ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG QUANG HẢI NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA VI RÚT GÂY BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TRÊN ĐÀN TRÂU, BÒ VÀ HIỆU LỰC CỦA VẮC XIN TRONG CÔNG TÁC PHÒNG BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TẠI TỈNH BẮC KẠN LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y THÁI NGUYÊN - 2015 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NÔNG QUANG HẢI NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA VI RÚT GÂY BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TRÊN ĐÀN TRÂU, BÒ VÀ HIỆU LỰC CỦA VẮC XIN TRONG CÔNG TÁC PHÒNG BỆNH LỞ MỒM LONG MÓNG TẠI TỈNH BẮC KẠN Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: 1.TS Nguyễn Văn Sửu PGS.TS Tô Long Thành THÁI NGUYÊN - 2015 i LỜI CAM ĐOAN Tôi Nông Quang Hải xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu Luận văn trực tiếp nghiên cứu hướng dẫn TS Nguyễn Văn Sửu PGS.TS Tô Long Thành trung thực, khách quan chưa sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ trình thực nghiên cứu viết Luận văn cảm ơn Tất thông tin trích dẫn Luận văn ghi rõ nguồn gốc Bắc Kạn, ngày 20 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nông Quang Hải ii LỜI CẢM ƠN Trong thời gia học tập trường làm đề tài nghiên cứu sở nhận giúp đỡ nhiệt tình Ban giám hiệu, Phòng Quản lý đào tạo Sau đại học, Khoa Chăn nuôi thú y thầy, cô giáo Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên, giúp đỡ tạo điều kiện Ban lãnh đạo cán chuyên môn phòng, ban Trung tâm Chẩn đoán thú y Trung ương, Chi cục Thú y tỉnh Bắc Kạn, Trạm thú y huyện, thành phố tỉnh Bắc Kạn giúp đỡ hoàn thành luận văn nghiên cứu Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy, cô giáo giảng viên Trường Đại học Nông lâm Thái Nguyên tận tình giảng dậy, giúp đỡ thời gian học tập trường, đặc biệt hướng dẫn, bảo tận tình thầy giáo TS Nguyễn Văn Sửu, PGS.TS Tô Long Thành trực tiếp giúp đỡ suốt trình nghiên cứu, thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới ban lãnh đạo Trung tâm chẩn đoán thú y Trung ương, Chi cục Thú y, tập thể trạm thú y huyện, thành phố tỉnh Bắc Kạn tạo điều kiện giúp đỡ trình thực đề tài Qua xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, đồng nghiệp thường xuyên giúp đỡ, tạo điều kiện dành cho động viên quý báu suốt trình học tập, nghiên cứu Một lần xin bày tỏ lòng biết ơn, lời cảm ơn chân thành tới tập thể, cá nhân tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành chương trình học tập Bắc Kạn, ngày 20 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nông Quang Hải iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH viii MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu đề tài 3 Ý nghĩa thực tế khoa học đề tài Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung bệnh Lở mồm long móng 1.2 Lịch sử bệnh Lở mồm long móng 1.2.1 Diễn biến tình hình dịch LMLM giới 1.2.2 Diễn biến tình hình dịch bệnh LMLM Việt Nam 1.3 Vi rút gây bệnh LMLM 14 1.3.1 Hình thái cấu trúc 15 1.3.2 Đặc tính di truyền, cấu trúc gen, kháng nguyên 16 1.3.3 Đặc tính kháng nguyên 18 1.3.4 Các điểm định kháng nguyên 19 1.3.5 Tiến hóa vi rút LMLM 19 1.3.6 Đặc tính gây nhiễm phòng thí nghiệm 20 1.3.7 Đặc tính nuôi cấy tổ chức tế bào 21 1.4 Một số đặc điểm dịch tễ học vi rút LMLM 22 1.4.1 Nguồn dịch 22 1.4.2 Động vật cảm thụ 22 1.4.3 Đường xâm nhập 23 1.4.4 Cơ chế sinh bệnh 23 1.4.5 Chất chứa vi rút 24 iv 1.4.6 Con đường phương thức truyền lây 25 1.4.7 Lứa tuổi mắc bệnh 26 1.4.8 Tỷ lệ ốm chết 26 1.5 Miễn dịch bệnh LMLM 27 1.6 Triệu chứng bệnh tích trâu bò 28 1.6.1 Triệu chứng 28 1.6.2 Bệnh tích 31 1.7 Chẩn đoán 32 1.7.1 Chẩn đoán lâm sàng 32 1.7.2 Chẩn đoán phòng thí nghiệm 32 1.8 Phòng bệnh LMLM 36 1.8.1 Vệ sinh phòng dịch 36 1.8.2 Vắc xin phòng bệnh 37 Chương 2: NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 39 2.1 Nội dung đối tượng nghiên cứu 39 2.1.1 Nội dung nghiên cứu 39 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 39 2.