Đang tải... (xem toàn văn)
Các dạng oxy hoạt động, bao gồm các gốc tự do và các phân tử chứa oxy, có hoạt tính oxy hóa cao như OH., HOO., O2,…có năng lượng cao và kém bền nên dễ dàng tấn công các đại phân tử như lipit, ADN, protein,… sinh ra nhiều loại bệnh như ung thư, tim mạch, tiểu đường, béo phì,… và tăng nhanh sự lão hoá. Vì vậy, để bảo vệ sức khỏe, cần phải bổ sung các chất kháng oxy hóa để kiểm soát hàm lượng ổn định của các gốc tự do trong cơ thể. Tác dụng kháng oxy hoá mang lại nhiều lợi ích tốt cho cơ thể như bảo vệ sự toàn vẹn của tế bào, ngăn ngừa một số tai biến, làm chậm quá trình lão hoá cơ thể, bảo vệ chức năng gan, hạn chế các tác nhân gây viêm... Như vậy, việc tìm kiếm các dược liệu, định hướng nghiên cứu các hoạt chất có khả năng kháng oxy hoá là cần thiết trong nỗ lực tìm kiếm thuốc mới phục vụ công tác phòng và chữa bệnh cho nhân dân. Việt Nam có nhiều dân tộc sinh sống với nhiều ngôn ngữ khác nhau. Mỗi dân tộc có một nhóm các cây thuốc chăm sóc sức khỏe và chữa bệnh đặc thù của dân tộc mình. Tộc người Pako và Vân Kiều là những cư dân có mặt sớm nhất ở vùng Trường Sơn trải dài từ Quảng Nam đến Quảng Bình, nhiều nhất là ở địa bàn miền núi Quảng Trị. Tri thức bản địa về sử dụng cây thuốc có vai trò quan trọng trong đời sống của người dân nơi đây. Trong đó, cây Mán đỉa (Archidendron clypearia (Jack) I.Niels) là cây thuốc đã được sử dụng trong y học dân tộc cổ truyền của Trung Quốc và trong các bài thuốc kinh nghiệm chữa bệnh của các đồng bào dân tộc Pako, miền Trung Việt Nam 5. Một số công trình đã công bố cho thấy, thành phần hóa học chủ yếu của Archidendron clypearia là các hợp chất flavonoid, saponin, acid hữu cơ...17, 23, 26. Tộc người Pako,Vân Kiều và một số nơi khác đã sử dụng Mán đỉa để điều trị các bệnh nhiễm trùng đường hô hấp, viêm gan, xơ gan, bệnh gan mật, tiêu hóa kém, viêm họng, viêm thanh quản, viêm amidan cấp tính 5. Theo một số tài liệu, Mán đỉa còn có tác dụng kháng nấm, kháng vi khuẩn 38, kháng virus 14,15,23, tác dụng gây độc tế bào ung thư 27,30, khả năng kháng oxy hóa 32, 38
ĐẶT VẤN ĐỀ Lý chọn đề tài Các dạng oxy hoạt động, bao gồm gốc tự phân tử chứa oxy, có hoạt tính oxy hóa cao OH , HOO., O2-,…có lượng cao bền nên dễ dàng công đại phân tử lipit, ADN, protein,… sinh nhiều loại bệnh ung thư, tim mạch, tiểu đường, béo phì,… tăng nhanh lão hoá Vì vậy, để bảo vệ sức khỏe, cần phải bổ sung chất kháng oxy hóa để kiểm soát hàm lượng ổn định gốc tự thể Tác dụng kháng oxy hoá mang lại nhiều lợi ích tốt cho thể bảo vệ toàn vẹn tế bào, ngăn ngừa số tai biến, làm chậm trình lão hoá thể, bảo vệ chức gan, hạn chế tác nhân gây viêm Như vậy, việc tìm kiếm dược liệu, định hướng nghiên cứu hoạt chất có khả kháng oxy hoá cần thiết nỗ lực tìm kiếm thuốc phục vụ công tác phòng chữa bệnh cho nhân dân Việt Nam có nhiều dân tộc sinh sống với nhiều ngôn ngữ khác Mỗi dân tộc có nhóm thuốc chăm sóc sức khỏe chữa bệnh đặc thù dân tộc Tộc người Pako Vân Kiều cư dân có mặt sớm vùng Trường Sơn trải dài từ Quảng Nam đến Quảng Bình, nhiều địa bàn miền núi Quảng Trị Tri thức địa sử dụng thuốc có vai trò quan trọng đời sống người dân nơi Trong đó, Mán đỉa (Archidendron clypearia (Jack) I.Niels) thuốc sử dụng y học dân tộc cổ truyền Trung Quốc thuốc kinh nghiệm chữa bệnh đồng bào dân tộc Pako, miền Trung Việt Nam [5] Một số công trình công bố cho thấy, thành phần hóa học chủ yếu Archidendron clypearia hợp chất flavonoid, saponin, acid hữu [17], [23], [26] Tộc người Pako,Vân Kiều số nơi khác sử dụng Mán đỉa để điều trị bệnh nhiễm trùng đường hô hấp, viêm gan, xơ gan, bệnh gan mật, tiêu hóa kém, viêm họng, viêm quản, viêm amidan cấp tính [5] Theo số tài liệu, Mán đỉa có tác dụng kháng nấm, kháng vi khuẩn [38], kháng virus [14],[15],[23], tác dụng gây độc tế bào ung thư [27],[30], khả kháng oxy hóa [32], [38] Cho đến nay, Việt Nam có công trình nghiên cứu tác giả Nguyễn Thị Hoài sàng lọc hoạt tính kháng oxy hóa dịch chiết metanol [5] chưa đầy đủ thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài Mán đỉa Nhằm góp phần làm sáng tỏ sở khoa học cho việc sử dụng thuốc này, chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack) I Niels” Mục tiêu nghiên cứu Cung cấp thông tin hoạt tính sinh học thành phần hóa học, quy trình chiết xuất, phân lập hợp chất xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập Đối tượng phạm vi nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu thành phần mặt đất Mán đỉa (Archidendron clypearia (Jack) I Niels) Phương pháp nghiên cứu 4.1 Phương pháp sàng lọc đánh giá hoạt tính kháng oxy hóa + Phương pháp nghiên cứu in vitro hoạt tính kháng oxy hóa- bảo vệ gan cao toàn phần cao phân đoạn Mán đỉa - Archidendron clypearia (Jack) I Niels + Phương pháp xác định lực kháng oxy hóa tổng (Total antioxidant capacity) theo mô hình phospho