p ch t 1.3.3.2 Ph 13 C-NMR 17 Ph nƠy cho tín hi u v ch ph cacbon.M i nguyên t cacbon s c ngh tr ng khác vƠ cho tín hi u ph khác nhau.Thangđo c aph d i thangđo r ng 0-230ppm 1.3.3.3 13 ng m t C-NMR lƠ ppm, v i Ph DEPT (Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer) Ph nƠy cho ta tín hi u phơn lo i lo i cacbon khác nhau.Trên ph DEPT, tín hi u c a cacbon b c b n bi n m t.Tín hi u c a CH vƠ CH3 n mv m t phía vƠ c a CH2 v m t phía ph DEPT 1350.Trên ph DEPT 900ch xu t hi n tín hi u ph c a CH 1.3.3.4 Ph 2D-NMR ơy lƠ k thu t ph hai chi u, cho phép xácđ nh t ng tác c acác h t nhơn t c a phơn t không gian hai chi u M t s k thu t ch y uth ngđ c s d ng nh sau: - Ph HSQC (Heteronuclear Single Quantum Coherence): Các t ng tác tr c ti p H-Cđ c xácđ nh nh vƠo t ng tác ph nƠy Trên ph , m t tr c lƠ ph 1HNMR, tr c lƠ 13C-NMR Các t ng tác HSQC n m trênđ nh ô vuông ph - Ph H-1H COSY (HOMOCOSY) Spectroscopy): Ph nƠy bi u di n t (1H-1H Chemical Shif Correlation ng tác xa c a H-H, ch y u lƠ proton đính v i cacbon li n k Nh ph nƠy mƠ ph n c a phơn t đ c n i ghép l i v i Ph HMBC (Heteronuclear Multiple Bond Connectivity): ơy lƠ ph bi u di n t ng tác xa c a H vƠ C phơn t Nh vƠo t ng tác ph nƠy mƠ t ng ph n c a phơn t c ng nh toƠn b phơn t đ c xácđ nh v c u trúc t Ph NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy): Ph nƠy bi u di n ng tác xa không gian c a proton không k đ n liên k t mƠ ch tínhđ n kho ng cách nh tđ nh không gian D a vƠo k t qu ph nƠy có th xácđ nh c u trúc không gian c a phơn t Nh trênđƣđ c p, ngoƠi vi c s d ng lo i ph , ng i ta s d ng k t h p ph ng pháp chuy n hoá hoá h c c ng nh ph ng pháp phơntích, so sánh, k t h p khác c bi tđ i v i phơn t nhi u m ch nhánh dƠi,tín hi u ph NMR b ch ng l p nhi u, khó xácđ nh xácđ c chi u dƠicác m ch, c ng nh đ i v i phơn t có 18 cácđ n v đ ng vi c xácđ nhchính xác lo i đ ng c ng nh c u hình đ th ng ph i s d ngph ng pháp thu phơn r i xácđ nh b ng ph MS ho cGC-MS v i cácđ ng chu n d ki n 1.4 ng thông ng pháp so sánh LC- Ung th Ung th lƠ m t nhóm b nh liên quan đ n phơn chia t bƠo, m t s t bƠo thoát kh i s ki m soát, s bi t hoá sinh lý vƠ ti p t c nhơn lên.Nh ng t bƠo nƠy có kh n ng xơm l n vƠ phá hu t ch c xung quanh ng th i chúng di trú vƠ đ n phát tri n nhi u c quan khác đ hình thƠnh nên kh i u m i Cu i ung th gơy t vong bi n ch ng vƠ r i lo n ch c n ng c th [22, 23] Qu n th t bƠo ung th có s thay đ i rõ nét v m t hình thái vƠ ch c n ng so v i t bƠo bình th ng.V m t hình thái, t bƠo ung th có nhơn l n h n bình th ng, nhơn chia thùy ho c có nhơn kh ng l phơn chia m nh g i lƠ nhơn quái T bƠo ch t có nhi u t n th ng thoái hóa nh nhi u hang, h c, ch t ch ti t, th vùi Qua đó, t l gi a nhơn vƠ t bƠo ch t b phá v V m t ch c n ng, t bƠo ung th bi t hóa nên không th c hi n đ c nh ng ch c n ng bình th ng vƠ chúng ti t ch t đ c tr ng c a dòng t bƠo nh µFP, CA125 (ung th bu ng tr ng), CA25 (ung th đ i trƠng), HCG (ung th thai, tinh hoƠn)ầ Khi quan sát qu n th t bƠo ung th , nhƠ nghiên c u đƣ đ a ba h c thuy t đ gi i thích ngu n g c c a qu n th nƠy:  Thuy t đ n dòng: LƠ quan ni m kinh n cho r ng kh i u phát sinh t m t t bƠo m nhơn lên Ví d : b nh b ch c u t y ph n da đen th y đ ng nh t lo i t bƠo th ng t n nhi m s c th s 10 Các t bƠo nƠy đ u ti t men Glucose-6phosphate dehydroglubuline  Thuy t đa dòng: D a k t qu quan sát hình thái vƠ ch c n ng cho th y t ch c ung th có nhi u lo i t bƠo nên chu n đoán t bƠo h c d nh m l n vƠ có nhi u d u chu n sinh h c (marker)  Thuy t v n đ nh gen c a TBUT: Có th ban đ u lƠ m t dòng, gen ung th không n đ nh nên có t bƠo bi n d sinh hƠng lo t t bƠo h n h p Ví d : u lympho ác tính t bƠo l n, t