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 39 2.2.1 Địa điểm nghiên cứu 39 2.2.2 Thời gian nghiên cứu 39 2.3 Nguyên liệu 39 2.3.1 Mẫu thí nghiệm 39 2.3.2 Kít xét nghiệm 40 2.3.3 Vắc xin dùng thí nghiệm 40 2.3.4 Tài liệu, số liệu 40 2.3.5 Máy móc, dụng cụ xét nghiệm 41 2.4 Phương pháp nghiên cứu 41 2.4.1 Điều tra số tiêu liên quan đến chăn nuôi dịch tễ bệnh LMLM địa bàn tỉnh Bắc Kạn 41 2.4.2 Định type vi rút 41 i LỜI CAM ĐOAN Tôi Nông Quang Hải xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu Luận văn trực tiếp nghiên cứu hướng dẫn TS Nguyễn Văn Sửu PGS.TS Tô Long Thành trung thực, khách quan chưa sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ trình thực nghiên cứu viết Luận văn cảm ơn Tất thông tin trích dẫn Luận văn ghi rõ nguồn gốc Bắc Kạn, ngày 20 tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nông Quang Hải vi DANH MỤC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT AND APC ARN : Acid Deoxyribonucleic : Antigen presenting cell (Tế bào trình diện kháng nguyên) : Acid Ribonucleic HBK-21 CFT ĐC : Baby Hamster Kidney dòng 21 : Complement Fixation Test : Đối chứng ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay FMD FMDV : Foot and Mouth Disease : Foot and Mouth Disease Virut HGKT H2O2 : Hiệu giá kháng thể : Hydrogen peroxide (Ô xy già) IFN IgG : Interferon : Immuno Globulin KH KHBT KN : Khoa học : Kết hợp bổ thể : Kháng nguyên KT LMLM : Kháng thể : Lở mồm long móng LPB-ELISA : Liqui Phase Blocking ELISA MHC : Major histocompatibility comlex OIE : Offce Internatinal Epizooties OPD PCR PBS RT-PCR TCI50 TLBH WRL : Ortho Phennylenediamine (chất phát màu) : Polymerase Chain Reaction : Phosfate Buffer Saline : Reverse Trancrption Polymerase Chain Reaction : 50% Tissue Culture Infection Dose : Tỷ lệ bảo hộ : World Reference Laboratory XN : Xét nghiệm (+) (-) : Dương tính : Âm tính µl : Micro liter g ml : Gram : Mililit vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Tình hình chăn nuôi số loài gia súc móng guốc chẵn Bắc Kạn từ năm 2010 đến 2014 52 Bảng 3.2: Diễn biến dịch LMLM trâu, bò địa bàn tỉnh Bắc Kạn từ năm 2010 đến năm 2014 (Tính chung trâu, bò) 55 Bảng 3.3: Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh LMLM qua năm 56 Bảng 3.4: Tỷ lệ trâu mắc bệnh LMLM theo mùa từ 2010 đến 2014 (Tách riêng trâu) 58 Bảng 3.5: Tỷ lệ bò mắc bệnh LMLM theo mùa từ 2010 đến 2014 (Tách riêng bò) 59 Bảng 3.6: Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh LMLM theo mùa từ 2010 đến 2014 (Tính chung trâu, bò) 60 Bảng 3.7: Tỷ lệ trâu mắc bệnh LMLM theo nhóm tuổi từ năm 2010 đến 2014 (Tách riêng trâu) 61 Bảng 3.8: Tỷ lệ bò mắc bệnh LMLM theo nhóm tuổi từ năm 2010 đến 2014 (Tách riêng bò) 62 Bảng 3.9: Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh LMLM theo nhóm tuổi từ năm 2010 đến 2014 (Tính chung trâu, bò) 63 Bảng 3.10: Tỷ lệ trâu, bò nhiễm virut LMLM tự nhiên tỉnh Bắc Kạn năm 2014 65 Bảng 3.11: Tỷ lệ dương tính huyết học 3ABC trâu, bò tỉnh Bắc Kạn năm 2014 (cắt ngang 4/8 huyện) 66 Bảng 3.12: Tỷ lệ dương tính ABC-ELISA trâu, bò huyện (Pác Nặm) 68 Bảng 3.13: Kết định type vi rut LMLM trâu, bò tỉnh Bắc Kạn huyết 70 Bảng 3.14: Kết thu thập bệnh phẩm LMLM trâu, bò địa bàn tỉnh Bắc Kạn năm 2014 - 2015 70 Bảng 3.15: Kết xét nghiệm định type vi rut LMLM đàn trâu, bò tỉnh Bắc Kạn giai đoạn 2014 - 2015 71 Bảng 3.16: Hiệu giá kháng thể trung bình đàn trâu, bò tiêm vắc xin 72 viii DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Bản đồ dịch tễ bệnh LMLM giới năm 2009 Hình 1.2: Cấu trúc virion vi rút LMLM type O1BFS 15 Hình 1.3: Sơ đồ hệ gen vi rút LMLM 16 Hình 1.4: Triệu chứng bệnh tích miệng bò bị bệnh LMLM .29 Hình 1.5: Bệnh tích miệng lưỡi bò bị bệnh LMLM 30 Hình 1.6: Bệnh tích vú bò