molybden + Phương pháp xác định khả kháng oxy hóa theo mô hình DPPH 4.2 Phương pháp chiết cao toàn phần cao phân đoạn + Phương pháp ngâm nhiệt độ phòng + Phương pháp chiết lỏng – lỏng + Phương pháp chiết pha rắn 4.3 Phương pháp phân lập cấu tử + Phương pháp sắc ký cột + Phương pháp sắc ký lớp mỏng 4.4 Phương pháp xác định cấu tạo cấu tử phân lập + Phương pháp phổ: 1H – NMR, COSYGP 13 C – NMR, HSQC – NMR, HMBC – NMR, Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Kết nghiên cứu cung cấp thông tin khoa học thành phần hóa học hoạt tính sinh học Mán đỉa (Archidendron clypearia (Jack) I Niels) thu hái vùng rừng núi huyện Đakrông, tỉnh Quảng Trị, Việt Nam Các nghiên cứu dựa phương pháp thường quy xử lí số liệu thống kê Cấu trúc luận văn Luận văn chia thành chương sau: Mở đầu Chương Tổng quan: Giới thiệu vài nét họ trinh nữ, thuộc chi Archidendron F.Mueller, đặc điểm thực vật phân bố chi Archidendron F Mueller loài Mán đĩa Archidendron clypearia (Jack) I Niels, thành phần hóa học hoạt tính sinh học, tác dụng công dụng chi Archidendron F Mueller loài Mán đĩa Archidendron clypearia (Jack) I Niels Chương Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đưa đối tượng nghiên cứu sử dụng số phương pháp nghiên cứu xác định hoạt tính kháng oxy hóa, định tính nhóm chức hữu phản ứng hóa học đặc trưng, tiến hành phân lập sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng, xác định cấu trúc hợp chất dựa liệu phổ Chương Kết nghiên cứu thảo luận: Trình bày kết nghiên cứu bao gồm kết thử hoạt tính kháng oxy hóa cao tổng metanol cao phân đoạn, chiết xuất, phân lập xác định cấu trúc cấu tử từ phân đoạn có hoạt tính kháng oxy hóa cao Kết luận Chương TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan Mán đỉa - Archidendron clypearia (Jack) I Niels 1.1.1 Vị trí phân loài Mán đỉa - Archidendron clypearia Theo hệ thống phân loại Takhtajan công bố năm 2009, Mán đỉa có tên khoa học Archidendron clypearia (Jack) I Niels, có vị trí phân loài sau[16]: Ngành Ngọc lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Ngọc lan (Magnoliidae) Bộ Ngọc lan (Magnoliales) Họ Đậu (Fabaceae) Phân họ Trinh nữ (Mimosaceae) Chi Archidendron Mán đỉa (Archidendron clypearia) có nhiều tên đồng nghĩa khác giác, khét, hông linh, lim sẹt, ràng ràng sử dụng với số tên khoa học đồng nghĩa Pithecellobium clypearia, Abarema clypearia, Inga clypearia [16], Inga clypearia Jack Malay, Abarema angulata (Bentham) Kostermans, Pithecellobium angulatum Bentham [16] 1.1.2 Sơ lược đặc điểm họ Trinh nữ - Mimosaceae Là họ nguyên thủy có nhiều loài Đậu, có dạng gỗ, bụi, thảo dây leo gỗ, nhẵn hay có gai Lá kép lông chim 1-2 lần, chét nhỏ, kèm hình sợi hay biến thành gai Hoa nhỏ, tập hợp thành cụm hoa hình đầu hay hình bông, hoa đều, mẫu 4, đài 5, thường dính lại Tràng có tiền khai van Nhị nhiều gấp đôi số cánh hoa số cánh hoa Hạt phấn thường dính lại thành khối 4-16 hạt Quả thuộc loại đậu [29] Họ Mimosaceae gồm khoảng 60 chi, 2800 loài, phân bố chủ yếu vùng nhiệt đới cận nhiệt đới Theo “Cây cỏ Việt Nam” Phạm Hoàng Hộ [7], họ Mimosaceae Việt Nam có khoảng 16 chi với 85 loài, bao gồm: Acacia P Miller (28 loài) Enterolobium C Martius (1 loài) Adenanthera C Linnaeus (2 loài) Leucoena J Lamarck (1 loài) Albizia A Durazzini Mimosa C Linnaeus (4 loài) (17 loài) Archidendron F Mueller (18 loài) Neptunia J Loureiro Calliandra G Bentham (2 loài) Parkia R Brown (1 loài) (1 loài) Cathormion (Benth.) Hassk (1 loài) Pithecellobium C Martius (2 loài) Desmanthus C Willdenow (1 loài) Samanea (DC.) Merrill Entada M Adanson Xylia W Roxburgh (4 loài) (1 loài) (1 loài) 1.1.3 Sơ lược đặc điểm chi Archidendron F Mueler Chi Archidendron F Mueller thuộc phân họ Mimosaceae tập trung chủ yếu vùng nhiệt đới Châu Á với khoảng 100 loài [16] Ở Việt Nam, chi Archidendron có 18 loài phân bố khắp nước [7] Bảng 1.1 Các loài chi Archidendron có Việt Nam [7] STT 10 11 12 13 14 Loài Archidendron pellitum (Gagn.) I Niels Archidendron clypearia (Jack.) I Niels Archidendron tetraphyllum (Gagn.) I Nielsen Archidendron quocense (Pierre) I Niels Archidendron turgidum (Merr.) I Niels Archidendron bauchei (Gagn.) I Niels Archidendron lucidum (Benth.) I Niels Archidendron utile (Chun & How) I Nielsen Archidendron eberhardtii I Niels Archidendron ellipticum (Bl.) Niels Archidendron kerri (Gagn.) I Niels Archidendron balansae (Oliv) I Niels Tên thường gọi Doi da Nơi phân bố Gia Lai, Kontum, Lâm Đồng Giác, Mán đỉa Đồng Nai, Bạc Liêu, Phú Quốc, Quảng Trị, Huế Doi, hầm học, lễ Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Hà Tây, Hòa Bình, Thanh Hóa Doi Phú Quốc Phú Quốc, Côn Sơn Doi phù Cổ ướm, cổ áo Cổ ôm, giác Doi hữu ích Doi Eberhardt Hoàng Liên Sơn, Gia Lai, Kontum Từ Thanh Hóa, Huế đến Cam Ranh Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế Vĩnh Phúc, Phú Thọ Doi