BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ NGA ỨNG DỤNG KHÁNG NGUN CHẨN ĐỐN BỆNH VIÊM ĐƯỜNG HƠ HẤP MẠN TÍNH Ở GIA CẦM (Chronic Respiratory Disease ) TRÊN ĐÀN GÀ NUÔI TẠI HÀ NỘI VÀ VÙNG PHỤ CẬN LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ NGA ỨNG DỤNG KHÁNG NGUN CHẨN ĐỐN BỆNH VIÊM ĐƯỜNG HƠ HẤP MẠN TÍNH Ở GIA CẦM (Chronic Respiratory Disease ) TRÊN ĐÀN GÀ NUÔI TẠI HÀ NỘI VÀ VÙNG PHỤ CẬN CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y MÃ SỐ: 60.64.01.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN BÁ HIÊN HÀ NỘI, NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa sử dụng để bảo vệ học vị Tôi xin cam đoan rằng, thơng tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày 24 tháng 09 năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Nga ii LỜI CẢM ƠN Mở đầu Luận văn cho xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy, cô giáo Bộ môn Vi sinh vật – Truyền nhiễm, thầy cô giáo khoa Thú y, cán quản lý Viện Sau đại học, trường Đại học Nơng nghiệp Hà Nội, tồn thể thầy giáo, cô giáo giảng dạy thời gian học Cao học trường Đặc biệt xin chân thành cảm ơn Thầy giáo - PGS.TS Nguyễn Bá Hiên tận tình hướng dẫn TS Đào Thị Hảo đóng góp nhiều ý kiến quý báu, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập hồn thành luận văn Tơi xin chân thành cảm ơn đồng nghiệp, bạn bè gia đình giúp đỡ, động viên để tơi hồn thành chương trình học tập hồn thành Luận văn tốt nghiệp Hà Nội, ngày 24 tháng 09 năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Nga iii MỤC LỤC Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục bảng vii Danh mục hình viii Danh mục chữ viết tắt ix MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh CRD (Chronic Respiratory Disease) 1.1.1 Nguyên nhân gây bệnh 1.1.2 Loài mắc bệnh nhân tố ảnh hưởng đến dịch tễ 1.1.3 Lứa tuổi mùa vụ mắc bệnh 1.1.4 Cách truyền lây chất chứa mầm bệnh 1.1.5 Triệu chứng bệnh 1.1.6 Bệnh tích 1.1.7 Chẩn đốn 10 1.1.8 Biện pháp phịng bệnh 13 1.1.9 Điều trị 16 1.2 Mầm bệnh Mycoplasma Galisepticum (MG) 16 1.2.1 Đặc điểm hình thái, cấu trúc 16 1.2.2 Đặc tính ni cấy 17 1.3 Tình hình nghiên cứu bệnh Mycoplasma gia cầm 19 1.3.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Mycoplasma gia cầm giới 19 1.3.2 Tình hình nghiên cứu bệnh CRD Việt Nam 21 Chương NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Ứng dụng chế phẩm kháng nguyên MG xác định tỷ lệ nhiễm CRD iv theo giống gà, lứa tuổi đàn gà nuôi ngoại thành Hà Nội tỉnh Bắc Ninh, Hải Dương, Hưng Yên 23 2.1.2 Phân lập, xác định hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính sinh vật hố học serotype chủng Mycoplasma phân lập gà có huyết dương tính với KNMG 2.2 Nguyên liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 23 23 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2.2 Nguyên liệu 23 2.2.3 Địa điểm thời gian nghiên cứu 26 2.3 Phương pháp nghiên cứu 26 2.3.1 Phương pháp lấy xử lý mẫu 26 2.3.2 Phương pháp làm phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính để phát kháng thể MG 27 2.3.3 Phương pháp xác định bệnh CRD qua chẩn đoán lâm sàng giải phẫu bệnh 28 2.3.4 Phương pháp phân lập, xác định hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn MG từ mẫu bệnh phẩm gà nghi mắc CRD 28 2.3.5 Phương pháp phát MG phản ứng nhân gen (PCR) 32 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 34 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Ứng dụng chế phẩm kháng nguyên MG xác định tỷ lệ nhiễm CRD theo giống gà, lứa tuổi đàn gà nuôi ngoại thành Hà Nội tỉnh Bắc Ninh, Hải Dương, Hưng Yên 35 3.1.