bị bệnh LMLM 31 Hình 3.1: Biểu đồ tần xuất dịch LMLM trâu, bò địa bàn tỉnh Bắc Kạn từ năm 2010 đến 2014 55 Hình 3.2: Biểu đồ diễn biến tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh LMLM chết bệnh LMLM địa bàn tỉnh Bắc Kạn từ năm 2010 đến 2014 57 Hình 3.3: Biểu đồ tỷ lệ trâu mắc bệnh LMLM theo mùa .59 Hình 3.4: Biểu đồ tỷ lệ bò mắc bệnh LMLM theo mùa .60 Hình 3.5: Biểu đồ tỷ lệ trâu mắc bệnh LMLM theo nhóm tuổi 62 Hình 3.6: Biểu đồ tỷ lệ bò mắc bệnh LMLM theo nhóm tuổi 63 Hình 3.7: Đồ thị biến động hiệu giá kháng thể độ dài miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin LMLM .73 1.2 Lịch sử bệnh Lở mồm long móng 1.2.1 Diễn biến tình hình dịch LMLM giới Diễn biến tình hình dịch năm 60 kỷ 20 trầm trọng, trung bình năm có 4.000 ổ dịch Đến năm 70, bệnh có xu giảm Châu Âu, Châu Mỹ phổ biến Châu Phi (Mauritania, Senegal, Liberia, Tanzannia, Nigeria ) Châu Á (Indonesia, Malaisia, Thái Lan ) Vào năm 80, 90 dịch LMLM có mặt nhiều châu lục Trong năm (1981 - 1985), dịch xuất khắp 80 nước Ở Châu Âu có 804 ổ dịch 12 quốc gia vi rút thuộc type O, A, C gây Năm 1985, dịch LMLM vi rút thuộc type Asia-1 sảy Hy Lạp Cùng thời gian này, Châu Á, dịch có mặt 11 nước hầu hết ổ dịch vi rút type Asia-1 Ở Châu Phi, dịch LMLM gây thiệt hại nhiều nước, đặc biệt Kenia Ethiopia (19841985) Vi rút type C bệnh ổ dịch nước Tại nước lại châu lục này, bệnh LMLM vi rút thuộc type SAT 1, SAT 2, SAT gây (Nguyễn Tiến Dũng, 2000)[6] Năm 1989, theo thông báo OIE, dịch LMLM sảy 53 nước khắp châu lục: Á, Âu, Phi, Nam Mỹ Cho đến nay, số quốc gia đạt thành tốt việc khống chế toán bệnh, nước thuộc khối cộng đồng Châu Âu, Bắc Mỹ, Argentina, Indonesia gần Cộng Hòa Séc Tuy nhiên, dịch LMLM nguy nhiều quốc gia, uy hiếp nghiêm trọng chăn nuôi thương mại quốc tế (Nguyễn Tiến Dũng, 2000)[6] Những năm 1990, châu Âu, nước báo dịch gồm Italia, Bulgari, Nga Hy Lạp Năm 1993 có 55 ổ dịch xảy Italia, ổ dịch đơn lẻ xảy Bulgari, Nga Giữa năm 1994, ổ dịch xảy Hy Lạp đảo Lesbos Thrace gần biên giới với Thổ Nhĩ Kỳ Năm 1996, có ổ dịch Thổ Nhĩ Kỳ Hy Lạp Năm 1997, có Georgia Armenia có bệnh Trong năm 1998, chủng type A phát Iran năm 1996 lan đến Thổ Nhĩ Kỳ sát Istanbul, dịch kéo dài đến cuối năm 1998 Ở Châu Phi, vào thập kỷ 90, vi rút LMLM type O lưu hành rộng rãi Tây Phi, Gambia, Senegal, Uganda, Tanzania Malawi Kenia Năm 1999, ổ dịch LMLM 69 bò nhiễm vi rút tự nhiên huyện Pác Nặm trước thời điểm điều tra (tháng năm 2015) 0,09%, dao động từ 0,06% đến 0,17% Điều cho thấy tỷ lệ trâu, bò nhiễm vi rút LMLM tự nhiên phân bố không đồng địa bàn nghiên cứu (huyện Pác Nặm) Kết điều tra năm 2014 (bảng 3.10) kết hợp điều tra cắt ngang (bảng 3.11) tỉnh Bắc Kạn cho kết dương tính huyết học 3ABC trâu, bò 11,4% 50,0% Kết điều tra cắt ngang địa phương (huyện Pác Nặm) thời điểm (tháng năm 2015) 0,09% (bảng 3.12) Như vậy, phân bố trâu, bò nhiễm vi rút LMLM tự nhiên tỉnh Bắc Kạn không đồng huyện, chí địa phương tỷ lệ nhiễm tự nhiên vi rút LMLM trâu, bò không đồng xã 3.4 Định type vi rút gây bệnh LMLM đàn trâu, bò tỉnh Bắc Kạn nghiên cứu đáp ứng miễn dịch độ dài miễn dịch đàn trâu, bò tỉnh Bắc Kạn Vi rút gây bệnh LMLM có serotype bao gồm O, A, C, Asia 1, SAT 1, SAT 2, SAT 3, serotype có type phụ (subtype), type có cấu trúc khánh nguyên khác nhau, chúng gây bệnh có triệu chứng, bệnh tích giống chúng miễn dịch chéo cho Mặt khác vi vút có khả đột biến mạnh tạo thành chủng nên việc phòng bệnh vắc xin gặp nhiều trở ngại Vấn đề xác định type vi rút gây bệnh địa phương có ý nghĩa định công tác công bố dịch chương trình phòng, chống bệnh vắc xin với bệnh LMLM 3.4.1 Định type vi rút LMLM trâu, bò huyết Mẫu huyết lấy ngẫu nhiên xã địa bàn huyện, thành phố (đảm bảo đại diện cho vùng núi, trung du vùng phẳng), huyết lấy trâu, bò tiêm phòng chưa tiêm phòng vắc xin LMLM định kỳ Các mẫu huyết xét nghiệm lần đầu phản ứng 3ABC-ELISA, tất mẫu