1 Định nghĩa coumarin Phân loại, cấu trúc loại coumarin Các tính chất lý hóa, sinh học coumarin Chiết xuất, phân lập coumarin từ dược liệu Định tính, định lượng coumarin dược liệu Tác dụng, công dụng coumarin Các dược liệu tiêu biểu có coumarin: (Bạch chỉ, Tiền hồ, Mù u, Sài đất) Coumarin thuộc lớp phenylpropanoid đa vòng (n ≥ 2) • Phenylpropanoid đơn giản (n = vòng) Khái niệm chung Chiết xuất & Phân lập Phân loại Các ph pháp phân tích Đặc điểm cấu trúc Phân bố tự nhiên Tính chất Tác dụng − Công dụng - acid cinnamic hydroxy-cinnamic - acid coumaric (o, m, p) - acid caffeic, ferulic dẫn chất • Phenylpropanoid đa vòng (n > vòng) - benzo-α-pyron (coumarin, isocoumarin) - benzo-γ-pyron (flavonoid) - benzo-β-pyron) acid o-coumaric acid m-coumaric COOH acid p-coumaric COOH COOH HO OH OH COOH COOH HO p o m acid cinnamic COOH COOH HO HO acid caffeic β-pyron O O (a) (c) O O O O O O O O chromen iso-chromen chromen-2-on O O O O O chromen-4-on eu-flavonoid O iso-chroman pyran O O O O acid sinapic chroman O O O OMe acid ferulic O O coumarin O HO O (a) (b) COOH γ-pyron O (a) (b) MeO OMe OH α-pyron acid hydroxy-cinnamic O O iso-chromon O O dẫn chất benzo-pyron iso-coumarin flavonoid O iso-flavonoid coumarin iso-coumarin - Tự nhiên: Phân lập từ hạt Coumaruna odorata (Vogel, 1820) - Tổng hợp: CHO OH Một số phản ứng khác dùng để tổng hợp ∆’ coumarin: a Phản ứng Perkin (1868) - Perkin (William Henry Perkin, 1868) - Pechmann (Hans von Pechmann, 1884) H+ AcONa Ac2O OH O O OH ONa ald salicylic - Reformatsky (Sergei Nikolaevich Reformatsky, 1887) O coumarin - Knoevenagel (Emil Knoevenagel, 1898) b Phản ứng Pechmann (1884) - Kostanecki-Robinson (St von Kostanecki, 1901) Me Me H HO (HO) O HEtO - Wittig (Georg Wittig, 1954) H2SO4 đđ (HO) O H2O + EtOH O O ∆’-coumarin 10 hạt Đậu Tonka cỏ Nhãn hương (Coumarouna odorata Aubl.) (Melilotus officinalis Pall.) • Năm 1820, từ hạt đậu Tonka (Coumarouna odorata = Dipteryx odorata) từ cỏ Nhãn hương (Melilotus officinalis); A Vogel phân lập coumarin (nhưng Vogel lại nhận định nhầm benzoic acid) • Cũng năm 1820, từ hạt đậu Tonka, N.G Guibourt phân lập chất đặt tên coumarin Ông xác định acid benzoic (nhưng chưa đưa cấu trúc hóa học) • Năm 1835, A Guillemette chứng minh “benzoic acid” (của Vogel) coumarin (của Guibourt) • Tuy vậy, tài liệu coi A Vogel người tách coumarin từ tự nhiên • Năm 1846, Gerhard xác định cấu trúc hóa học coumarin • Năm 1868, Perkin tổng hợp coumarin từ aldehyd salicylic 11 12 từ hạt Đậu Tonka = Coumarouna odorata từ salicylaldehyd AcONa Ac2O từ nhiều ph pháp Σ Vogel (1820) phân lập* Σ Perkin (1868) (cuối kỷ 19) (CT 1846, Gerhard) Melilotus officinalis Fabaceae coumarin Karl Paul Link (1901 – 1978) Richard Anschutz (1852 – 1937) Σ từ 4-OH coumarin coumarin coumarin (1909) OH OH từ 4-OH-coumarin Σ Anschutz (1909) O Dicoumarol* Cỏ khô bị nhiễm nấm (Aspergillus ) • 1916, Simonis → “Chemistry of coumarins” • 1940, K.P Link → tính gây xuất huyết Dicoumarol (193x) (1933-1939) 3' OO O Biscoumarin (Dicoumarol*) (1945) • 1945: tổng hợp Warfarin*, dùng để diệt chuột! • 1955, Warfarin* dùng trị chứng nhồi máu tim Gia súc chết xuất huyết 15 Warfarin* = Coumadin* nhóm coumarin (vòng + vòng benzo) phân nhóm đại diện đơn giản (2 vòng) Umbelliferon umbelliferon esculetin, scopoletin 2a Furano thẳng (3 vòng) Psoralen psoralen, bergaptol (-en) xanthotoxol (-in) 