bầu dục Bắc Cạn, Thái Nguyên, Hà Tây, Hòa Bình, Thanh Hóa Gia Lai, Kon Tum Doi Kerr Bắc Cạn, Thái Nguyên Cứt ngựa Từ Cao Bằng, Lạng Sơn, đến Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế Phú Yên, Khánh Hòa Archidendron chevalieri Doi Chevalier (Kost) I Niels Archidendron tonkinensis I Doi Bắc Bộ Niels Quảng Ninh 15 16 17 18 Archidendron robinsonii (Gagn.) I Niels Dái heo Cao Bằng, Lạng Sơn, Quảng Bình, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Phú Yên, Khánh Hòa, Đà lạt Tam Đảo, Bạch Mã, Kontum, Lâm Đồng Bạch Mã, Quảng Trị Archidendron poilanei Doi Poilane (Kost.) I Niels Archidendron occultatum Doi ẩn (Gagn.) I Niels Archidendron dalatensis Doi Đà Lạt Gia Lai, Kontum, Lâm (Kost.) I Niels Đồng Các loài Archidendron phân bố khắp nước, tập trung nhiều miền Bắc, miền Trung khu vực Tây Nguyên Tại khu vực Quảng Trị, Thừa Thiên Huế tìm thấy số loài A clypearia (Jack) I Niels, A bauchei (Gagn.) I.Niels, A lucidum (Benth.) I Niels, A balansae (Oliv) I Niels, A robinsonii (Gagn.) I Niels, A poilanei (Kost.) I Niels, A occultatum (Gagn.) I Niels 1.1.4 Sơ lược đặc điểm Mán đỉa – Archidendron clypearia Cây thường thấy rừng đầm lầy, rừng phủ xanh đất sét, rừng thưa rừng hỗn giao rụng lá, vùng núi độ cao đến 1700m Cây ưa sáng, mọc nhanh, ưa đất chua, ưa ẩm, nảy chồi mạnh Tái sinh hạt khỏe tán rừng có độ tán che thấp Ở Việt Nam, mọc hoang nhiều tỉnh phía Bắc, tỉnh miền Trung tỉnh Nam Đồng Nai, Bạc Liêu, Phú Quốc, Quảng Trị, Huế [4] Mán đỉa thuộc loại nhỡ hay gỗ cao 10-15m, nhánh ngang, có cạnh Lá kép, mang 4-5 cặp cuống bậc hai, cuống bậc hai mang 3-8 đôi chét hình bình hành, hình trái xoan hay hình giáo ngược, gốc hình nêm không cân đối Đầu nhọn thường có mũi, có lông mịn hai mặt có lông tơ mặt Ra hoa vào tháng 3-4, cụm hoa chùm tán hay chùy ngọn, phân nhánh đến lần, có lông Các cuống mang tán gồm khoảng 10 hoa có cuống 1-3mm Đài hình chén hay hình phễu, tràng hình phễu hay hình chuông, ống nhị ống tràng Bầu có lông mịn hay lông tơ Có vào tháng 6-8, cỡ 20 x cm, dẹp, xoắn theo hình trôn ốc, màu cam vàng mặt ngoài, đỏ mặt trong, có lông mềm hay lông tơ Hạt hình bầu dục hay hình cầu, có vỏ màu đen lam 1.1.5 Các nghiên cứu thành phần hóa học số loài thuộc chi Archidendron loài Archidendron clypearia 1.1.5.1 Các nghiên cứu thành phần hóa học số loài thuộc chi Archidendron Chi Archidendron (hay gọi với tên Pithecellobium) đưa vào sử dụng với mục đích chữa bệnh từ lâu, nghiên cứu thành phần hóa học chi phát triển năm gần đây, phải kể đến nghiên cứu từ Trung Quốc, Ấn Độ, Hàn Quốc số nước Đông Nam Á Các nhóm chất có chi flavonoid, saponin số dẫn chất khác [17], [23], [26] a Nhóm flavonoid Bảng 1.2 Các hợp chất flavonoid có chi Archidendron Tên chất - Prenylapigenine 7-O-rutinoside Quercitrin Rutin Kaempferol Naringin Daidzein Có loài A.dulce Flavan 3-ol gallate A.lobatum ’ TLTK [37] A dulce [29] [31] b Nhóm saponin Bảng 1.3 Các hợp chất saponin có chi Archidendron Eliptoside A-J Pitheduloside A-G Pithelucoside A-C A ellipticum A dulce A lucidum [15] [33] [27] A dulce [36] 3-O-[beta-D-glucopyranosyl (1-2)-alpha-Larabinopyranosyl]-28-O-[beta-D-xylopyranosyl(16)-beta-D-glucopyranosyl]-echinocystic acid 3-O[alpha-L-arabinopyranosyl (1-2)][alpha-L arabinopyranosyl (1-6)]2-acetoamido-2-deoxybeta-D-glucopyranosyl oleanolic acid 3-O[alpha-L-arabinopyranosyl (1-2)][alpha-L A racemosum [21] A.cubense [20] arabinopyranosyl (1-6)]2-acetoamido-2-deoxybeta-D-glucopyranosyl echinocystic acid O(3)- (2-acetylamino-2-deoxy-beta-D- glucopyranosyl)-oleanolic acid A.arboreum c Các nhóm khác Ngoài flavonoid, saponin, thành phần chi Archidendron có diterpenoid, acid hữu cơ, dẫn xuất axit,… Bảng 1.4 Các hợp chất khác có chi Archidendron Diterpenoid (-) 19-beta-D-glucopyranosyl 6,7- A albicans [30] Acid hữu dihydroxy kaurenoate Metyl panmitat Metyl stearat A [17] Axit glucuronic cauliflorum A mangense [18] Djenkolic axit (S,S’- A jiringa [39] dẫn xuất acid Hợp chất khác methylenebiscysteine) Lectin ’ 3-O[6 -O-palmitoyl-β-D-glucosyl]- [38] A.cauliflorum spinasta-7,22(23)-dien 3-O[6’-O-stearoyl-β-D-glucosyl]- [17] spinasta-7,22(23)-dien (1) Quercitrin (3) Kaempferol (2) Rutin (4) Naringin (5) Daidzein (6) Kaempferol-3-O-alpha- L-rhamnopyranoside (7) Flavan 3-ol gallate (8) Djenkolic acid (S,S’-methylenebiscysteine) Hình 1.1 Công thức cấu tạo số cấu tử phân lập từ loài thuộc chi Archidendron F.Mueller Thành phần hóa học chi Archidendron flavonoid saponin Flavonoid thường có hoạt tính chống độc, tạo phức với ion kim loại, bảo vệ chức gan, kháng oxy hóa tốt; saponin có tác dụng chống viêm, số có tác dụng ức chế virus [14], [23], kháng nấm kháng khuẩn [38] Từ thành phần phần giải thích tác dụng kháng oxy hóa, kháng viêm, chống dị ứng kháng nấm… loài chi Archidendron 1.1.5.2 Các nghiên cứu thành phần hóa học