dương tính với phản ứng 3ABC-ELISA xét nghiệm tiếp phản ứng LPB-ELISA (Liquid Phase Blocking ELISA) để xác định type vi rut, kết trình bày bảng sau: 70 Bảng 3.13: Kết định type vi rut LMLM trâu, bò tỉnh Bắc Kạn huyết Stt Tên huyện lấy mẫu Thành phố Bắc Kạn Huyện Pác Nặm Huyện Ba Bể Huyện Ngân Sơn Huyện Bạch Thông Huyện Chợ Đồn Huyện Chợ Mới Huyện Na Rì Cộng Số mẫu XN 10 40 40 30 15 30 15 30 210 Số mẫu (+) 7 0 24 Kết định type Type O Type A Type Asia-1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 20 Kết bảng 3.10 bảng 3.13 cho thấy, 210 mẫu huyết trâu, bò xét nghiệm có 24 mẫu dương tính với phương pháp 3ABC-ELISA 24 mẫu đem xét nghiệm tiếp với phương pháp LPB-ELISA để định type, kết thu 04 mẫu dương tính type O 20 mẫu dương tính với type A, kết luận thời điểm nghiên cứu địa bàn tỉnh Bắc Kạn xuất lưu hành vi rut LMLM type O type A 3.4.2 Định type vi rút LMLM trâu, bò biểu mô Trong năm 2014 tháng đầu năm 2015 Chi cục Thú y Bắc Kạn trực tiếp thu thập mẫu bệnh phẩm biểu mô trâu, bò ốm có triệu chứng bệnh LMLM chuyển Trung tâm chẩn đoán thú y Trung ương - Cục Thú y để xét nghiệm Kết thu thập bệnh phẩm trình bày bảng sau Bảng 3.14: Kết thu thập bệnh phẩm LMLM trâu, bò địa bàn tỉnh Bắc Kạn năm 2014 - 2015 Stt Tên huyện Năm 2014: Pác Nặm Ba Bể Ngày mắc bệnh Ngày lấy mẫu 22/02/2014 23/02/2014 29/02/2014 04/3/2014 Vị trí lấy mẫu Miệng Miệng, kẽ móng chân Số lượng bệnh phẩm Trâu Bò 01 02 02 02 02 04 01 06 03 11 Năm 2015: Ngân Sơn 17/01/2015 19/01/2015 Ba Bể Cộng 24/02/2015 27/02/2015 Miệng, kẽ móng chân Miệng 71 Trong thời gian từ năm 2014 đến 2015 ghi nhận Bắc Kạn có 03 huyện xuất bệnh LMLM gia súc gồm: Ba Bể, Pác Nặm Ngân Sơn Việc thu thập mẫu bệnh phẩm để xét nghiệm vi rut đòi hỏi chất lượng mẫu cao kịp thời, thường bệnh phẩm thật đạt chất lượng tuần đầu vật bắt đầu có triệu chứng, số mẫu bệnh phẩm không thu thập số ổ dịch thông tin không kịp thời vật bị bệnh, cán thú y đến kiểm tra, lấy mẫu thường vật không bệnh tích điển hình bị giết thịt Bảng 3.15: Kết xét nghiệm định type vi rut LMLM đàn trâu, bò tỉnh Bắc Kạn giai đoạn 2014 - 2015 Stt Tên huyện Ngày lấy mẫu Kết định type Số lượng mẫu Type O Type A Type Asia-1 Năm 2014: Pác Nặm 23/02/2014 03 02 Ba Bể 04/3/2014 04 01 Năm 2015: Ngân Sơn 19/01/2015 06 02 Ba Bể 27/02/2015 04 01 17 Cộng Kết bảng 3.15 cho thấy: Tại 03 huyện với ổ dịch tương ứng với 06 mẫu bệnh phẩm dương tính với type A, type O, Asia-1 cho kết âm tính, kết phân tích cho thấy giai đoạn năm 2014 đến tháng đầu năm 2015 ổ dịch LMLM gây đàn trâu, bò vi rút thuộc type A Qua nghiên cứu lưu hành vi rút LMLM tự nhiên, việc định type vi rút thông qua mẫu bệnh phẩm biểu mô thu thập ổ dịch địa bàn tỉnh Bắc Kạn, kết luận thời điểm nghiên cứu vi rút LMLM trâu, bò lưu hành tỉnh Bắc Kạn vi rút thuộc type A Hiện nay, việc sử dụng vắc xin đơn giá type O địa bàn tỉnh Bắc Kạn chưa phù hợp, nên bổ sung type A để đảm bảo công tác phòng, chống dịch đạt hiệu quả, vừa đảm bảo tính khoa học vừa đảm bảo hiệu kinh tế Chúng hy vọng kết 72 nghiên cứu quyền sở, quan chuyên môn thú y làm khoa học để lựa chọn vắc xin phòng bệnh phù hợp 3.4.3 Đáp ứng miễn dịch độ dài miễn dịch đàn trâu, bò tỉnh Bắc Kạn Việc tiêm phòng vắc xin tạo cho thể vật nuôi lượng kháng thể định chống lại kháng nguyên gây bệnh xâm nhập vào thể, mục đích việc tiêm phòng vắc xin LMLM nhằm giảm tổn thất chăn nuôi Để việc tiêm phòng có hiệu vắc xin phải có hiệu lực, tính kháng nguyên tương đồng chống lại vi rút LMLM gây bệnh đe dọa gia súc địa bàn tỉnh Bắc Kạn Nhằm đáp ứng yêu cầu tỉnh Bắc Kạn sử dụng vắc xin Aftovac vắc xin đơn giá (tuýp O) đa giá (tam giá O, A Asia1) hãng Merial Mặc khác để có đáp ứng miễn dịch tối ưu cần thực việc tiêm phòng kỹ thuật với tỷ lệ tiêm phòng đủ yêu cầu cần tiêm nhắc lại Để đánh giá độ dài miễn dịch trâu, bò sau tiêm phòng vắc xin LMLM, tiến hành lấy mẫu huyết đàn trâu, bò sau