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm CRD giống gà phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 35 3.1.2 Kết xác định tỷ lệ nhiễm MG gà theo lứa tuổi phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 36 3.1.3 Xác định tỷ lệ nhiễm MG gà theo dòng gà 38 v 3.2 Phân lập, xác định hình thái, tính chất ni cấy, đặc tính sinh vật hoá học serotype chủng Mycoplasma phân lập gà có huyết dương tính với KNMG 40 3.2.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm CRD gà có biểu bệnh CRD 40 3.2.2 Kết phân lập giám định số đặc tính sinh học vi khuẩn MG 44 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 55 Kết luận 55 Đề nghị 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO 56 PHỤ LỤC 59 vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 2.1 Thành phần chất phản ứng PCR xác định MG 33 2.2 Điều kiện phản ứng PCR xác định MG 33 3.1 Kết xác định tỷ lệ nhiễm CRD giống gà phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 36 3.2 Xác định tỷ lệ nhiễm CRD qua giai đoạn tuổi gà 37 3.3 Kết xác định tỷ lệ nhiễm MG theo dòng gà 38 3.4 Kết xác định tỷ lệ nhiễm CRD số sở chăn nuôi gà kháng nguyên MG Viện Thú y 3.5 39 Kết xác định tỷ lệ nhiễm CRD gà có biểu bệnh CRD phản ứng ngưng kết nhanh phiến kính 40 3.6 Số lượng mẫu gà có huyết dương tính 41 3.7 Triệu chứng lâm sàng, bệnh tích đại thể đặc trưng gà mắc bệnh CRD 42 3.8 Kết phân lập vi khuẩn MG từ phổi gà theo lứa tuổi 44 3.9 Kết phân lập vi khuẩn MG từ phổi gà theo giống gà 45 3.10 Kiểm tra số đặc tính sinh hố khả lên men đường chủng MG phân lập 51 3.11 Giám định vi khuẩn MG phân lập phản ứng PCR 52 3.12 Kết giám định serotype chủng MG phân lập 53 vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Gà bị bệnh CRD viêm khớp gối, gầy chết 3.1 Tích dịch khí quản 43 3.2 Viêm túi khí 43 3.3 Kết phản ứng PCR xác định vi khuẩn MG 45 3.4 Hình thái vi khuẩn MG nhuộm Giemsa (100x) 49 3.5 Khuẩn lạc MG sau ngày nuôi cấy (40x) 50 3.6 Vi khuẩn MG mọc MB sau ngày nuôi cấy 50 3.7 Sản phẩm PCR giám định vi khuẩn MG (530 bp) 52 viii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CRD : Chronic Respiratory Disease DNA : Acid Deoxyribonucleic ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assey EMB : Eosin Methylene Blue KHT : Kháng huyết KN : Kháng nguyên MA : Mycoplasma agar MB : Mycoplasma broth MG : Mycoplasma gallisepticum MS : Mycoplasma synoviae NC : Nuôi cấy OIE : Office International des épizooties (tổ chức dịch tễ giới) PCR : Polymerase Chain Reaction (phản ứng nhân gen) PPLO : Pleuro – Pneumonia Like Organisms RNA : Acid Ribonucleic RSA : Rapid Slice Agglutination SPA : Serum Plate Agglutination TE : Tris -Acetie - EDTA VSV – TN : vi sinh vật – truyền nhiễm ix ... dựa sở kết nghiên cứu đạt tiến hành nghiên cứu đề tài : ? ?Ứng dụng kháng nguyên chẩn đoán bệnh Viêm đường hơ hấp mạn tính gia cầm (Chronic Respiratory Disease) đàn gà nuôi Hà Nội vùng phụ cận? ??,... VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ NGA ỨNG DỤNG KHÁNG NGUN CHẨN ĐỐN BỆNH VIÊM ĐƯỜNG HƠ HẤP MẠN TÍNH Ở GIA CẦM (Chronic Respiratory Disease ) TRÊN ĐÀN GÀ... biến gà gà tây Bệnh xảy lứa tuổi, chủ yếu gà tháng tuổi, gà trưởng thành bệnh xảy thể mạn tính, tỷ lệ mắc bệnh đàn gà cao, từ 30-50% 1.1.1 Nguyên nhân gây bệnh Đối với gia cầm có nhiều bệnh Mycoplasma