BÀI THUYẾT TRÌNH NHÓM Môn: Sinh Học Phân Tử CHỦ ĐỀ: SO SÁNH QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA TỪ VIRUT WSSV GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN TÔM VÀ RNA TỪ VIRUT VNN GÂY BỆNH HOẠI TỬ THẦN KINH TRÊN CÁ BIỂN GVHD: Nguyễn Văn Duy THÀNH VIÊN NHÓM Bùi Thùy Hương Cao Thị Kim Hằng Trần Thị Thu Dịu Phan Thị Bích Hội Đào Thị Phương Dung Đặng Thị Kim Chung MỤC LỤC Quy trình tách DNA & RNA I IV II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển So sánh quy trình tách DNA & RNA i Quy trình tách dna & rna Quy trình tách DNA: Phương pháp tách chiết DNA gồm bước: Phá vỡ màng tế bào màng nhân Loại bỏ thành phần DNA, chủ yếu protein Làm kết tủa acid nucleic i Quy trình tách dna & rna Quy trình tách DNA: Sơ đồ tách chiết DNA tổng số i Quy trình tách dna & rna Quy trình tách RNA: Các RNA phân tử không bền, dễ bị phân hủy Rnase, Rnase có khắp nơi Chính vậy, phải có nhiều biện pháp để tránh tạp nhiễm Rnase từ môi trường: thao tác điều kiện vô trùng Tách RNA gồm bước tách DNA i Quy trình tách dna & rna Quy trình tách RNA: Nghiền tế bào mô Loại bỏ protein phenol Tạo tủa II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm Giới thiệu khái quát tôm  Giá trị dinh dưỡng cao  Giá thành ổn định  Giúp ngư dân xóa đói, giảm nghèo làm giàu cấu công tác chuyển dịch cấu kinh tế lĩnh vực thủy sản II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm Nguyên nhân xuất bệnh đốm trắng tôm a Virut WSSV gây bệnh đốm trắng tôm  Virut  Có thuộc chi Uwhispovirus, họ Nimaviridae dạng hình elip rộng  Vật chất di truyền DNA, có màng bao, với phụ đặc trưng giống lông mao II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm Nguyên nhân xuất bệnh ốm trắng tôm a Virut WSSV gây bệnh đốm trắng tôm III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Giới thiệu tổng quát cá biển Cá biển có chứa nhiều clo fluo có tác dụng tốt xương Ngoài cá có DHA đóng vai trò quan trọng trình sinh trưởng tế bào não thần kinh III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Nguyên nhân xuất bệnh hoại tử thần kinh cá a Nguồn gốc  Vi rút gây bệnh hoại tử thần kinh thuộc giống betanoda vi rút, họ nodayiridae bắt nguồn từ tên làng Nhật Bản III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Nguyên nhân xuất bệnh hoại tử thần kinh cá a Nguồn gốc Cấu trúc gen  Betanodavirut màng bào, hình cầu, đường kính 25-30nm 20 mặt đối xứng, vỏ bao gồm 180 protein  Bộ gen betanodavirut RNA mạch đơn, sợi + , tuyến tính hai phía có cấu trúc phân đoạn gồm tiểu phần RNA-1và RNA-2  Đôi gen betanodavirut có sở hưu thêm phân đoạn RNA-3 III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Nguyên nhân xuất bệnh hoại tử thần kinh cá b Cơ chế xâm nhập Chúng xâm nhập vào sinh vật sống, sinh sản bên ký chủ gây bệnh cách làm tổn hại mô ký chủ III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Tác hại cuả VNN gây lên cá Triệu chứng   Cá chết hấp hối hầu hết bóng trương phồng Cá bơi lội hỗn loạn không định hướng, hàm có vết hoại tử chà sát với lưới III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Tác hại cuả VNN gây lên cá Cá 20 ngày tuổi bệnh dấu hiệu rõ Cá sau 20-45 ngày tuổi dấu hiệu bệnh cá yếu bơi gần tầng mặt Cá 45 ngày tuổi đến tháng tuổi bị bệnh bơi không định hướng (bơi quay tròn xoáy chon ốc), ăn