tiêm phòng vắc xin LMLM (vắc xin Aftovac) huyện khác nhau, tương ứng với thời điểm 30 ngày, 60 ngày, 90 ngày 120 ngày (lấy mẫu sau tiêm phòng vắc xin LMLM đợt II năm 2014 Chi cục Thú y Bắc Kạn) Mẫu chuyển Trung tâm chẩn đoán thú y Trung ương để định lượng hiệu giá kháng thể phương pháp ELISA, kết trình bày bảng 3.14 Bảng 3.16: Hiệu giá kháng thể trung bình đàn trâu, bò tiêm vắc xin Số Tỷ lệ mẫu Ngày lấy bảo GMT Thời điểm (ngày) đạt mẫu hộ (Log2) bảo (%) hộ Sau tiêm 30 ngày 40 28/11/2014 38 95,00 37 92,50 7,36 Sau tiêm 60 ngày 40 26/12/2014 36 90,00 34 85,00 7,12 Sau tiêm 90 ngày 40 27/01/2015 35 87,50 32 80,00 7,04 Sau tiêm 120 ngày 40 27/02/2015 32 80,00 29 72,50 6,41 Cộng 160 141 132 (Các mẫu kiểm tra hiệu giá kháng thể xét nghiệm trước phương Tổng số mẫu kiểm tra Số mẫu (+) pháp 3ABC- ELISA) Tỷ lệ dương tính (%) type O bắt nguồn từ Mali (Tây Phi) theo đường vận chuyển bò xuyên qua Sahara lan đến Algeria, Marocco Tunisia Vi rút LMLM type SAT lưu hành Uganda, Zambia Kenia; SAT xác định Kenia Ở Châu Á, dịch LMLM vi rút type O Asia-1 xảy Pakistan Myanmar; type O A Nepal, Buhtan; type A Thái Lan Tại Malaysia, không công bố dịch từ năm 1998, thự tế type vi rút O Asia-1 lưu hành bán đảo Malay (không gửi bệnh phẩm đến WRL) Hai ổ dịch địa phương Đài Loan Philippines (đảo Luzon) vi rút type O gây Tại Trung Quốc, dịch xảy Vân Nam thông tin type vi rút (Bùi Quang Anh Hoàng Vă Năm, 2001)[1] Ở Tây Á, chủng Iran 98 type A gây bệnh Thổ Nhĩ Kỳ, Iran lan đến Akmenia Vi rút type O gây dịch Lebanon, Kuwait, Iran, Iraq, Israel, Qatar, Bahrain, Yemen Saudi Arabia; Kazakstan Kyrgyzstan (riêng Kazakhstan có vi rút type A) Ở Nam Mỹ, tình hình khống chế dịch LMLM có nhiều thuận lợi, Paraguay công nhận nước an toàn dịch (có tiêm phòng) Argentina OIE công nhận nước có vùng không bệnh LMLM không tiêm phòng (Collen T cs, 1998) [38] Năm 2001, dịch LMLM type O tái bùng phát khắp châu Âu (Anh, Hà Lan, Pháp Ireland); Nam Mỹ (Uruguay, Brazil Colombia); châu Á (Thổ Nhĩ Kỳ, Iran, Afghanistan, Georgia, Azerbaijan, Mông Cổ, Kuwait, Bahrain, Yemen, Qatar, Ả Rập, Oman, Iran, Butan, Nepal, Malaysia, Philippin, Thái Lan Đài Loan) Tính đến cuối tháng 4/2001, Chính phủ Anh phí cho việc tiêu hủy gia súc bệnh, dập dịch, cộng với thiệt hại dịch gây lên đến 14 tỷ đô la Mỹ Sau đó, dịch xảy loạt nước châu Âu, châu Mỹ, Phi châu Á Tính đến tháng 7/2001, có 20 nước xảy dịch LMLM (Nguyễn Vĩnh Phước cộng sự, 1978) [16] Từ năm 2000-2004 có 23 nước Châu Á Châu Phi gửi mẫu đến WRL Kết type O type phổ biến nhất; type A, SAT SAT có trình tự nucleotide (di truyền) biến đổi nhiều so với chủng trước serotype Tại Đông Nam Á vùng Viễn Đông, dịch bệnh vi rút type O ghi nhận Hồng Kông tất quốc gia thành viên SEAFMD, ngoại trừ Indonesia 74 - Ở thời điểm 60 ngày sau tiêm phòng vắc xin, làm phản ứng ELISA có 36 mẫu dương tính tổng số 40 mẫu huyết kiểm tra, chiếm tỷ lệ 90,00%, 36 mẫu dương tính có 34 mẫu đạt bảo hộ có hiệu giá kháng thể ≥ log2 Tỷ lệ bảo hộ thời điểm đạt 85,00%, hiệu giá kháng thể trung bình 7,12 log2 - Ở thời điểm 90 ngày sau tiêm phòng vắc xin, làm phản ứng ELISA có 35 mẫu dương tính tổng số 40 mẫu huyết kiểm tra, chiếm tỷ lệ 87,50%, 35 mẫu dương tính có 32 mẫu đạt bảo hộ có hiệu giá kháng thể ≥ log2 Tỷ lệ bảo hộ thời điểm đạt 80,00%, hiệu giá kháng thể trung bình 7,04 log2 - Ở thời điểm 120 ngày sau tiêm phòng vắc xin, làm phản ứng ELISA có 32 mẫu dương tính tổng số 40 mẫu huyết kiểm tra, chiếm tỷ lệ 80,00%, 32 mẫu dương tính có 29 mẫu đạt bảo hộ có hiệu giá kháng thể ≥ log2 Tỷ lệ bảo hộ thời điểm đạt 72,50%, hiệu giá kháng thể trung bình 6,41 log2 Hiệu giá kháng thể trung bình trâu, bò đạt mức cao thời điểm 30 ngày sau tiêm vắc xin mũi 7,36 log2 sau giảm dần, đến thời điểm 120 ngày giảm xuống 6,41 log2 Theo nghiên cứu tác giả Dương Tất Thắng (2007) [30] Tỷ lệ bảo hộ trung bình đàn trâu, bò Nghệ An sau