2b Furano angular (3 vòng) Angelicin angelicin, sphondin 3a Pyrano thẳng xanthyletin, xanthoxyletin (3 vòng) Xanthyletin 3b Pyrano angular (3 vòng) Seselin seselin 4a Bis, tricoumarin Dicoumarol dicoumarol, tromexan 4b Phenyl-coumarin Coumestan wedelolacton 4c Alkyl-phenyl-coumarin Coumarol warfarin, acenocoumarol 4d Alkyl-phenyl-coumarin Aflatoxin 4e Các coumarin khác Furano-coumarin O 18 Pyrano-coumarin R6 O O O O O O O O O O O O R7 angular linear O R8 angular linear • Còn gọi nhóm umbeliferon (R7 = OH; đặc biệt ý!) O • Trong tự nhiên, thường có thêm nhóm OH 6, O coumarin đơn giản OH O • Các nhóm OH tạo O-glycosid với đường (glc!) R OH OO O Bis-coumarin O O • Một số aglycon coumarin thường gặp: - coumarin* - esculetin* - scopoletin* - umbelliferon* - herniarin* - fraxilin Phenylalkyl-coumarin 20 • nhóm 6,7-furanocoumarin = nhóm psoralen (linear) Aglycon R6 R7 R8 Glycosid Coumarin* H H H − Umbelliferon* Herniarin* H H OH OMe H H Skimmin = U-7-O-glc Esculetin** Scopoletin** OH OMe OH OH H H Esculin = E-6-O-glc Scopolin = S-7-O-glc Daphnetin Fraxetin H OMe OH OH OH OH Daphnin = D-8-O-glc Fraxin = F-8-O-glc • nhóm 7,8-furanocoumarin = nhóm angelicin (angular) A O O O O psoralen 7 O O O dihydro- A O O O angelicin O O dihydro- Chú ý cấu trúc furano-coumarin • Oxy vòng furano gắn C-7 • ∆ tiếp cách với ∆ vòng benzo (A) • Dẫn chất dihydro: nối đôi ( ) 21 22 2.2.2 Phân nhóm angelicin (angular) 2.2.1 Phân nhóm psoralen (linear) psoralen** bergaptol bergapten OMe OH O O O O O O O O O O O O angelicin** OMe MeO 4' 5 OMe MeO MeO 5' O O peucedanin O O OH O xanthotoxol O O O OMe O O O O Iso-bergapten xanthotoxin 23 O O sphondin O O O O pimpinellin 24 nhóm 6,7-pyranocoumarin nhóm 7,8-pyranocoumarin = nhóm xanthyletin (linear) = nhóm seselin (angular) 2.3.1 Phân nhóm xanthyletin (linear) OMe 6 O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O O OMe xanthyletin xanthyletin dihydro- seselin dihydro- xanthoxyletin luvangentil 2.3.2 Phân nhóm seselin (angular) Chú ý cấu trúc pyrano-coumarin • vòng pyrano: Oxy gắn C-7 MeO 6 O • isoprenyl: ∆ tiếp cách với ∆ vòng benzo (A) O O O O O O O O • gặp 5,6-pyranocoumarin seselin 25 brailin 26 (theo J B Harborne, 1989: số phụ ra) 2.3.3 Phân nhóm khellin (dihydro) 4' 3' 3' 2' O O 3' O O 4' OH O O O 4' OMe 3' O 1' OH khelacton provismin O 1' 6' OH 2' 5' O 10 O O OAc O O O O 2' O O O O O 2' 5' 3' O 1' O O 1' O O 4' 6' 3' OAc O CO CH O CO CH samidin visnadin*** 27 28 α (theo tài liệu khác: số phụ vào) R R R4 4' 4' 3' 5' 5' O O 2' 1' R O O O O 10 O 2' 1' 8' O O 6' 7' O R3 3' O 2.4.1 Phân nhóm Bis-coumarin (Dicoumarol ) O 2' 1' O O 3' O 1' O 2' 7' 4' 5' 3' 6' O 2.4.2 Phân nhóm Phenyl-coumarin O 4' 5' 8' 2.4.3 Phân nhóm Alkyl-phenyl-coumarin (Coumarol) 2.4.4 Phân nhóm Aflatoxin 2.4.5 Các phân nhóm coumarin khác 29 30 1 Dicoumarol* Dicoumarol ** (từ Melilotus spp.) Tromexan = Neodicoumarol (tổng hợp, hết dùng) OH OH 10 O 4' 11 O O 10 O 4' O 11 O O O 4' O OH COOEt OH OH OH 10 11 O O Ban đầu: Phân lập từ Trifolium repens O Hiện nay: Tổng hợp toàn phần (từ 4-OH-coumarin ) OH HO 10 OH 11 4' O Đã đưa vào Dược điển nhiều nước, OH 6' O O Làm thuốc chống đông (trị huyết khối, nhồi máu tim ) O Từ 1955: thay Warfarin** 3,3’-methylen bis(4,6-dihydroxy-coumarin) / Guazuma tomentosa 31 32 O O O O OH OH H H O O O O loại bỏ H2O ngưng tụ O CH2 OH OH 4 A O B O O O hiệu suất