loài Archidendron clypearia Cây Mán đỉa nhà khoa học Trung Quốc quan tâm nghiên cứu vài năm trở lại Cây người dân đưa vào sử dụng làm thuốc từ lâu Năm 2013, Việt Nam có nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Mán đỉa tác giả Nguyễn Khánh Thùy Linh [8], với hướng dẫn PGS.TS Nguyễn Thị Hoài Cho đến nay, tài liệu nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack) I Niels tìm thấy không nhiều Qua tài liệu tham khảo được, thành phần chủ yếu Mán đỉa (Archidendron clypearia) flavonoid, saponin, acid hữu [23] Theo tổng quan tài liệu, hoạt chất phân lập từ Mán đỉa trình bày bảng 1.5 Bảng 1.5 Một số hoạt chất phân lập từ Mán đỉa ST Nhóm hoạt T chất 10 Flavonoid 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Tên chất 5-hydroxy-3,7,3’,4’-tetramethoxyflavone 5,4’-dihydroxy-3,7,3’-trimethoxyflavone Luteolin Luteoloside 7,3’-O-di-gallyoltricetiflavan 7,4’-O-di-gallyoltricetiflavan (-)-epigallocatechin-7-O-gallate 2(-)-epigallocatechin-7-gallate 3(-)-5,7,3’,4’,5’-pentahydroxyflavan 5(-)-tetrahydroxyflavan-7-gallate 7-O-galloyltricetifavan 7,4’-di-O-galloyltricetifavan Myricitrin (myricetin-3-O-alpha-L-rhamnopyranoside) Quercitrin (quercetin-3-O-alpha-L-rhamnopyranoside) Quercetin Acid hữu dẫn xuất acid Oleanolic acid Ursolic acid Acid gallic Methyl gallate Saponin Alpha-amyrin Sterol Beta- Sitosterol Hydrocarbon Tritriacontane TLTK [43] [41] [14] [25] [26] [43] [26] [43] Qua bảng 1.2, nhận thấy thành phần phân lập được, flavonoid chiếm với số lượng lớn Flavonoid nhóm chất có tác dụng ngăn chặn trình oxy hóa, dập tắt gốc tự do, chống độc, giảm tổn thương gan bảo vệ gan [2] Điều góp phần vào việc giải thích tác dụng chữa bệnh liên quan đến kháng oxy hóa, bảo vệ gan dược liệu 1.1.6 Hoạt tính sinh học chi Archidendron loài Archidendron clypearia 1.1.6.1 Hoạt tính sinh học chi Archidendron Bột khô Mán đỉa (5 kg) Bã rắn Dịch metanol Cất đuổi dung môi (t0, cô quay chân không) Cao MeOH (750 gam) Phân tán nước Chiết phân đoạn với dung môi có độ phân cực tăng dần (3 lít/lần) Cao n–hexan (Cao H: 100 gam) Cao clorofom (Cao C: 145 gam) Cao etyl axetat (Cao E: 250 gam) Cao n–butanol (Cao B: 105 gam) Cao nước (Cao W: 145gam) Hình 3.3 Sơ đồ chiết cao toàn phần cao phân đoạn Mán đỉa 3.2.2 Quy trình phân lập Cột sắc ký rửa sạch, tráng lại metanol, để khô tự nhiên Giữ cột thẳng đứng giá, khóa vòi bên cột, nhựa trao đổi ion rót vào cột, để yên – 10 phút cho hạt nhựa lắng xuống, cho nước cất qua cột để rửa cột Để nạp mẫu chất lên đầu cột tiến hành mở khóa để hạ mức dung môi cột xuống vừa sát mức nhựa đầu cột, khóa lại Dùng pipet hút đưa mẫu lên đầu cột, mở khóa cho dung dịch mẫu hút vào lớp nhựa đầu cột, để yên 10 – 20 phút mẫu tiếp xúc cân với nhựa Cao clorofom SKC pha thường C1 20:1 40:1 100:0 C3 C2 SKC pha đảo C2.1 n – hexan/axeton (v/v) C2.3 C2.4 C2.5 Clorofom/metanol (30:1, v/v) C5.1 C5.2 C5.3 C5.4 Axeton/nước (3:1, v/v) Clorofom/axeton (30:1, v/v) SKC pha thường C7 C6 SKC pha thường 0:100 1:1 C5 C4 Metanol/nước (10:1, v/v) C2.2 5:1 10:1 SKC pha đảo C2.2.4 C2.2.2 C5.1.1 C2.2.1 n–hexan/axeton (15:1, v/v) SKC pha thường C2.2.5 C2.2.3 C5.1.4 C5.1.3 C5.1.2 Axeton/metanol/nước (2:1:0,1; v/v) SKC pha đảo C5.1.3.1 C5.1.3.2 C5.1.3.3 Metanol/nước(2:1,v/v) C2.2.2.1 C2.2.2.2 C2.2.2.3 C2.2.2.4 SKC lọc qua gel Clorofom/etyl axetat/metanol (15:1:0,1; v/v) C2.2.2.4.1 SKC lọc qua gel SKC pha thường Chất 22 C2.2.2.4.2 C2.2.2.4.3 Metanol/nước (2:1,v/v) Chất Hình 3.4 Sơ đồ phân lập cấu tử từ cao phân đoạn clorofom Cao phân đoạn clorofom phân tách sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải với hệ dung môi n-hexan/axeton (100:0, 40:1, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1, 0:100) thu cao ký hiệu C1 - C7 Khảo sát sắc ký lớp mỏng, nhận thấy phân đoạn C2 C5 xuất vết sắc ký rõ nét Phân đoạn C2 tiếp tục triển khai sắc ký cột pha đảo, hệ dung môi rửa giải metanol/nước (10:1) thu phân đoạn ký hiệu từ C2.1 đến C2.5 Trong đó, tiếp tục khảo sát sắc ký lớp mỏng, nhận thấy phân đoạn C2.2 xuất vết sắc ký rõ nét nên chọn C2.2 tiếp tục triển khai cột sắc ký pha thường rửa giải hệ clorofom/ axeton (30:1) thu phân đoạn ký hiệu từ C2.2.1 đến C2.2.5 Phân đoạn C2.2.2 khảo sắc ký lớp mỏng, nhận thấy xuất vết sắc ký rõ nét nên chọn phân đoạn C2.2.2 phân lập sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải axeton/ metanol/ nước (2:1:0,1) cho phân đoạn từ C2.2.2.1 đến C2.2.2.4 Tiếp tục phân tách C2.2.2.4 sắc ký cột pha thường với hệ clorofom/ etyl axetat/ metanol (15:1:0,1) phân đoạn từ C2.2.2.4.1 đến C2.2.2.4.3 Phân đoạn C2.2.2.4.1 tinh chế cột sắc ký lọc qua gel với pha động metanol: nước (2:1), thu hợp chất Phân đoạn C5 triển khai sắc ký cột pha thường, hệ dung môi rửa giải clorofom/ metanol (30:1) thu phân đoạn từ C5.1 đến C5.4 Phân đoạn C5.1 triển khai sắc ký cột pha đảo với hệ dung