tiêm phòng vắc xin LMLM mũi thời điểm 21 ngày đạt 70,90%; 60 ngày đạt 66,67%; 120 ngày đạt 44,00%, nhìn chung tỷ lệ bảo hộ trung bình thấp tỉnh Bắc Kạn Khi khả bảo hộ vắc xin cho đàn gia súc không ít, gặp điều kiện bất lợi vi rút gây bệnh dễ xâm nhập vào thể động vật Kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ bảo hộ đạt mức cao thời điểm 30 ngày sau tiêm phòng vắc xin (92,50%), sau giảm dần đến thời điểm 120 ngày (72,50%), thời điểm đàn trâu, bò tiêm phòng tỉnh Bắc Kạn khả bảo hộ tỷ lệ bảo hộ thấp Do đó, để đàn trâu, bò tỉnh an toàn trước xâm nhập vi rút LMLM biện pháp hữu hiệu tiêm phòng nhắc lại vắn xin LMLM cho tổng đàn gia súc, thời điểm tiêm phòng nhắc lại tốt tính từ lúc tiêm mũi lúc tiêm nhắc lại khoảng thời gian từ 130 đến 150 ngày Thực tế tỉnh Bắc Kạn triển khai tiêm phòng vắc xin định kỳ hai mũi năm (mũi cách mũi hai tháng) 75 3.4.4 Một số khuyến cáo cho người chăn nuôi Để đảm bảo an toàn dịch bệnh cho đàn vật nuôi, từ nghiên cứu đưa số khuyến cáo cho người chăn nuôi, sau: - Khi nhập đàn trâu, bò phải đảm báo có nguồn gốc xuất xứ rõ ràng, trâu, bò mua phải xuất phát từ vùng dịch bệnh, tuyệt đối không mua, vận chuyển trâu, bò không rõ nguồn gốc, trâu bò không đảm bảo an toàn dịch bệnh hồ sơ giấy tờ kiểm dịch - Chuồn trại chăn nuôi phải đảm bảo đủ diện tích để nuôi nhốc gia súc theo quy mô chuồng trại nông hộ, chuồng chắn, có mái che mưa, nắng vách phên chống rét, gió lùa, đảm bảo chuồng khô ráo, thoát phân nước tiểu, tránh ô nhiễm chuồng nuôi tồn dư mầm bệnh - Hàng năm phải có kế hoạch dự trữ thức ăn tinh thức ăn thô để phòng đến mùa Đông lạnh giá, khan thức ăn ngày mưa báo, gió mùa không chăn thả - Thực việc tiêm phòng triệt để vắc xin cho đàn vật nuôi theo hướng dẫn quan thú y địa phương Đối với bệnh LMLM đàn trâu, bò phải tiêm đầy đủ hai lần năm, tiêm lần vào tháng 3-4 hàng năm, lần tiêm cách lần tiêm khoảng tháng (khoảng cách hai lần tiêm không vượt 150 ngày) - Chủ động khai báo với quan thú y quyền địa phương phát gia súc ốm có biểu bất thường để kịp thời kiểm tra có hướng xử lý, nắm bắt tình hình chăn nuôi địa bàn - Đối với vắc xin tiêm phòng bệnh LMLM nên tiêm loại vắc xin đa giá nhị giá đảm bảo phòng bệnh type O A - Khi phát đàn vật nuôi có dấu hiệu bệnh lý phải kịp thời báo cáo cho cán thú y, tuyệt đối không bán chạy trâu, bò ốm trâu, bò chết bên 76 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Từ kết nghiên cứu trình bày trên, rút số kết luận sau: - Dịch LMLM địa bàn tỉnh Bắc Kạn xảy quanh năm, số lượng gia súc mắc bệnh tập trung vào thời điểm cuối mùa Đông đến đầu mùa Xuân hàng năm, dao động từ 19,06% đến 80,94% - Ở giai đoạn tuổi mắc bệnh nghiên cứu cho thấy tất trâu, bò mắc bệnh, xảy chủ yếu giai đoạn từ năm tuổi trở lên - Qua nghiên cứu vi rút LMLM tự nhiên, vi rút LMLM type O A lưu hành tỉnh Bắc Kạn, việc sử dụng vắc xin type O không chưa phù hợp, cần bổ sung vắc xin LMLM type A đảm bảo việc phòng bệnh LMLM; khu vực xuất type A cần tiêm vắc xin đa giá (type A O), khu vực chưa xuất type A sử dụng vắc xin type O cho phù hợp - Tỷ lệ bảo hộ sau tiêm phòng vắc xin LMLM (vắc xin Aftovac) cho đàn trâu, bò địa bàn tỉnh Bắc Kạn an toàn giai đoạn từ 30 đến 90 ngày Sau giảm dần đến giai đoạn từ 120 ngày trở Đề nghị Từ kết luận trên, để đảm bảo công tác phòng bệnh LMLM an toàn đạt kết quả, có số đề nghị sau: - Trước tình hình dịch bệnh LMLM nay, với xuất thêm nhiều chủng vi rút mới, đề nghị UBND tỉnh Bắc Kạn quan tâm đạo công tác phòng, chống dịch bệnh cho đàn vật nuôi tỉnh Bắc Kạn đạt kết cao - Ngoài kết nghiên cứu chúng tôi, cần tiến hành nghiên cứu thêm tiêu làm sở xây dựng đồ dịch tễ bệnh LMLM địa bàn tỉnh Bắc Kạn, góp phần vào thành công chương trình toán bệnh LMLM giai đoạn 2016 - 2020 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Bùi Quang Anh Hoàng Văn Năm (2001), "Tình hình bệnh Lở mồm long móng Đông Nam Á giới