of Schem 1: 91% Gây xuất huyết bò, cừu (1930s) 33 3,3’-methylen bis(4,6-dihydroxy-coumarin) / Guazuma tomentosa OH HO 10 C δC, ppm 4' O δH (J, Hz) 168.2 7.33 d (2.0 Hz) 104.5 ̶ 172.4 OH 6' OH 11 34 O O O MeO HO O O O O 7' O 2' 3' 5' 4' daphnoretin = (scopoletin-3 –O−7-umbelliferon) (từ Edgeworthia chrysantha) • C19H12O8 = 368 (light green needles) • MS: m/z 368 [M+], 191, 177 • mp: 241 – 243 oC ̶ HO • UV (MeOH): 213; 259; 330 nm 132.8 ̶ 170.2 ̶ 134.6 7.27 dd (8.0, 2.0) • IR (KBr, cm−1): 126.7 6.77 d (8.0 Hz) - 3500-3300 (hydroxyl) 154.7 ̶ 10 124.9 11 19.3 (blue-green fluorescence) O O HO Rha O O O HO 5' HO 6' ̶ 3.40 s (2H) O O - 1720, 1130 (coumarin lacton) Edgeworosid C - 1615, 1530, 1560 (C=C arom.) (từ Edgeworthia chrysantha) HO O O 5,5’-bis-esculetin (từ Viola yedoensis ) 36 H 5' H5 MeO H 4' H 6' H 3' H4 O O 7' O MeO O O O 7' O 2' H 8' HO O O O 7'' O HO O O 3' HO 4' 5' Api H8 O 5' O O O O 6' daphnoretin (7-O-3) (từ Edgeworthia chrysantha) Edgeworosid B EI-MS m/z: 352, 179, 89, 63 (từ Edgeworthia chrysantha) proton δH, ppm, (J, Hz) proton δH, ppm, (J, Hz) H-4 7.88 s H-3’ 6.38 d (9.5 Hz) H-5 7.22 s H-4’ 8.05 d (9.5 Hz) H-8 6.87 s H-5’ 7.71 d (8.6 Hz) 7-OH 10.31 s H-6’ 7.12 dd (8.6, 2.2) 6-OMe 3.82 s H-8’ 7.19 d (2.2 Hz) 37 38 • Các 3-phenyl coumarin resveratrol 3-phenyl-coumarin 4-phenyl-coumarin OH O O O O O O Đáng ý coumestan wedelolacton / Sài đất Chúng coi dẫn xuất từ iso-flavonoid từ resveratrol HO coumarin OH OH O O O MeO O O 3 O MeO O RO O O OR MeO HO OH O O OH O 4' O OH 3' OH 4 OH O OR wedelolacton / Sài đất isoflavonoid resveratrol Wedelolacton / Sài đất O OH (khung coumestan) OR neoflavonoid calophyllolid / Mù u 40 coumarin đơn giản có thêm nhóm si-gel, hRf với hệ dung môi tên hợp chất (A) (B) (C) linear furano-coumarin (psoralen) có thêm nhóm tên hợp chất si-gel, hRf với hệ dung môi (A) (B) (C) (D) 7-OH umbelliferon 45 20 39 8-OMe xanthotoxin − − 67 53 7-OH, 8-OH daphnetin 42 − − 5-OMe bergapten 45 29 − 59 7-OH, 6-OH esculetin 28 02 11 5-OMe, 8-OMe iso-pimpinellin 41 25 − 54 7-OH, 6-O-glc esculin 04 − − 6-OMe, 7-OH, scopoletin 42 12 60 8-isopentenyloxy* imperatorin 50 33 78 − 7-OMe, 6-OH isoscopoletin − 20 61 5-isopentenyloxy* iso-imperatorin 62 43 − − 7-OMe, 6-OMe scoparon − 31 81 5-isopentenyloxy*, 8-OMe cnidilin 54 37 − − 7-OMe herniarin 55 54 81 (A) = toluen – ethyl acetat (5 : 1) (A) = toluen – HCOOEt – acid formic (5 : : 1) (B) = CHCl3 – AcOH – H2O (4 : : 1; lớp dưới) (C) = toluen – aceton (95 : 5; khai triển lần) 105 O (C) = benzen – ethyl acetat (7 : 3) O O (D) = toluen – Et2O – AcOH 10% (1 : : x) (xem mục 4.2 Hóa tính coumarin, slide 85 ) O • Có thể khai thác thông tin từ phản ứng hóa học OMe MeO (B) = EP – CHCl3 - MeOH (8 : : 0.3) O O Lưu ý rằng: O • phản ứng riêng lẻ không đặc hiệu cho coumarin angular furano (angelicin) có thêm nhóm hợp chất si-gel, hRf hệ d.môi (D) 5-OMe iso-bergapten 71 6-OMe sphondin 46 (nhất kết hợp với test huỳnh quang cis / trans ) 5-OMe, 6-OMe pimpinellin 65 • Nên kết hợp với định tính khác (màu phát quang (mang tính phủ định xác nhận) • màu với dd FeCl3 nhạt (khác xa flavonoid, tannin ) • phản ứng có ý nghĩa đáng kể: mở / đóng vòng lacton UV 365, SKLM, HPLC, kỹ thuật phổ nghiệm) (D) = toluen – Et2O – AcOH 10% (1 : : x) • Nên tham khảo mục Định tính chuyên luận cụ thể (ví dụ chuyên luận Bạch chỉ, Tiền hồ DĐVN IV ) 107 106 Ví