bƠo nh ho c lo i ung th ph i th h n h p, ung th mô liên k t th h n h p Trong trình đa giai đo n hình thƠnh kh i u, t bƠo ung th thu nh n vƠ bi u hi n nhi u đ c m, có sáu kh n ng sinh h c n i b t t o nên đ c tính ph c t p 19 v m t t ch c c a b nh, bao g m: trì tín hi u t ng sinh; tr n tránh y u t c ch kh i u; ch ng l i s ch t c a t bƠo; cho phép nhơn lên g n nh b t t ; c m ng hình thƠnh m ch máu; ho t hóa trình xơm l n vƠ di c n[7].Trong nghiên c u nƠy, mu n đánh giá tác đ ng c a ch t đ n trình gơy ch t t bƠo ung th nên quan tơm nhi u đ n đ c m ch ng l i s ch t c a t bƠo ung th Hình 1.2: Các đ c tr ng c b n c a t bào ung th [7] Có th nói r ng, đ c m c b n nh t c a t bƠo ung th liên quan đ n kh n ng trì s t ng sinh vô h n c a chúng Các mô bình th ng s u n chu k phơn chia m t cách h p lý vƠ xác Do đó, s l qua đó, c u trúc c ng nh ch c n ng c a mô đ ng t bƠoluôn đ c đ m b o b ng, c đ m b o n đ nh Các t bƠo ung th có kh n ng trì tín hi u t ng sinh b ng m t s đ ng khác Chúng có th s n xu t y u t t ng tr ng cho đ t kích thích t ng sinh NgoƠi ra, chúng có th g i tín hi u kích thích t bƠo th ng đ h tr hình thƠnh ch t n n kh i u, cung c p y u t t ng tr ng c n thi t khác cho kh i u[27, 28] Trong trình phát tri n, t bào m i v n th ng xuyên đ c sinh thay th cho t bào ch t mô đ đ m b o v s l ng t bào cho mô ho t đ ng bình th ng.Các t bào có th b ch t đư già, sai h ng ADN, tác đ ng c h c hay mô c n gi m s l ng t bào.Trong th c t , t t c t bào đ u có s n ch ng 20 trình đ ch t.Nh ng tr ng thái ho t đ ng bình th ng có m t lo t tín hi u ng n c n chúng th c hi n trình ch t Khi tín hi u m t đi, ho c có m t tín hi u gây ch t m nh h n đ c ho t hóa, t bào s vào chu TÀI LI U THAM KH O Tài li u ti ng Vi t Nguy n Nh Hi n, Tr nh Xuơn H u (2006), "T bƠo h c" Nhà xu t b n ih c Qu c Gia Hà N i Phùng Ph đ ic ng, Nguy n V n C u, Nguy n Tr n Thúc Huơn (2005), "Ung th h c ng" ih cYD c Hu Lê ình Sáng (2010), "B nh h c ung th " i h c Y Khoa Hà N i Tài li u ti ng Anh Freshney RI (2005), Culture of specific cell types, Wiley Online Library, Teicher BA, Andrews PA (2004), Anticancer drug development guide, Springer Science & Business Media, Freshney RI Culture of animal cells, a manual of basic technique, John Wiley and Sons, inc, Abou-Ghali M, Stiban J (2015), "Regulation of ceramide channel formation and disassembly: Insights on the initiation of apoptosis".Saudi journal of biological sciences, 22 (6), p 760-772 Drozdova OA, Avilov SA, Kalinin VI, Kalinovsky AI, Stonik VA, Riguera R, Jiménez C (1997), "Cytotoxic Triterpene Glycosides from Far Eastern Sea Cucumbers Belonging to the Genus Cucumaria".Liebigs Annalen, 1997 (11), p 2351-2356 Dzieciolowska EW (2009), "Selected peripheral blood cell parameters in twelve inbred strains of laboratory mice".Animal Science Papers and Reports, 27 (p 69-77 Hanahan D, Weinberg RA (2011), "Hallmarks of cancer: the next generation".cell, 144 (5), p 646-674 21 Kalinin VI, Silchenko AS, Avilov SA, Stonik VA, Smirnov AV (2005), "Sea cucumbers triterpene glycosides, the recent progress in structural elucidation and chemotaxonomy".Phytochemistry Reviews, (2-3), p 221-236 Kennedy BK (2014), "Similarities and differences between mice and humans revealed".Pann State, p 10 Lee M-S, Chan JY-W, Kong S-K, Yu B, Eng-Choon VO, Nai-Ching HW, Mak Chung-Wai T, Fung K-P (2005), "Effects of polyphyllin D, a steroidal saponin in Paris polyphylla, in growth inhibition of human breast cancer cells and in xenograft".Cancer biology & therapy, (11), p 1248-1254 11 Man S, Gao W, Zhang Y, Huang L, Liu C (2010), "Chemical study and medical application of saponins as anti-cancer