năm 2000", Tạp Chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 8, tr 90-93 Bộ NN & PTNT (2011), Chương trình quốc gia khống chế bệnh Lở mồm long móng giai đoạn 2011-2015, tr 13-15 Chi cục thú y tỉnh Bắc Kạn (2014), Báo cáo tình hình dịch bệnh LMLM năm 2014 Lê Minh Chí (1993), “Bệnh lở mồm long móng”, Cục thú y Lê Minh Chí (2000), Báo cáo tổng kết công tác phòng chống dịch Lở mồm long móng năm 1999 - 2000, Cục Thú y Nguyễn Tiến Dũng (2000), "Bệnh LMLM (Bài tổng hợp)", Tạp Chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, 7(1), tr - 16 Phan Đình Đỗ Trịnh Văn Thịnh (1958) , Bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông thôn I, Tr.117-179 Nguyễn Đăng Khải (2000), "Sử dụng kỹ thuật ELISA chẩn đoán bệnh LMLM", Tạp Chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, (3), tr 100 - 104 Kihm U (1993), Bệnh Lở mồm long móng Cục Thú y 10 Văn Đăng Kỳ Nguyễn Văn Thông (2001), "Một số kết phòng chống bệnh Lở mồm long móng khu vực giới", Tạp Chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, (3), tr 83 - 88 11 Văn Đăng Kỳ (2002), Nghiên cứu dịch tễ học bệnh LMLM lợn Tại Việt Nam biện pháp phòng chống, Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia 12 Phạm Sỹ Lăng Nguyễn Thiện (2002), Một số bệnh vi rút gia súcgia cầm nhập nội biện pháp phòng trị, Nxb Nông nghiệp, Hà Nôi 13 Nguyễn Lương (1997), Dịch tễ học Thú y phần chuyên khoa, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội 14 Phạm Gia Ninh (1993), Bệnh Lở mồm long móng, Cục thú y xuất bản, lưu hành nội bộ, tr.1 - 58 15 Trần Thanh Phong (1996), Bệnh LMLM, bệnh bọng nước heo, Đại học Nông lâm TP Hồ Chí Minh nước bệnh LMLM Type A tìm thấy Malaysia, Thái Lan, Lào Việt Nam (2004) Các chủng vi rút type O phân lập thuộc topotype ME-SA Cathay Các vi rút phân lập từ Hồng Kông Philippines nằm topotype Cathay lại thuộc dòng phụ khác Vi rút nhận từ Việt Nam thuộc topotype Cathay ME-SA (chủng Pan - Asia) Vi rút type A Việt Nam thuộc topotype Asia, có quan hệ gần với chủng gây dịch bệnh Thái Lan năm 2003, 2004 [37] Trong năm 2005, bệnh LMLM xảy Brazil (serotype O), Colombia (serotype A), Nga (serotype Asia 1); Trung Quốc (serotype Asia-1), Hồng Kông (serotype Asia-1), Mông Cổ (serotype Asia-1); Botswana (serotype SAT 2), Congo (SAT 1, 2, A) Sự xuất gần serotype Asia-1 Trung Quốc, Hồng Kông, Mông Cổ, Myanmar, Nga, Tajikistan với có mặt serotype Ấn Độ, Iran Pakistan cho thấy chủng Asia-1 lây lan khắp châu Á Trong báo cáo OIE năm 2005, dịch LMLM nước vùng coi an toàn không tiêm phòng vắc xin LMLM Cũng năm này, FAO/WRLFMD nhận 266 mẫu bệnh phẩm LMLM từ 21 nước châu Âu, châu Á, châu Phi kết phân lập định type cho biết type O chiếm tỷ lệ lưu hành cao (Chinsangaram J , Koster M , 2001) [37] Theo kết xét nghiệm Phòng thí nghiệm giám định vi rút LMLM (Pirbright, UK) năm gần đây, phân bố type serotype vi rút LMLM giới phân bố năm 2002 (hình 1.1) - Châu Âu: ổ dịch vi rút type O A có serotype A Iran/96 Iran Thổ Nhĩ Kỳ - Châu Phi: ổ dịch type O gây vùng Đông Bắc lục địa (Algeria, Tunisia, Guinea, Burundi, Kenya, Tanzania Zimbabue); type A phân bố Tây, Trung Đông Phi; type C không phổ biến, type SAT lưu hành rộng rãi, SAT SAT xảy rộng khắp trừ phía Bắc Phi, SAT xảy vùng hẹp phía Nam 79 30 Tiêu chuẩn Việt Nam (2009), Chẩn đoán bệnh động vật - Quy trình chẩn đoán bệnh Lở mồm long móng TCVN-8400:2010, Hà Nội, tr.1-17 31 Nguyễn Tùng (2003), Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch trâu, bò với vắc xin Lở mồm long móng số tỉnh miền Bắc Việt Nam, Luận văn Thạc sĩ khoa học Nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam 32 Tô Cẩm Tú Trần Văn Diễn (1992), Phân tích số liệu nhiều chiều, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội II Tài liệu tiếng Anh 33 Anonymous (2000) , Foot and mouth disease Manual ofstandards for diagnostic tests and va ccines, Office international