dụ, tham khảo HPLC dịch chiết Tiền hồ Peucedanum decursivum 6.4.1 Phương pháp oxy hóa – khử (kém xác) Coumarin + d.dịch KMnO4 / H2SO4 → màu giọt thừa dung dịch KMnO4 Cột: RP-Spherigel ODS C18 (250 × 4.6 mm, µm); Pha động: AcCN − H2O (gradient mode): → tím hồng 0–24 min: 50% AcCN 24–40 min: 65% AcCN Tốc độ dòng: 1.5 ml / phút Phát 254 nm 6.4.2 Phương pháp đo phổ UV (cần mẫu tinh khiết) Ref: Journal of Chromatography A, 1076, (2005), pp 127–132 Đo // với mẫu chuẩn λmax, ghi nhận Abs So sánh với chuẩn → [coumarin] / mẫu 6.4.3 Phương pháp HPLC (thông dụng) (xem slide kế) 109 HPLC dịch chiết Tiền hồ Peucedanum decursivum Abs (254 nm) decursitin C decursidin = 3=D ostruthin = = nodakenetin C=2 phút (C D dẫn chất pyrano-coumarin) DL thường chứa 1-2 loại / nhóm coumarin (furano-, pyrano-) Đến năm 2013, với nhiều chất có cấu trúc tương tự • coumarin tự nhiên: > 1300 chất, chủ yếu từ # 150 họ thực vật • coumarin (bán) tổng hợp: nhiều Bộ (> 100 coumarin) Họ (> 100 coumarin) Araliales Apiaceae Rutales Rutaceae Asterales Asteraceae Fabales Fabaceae Oleales Oleaceae Urticales Moraceae Thymelaeales Thymelaeaceae 113 Nguyên liệu Coumarin (%) tinh dầu Quế (Cinnamomum cassia) − 11% tinh dầu Quế (C zeylanicum) − 4% tinh dầu vỏ Quế (C zeylanicum) 0,3 − 0,7% hạt Đậu Tonka (Coumarouna odorata) − − 10% cỏ Nhãn hương (Melilotus officinalis) 0,25 – 0,45% Lavander (Lavandula spp.) − 8% tinh dầu Foil (Lolium perenne) 8% Woddruff (Galium odoratum) ? giàu hạt Mù u (Calophyllum inophyllum) ? tinh dầu Bạc hà (Mentha arvensis) 20 ppm Trà xanh (Camellia chinensis) # ppm • Làm thuốc chống đông máu (trị chứng huyết khối) : - Aceno-coumarol (Sintrom*) - Phenprocoumon (Marcoumar*) - Dicoumarol; Warfarin (Coumadin*, Coumarol*) thường phối hợp với Aspirin 81 mg, Heparin • Hạ sốt (làm dãn mạch ngoại biên): Bạch • Dãn mạch vành, chống co thắt: Visnadin • Chữa chứng bạch biến, vảy nến: Psoralen, Angelicin (+ UVA) • Kháng khuẩn, kháng viêm: Wedelolacton / Sài đất Chú ý : Nhiều coumarin lại có tác hại 115 (viêm da, tổn thương gan, sinh ung thư) 116 Warfarin = Coumadin = Jantoven = Marevan = Uniwarfin ngăn chận enzym vit K epoxid reductase 117 118 ® ® 3' Được tổng hợp từ 4-OH-coumarin phenyl alkyl alcol Me OH HHO O O 80OC x 20 h 1' Me OH FeCl3 Me 2' OH 1' O O O • Là thuốc kháng đông máu, dạng uống, tác dụng kéo dài O • Cơ chế kháng đông tương tự nhóm warfarin: đối kháng vit Phenprocoumon K theo kiểu ức chế enzym có tên vit K epoxid reductase, qua ngăn chận hoạt hóa (về dạng khử) vit K epoxid • Kết yếu tố gây đông máu (II, VII, IX, X ) không hoạt hóa không hình thành cục máu đông (S.107) • Phenprocoumon sử dụng để ngừa & trị chứng huyết khối 119 120 Acenocoumarin = Acitrom = Darius = Sintrom Là thủ phạm gây chết gia súc từ thập niên 1930 (do xuất huyết nội tạng, xuất huyết sau thiến hay cưa sừng ) Dicoumarol sản phẩm sinh coumarin đơn giản có thực vật nhờ tác động số nấm mốc họ Aspergillus, Penicillium điều kiện thuận lợi Ban đầu (từ 1945) tổng hợp để sản xuất thuốc diệt chuột Sau dùng để loại trừ tác dụng vit K Từ 1955, Dicoumarol thay dần sản phẩm tổng hợp khác, hữu hiệu (Warfarin) Cơ chế kháng đông Dicoumarol tương tự nhóm warfarin (xem slide 111) Dicoumarol dùng phối hợp với Heparin để ngừa & trị chứng huyết khối tĩnh mạch Có thể dùng Dicoumarol dài hạn (hàng tháng, hàng năm; khác với Heparin) 121 Dicoumarol OH Tromexan = Trombil = Neodicoumarol O 3' OO COOEt OH OH OH O O Biệt dược 122 3' OO O Ba dót Ammi visnaga Mần tưới Cỏ mực Bán thải (giờ) Liều trì (mg/ngày) Sintrom (1 → mg) 24 1−8 Coumadin (1 → 10 mg) 36 3−9 Bạch Sài đất 120 − 144 mg Tiền hồ Mù u Dicoumarol (100 mg) 24 − 96 50 − 100 Tromexan (500 mg) 1−2 450 − 600 Marcoumar (3 mg) Xà sàng 123 124 Dược liệu (Radix Angelicae dahuricae), Bai Zhi = rễ phơi / sấy khô Bạch (Angelica dahurica Benth et Hook f., họ Apiaceae) Tham khảo thêm: Bạch chỉ, DĐVN IV, 2009, trang 688-689 125 126 THÀNH PHẦN HÓA HỌC (BẠCH CHỈ) ĐỊNH TÍNH (BẠCH CHỈ) Các phản ứng chung: Diazo, huỳnh quang / UV 365 Tinh dầu Coumarin 2.1 nhóm Scopoletin MeO - scopoletin Phản ứng màu (DĐVN IV, p 689) HO O O dịch ether + 2.2 nhóm Psoralen (~ 20 chất) - byak-angelicin R5 - xanthotoxin O O KOH MeOH MeOH cách thủy - byak-angelicol - bergapten NH2OH.HCl + HCl (pH – 4) + FeCl3 / EtOH O R8 màu đỏ tím 127 128 ĐỊNH TÍNH (BẠCH CHỈ) TÁC DỤNG - CÔNG DỤNG (BẠCH CHỈ) SKLM - si-gel F 254 (Merck) - mẫu thử: dịch EtOH; chấm vạch (// chuẩn) - dung môi: Benzen – EtOAc (9 : 1) - phát vết: soi UV 365 nm scopoletin : xanh da trời sáng coumarin ≠ : xanh lơ, xanh lục • Hạ sốt, giảm đau • Giãn mạch vành • Làm tăng huyết áp (liều nhỏ) • Gây co giật (liều cao) - so với mẫu chuẩn, kết luận HPLC 129 130 Từ rễ Bạch chỉ, tài liệu (Molecules 2011, 16) phân lập 18 coumarin thuộc nhóm furano-coumarin: - oxyalloimperatorin (1, hợp chất mới) - isoimperatorin (2), cnidilin (3), phellopterin (4), - bergapten (5), imperatorin (6), xanthotoxin (7), - alloimperatorin (8), isooxypeucedanin (9), - isodemethylfuropinarin (10), xanthotoxol (11), - 5-OMe-8-OH psoralen (12), demethylfuropinarin (13), - apaensin (14), pabulenol (15), isobyakangelicin (16), - byakangelicol (17) oxypeucedanin hydrat (18) 132 Rapid extraction, separation, identification and purification of active coumarin components from Radix Angelicae Dahuricae (RAD) Phytochemical Analysis 2010, 21(5), pp 473–482 Abstract Introduction Further studies of active coumarin components in RAD are absolutely essential to provide data on pharmacology, toxicology and quality for innovative drug candidates Thus, the preparation of active component standards and the administration of coumarin monomers should be carried out The isolation of the low-level active components from complex Traditional Chinese Medicine samples necessitates the development of rapid, simple and economical modern extraction, separation, identification and purification methods Objective To develop an efficient strategy for the rapid extraction, separation, identification and purification of coumarins from RAD 133 134 Methodology Coumarins were extracted with MAE after the extraction conds were optimised Extraction methods with MAE were used to partially purify RAD DĐVN IV quy định: Tiền hồ rễ phơi / sấy khô loài thuộc họ Hoa tán, Apiaceae: A HPLC-DAD-ESI-MS/MS method was applied for the preliminary on-line identification and screening of the main coumarins in RAD extract • Peucedanum praeruptorum Dunn [Tiền hồ hoa trắng] A 2D-prep-HPLC-DAD system was developed for further preparative separation of those target components • Peucedanum decursivum Maxim [Tiền hồ (hoa tím)] Results Loài Tiền hồ P decursivum hoa tím, có tên Quy nam 10 coumarins have been identified and of them (xanthotoxol, osthenol, oxypeucedanin