Trần văn quang nghiên cứu kỹ thuật bào chế, đánh giá khả kháng khuẩn in vitro chế phẩm kem Silver sulfa 1% Ngời hớng dẫn : TS Nguyễn Thị Lộc Đặt vấn đề Bỏng bệnh ngoại khoa quan trọng Để điều trị bỏng chế phẩm sulfadiazin bạc có nhiều u điểm đợc chứng minh lâm sàng Viêc cung ứng thuốc có khó khăn Các mục tiêu cụ thể khóa luận : Nghiên cứu kỹ thuật bào chế kem Silver sulfa 1% Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất chế phẩm Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn in vitro có so sánh với với chế phẩm Silvirin 1% (ấn Độ) Phần I Tổng quan tài liệu Tỷ lệ mắc bệnh bỏng Thời bình : 1,8% - 10% so với chấn thơng ngoại khoa Trong chiến tranh : 3% - 10% tổng số thơng binh lên tới 70% - 85% Thuốc mỡ sát khuẩn điều trị vết bỏng chỗ * Kem maduxin;* Mỡ cao vàng;* Damcream * Chế phẩm chứa hoạt chất sulfadiazin bạc nh : Sivadene (Mỹ), Flammazin (Pháp), Silvirin (ấn Độ), Slivin (Pakistan) chế phẩm thuốc mỡ có hoạt chất sulfadiazin bạc 3.1 Công thức hoá học Sulfadiazin bạc muối bạc N1- pyrimidin - yl - sulfanilamid (AgC10H9N4O2S) KLPT = 357,1 Độ hoà tan nớc < 1/10.000 O H2N S N(6) N(1) N(2) O(2) Ag Hình : Công thức hoá học sulfadiazin bạc 3.2 Cơ chế tác dụng * sulfadiazin có tác dụng kìm khuẩn: cạnh tranh ức chế với PABA * Ion bạc: Ion bạc chuyển cầu nối nitơ thuộc nhân purin đối diện Do làm khả sinh sản phân đôi vi khuẩn Phối hợp: nhân pyrimidin dễ dàng làm vận chuyển ion bạc qua màng vi khuẩn * Cơ chế tác dụng khác với hợp chất bạc khác, khác với sulfadiazin đơn độc 3.3 Tác dụng kháng khuẩn Bảng 1: Khả kháng khuẩn invitro sulfadiazin bạc Nồng độ sulfadiazin bạc Họ loài 50 g/ml 100 g/ml 130/130 130/130 E cloacae 24/24 24/24 Klebsiella pneumoniae 53/54 54/54 Escherichia coli 63/63 63/63 100/101 101/101 S epidermidis 51/51 51/51 Enterococus (nhóm D) 52/53 52/53 Candia albicans 43/50 50/50 Ps Aeruginosa S aureus 3.4 Hấp thu thuốc * Các nghiên cứu hấp thu với Ag111 cho thấy hầu hết thuốc tích tụ lớp biểu bì (có tác dụng chỗ) Khoảng 10% lợng sulfadiazin bôi chỗ đợc hấp thu Để đo sulfadiazin chất chuyển hoá đặc hiệu cần dùng phơng pháp HPLC * Lợng bạc đợc hấp thu thể khoảng dới 1% Đo quang phổ hấp phụ nguyên tử 3.5 Những u điểm điều trị lâm sàng - Có phổ kháng khuẩn rộng - Có thể làm mềm mô bỏng đông cứng - Không gây đau bôi - Không gây rối loạn điện giải hay kiềm toan - Không làm bẩn y phục hay vải trải giờng Phần II Vật liệu phơng pháp nghiên cứu Vật liệu trang thiết bị 1.1 Vật liệu hoá chất - Bạc sulfadiazin đạt tiêu chuẩn USP 24 - Các tá dợc cần thiết đạt tiêu chuẩn DĐVN III - Các chất bảo quản, chất chống ôxy hoá đạt tiêu chuẩn DĐVN III - Các dung môi dùng cho SKLM, HPLC-pp - Màng nhân tạo cellophan - Các hoá chất khác cần thiết 1.2 Dụng cụ, trang thiết bị - Cân phân tích độ xác 0,1mg Trung Quốc - Máy ly tâm Nhật Bản - Tủ điều nhiệt giữ đợc nhiệt độ 400C, Trung Quốc - Bản mỏng Silicagel 60 F254 ,VKN cung cấp - Đèn huỳnh quang soi