môi rửa giải axeton/ nước (3:1) thu phân đoạn ký hiệu từ C5.1.1 đến C5.1.4 Phân đoạn C5.1.3 phân tích tiếp sắc ký cột pha thường với hệ dung môi rửa giải n-hexan : axeton (15:1) thu phân đoạn ký hiệu từ đến C5.1.3.1 đến C5.1.3.3 Phân đoạn C5.1.3.3 tinh chế cột sắc ký lọc qua gel với pha động metanol/ nước (2:1), thu hợp chất 3.3 Xác định cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 3.3.1 Hợp chất (ACC11) Hợp chất phân lập dạng dầu, màu trắng, tan tốt axeton Phổ 1H-NMR đưa tín hiệu cộng hưởng 11 nhóm metylen quan sát δH 2,60 t (7,0); 1,78 m; 1,41-1,92 m Ngoài tín hiệu phổ nhóm metyl gắn với carbon không liên kết với hydro δH 2,16 s; 2,11 s; 2,11 s; 1,23 s với nhóm metyl mạch nhánh δH 0,87 d (6,5); 0,87 d (6,5); 0,84-0,85 d (6,5) nhóm hydroxyl vị trí C-6 tín hiệu δH 4,17 (s,-OH) Phổ 13C-NMR, DEPT xuất tín hiệu cho thấy có 29 nguyên tử carbon gồm 11 nhóm metylen, nhóm metyl, nhóm metin, carbon không liên kết với hydro Các tín hiệu carbon gán với tín hiệu proton tương ứng thông qua phổ HSQC Bảng 3.6 Số liệu phổ NMR hợp chất chất tham khảo [4] C 2a 4a 5a 7a 8a 8b δ C(#) (Chất chuẩn) δ Ca, b(Chất phân tích) DEPT δ Ha, c (J, Hz) 74,5 23,8 31,6 20,8 117,4 118,5 11,3 144,5 121,0 12,2 122,6 145,6 11,8 74,5 23,8 31,6 20,8 117,4 118,5 11,3 144,5 121,0 12,2 122,6 145,6 11,8 C CH3 CH2 CH2 C C CH3 C C CH3 C C CH3 1’ 39,8 39,8 CH2 2' 3', 5', 21,1 37,3 - 37,5 21,1 37,3 – 37,5 CH2 CH2 − 1,23 s 1,78 m 2,60 t (7,0) − − 2,11 s − − 2,16 s − − 2,11 s 1,54 m 1,41 m 1,43 m 1,08 – 1,25 m 7', 9' 4', 8' 32,8 32,8 CH 1,39 – 1,40 d CH3 (6,5) 0,84 – 0,85 d CH2 CH2 (6,5) 1,92 m 1,28 m 4'a, 8'a 6' 10' 19,8 24,5 24,8 19,8 24,5 24,8 11' 12' 12'a 13' 39,4 39,4 CH2 1,05 m 28,0 28,0 CH 1,53 d (6,5) 22,6 22,6 CH3 0,87 d (6,5) 22,7 22,7 CH3 0,87 d (6,5) (#) ($) a b c δC, δH α-tocopherol [4], đo CDCl3, 125 MHz, 500 MHz Thông qua tương tác HMBC H-5a (δH 2,11) với C-5 (δC 118,5); C-4a (δC 117,4); C-6 (δC 144,5) tương tác H-8b (δH 2,11) với C-7 (δC 121,0); C-8 (δC 122,6); C-8a (δC 145,6) chứng tỏ nhóm hydroxyl, nhóm metyl vị trí 6, 5, 7, 8, Tương tự với tương tác mạch nhánh H-4’a (δ H 0,84) với C-3’ (δC 37,3-37,5); C-4’ (δC); C-5’ (δC 37,3-37,5); với tương tác H-8’a (δH 0,85) với C-7’ (δC 37,3-37,5); C-8’ (δC 32,8); C-9’ (δC 37,3-37,5); H-12’a (δH 22,6) với C-11’(δC 39,4); C-12’ (δC 28,0); C-13’ (δC 22,7), H-13’(δH 0,87) với C-11’ (δC 39,4); C-12’ (δC 28,0); C-12’a (δC 22,6) cho thấy nhóm metyl vị trí 4’, 8’, 12’ Hình 3.5 Các tương tác HMBC (H→C) hợp chất Từ phân tích nêu phù hợp số liệu phổ hợp chất với tài liệu công bố [4], cho phép xác định cấu trúc hóa học hợp chất αtocopherol Hình 3.6 Cấu trúc hóa học α-tocopherol (C29H50O2) 3.3.2 Hợp chất (ACC6) Hợp chất E5A3C1 phân lập dạng dầu, màu trắng, tan tốt axeton Phổ 1H-NMR đưa tín hiệu cộng hưởng nhóm metyl gắn với carbon không liên kết với hydro δH 2,02 s; 1,83 s; 1,82 s; 1,05 s với nhóm metyl mạch nhánh δH 0,87 d (7,0); 0,87 d (7,0); 0,85 d (7,0); 0,84 d (6,5) Một nhóm hydroxyl vị trí δH 4,17 s (-OH) Phổ 13C-NMR, DEPT xuất tín hiệu cho thấy có 29 nguyên tử carbon gồm 11 nhóm metylen, nhóm metyl, nhóm metin, carbon không liên kết với hydro Các tín hiệu carbon gán với tín hiệu proton tương ứng thông qua phổ HSQC Bảng 3.7 Số liệu phổ NMR hợp chất chất tham khảo [5] C δ C(#)(chất chuẩn) δ Ca, b(Chất phân tích) 3a 5a 6a 9a 10 11 12, 14, 204,9 92,2 207,1 24,8 89,1 163,0 11,5 139,3 8,7 32,8 36,2 87,0 25,4 41,5 22,4 37,3 - 37,5 204,9 92,2 207,1 24,9 89,1 163,0 11,8 139,3 8,7 32,9 36,2 87,0 25,5 41,5 22,5 37,3 – 37,6 DEP T C C C CH3 C C CH3 C CH3 CH2 CH2 C CH3 CH2 CH2 CH2 δ Ha, c (J, Hz) − − − 2,02 s − − 1,82 s − 1,83 s − − − 1,05 s − − − 16, 18 13 32,8 32,7 CH − 17 32,8 32,8 CH − 13a 19,7 19,7 CH3 0,85 d (7) 17a 19,7 19,8 CH3 0,84 d (6,5) 15 24,8 24,8 CH2 − 19 24,5 24,5 CH2 − 20 39,3 39,4 CH2 − 21 28,0 28,0 CH − 21a 22,7 22,7 CH3 0,87 d (7) 22 22,6 22,6 CH3 0,87 d (7) (#) ($) a b c δC, δH α-tocospiro A [5], đo CDCl3, 125 MHz, 500 MHz Thông qua tương tác HMBC δH 4,17 s với C-4 (δC ), C-5 (δC ) tương tác H-5a (δH 1,82) với C-5 (δC 163,0), C-6 (δC 139,3), H-6a (δC 1,83) với C-1 (δC 204,9), C-5 (δC 163,0), C-6 (δC 139,3), H-9a (δC 1,05) với C-9 (δC 87,0), C-10 (δC 41,5), C-8 (δC 36,2) chứng tỏ nhóm hydroxyl, nhóm metyl vị trí 4, 5, 6, Mặt khác tương tác H-3a (δH 2,02) với C-3 (δC 207,1), C-4 (δC 89,1 ) tồn nhóm axetyl Tương tự với tương tác mạch nhánh H-13a với C-14 (δC 37,3-37,6), C-12 (δC 37,3-37,6), C-13 (δC 32,7), H-17a với C-16 (δC 37,3-37,6), C-18 (δC 37,3-37,6), C-17 (δC 32,8), H-21a (δH 0,87) với C-20 (δC 39,4), C-21 (δC 28,0), C-22 (δC 22,6), H-22 (δH 0,87) với C-20 (δC 39,4), C-21 (δC 28,0) cho thấy nhóm metyl vị trí 13, 17, 21 Hình 3.7 Các tương tác HMBC (H→C) hợp chất Từ phân tích nêu phù hợp số liệu phổ hợp chất với tài liệu công bố [5], cho phép xác định