hydrate, byakangelicin, imperatorin) were deemed as target components for the preparative isolation All of the isolated coumarins were at high purities of over 99% and the production rate was much higher than the traditional methods = Angelica decursiva (Miq.) Franch et Sav tránh nhầm với Angelica sinensis (Oliv.) Diels, Apiaceae = Đương quy Thực tế, loài hoa trắng thông dụng Conclusion The present paper demonstrates that these consecutive approaches are very useful for to isolate chemical constituents from TCM Cần tham khảo chuyên luận Tiền hồ, DĐVN IV, trang 911 135 137 QIAN-HU, 139 138 VI PHẪU TIỀN HỒ HOA TRẮNG DESCRIPTION Irregular cylindrical, conical or fusiform, slightly twisted, frequently branched at the lower part, 4-15 cm long, 3-18 mm in diameter = Túi tiết tinh dầu Externally yellowish-brown to dark brown, marked with longitudinal furrows or wrinkles and transverse lenticel-like cicatrices The top part is stubby, frequently with stem scars and fibrous leaf-bases remains at the root stock, with numerous fine annular striations at the upper end Texture relatively flexible, and hard when dried, easily broken; fracture uneven, pale yellow, numerous brownish-yellow oil spots scattered in cortex, cambium ring brown Odour aromatic; taste slightly bitter and pungent (Fig 1) Bần Biểu bì Túi tiết tinh dầu Xoang rỗng Tia libe Libe Tầng phát sinh gỗ Gỗ 141 SOI BỘT DƯỢC LIỆU TIỀN HỒ HOA TRẮNG Furanocoumarin (glycosid) O • rutarin, isorutarin, • marmesinin, praerosid I O OOC O Me OOC praeruptorin A Pyranocoumarin • praeruptorin A*, B*, E* (aglycon) • praerosid II, III, IV, V (glucosid) O O O OOC Hat tinh bột Sợi gỗ Cương thể Mạch mạng Mảnh túi tiết Mảnh bần OOC Ngoài coumarin, có tinh dầu praeruptorin B Furanocoumarin • bergapten, nodakenetin (aglycon) • nodakenin, decurosid I-V (glycosid nodakenetin) Pyranocoumarin • xanthyletin, decursin, decursidin Ngoài có umbeliferon, tinh dầu (Tham khảo DĐVN IV, trang 911) (bằng phương pháp SKLM, DĐVN IV) A Phản ứng tăng màu môi trường kiềm • Trên mỏng (silica gel G), chấm vết: B Phản ứng mở - đóng vòng lacton - cắn cồn 96% dược liệu Tiền hồ thử / CHCl3 C Phản ứng tạo màu đỏ với ZnCl2 - cắn cồn 96% dược liệu Tiền hồ chuẩn / CHCl3 - Hòa tan cắn cồn AcOH băng - Thêm vài giọt acetyl clorid (CH3COOCl) • D môi khai triển: c-hexan – EtOAc – Me2CO (18 : : 1) - Thêm vài tinh thể ZnCl2 (thuốc thử) • Phát (KOH/MeOH) + (vanillin sulfuric) + ∆ - Đun cách thủy − phút • Mẫu thử phải có vết tương ứng mẫu dược liệu chuẩn - Kết quả: Xuất màu đỏ 147 148 (bằng phương pháp HP-TLC, tham khảo) (bằng phương pháp HPLC, tham khảo) = praeruptorin A • Trên mỏng (HP, silica gel F254 Merck), chấm vết: (RRT 0,67) - dịch chiết Tiền hồ / MeOH - chuẩn praeruptorin A B / MeOH • Khai triển lần (8,5 cm) với dung môi DCM − Me2CO (20 : 1) = praeruptorin B (RRT = 1,00) • Phát đèn UV 365 nm • Mẫu thử phải có vết tương ứng với praeruptorin A, B chuẩn praeruptorin E + 0,74 4= qianhucoumarin (RRT = 1,16) 149 150 (theo tiêu chuẩn DĐVN IV, 2009) • Tăng tiết dịch đường hô hấp • Dùng chữa chứng khó thở, ho, viêm hô hấp • DĐVN IV không quy định tiêu chuẩn định lượng coumarin • Chống ngưng kết tiểu cầu dược liệu Tiền hồ (nodakenin, nodakenetin, decurosid III, decurosid IV) • Dùng làm thuốc giãn mạch vành • DĐVN IV quy định: Hàm lượng chất chiết ≥ 20% (ngâm lạnh với EtOH 