bỏ ăn Quy trình tách RNA từ virut VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển 20mg mẫu (mắt não cá) Ly tâm 12000v/p, 15p, 4◦C 100-200µl trizol Nghiền 550-600µl trizol Nghiền Ủ nhiệt độ phòng 5p Thu dịch Hòa tan mẫu với 50-100µl nước tinh khiết 500µl isopropanol/1ml trizol Ủ 15-30◦C, 10p Ủ 15-30◦C, 2-3p 200µl cloroform/1ml trizol Thu dịch Ly tâm 12000v/p, 10p, 4◦C Ly tâm 12000v/p, 10p, ◦C Bỏ Ethanol Ly tâm 75000v/p, 5p, ◦C Bỏ isopropanol Thu kết tủa Rửa tủa ethanol 75% (500µl isopropanol/1m l trizol) IV SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA **Giống  Sử dụng phương pháp kết tủa để tinh nucleic  Các bước giống nha (lấy mẫu, tách chiết acid nucleic, tinh acid nucleic cồn)  Các kỹ thuật giống (ly tâm, nghiền ủ) IV SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA ** Khác DNA  Phá màng nito lỏng  Phenol, chloroform, isoamul alcohol  Ly tâm lần RNA  Phá màng trizol  Trizol  Ly tâm lần IV SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA ** Khác DNA     Tốc độ 14000v/p Ủ nhiệt độ thấp (-25 độ) Tủa DNA cồn Bỏ tủ lạnh → Ly tâm, pH>=7-8  Hòa tan dd TERnase RNA     Tốc độ 12000v/p Ủ nhiệt độ phòng (15-30 độ) Tủa RNA isopropanol Ly tâm lạnh, pH=4-5  Hòa tan nước tinh khiết CÂU HỎI TRẮC NGHIỆM Tác nhân gây bệnh đốm trắng tôm gì? Virut WSSV Kể tên protein cấu trúc virut WSSV A VP28,VP29 B VP24, VP26 C VP15 D Tất đáp án ĐÁP ÁN: D CÂU HỎI TRẮC NGHIỆM 3. Trong quá trình tách chiết RNA /DNA từ virut  VNN/WSSV, ta phá vỡ màng tế bào bằng chất gì?  A. Nito lỏng  B. Trizol  C. Lysin  D. Đáp án B & C  ĐÁP ÁN: D 4. Cơ quan đích của Betanodavirus là:  A. Gan, thận  B. Tim, lách  C. Da  D. Mô não võng mạc ĐÁP ÁN: D CÂU HỎI TRẮC NGHIỆM Trong quy trình tách RNA từ VNN, lần li tâm thứ quay tốc độ bao nhiêu? A 12000v/p B 13000v/p C 75000v/p D 14000v/p ĐÁP ÁN: D TÀI LIỆU THAM KHẢO  Bài giảng sinh học phân tử - Nguyễn Văn Duy  Sinh học phân tử - Hồ Huỳnh Thùy Dương  Tiêu chuẩn Việt Nam 8710:2­2011 –  Bênh thủy sản – Quy trình chẩn  đoán, Phần 2: Bệnh hoại tử thần  kinh ở cá biển.   Voer.edu.vn – Các phương pháp tách  chiết acid nucleic – Bùi Chí Bửu.  [...]...II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm b Bệnh đốm trắng trên tôm:  Do thời tiết bất thường, vùng nuôi ô nhiễm là nguyên nhân chính  Theo các nhà khoa học, tác nhân gây ra bệnh đốm trắng trên tôm bao gồm virus hoặc vi khuẩn gây ra II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm b Bệnh. .. Thu DNA III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 1 Giới thiệu tổng quát về cá biển Cá biển còn có chứa nhiều clo và fluo có tác dụng tốt đối với xương và răng Ngoài ra cá còn có DHA đóng vai trò quan trọng trong quá trình sinh trưởng của tế bào não và thần kinh III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh. .. làm tổn hại các mô của ký chủ III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 3 Tác hại cuả VNN gây lên cá Triệu chứng   Cá chết và hấp hối hầu hết bóng hơi trương phồng Cá bơi lội hỗn loạn không định hướng, hàm dưới có vết hoại tử do chà sát với lưới III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 3 Tác hại cuả VNN gây lên cá Cá dưới 20 ngày tuổi bệnh không... betanodavirut là RNA mạch đơn, sợi + , tuyến tính hai phía có cấu trúc phân đoạn gồm 2 tiểu phần RNA- 