cấu trúc hóa học hợp chất αtocospiro A Hình 3.8 Cấu trúc hóa học E5A3C1 (C29H50o4) α-tocopherol α-tocospiro A hợp chất lần phân lập từ Mán đỉa α-tocopherol vitamin E biết chất kháng oxy hóa quan trọng nhất, chất ức chế tự nhiên peroxy lipit thể [5] , làm giảm nguy mắc bệnh tim mạch, ung thư α-tocospiro A biết đến với khả kháng khuẩn, kháng viêm, Các kết đạt mở triển vọng cần thiết cho nghiên cứu thành phần hoá học tác dụng dược lý loài để ứng dụng việc tìm kiếm hoạt chất có tác dụng phòng chữa bệnh cho người KẾT LUẬN Qua trình thực nghiệm, đề tài thu kết sau đây: Về hoạt tính kháng oxy hóa Mán đỉa: Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa cao toàn phần cao phân đoạn từ Mán đỉa kết có phân đoạn cao clorofom cao etyl axetat có hoạt tính kháng oxy hóa cao tương đương với chất đối kháng curcumin Về chiết xuất phân lập hợp chất tinh khiết: Đã phân lập hợp chất tinh khiết dạng dầu màu trắng tan tốt axeton từ phân đoạn clorofom Bằng phương pháp phân tích liệu phổ, đối chiếu với phổ chuẩn xác định hai hợp chất phân lập là: - α-tocopherol (C29H50O2) - α-tocospiro A (C29H50O4) KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu hợp chất có phân đoạn lại Mán đỉa - Archidendron clypearia (Jack) I Niels - Nghiên cứu sâu hoạt tính sinh học khác phân đoạn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt [1] Nguyễn Tiến Bân (2000), Thực vật chí Việt Nam, tập 1, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, – 8, 45 – 59 [2] Bộ môn Dược liệu (2007), Bài giảng dược liệu, tập 2, Trường Đại học Dược Hà Nội, Nhà xuất Y học, Hà Nội [3] Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam – Lần xuất thứ tư, Nhà xuất Y học, Hà Nội [4] Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nhà xuất Y học, Thành phố Hồ Chí Minh, 19 – 23, 43 – 52, 58 – 74, 243 – 283 [5] Nguyễn Thị Hoài, Trịnh Thị Điệp, Đỗ Thị Thảo, Nguyễn Khánh Thùy Linh, Nguyễn Bích Hiền, Hoàng Thị Diệu Hương (2012), “Sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa số thuốc đồng bào Pako- Vân Kiều Quảng Trị”, Tạp chí Dược liệu, tập 17 (số 1), 8-13 [6] Nguyễn Thị Hoài (2005), Khảo sát kinh nghiệm sử dụng thuốc nam người dân tộc Vân Kiều huyện Đakrong, Tây Nguyên, Tạp chí Y học thực hành, số 12, 32 – 36 [7] Phạm Hoàng Hộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, I, 815-837, Nhà xuất Trẻ, Hà Nội [8] Nguyễn Khánh Thùy Linh (2013), Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng sinh học Mán đỉa (Archidendron clypearia (Jack) I.Niels mimosaceae), Luận văn thạc sĩ Khoa Dược, Trường Đại học Dược Hà Nội [9] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Các phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất Đại học Quốc Gia, Thành phố Hồ Chí Minh, số 8, 156 – 157 [10] Nguyễn Thị Phương Thảo, Ninh Khắc Bản, Jacinto Regalado, Bùi Văn Thanh (2007), Điều tra kinh nghiệm sử dụng thực vật Dân tộc Cơ-Tu Nam Đông, Tỉnh Thừa Thiên Huế, Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái tài nguyên sinh vật lần thứ 2, số 1, 105 – 109 [11] Nguyễn Duy Thuần (2006), Chiết xuất dược liệu – Nghiên cứu thuốc từ thảo dược (Giáo trình sau Đại học), Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 199 – 222 [12] Đào Đình Thức (2007), Một số phương pháp phổ ứng dụng hóa học, Nhà xuất Đại học Quốc gia, Hà Nội, 177 – 217, 311 – 316 Tiếng Anh [13] Ayse Karadag, Beraat Ozcelik, Samim Saner (2009), “Review of Methods to Determine Antioxidant Capacities’’, Food Anal Methods, 2, 41 – 60 [14] Bao L., Yao X., Xu J., Guo X., Liu H., Kurihara H.(2009), “Effects of Pithecellobium clypearia Benth extract and its main components on inflammation and allergy”, Fitoterapia, 80(6), 349-353 [15] Beutler J.A., Kashman Y., Pannell L.K., Cardellina J.H., Alexander M.R., Balaschak M.S., Prather T.R., Shoemaker R.H., Boyd M.R.(1997), “Isolation and characterization of novel cytotoxic saponins from Archidendron ellipticum”, Bioorg Med Chemistry, 5(8), 1509-1517 [16] Chattopadhyay I., Biswas K., Bandyopadhyay U., and Banerjee R K.(2004), Turmeric and curcumin: Biological actions and medicinal applications Current Science, 87, 44 – 45 [17] Denise de Castro Ferreira Gomes and Leila Vilela Alegrio (1998), “Acyl steryl glycosides from Pithecellobium cauliflorum”, Phytochemistry, 49(5), 1365-1367 [18] De Pinto, GL; Martinez M., Ocando E., Rivas C (2001), “Relevant structural features of the polysaccharide from Pithecellobium mangense gum exudates”, Carbohydrate Polymers, 261-266 [19] Halliwell B., Murcia M.A., Chirico S., Aruoma O.I (1995), “Free radicals and antioxidants in food and in vivo: what they and how they work” Crit Rev Food Sci Nutr., 35(1,2), – 20 [20] Helmut Ripperger, Alfred Preiss, Jurgen Schmidt (1981), “O(3)-(2acetylamino-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl)-oleanolic acid, a novel triterpenoid glycoside from two Pithecellobium species”, Phytochemistry, 20(10), 2434-2435 [21] Khan I.A., Clark A.M., McChesney J.D (1997), “Antifungal activity of a new triterpenoid glycoside from Pithecellobium racemosum (M.)”, Pharmaceutical Research, 14(3), 358-361 [22] Le Hoang Lam, T Shimamura, K Sakaguchi, K Noguchi, M Ishiyama, Y Fujimura and H Ukeda (2007), “Assay of angiotensin I–converting enzyme– inhibiting activity based on the detection of 3–hydroxybutyric acid”, Analytical Biochemistry, 364, 104 – 111 [23] Leung K.T., Chiu L.C., Lam W.S., Li Y., Sun S.S., Ooi V.E.