bớc sóng 254 nm - Thạch Muller - Hinton - Các chủng vi khuẩn: S aureus, P aeruginosa, E coli - Dụng cụ nghiên cứu khả giải phóng dợc chất khỏi tá dợc thuốc mỡ - Máy sắc ký lỏng cao áp hiệu cao Shimadzu - Các dụng cụ cần thiết khác phòng thí nghiệm CT Sulfadiazin bạc 1,0g Sorbitan stearat 1,4g Polysorbat 80 0,6g Alol cetostearic 6,5g Triglycorides 11,0g Glycrol 0,4g Chất bảo quản 0,5g Nớc tinh khiết vđ 100ml CT 3: Sulfadiazin bạc 1,0g Alcol cetostearic 8,0g Glycerin monostearat 0,4g Vaselin 6,0g Paraffin 0,5g Tween 60 0,6g Chất bảo quản 0,2g Nớc tinh khiết vđ 100ml CT 4: Sulfadiazin bạc Alcol stearylic Sáp ong Tween 80 Span 80 Sorbitol Chất bảo quản Nớc tinh khiếtvđ CT 5: Sulfadiazin bạc Alcol cetylic Dầu paraffin Glycerol stearat Polysorbat 80 Glycol propylen Chất bảo quản Nớc tinh khiết vđ 1,0g 15,0g 8,0g 3,8g 1,2g 8,0g 0,2g 100ml 1,0g 3,0g 20,0g 2,9g 3,1g 7,0g 0,2g 100ml Lựa chọn chất chống oxy hoá Bảng 2: Hiệu lực bảo vệ chống ôxy hoá natri bisulfit Thời điểm t0 t1 t2 t3 0,05% - - + 0,10% - - - + 0,15% - - - - Hàm lượng Chọn chất chống ôxy hoá natri bisulfit , hàm lợng 0,15%, Kết nghiên cứu sơ độ bền vững Bảng 3: Kết nghiên cứu sơ độ ổn định Điều kiện CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 ĐK ++ - + ++ - ĐK ++ - - +++ ++ Chọn công thức: CT2, CT3, CT5 để đo giải phóng hoạt chất qua màng Kết đo giải phóng hoạt chất 3.1 Kết định tính hoạt chất giải phóng qua màng: Bảng 4: Kết định tính SKLM Thời điểm lấy mẫu CT2 CT3 CT5 30 phút - - - 60 phút + + - 90 phút + ++ + Chọn thời điểm t1 = 90phút, t1 =120phút, t3 =180phút, t 4=360 phút để đo lợng hoạt chất giải phóng qua màng HPLC 3.2.Kết định lợng dợc chất giải phóng qua màng 3.2.1 Kết xây dựng đờng chuẩn - Sắc ký đồ dung môi cốt tá dợc - Các đờng chuẩn: + Chuẩn 1: nồng độ hoạt chất 2,12g/ml + Chuẩn 2: nồng độ hoạt chất 5,30g/ml + Chuẩn 3: nồng độ hoạt chất 10,60g/ml Kết đợc phơng trình tuyến tính y = 5,9118.e - 0,06.x + Hệ số tơng quan r = 0,999833 Cho thấy có tơng quan chặt chẽ diện tích pic nồng độ 3.2.2.Nhận biết pic sulfadiazin bạc Sử dụng hệ thống HPLC kết hợp detecter diode array: - Thời gian lu tR - Hệ số Match =1 3.2.3 Tính nồng độ dợc chất giải phóng qua màng *Kết tính nồng độ dợc chất giải phóng qua màng: Bảng 5: Nồng độ dợc chất giải phóng qua màng theo thời gian CT3(n = 5;SD = 0,0018) Các thời điểm tR (giây) S(mAU) Nồng độ (g/ml) t1 3,389 626244 3,138 t2 3,448 974704 4,912 t3 3,517 1055665 5,320 t4 3,408 1692586 8,532 *Tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua màng: Công thức tính tỷ lệ% dợc chất giải phóng qua màng: 250C 25C x% 100 3.10 30 Bảng 6: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng CT theo thời gian t CT2 CT3 CT5 t1 1,198 2,614 1,488 t2 2,567 4,093 2,766 t3 3,566 4,459 3,650 t4 4,816 7,111 6,285 80 70 60 50 CT2 40 CT3 30 CT5 20 10 90 120 180 360 Hình 6: Đồ thị so sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng CT theo thời