agents".Fitoterapia, 81 (7), p 703-714 12 Mariño G, Kroemer G (2013), "Mechanisms of apoptotic phosphatidylserine exposure".Cell research, 23 (11), p 1247-1248 13 Rao A, Sung M (1995), "Saponins as anticarcinogens".The Journal of nutrition, 125 (3 Suppl), p 717S-724S 14 Sharpless NE, DePinho RA (2006), "The mighty mouse: genetically engineered mouse models in cancer drug development".Nature reviews Drug discovery, (9), p 741-754 15 Silchenko AS, Kalinovsky AI, Avilov SA, Andryjashchenko PV, Dmitrenok PS, Kalinin VI, Stonik VA (2012), "3 -O-Glycosylated 16 -acetoxy-9 -H-lanosta-7, 24diene-3 , 18, 20 -triol, an intermediate metabolite from the sea cucumber Eupentacta fraudatrix and its biosynthetic significance".Biochemical Systematics and Ecology, 44 (p 53-60 16 Sparg S, Light M, Van Staden J (2004), "Biological activities and distribution of plant saponins".Journal of ethnopharmacology, 94 (2), p 219-243 17 Tong Y, Zhang X, Tian F, Yi Y, Xu Q, Li L, Tong L, Lin L, Ding J (2005), "Philinopside a, a novel marine derived compound possessing dual anti angiogenic and anti tumor effects".International journal of cancer, 114 (6), p 843-853 22 18 Yi YH, Xu QZ, Li L, Zhang SL, Wu HM, Ding J, Tong YG, Tan WF, Li MH, Tian F (2006), "Philinopsides A and B, two new sulfated triterpene glycosides from the sea cucumber Pentacta quadrangularis".Helvetica chimica acta, 89 (1), p 54-63 19 ZHANG Y-j, YI Y-h "Antitumor activities in vitro of the triterpene glycoside Colochiroside A from sea cucumber Colochirus anceps" p 20 Zhang Y, Yi Y (2011), "[Studies on antitumor activities of triterpene glycoside colochiroside A from sea cucumber Colochirus anceps]".Zhongguo Zhong yao za zhi= Zhongguo zhongyao zazhi= China journal of Chinese materia medica, 36 (4), p 504507 21 Zhang Y J LXJ, Yi Y H (2005), "A new triterpene glycoside from the seacucumber Colochirous anceps".Chinese Journal of Marine Drugs, 24(2) (p 13-17 22 c Phùng Ph ng" ng NVC, Nguy n Tr n Thúc Huơn (2005), "Ung th ih cYD h c đ i c Hu , p i h c Y Khoa Hà N i., p 23 Sáng L (2010), "B nh h c ung th " 24 Diwan FH(1) A-HI, Mohammed ST (2000 Mar-May), "Effect of saponin on mortality and histopathological changes in mice".East Mediterr Health J, 6(2-3):345-51 (p 25 Voigt W (2005), Sulforhodamine B assay and chemosensitivity, Springer, 26 Adams J, Cory S (2007), "The Bcl-2 apoptotic switch in cancer development and therapy".Oncogene, 26 (9), p 1324-1337 27 Bhowmick NA, Neilson EG, Moses HL (2004), "Stromal fibroblasts in cancer initiation and progression".Nature, 432 (7015), p 332-337 28 Cheng N, Chytil A, Shyr Y, Joly A, Moses HL (2008), "Transforming growth factor- signalingậdeficient fibroblasts enhance hepatocyte growth factor signaling in mammary carcinoma cells to promote scattering and invasion".Molecular Cancer Research, (10), p 1521-1533 29 Grivennikov SI, Greten FR, Karin M (2010), "Immunity, inflammation, and cancer".Cell, 140 (6), p 883-899 23 30 Lowe SW, Cepero E, Evan G (2004), "Intrinsic tumour suppression".Nature, 432 (7015), p 307-315 24 ... saponin có ho t tính kháng t bƠo ung th t h i sơm Cercodemas anceps v i m c đích: Phơn l p vƠ xác đ nh c u trúc t đ n h p ch t saponin t loƠi h i sơm Cercodemas anceps ánh giá đ c ho t tính di... i sơm th hi n d c tính cao v i kh n ng kháng u, kháng viêm, kháng khu n, kháng virut, kháng n m, Vi t Nam, m t vƠi nhóm nghiên c u đƣ phơn l p saponin t h i sơm.Trong có nhóm nghiên c u c a Nguy... h u h t lo i saponin nƠy cho th y kh n ng kháng ung th Nh ng saponin lo i nƠy th ng có tác d ng m nh v i t bƠo ung th di c n h n t bƠo không ác tính. IC50 đ i v i t bƠo không ác tính g p t i 40