50%; tham khảo thêm trang 912) 151 152 154 155 156 • Các 4-phenyl coumarin / hạt Mù u THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HẠT MÙ - U Các calophyllolid & inophyllolid / hạt Mù u Phần không tan / cồn: Dầu béo (quan trọng!) coi dẫn xuất từ neo-flavonoid Phần tan cồn: • tinh dầu, nhựa O R 7O • xanthonoid (calophyllin B, jacareubin ) • dẫn chất 4-phenyl coumarin (rất nhiều chất) A O C O O C O A O C O OR B neo-flavonoid - inophyllolid O A - calophyllolid MeO O O B calophyllolid B inophyllolid - acid calophyllic - acid calophynic 157 TÁC DỤNG VÀ CÔNG DỤNG (DẦU HẠT MÙ U) THÀNH PHẦN CHÍNH CỦA DẦU HẠT MÙ U Hàm lượng (%) acid béo / dầu Mù u Palmitic 14.7 Oleic Stearic Linoleic 21.3 12.7 49.4 Linolenic 158 - kháng viêm, chống loét (Phụ khoa, Tiểu đường! ) - chữa (lửa, điện, nước sôi, acid ) 0.30 - chữa vết thương hở, chữa nước ăn chân Eicosenoic 1.70 - làm mau lên da non, mau lành sẹo, làm sẹo mờ - sử dụng điều trị bệnh Hansen (phụ trợ) Chế phẩm : Calino, Balsino, Mecalin (+ Tràm) 159 160 Bộ phận dùng: Thành phần mặt đất Có chứa nhiều hợp chất: coumarin flavonoid ∆’ acid quinic nhóm khác (nhóm coumestan) • apigenin • ac 3,4-dicaffeoyl Q • sesquiterpenoid • wedelolacton • luteolin • ac 3,5-dicaffeoyl Q • diterpenoid • norwedelolacton • kaempferol • ac 4,5-dicaffeoyl Q • triterpenoid • acid norwedelolic • quercetin • astragalin • tinh dầu • (iso)quercitrin • muối vô *** 161 HO O MeO O O OH OH O OH nor-wedelolacton OH O O OH O R3 OH O - kháng viêm, kháng khuẩn, OH acid nor-wedelolic R3 R3’ • apigenin H H • luteolin H OH 4' OH • kaempferol OH H 3' R 3' • astragalin O-glc H • quercetin OH OH • quercitrin O-rha OH • isoquercitrin O-glc OH • hyperin O-gal OH OH OH wedelolacton TÁC DỤNG – CÔNG DỤNG CỦA SÀI ĐẤT COOH OH flavonoid HO OH HO O 162 - trị vết thương nhiễm khuẩn - phòng trị mụn nhọt, mẩn ngứa, rôm sảy - giải độc gan, bảo vệ tế bào gan Sài đất không độc (có thể dùng rau) HẾT BÀI COUMARIN & DƯỢC LIỆU CHỨA COUMARIN 163 164 [...]... anthraquinon aglycon đơn giản, các coumarin đơn giản ở dạng aglycon thì có thể thăng hoa được • Cách thực hiện: xem tài liệu Thực tập dược liệu bông lạnh tinh thể (nhưng khi mở vòng sẽ tạo muối phenolat: dễ tan / nước) • dược liệu dạng glycosid: tan được / nước nóng, cồn Bếp cách cát (t > 200 oC) 53 PHỔ UV (λ λmax nm / EtOH abs.) của coumarin 4.1.3 Phổ UV của các coumarin (λmax, nm) coumarin đơn giản ∆’ 7-OH... Các coumarin thường có nhóm thế ở C6 và C7 Nói chung : dễ chiết (do coumarin kém phân cực) Khi vị trí C3 và C4 không có nhóm thế, ∆ tại đây dễ dàng cho Có thể chiết coumarin ra khỏi dược liệu bằng cách: phản ứng cộng hợp với Brom: 5.1 Dùng dãy dung môi phân cực dần Br R6 R7 nước Brom O O R6 R7 → coumarin sẽ ra ở các phân đoạn đầu Br O đôi khi: Lắc, thu dịch Et2O → tinh thể O Các furano- và pyrano -coumarin. .. trúc hóa học của coumarin cũng như của các hợp chất hữu cơ • Phổ NMR của coumarin thì đơn giản, dễ tiếp cận • Phổ 1H- và 13C-NMR cho thông tin rất rõ về - kiểu khung coumarin (simple, furano, pyrano -coumarin ) - các mạch nhánh (-R, -OH, -OMe, -OAc, prenyl, ose ) • Với sự hỗ trợ của phổ khối (MS, Mass Spectroscopy), việc xác định cấu trúc các coumarin sẽ trở nên rất dễ dàng 67 68 Đa số coumarin thông... số chất là ∆’ dihydro ( ) nguồn vi sinh vật • Ví dụ hydrangenol, phyllodulcin, các thuberginol A → G • δc của ceton ~168 ppm (δc của ceton / coumarin ~161 ppm) 49 • Trong dược liệu, coumarin thường ở dạng aglycon hơn, 50 4.1 Lý tính của coumarin 4.2 Hóa tính của coumarin 4.1.1 Cảm quan 4.2.1 Ph ứng của -OH phenol 4.1.2 Tính thăng hoa 4.2.2 Tính thăng hoa 4.1.3 Phổ UV 4.2.3 Ph ứng đóng mở vòng lacton... 