(2006), “In vitro antiviral activities of Chinese medicinal herbs against duck hepatitis B virus”, Phytother Research, 20(10), 911 – 914 [24] Li Y., Ooi L.S., Wang H., But P.P., Ooi V.E (2004), “Antiviral activities of medicinal herbs traditionally used in southern mainland China”, Phytother Research, 18(9), 718-722 [25] Li Y., Leung K.T., Yao F., Ooi L.S., Ooi V.E (2006), “Antiviral flavans from the leaves of Pithecellobium clypearia”, Journal Natural Products, 69(5), 833 – 835 [26] Li Y.L., Li K.M., Su M.X., Leung K.T., Chen Y.W., Zhang Y.W.(2006), “Studies on antiviral constituents in stems and leaves of Pithecellibium clypearia”, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 31(5), 397-400 [27] Ma S.G., Hu Y.C., Yu S.S., Zhang Y., Chen X.G., Liu J., Liu Y.X.(2008), “Cytotoxic triterpenoid saponins acylated with monoterpenic acid from Pithecellobium lucidum”, Journal Natural Products, 71(1), 41-46 [28] Mark Percival (1998), “Antioxidants”, Advanced Nutrition Publication [29] Megala J., Geetha A.(2010), “Free radical-scavenging and H+, K+-ATPase inhibition activities of Pithecellobium”, Food Chemistry, 1120-1128 [30] Mena-Rejón G.J., Sansores-Peraza P., Brito-Loeza W.F., Quijano L.(2008), “Chemical constituents of Pithecellobium albicans”, Fitoterapia, 79(5), 395-397 [31] Min-Won Lee, Satoshi Morimoto, Gen-Ichiro Nonaka, Itsuo Nishioka (1992), “Flavan-3-ol gallates and proanthocyanidins from Pithecellobium lobatum”, Phytochemistry, 31(6), 2117-2120 [32] Muslim N.S., Nassar Z.D., Aisha A.F., Shafaei A., Idris N., Majid A.M., Ismail Z.(2012), “Antiangiogenesis and antioxidant activity of ethanol extracts of Pithecellobium jiringa”, BMC Complement Altern Med, 12, 210 [33] Nigam SK, Gopal M, Uddin R, Yoshikawa K, Kawamoto M, Arihara S (1997), “Pithedulosides A-G, oleanane glycosides from Pithecellobium dulce”, Phytochemistry, 44(7), 1329 – 1334 [34] Pal P.B., Pal S., Manna P., Sil P.C.(2012), “Traditional extract of Pithecellobium dulce fruits protects mice against CCl4 induced renal oxidative impairments and necrotic cell death”, Pathophysiology, 19(2), 101-114 [35] Ren–You Gan, Xiang–Rong Xu, Feng–Lin Song, Lei Kuang and Hua–Bin Li (2010), “Antioxidant acitivity and total phenolic content of medicinal plants associated with prevention and treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases”, Journal of Medicinal Plants Research, 4(22), 2438 – 2444 [36] Sahu N.P., Mahato S.B.(1994), “Anti-inflammatory triterpene saponins of Pithecellobium dulce: characterization of an echinocystic acid bisdesmoside”, Phytochemistry, 37(5), 1425-1427 [37] Saxena V.K., Madhuri Singhal (1999), “Novel prenylated flavonoid from stem of Pithecellobium dulce”, Fitoterapia, 70(1), 98-100 [38] Sarinya Charungchitrak, Amorn Petsom, Polkit Sangvanich, Aphichart Karnchanatat (2011), “Antifungal and antibacterial activities of lectin from the seeds of Archidendron jiringa Nielsen”, Food Chemistry,1025-1032 [39] Shukri R., Mohamed S., Mustapha N.M., Hamid A.A (2011), “Evaluating the toxic and beneficial effects of jering beans (Archidendron jiringa) in normal and diabetic rats”, Joural of science of Food and Agriculture, 91(14), 2697-2706 [40] Srour MA, Bitto YY, Juma M (2000), “Evaluation of different methods used to measure malonydialdehyde in human erythrocytes”, Clin Henorhecol Microcirc, 23(1), 23 – 30 [41] Su M.X., Tang Z.Y., Huang W.H., Li Y.L., Cen Y.Z (2009), “Studies on the chemical comstituents of Pithecellobium clypearia”, Zhong Yao Cai, 32(5), 705-707 [42] Wei Xiang, Bei Jiang, Xu-Mei Li, Hong-Jie Zhang, Qin-Shi Zhao, ShengHong Li, Han-Dong Sun (2002), “Constituents of Gnetum montanum”, Fitoterapia, 73(1), 40-42 [43] Xie C.Y., Lin L.W (2011), “Study on the chemical constituents of Pithecellobium clypearia”, Zhong Yao Cai, 34(7), 1060-1062 [44] Yang W.S., Jeong D., Nam G., Yi Y.S., Yoon D.H., Kim T.W., Park Y.C., Hwang H., Rhee M.H., Hong S., Cho J.Y (2013), “AP-1 pathway-targeted inhibition of inflammatory responses in LPS-treated macrophages and EtOH/HCltreated stomach by Archidendron clypearia methanol extract”, Journal of Ethnopharmacology, 146, 637-644 [45] Yun–Zhong Fang, Sheng Yang, and Gouyao Wu, PhD (2002), Free Radicals, Antioxidants, and Nutrition, Regulation of physiological, Systems by netrients, 18(10), 872 – 879 [46] Zhivko velkov (2009), “Quantum – chemical Approach to the Modeling of Antioxidant Activity (Theoretical descriptors of antioxidants)”, Scientific Research Journal of South – West University, 2(1), 41 – 45 Tài liệu Internet [47] http://en.wikipedia.org/wiki/Ascorbic_acid (10/07/15) [48] http://en.wikipedia.org/wiki/Butylated_hydroxytoluene (20/07/15) [49] http://en.wikipedia.org/wiki/Gallic_acid (20/08/15) PHỤ LỤC HỢP CHẤT (ACC11) - 1H - 13C - DEFT - HBMC - HSQC PHỤ LỤC HỢP CHẤT (ACC6) - 1H - 13C - DEFT - HBMC - HSQC [...]