dese pizoo ties, 7 - 34 Becker Y (1994), Need for cellular and humoral immune responses in bovines to ensure protection from foot and mouth disease virus (FMDV)-a point of view, Virus Genes 8, 199 - 214 35 Childerstone A J., Cedillo - Baron L., Foster - Cuevas M., Parkhouse R M (1999), Demonstration of bovine CD8+ T - cell responses to foo and mouth disease virus J Gen Virol 80 ( Pt 3), 663-669 36 Chinsangaram J cs (2001), foot and mouth disease virus replication by alpha/beta interferon involves double - stranded RNA-dependent proteinkinase J Virol 75, 5498-5503 37 Collen T cs (1998), Heterotypic recognition of recombinant FMDV proteins by bovine T-cells: the polymerase (P3Dpol) as an immunodominant T-cell immunogen Virus Res 56, 125 - 133 38 Donaldson A.I., Ferris N.P., Wels G.A.H (1984), Experimental foot and mouth disease in fattening pig, sows and piglets in relation to the possible origin of the Normandy 1979 and Brittany 1981 epidemics Proceedings of the 8th International Pig Veterinary Medicine 44, 92 - 96 39 Donaldson A I (2000), FMD Epidemiology - Current situation and pespectives Veterynary scienses and techniques, Vol VII 40 Donaldson A I (1-2000), FMD Pathology and epidemiology of Veterynary scienses and techniques, Vol VII 41 Eugui E M., Emery D.L (1981), Genetically restricted cell-mediated cytotoxicity in cattle immune to Theileria parva Nature 290, 251 - 254 80 42 Feng Q et al I (2004), Genome comparison of a novel foot-and-mouth disease virus with other FMDV strains Biochem Biophys Res Commun 323, 254 - 263 43 Francis M J., Black L (1983), Antibody response in pig nasal fluid and serum following foot and mouth disease infection or vaccination J Hyg.(Lond) 91, 329 - 334 44 Fryholm K O., Ericsson Y (1968), Intra-oral determination of carbohydrates in bakers Dtsch Zahn Mund Kieferheilkd.Zentralbl.Gesamte 51, 177 - 189 45 Geoffrey W (1989), A note on some epizootological observation on foot and mouth disease outbreak in an organized herd Indian veterinary medical Journal 13, 127 - 129 46 Grubman M J., Baxt B (2004), Foot-and-mouth disease Clin.Microbiol R e v 17, 465 - 493 47 Gurumurthy C B et alI (2002), Genetic diversity in the VP1 gene of footand-mouth disease virus serotype Asia-1 Arch Virol 147, 85 - 102 (2002) 48 Kitching R P (2001), Clinical variation in foot and mouth disease: cattle Rev Sci Tech 21, 499 - 504 49 Marquardt O., A K H a S O C (1991), Detection and localization of single- base sequence differences in foot and mouth disease virus genomes by RNase mismatch cleavage method Journal of Vitrological Methods 33, 267 283 OIE (2005), 50 Annual OIE/FAO FMD reference laboratory network report Ruleswww.oie.int 51 OIE (2000), Manual diagnosis test and vaccin for terrestrial animals Chapter 2.1.1.Foot and Mouth disease 77 - 92 52 OIE (2005), List of foot and mouth disease free countries www.oie.int 53 Reid S M., Ferris N P., Hutchings G H., De Clercq K., Newman B J., Knowle N.J., Samuel A R (2001), Diagnosis of foot and mouth disease by RT-PCR, use of phylogenetic data to evaluate primers for the typing of viral RNA in clinical sample 81 54 Samuel A R., Knowles N J (2001), Foot and mouth disease type O viruses exhibit genetically and geographically distinct evolutionary lineages (topotypes) J Gen Virol 82, 609-621 55 Terpstra C., Van Maanen C., Van Bekkum J G (1990), Endurance of immunity against foot and mouth disease in cattle after three consecutive annual vaccinations, 236-242 III Tài liệu mạng Internet 56 http: //en mercopress com / / / / fmd - emergen cy- in korea - 0 animals-at-211-farms-culled 57 http: // ww w bullshit com/s ho wt hre ad p hp? 65 5- FD A- bei ng -f ullof -sh it- claims-raw-milk-is-full-of-germs/page2 58 http://www.cucthuy.gov.vn 82 Lấy mẫu huyết trâu, bò Xét nghiệm mẫu huyết trâu, bò Vắc xin, tiêm phòng vắc xin