gian (các tỷ lệ % đợc gấp lên 10 lần) Chọn CT3 để xác định khả kháng khuẩn invitro Bảng 7: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng Silvirin 1% theo thời gian(n = 5;SD = 0,0018) Thời gian tR S(mAU) C x% t1 3,460 628819 3,002 2,502 t2 3,358 657693 4,831 4,026 t3 3,448 1048732 5,017 4,182 t4 3,444 1328906 7,544 6,287 Bảng 8: So sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng CT3 với Silvirin 1% theo thời gian Nồng độ giải phóng qua màng (x%) Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua màng CT3 / Silvirin 1% CT3 Silvirin 1% 2,614 2,502 1.045 4,093 4,026 1.017 4,459 4,182 1.043 7,111 6,287 1.131 Khả giải phóng hoạt chất qua màng CT3 Silvirin 1% tơng đơng Kết đo kháng khuẩn invitro Bảng 9:So sánh khả khuẩn invitrô CT3 Silvirin 1% Vi khuẩn S.aureus P.aeruginosa E.coli Đường kính vùng ức chế (mm) CT3 Silvirin 1% 10 10 6 12 10 Kết kháng khuẩn invitrô CT3 Silvirin 1% tơng đơng Kết luận - Đã xây dựng đợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn định bền vững điều kiện bình thờng ổn định điều kiện khắc nghiệt - Khả giải phóng hoạt chất qua màng CT3 Silvirin 1% tơng đơng Nh kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá dợc không cản trở khả giải phóng hoạt chất kem - Khả kháng khuẩn CT3 tơng đơng với Silvirin 1% invitro Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu tính chất khác kem Silver sulfa 1%: * Nghiên cứu độ ổn định lâu dài * Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất kháng khuẩn invivo * Nghiên cứu độc tính cấp trờng diễn * Nghiên cứu hiệu lực điều trị kem Xin chân thành cảm ơn quý vị đại biểu thầy cô giáo toàn thể bạn sinh viên! [...]... đơng nhau Nh vậy kem Silver sulfa 1% có độ giải phóng hoạt chất tốt, cốt tá dợc không cản trở khả năng giải phóng hoạt chất của kem - Khả năng kháng khuẩn của CT3 là tơng đơng với Silvirin 1% trên invitro Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu các tính chất khác của kem Silver sulfa 1%: * Nghiên cứu độ ổn định lâu dài * Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất và kháng khuẩn trên invivo * Nghiên cứu độc tính cấp... màng của CT3 với Silvirin 1% theo thời gian Nồng độ giải phóng qua màng (x%) Tỷ lệ nồng độ giải phóng qua màng CT3 / Silvirin 1% CT3 Silvirin 1% 2,614 2,502 1.045 4,093 4,026 1.017 4,459 4,182 1.043 7,111 6,287 1.131 Khả năng giải phóng hoạt chất qua màng của CT3 và Silvirin 1% là tơng đơng 5 Kết quả đo kháng khuẩn trên invitro Bảng 9:So sánh khả năng khuẩn trên invitrô giữa CT3 và Silvirin 1% Vi khuẩn. .. ngay sau khi bào chế t1 sau khi bào chế 1 ngày, t2 sau khi bào chế 3 ngày, t3 sau khi bào chế 7 ngày - Phơng pháp đánh giá : xem xét sự thay đổi màu sắc Chuẩn bị tá dợc Chuẩn bị dợc chất Làm thuốc mỡ đặc Phối hợp tá dợc Kiểm nghiệm bán thành phẩm Làm đồng nhất Kiểm nghiệm thành phẩm Đóng lọ, dán nhãn Hình 5: Sơ đồ quy trình bào chế kem Silver sulfa 1% 2.3.2 (Bớc 2): Nghiên cứu sơ bộ độ bền