4 COO 3 C2H5 173 3 MeO 7 8 O 2 O O 6,7-dimethoxy coumarin (C11H10O4 = 206) O ethyl-3 -coumarin carboxylat (C12H10O4 = 218) 206 118 191 ∆ = 28 146 ∆m/z = 72 218 (COO−C2H4) 163 118 178 89 90 4.2.2 Phản ứng tăng màu (đóng / mở vòng Lacton) 4.2.1 Phản ứng của nhóm –OH phenol - Coumarin + d.dịch NaOH loãng BM màu xanh - Coumarin có –OH phenol + dd FeCl3 - Coumarin có –OH phenol + dd FeCl3 tăng màu NH2OH... chế đóng – mở vòng Lacton của Coumarin kiềm HO O O acid kém tan / nước acid (đục) O O thu tinh thể bằng EtOH COO tinh thể tan / nước kiềm (trong) dược liệu R lọc bông Nguyên tắc tinh chế coumarin bằng phương pháp acid - base + kiềm → không đỏ + Iod → (nâu tím) phản ứng diazo (+) 93 94 Cơ chế của thử nghiệm huỳnh quang 4.2.4 Thử nghiệm huỳnh quang (trên giấy lọc) HO O O coumarin huỳnh quang yếu tạo phenolat... COOH) (hexa hydroxy diphenic acid) coumarin O Me R X R R isocoumarin O O R O 4 MeO MeOOC 6 7 5 3 1 O 8 OH O O cyclo-coumarol O O R7 Me O O O O R8 3-amido-coumarol O dihydro-isocoumarin OH O 8 O NHCOR OMe OH coumarino-lignan (Jatrophin) 2 R 7 3 Me 4 O 5 O 4 3 O OH Me 6 OH O R OMe MeO O hydrangenol Novobiocin Clorobiocin • Sinh phát nguyên không có liên quan gì với coumarin Coumermycin A1 • Nói chung,... So sánh với chuẩn → [coumarin] / mẫu 6.4.3 Phương pháp HPLC (thông dụng) (xem slide kế) 109 HPLC dịch chiết Tiền hồ Peucedanum decursivum Abs (254 nm) decursitin C 6 decursidin = 5 3=D ostruthin = 4 1 = nodakenetin C=2 phút (C và D là 2 dẫn chất pyrano -coumarin) 1 DL thường chỉ chứa 1-2 loại / nhóm coumarin (furano-, pyrano-) Đến năm 2013, với nhiều chất có cấu trúc tương tự • coumarin tự nhiên: >... có cấu trúc tương tự • coumarin tự nhiên: > 1300 chất, chủ yếu từ # 150 họ thực vật • coumarin (bán) tổng hợp: rất nhiều Bộ (> 100 coumarin) Họ (> 100 coumarin) Araliales Apiaceae Rutales Rutaceae Asterales Asteraceae Fabales Fabaceae Oleales Oleaceae Urticales Moraceae Thymelaeales Thymelaeaceae 113 Nguyên liệu Coumarin (%) tinh dầu lá Quế (Cinnamomum cassia) 4 − 11% tinh dầu lá Quế (C zeylanicum)... 7 Tầng phát sinh gỗ 8 Gỗ 141 SOI BỘT DƯỢC LIỆU TIỀN HỒ HOA TRẮNG 1 Furanocoumarin (glycosid) O • rutarin, isorutarin, • marmesinin, praerosid I O OOC O Me OOC praeruptorin A 2 Pyranocoumarin • praeruptorin A*, B*, E* (aglycon) • praerosid II, III, IV, V (glucosid) O O O OOC 1 Hat tinh bột 2 Sợi gỗ 3 Cương thể 4 Mạch mạng 5 Mảnh túi tiết 6 Mảnh bần OOC Ngoài các coumarin, còn có tinh dầu praeruptorin ... aglycon đơn giản, coumarin đơn giản dạng aglycon thăng hoa • Cách thực hiện: xem tài liệu Thực tập dược liệu lạnh tinh thể (nhưng mở vòng tạo muối phenolat: dễ tan / nước) • dược liệu dạng glycosid:... Gerhard) Melilotus officinalis Fabaceae coumarin Karl Paul Link (1901 – 1978) Richard Anschutz (1852 – 1937) Σ từ 4-OH coumarin coumarin coumarin (1909) OH OH từ 4-OH -coumarin Σ Anschutz (1909) O Dicoumarol*... Bis, tricoumarin Dicoumarol dicoumarol, tromexan 4b Phenyl -coumarin Coumestan wedelolacton 4c Alkyl-phenyl -coumarin Coumarol warfarin, acenocoumarol 4d Alkyl-phenyl -coumarin Aflatoxin 4e Các coumarin