1và RNA- 2  Đôi khi bộ gen của betanodavirut có sở hưu thêm một phân đoạn RNA- 3 III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá b Cơ chế xâm nhập Chúng xâm nhập vào sinh vật sống, sinh sản bên trong ký chủ và gây bệnh bằng cách làm... biển 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá a Nguồn gốc  Vi rút gây bệnh hoại tử thần kinh thuộc giống betanoda vi rút, họ nodayiridae được bắt nguồn từ tên một ngôi làng ở Nhật Bản III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển 2 Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá a Nguồn gốc Cấu trúc gen  Betanodavirut không có màng bào, hình cầu, đường kính 25-30nm... từ tôm bố mẹ sang tôm con, từ nguồn nước cấp, truyền trong quá trình lột xác khi tôm khỏe ăn tôm bệnh II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm 3 Tác hại của virut WSSV gây lên tôm b Triệu chứng  Tôm ăn nhiều đột ngột, sau đó giam d ̉ ần.   Tôm có thể bị bệnh đen mang hoặc cụt râu, tôm bị bệnh có dấu hiệu bơi lờ đờ trên mặt nước.   Dấu hiệu  đặc trưng là những đốm trắng tròn ... với kích thước từ 0,5­2mm dưới lớp vỏ kitin  ở  phần giáp đầu ngực và đốt bụng cuối cùng.  II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm 3 Tác hại của virut WSSV gây lên tôm c Nguyên nhân khiến bệnh đốm trắng ở tôm khó được kiểm so t Mật độ nuôi cao và thức ăn công nghiệp 1 4 2 Nhiều loài có thể trở thành vật chủ trung gian 3 Cấu trúc di truyền đặc biệt Tôm nuôi có khả năng mắc nhiều bệnh cùng lúc 4 Quy. .. xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm b Bệnh đốm trắng trên tôm: II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm 3 Tác hại của virut WSSV gây lên tôm a Dấu hiệu chính của bệnh  Virus sẽ cư trú ở nhiều bộ phận của tôm như mô dạ dày, mang, trứng, mắt, chân bơi…  Bệnh đốm trắng có thể xảy ra ở tất cả các giai đoạn nuôi tôm, nhưng chủ yếu nhất ở giai đoạn từ 20-60 ngày tuổi  Bệnh có khả năng... nha (lấy mẫu, tách chiết acid nucleic, tinh sạch acid nucleic bằng cồn)  Các kỹ thuật giống nhau (ly tâm, nghiền ủ) IV SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA ** Khác nhau DNA  Phá màng bằng nito lỏng  Phenol, chloroform, isoamul alcohol  Ly tâm 2 lần RNA  Phá màng bằng trizol  Trizol  Ly tâm 4 lần IV SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA ** Khác nhau DNA     Tốc... VNN gây lên cá Cá dưới 20 ngày tuổi bệnh không có dấu hiệu rõ Cá sau 20-45 ngày tuổi dấu hiệu bệnh cá yếu bơi gần tầng mặt Cá 45 ngày tuổi đến 4 tháng tuổi khi bị bệnh bơi không định hướng (bơi quay tròn hoặc xoáy chon ốc), kém ăn hoặc bỏ ăn 4 Quy trình tách RNA từ virut VNN gây bệnh hoại tử thần kinh trên cá biển 20mg mẫu (mắt hoặc não cá) Ly tâm 12000v/p, 15p, 4◦C 100-200µl trizol Nghiền 550-600µl ... LỤC Quy trình tách DNA & RNA I IV II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển So sánh quy trình tách DNA & RNA i Quy trình. .. đốm trắng tôm bao gồm virus vi khuẩn gây II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm trắng tôm Nguyên nhân xuất bệnh đốm trắng tôm b Bệnh đốm trắng tôm: II Quy trình tách DNA từ WSSV gây bệnh đốm. .. trưởng tế bào não thần kinh III Quy trình tách RNA từ VNN gây bệnh hoại tử thần kinh cá biển Nguyên nhân xuất bệnh hoại tử thần kinh cá a Nguồn gốc  Vi rút gây bệnh hoại tử thần kinh thuộc giống