... xay thành bột thô và bảo quản nơi khô thoáng Hình 2.1 Hình ảnh cây Mán đỉa 2.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Mán đỉa Archidendron clypearia (Jack) I Niels thu thập theo định hướng kháng oxy hóa bảo vệ gan 2.3 Cách tiếp cận và nội dung nghiên cứu 2.3.1 Cách tiếp cận - Thử nghiệm hoạt tính kháng oxy hóa của cao toàn phần, các cao phân đoạn và chất phân lập được từ cây Mán đỉa. .. VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nghiên cứu hoạt tính kháng oxy hóa của cây Mán đỉa- Archidendron clypearia (Jack) I Niels 3.1.1 Kết quả sàng lọc in vitro hoạt tính kháng oxy hóa- bảo vệ gan của cao toàn phần và các cao phân đoạn Dựa trên kết quả sàng lọc hoạt tính các cây thuốc của đồng bào Pako ở miền Trung Việt Nam theo định hướng tác dụng kháng oxy hóa- bảo vệ gan, Mán đỉa là cây thuốc có hoạt tính kháng oxy hóa. .. Từ phân đoạn có hoạt tính kháng oxy hóa tốt, tiến hành phân lập các cấu tử và xác định công thức cấu tạo của các cấu tử phân lập được 2.3.2 Nội dung nghiên cứu - Chiết xuất cao toàn phần metanol và các cao phân đoạn có độ phân cực tăng dần - Đánh giá khả năng kháng oxy hóa của cao toàn phần và các cao phân đoạn + Sàng lọc in vitro hoạt tính kháng oxy hóa bảo vệ gan của cao toàn phần và các cao phân... hay tiêu hóa kém [1] b Hoạt tính sinh học và tác dụng dược lý Cho đến nay, các nghiên cứu về tác dụng dược lý của Mán đỉa chủ yếu của Trung Quốc với một số tác dụng đã được chứng minh như điều trị viêm dạ dày, chống viêm, chống dị ứng và kháng virus - Tác dụng kháng viêm Mán đỉa được coi như là một cây thuốc cổ truyền trong việc điều trị các bệnh viêm nhiễm khác nhau Dịch chiết metanol của Mán đỉa thể... khả năng kháng oxy hóa bằng phương pháp lực kháng oxy hóa khử Mo(VI) về Mo(V) + Đánh giá khả năng kháng oxy hóa bằng phương pháp bắt gốc tựu do DPPH - Phân lập và xác định công thức hóa học của một số cấu tử đã phân lập 2.4 Hóa chất và thiết bị nghiên cứu, nguyên liệu và mẫu động vật thí nghiệm 2.4.1 Hóa chất và thiết bị 2.4.1.1 Hóa chất Các hóa chất sử dụng trong quá trình nghiên cứu đạt yêu cầu theo... độ phát huỳnh quang thay đổi Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Phần trên mặt đất của cây Mán đỉa được TS Nguyễn Thế Cường, Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, xác định tên khoa học là Archidendron clypearia (Jack) I Niels Mẫu được thu hái tại huyện Đakrông, tỉnh Quảng Trị vào tháng 6/2013 Sau khi thu mẫu, nguyên liệu... hình in vitro, cao toàn phần metanol và các cao phân đoạn chiết từ cây Mán đỉa (Archidendron clypearia) đều thể hiện kết quả hoạt tính kháng oxy hóa rất tương thích với nhau và trong nhiều trường hợp, tốt hơn cả curcumin Đây là cơ sở cho các bước nghiên cứu tiếp theo của chúng tôi 3.2 Nghiên cứu quy trình chiết xuất và phân lập một số cấu tử 3.2.1 Quy trình chiết xuất Mẫu Mán đỉa (5,0 kg) bột khô được... hai cổ nhám, ống sinh hàn, bình gạn, bình chạy sắc ký Bếp điện, tủ sấy Memmert, máy cô quay Yamato, bình chiết, máy lọc hút chân không 2.4.2 Nguyên liệu và mẫu động vật thí nghiệm Phần trên mặt đất của cây Mán đỉa được lấy ở huyện Đakrông, tỉnh Quảng Trị Nguyên liệu cây Mán đỉa (Archidendron clypearia) được các cán bộ của Viện Sinh thái và Tài nguyên Sinh vật, Viện hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt... nhận tên khoa học Sau khi rửa sạch, loại bỏ phần hư hỏng, sấy khô ở 50 0C, xay thành bột nguyên liệu Chuột nhắt trắng, khoẻ mạnh khoảng 8 tuẩn tuổi, nặng 25-30 gam được nuôi ở khu nuôi động vật của Viện Công nghệ sinh học, Viện hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam bằng thức ăn và nước uống tiêu chuẩn 2.5 Phương pháp nghiên cứu 2.5.1 Phương pháp xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu 2.5.1.1 Lấy... 1.1.6.1 Hoạt tính sinh học của loài Archidendron clypearia a Công dụng Mán đỉa được sử dụng làm thuốc ở nhiều nước trên thế giới Ở Trung Quốc, lá Mán đỉa là vị thuốc y học cổ truyền dùng để trị đau họng, đau thượng vị, tiêu chảy nhiệt, đắp trên vết thương trị bỏng lửa, bỏng nước, sưng nhọt, ghẻ lở [27] Ở Ấn Độ và Malaixia, lá được dùng trị đau chân, sưng tấy, thủy đậu, ho và đậu mùa Ở Lào, lá Mán đỉa phơi