vững - Điều... P.aeruginosa E.coli Đường kính vùng ức chế (mm) CT3 Silvirin 1% 10 10 6 6 12 10 Kết quả kháng khuẩn trên invitrô giữa CT3 và Silvirin 1% là tơng đơng Kết luận - Đã xây dựng đợc công thức kem Silver sulfa 1% (CT3) có hình thức cảm quan đạt yêu cầu, có độ ổn định bền vững trong điều kiện bình thờng vì đã ổn định trong điều kiện khắc nghiệt - Khả năng giải phóng hoạt chất qua màng của CT3 và Silvirin 1%... Phơng pháp nghiên cứu 2.1 Định tính hoạt chất *Định tính Sulfadiazin - Theo DĐVN I:Dùng phơng pháp SKLM : + Hệ dung môi triển khai : Methanol : NH4OHđặc = 100 : 1,5 +Thể tích chấm 10l + Soi đèn huỳnh quang ở bớc sóng 254nm + Giá trị Rf chuẩn : 6,4 2.2 *Định lợng sulfadiazin bạc trong kem Phơng pháp đo nitrit : 1 ml natri nitrit 35,71mg sunfadiazin bạc 2.3 Các bớc nghiên cứu mô hình kem Silver sulfa 1%... Xây dựng các công thức bào chế NC sơ bộ độ bền vững Loại bớt CT kém bền vững Kiểm tra độ giải phóng hoạt chất trên invitro Loạibớt CT có độ giải phóng kém Kiểm tra độ kháng khuẩn Hình 4: Các bớc nghiên cứu mô hình kem Sliver sulfa 1% 2.3.1 (Bớc 1): Xây dựng các công thức bào chế * Xây dựng các công thức cốt tá dợc + Trong tất cả các công thức sử dụng chất bảo quản là hỗn hợp nipagin: nipason =95: 5 +... vđ 100ml CT 3: Sulfadiazin bạc 1,0g Alcol cetostearic 8,0g Glycerin monostearat 0,4g Vaselin 6,0g Paraffin 0,5g Tween 60 0,6g Chất bảo quản 0,2g Nớc tinh khiết vđ 100ml CT 4: Sulfadiazin bạc Alcol stearylic Sáp ong Tween 80 Span 80 Sorbitol Chất bảo quản Nớc tinh khiếtvđ CT 5: Sulfadiazin bạc Alcol cetylic Dầu paraffin Glycerol stearat Polysorbat 80 Glycol propylen Chất bảo quản Nớc tinh khiết vđ 1,0g... vô khuẩn xung quanh lỗ thử và lỗ chứng Phần III Kết quả và bàn luận 1 Kết quả xây dựng công thức bào chế Xây dựng công thức: CT 1: Sulfadiazin bạc 1,0g Acid stearic 24,0g Triethanolamin 1,0g Glycerin 13,0g Chất bảo quản 0,50g Nớc tinh khiết vđ 100ml CT 2 Sulfadiazin bạc 1,0g Sorbitan stearat 1,4g Polysorbat 80 0,6g Alol cetostearic 6,5g Triglycorides 11,0g Glycrol 0,4g Chất bảo quản 0,5g Nớc tinh... 60 50 CT2 40 CT3 30 CT5 20 10 0 90 120 180 360 Hình 6: Đồ thị so sánh tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng của các CT theo thời gian (các tỷ lệ % đều đợc gấp lên 10 lần) Chọn CT3 để xác định khả năng kháng khuẩn trên invitro Bảng 7: Tỷ lệ % hoạt chất đợc giải phóng qua màng của Silvirin 1% theo thời gian(n = 5;SD = 0,0018) Thời gian tR S(mAU) C x% t1 3,460 628819 3,002 2,502 t2 3,358 657693 4,831... tâm thuốc mỡ mới bào chế trong vòng 5 phút với tốc độ 600v/phút ở nhiệt độ 20 10C Quan sát sự phân lớp của thuốc mỡ - Điều kiện2: Đặt thuốc mỡ ở 40 10C trong vòng 1 ngày đêm Quan sát sự thay đổi của thuốc mỡ -Lựa chọn ba công thức bền vững nhất nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất 2.3.3 (Bớc 3): Nghiên cứu độ giải phóng hoạt chất qua màng cellophan *Khuếch tán thuốc qua màng: - Ngăn trên : 3g thuốc