Nghiên cứu nâng cao khả sinh tổng hợp vancomyxin xạ khuẩn Streptomyces orientalis Chu Thanh Bình Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Vi sinh vật học; Mã số: 60 42 40 Người hướng dẫn: TS Nguyễn Phương Nhuệ Năm bảo vệ: 2012 Abstract: Trình bày Chất kháng sinh vancomyxin; Streptomyces orientalis yếu tố ảnh hưởng đến sinh tổng hợp vancomyxin; nghiên cứu trì nâng cao hiệu suất chủng giống sản xuất vancomyxin; tình hình nghiên cứu sản xuất vancomyxin Vật liệu nghiên cứu; phương pháp nghiên cứu: Bảo quản giống; Xác định đặc điểm sinh học; Xác định sinh khối; Xác định hoạt tính kháng sinh, … Nghiên cứu đặc điểm sinh học chủng Streptomyces orientalis 4912; khả sinh tổng hợp kháng sinh chủng S orientalis 4912; nâng cao hoạt tính kháng sinh chủng S orientalis 4912; số đặc điểm sinh học biến chủng Streptomyces orientalis 4912- 81- 61; tối ưu hóa quy trình lên men biến chủng S orientalis 4912-81-61 Keywords: Vi sinh vật học; Xạ khuẩn; Tổng hợp vancomyxin; Chất kháng sinh Content CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 CHẤT KHÁNG SINH VANCOMYXIN 1.1.1 Lịch sử phát triển kháng sinh vancomyxin Vancomyxin CKS tiêu biểu nhóm KS glycopeptit, Eli Lilly cộng mô tả lần vào năm 1956, xạ khuẩn S orientalis phân lập từ đất Indonexia Ấn Độ sinh [45] Ban đầu CKS gọi hợp chất 05865, sau đặt tên vancomyxin (do bắt nguồn từ “Vanquyshed” có nghĩa “đánh bại”) Năm 1958, CKS đưa vào điều trị thử nghiệm người Năm 1964, Bộ Y tế Mỹ chấp thuận đưa vancomyxin vào sử dụng rộng rãi bệnh viện Khi CKS bán tổng hợp nhóm penixilin metixilin đưa vào dùng chữa bệnh nhu cầu vancomyxin giảm xuống thời gian Tuy nhiên, xuất chủng vi khuẩn S auureus kháng metixilin vào thập kỷ cuối kỷ XX làm kháng sinh glycopeptit lựa chọn phác đồ điều trị bệnh nhiễm trùng vi khuẩn kháng nhiều loại KS thông dụng gây Lúc vancomyxin ví loại thần dược hay phương thuốc cuối có khả điều trị bệnh nhiễm trùng nguy hiểm chủng vi sinh vật kháng metixilin gây nên Vancomyxin mở liệu pháp điều trị có nghi ngờ khả kháng penixilin chủng Staphylococcus Sau nghi ngờ dẫn chứng số liệu cụ thể liệu pháp điều chỉnh cho phù hợp [18], [20], [22], [28], [36], [56] 1.1.2 Đặc tính vancomyxin Vancomyxin có công thức tổng quát C66H75Cl2N9O24 Trong phân tử có chứa disacarit vị trí axit amin thứ 4, cấu trúc hóa học thể hình 1.1 [9], [16] Vancomyxin có tổng số 18 trung tâm lập thể, với trung tâm lập thể nằm lõi glycol trung tâm lại nằm nhóm cacbonhydrat [58] Cấu trúc hóa học lập thể định chế hoạt động vancomyxin Vancomyxin có chuỗi hexapeptit glycozyl hóa, chứa aminoaxit gồm loại chloro-β-hydroxytyrozin, p-hydroxylphenylglyxin, N-metylleuxin axit aspartic tạo thành khung phân tử vững [13], [43], [53], [64] 1.1.3 Cơ chế kháng khuẩn vancomyxin Vancomyxin kháng sinh nhóm glycopeptit có hoạt tính kháng vi sinh vật thông qua việc ức chế tổng hợp thành tế bào Vị trí mà tác nhân công vào thành tế bào lớp peptidoglycan Đây lớp để vi khuẩn chống lại điều kiện bất lợi môi trường Nếu lớp lý mà lớp peptidoglycan bị phá hủy tế bào vi khuẩn trở nên cứng nhắc, không linh động, kết qủa tế bào bị chết [33] Vancomyxin ức chế giai đoạn cuối trình sinh tổng hợp peptidoglycan qua giai đoạn [58]: - Giai đoạn 1: Vancomyxin không xâm nhập vào tế bào chất để ức chế bước sinh tổng hợp thành tế bào mà hoạt động bên màng tế bào chất Sự ức chế chất màng ngăn cản chu trình lặp lại chất mang C55 lipit làm gia tăng tích lũy tiền chất tế bào chất Đây chế không thường xuyên xảy tác nhân kháng vi sinh vật bao gồm việc sử dụng chất thay điều khiển hoạt tính enzyme sinh tổng hợp - Giai đoạn 2: Nhờ cấu tạo hình xoắn phân tử mà gần người ta phát khả kháng vi sinh vật vancomyxin tác động ngược lại với mẫn cảm penixilin Ở màng tế bào vi khuẩn, enzyme transglycosylaza bổ sung mảnh disacaryl pentapeptit để hình thành lớp peptidoglycan tế bào Sau đó, enzyme transpeptidaza nối peptit bên với sợi lớp peptidoglycan bên bề mặt màng tế bào Đích tác dụng vancomyxin gắn với peptit chất, ngăn cản chúng liên kết với vị trí hoạt động enzyme Khi đó, phân tử vancomyxin có dạng hình cốc liên kết với lực cao nhờ bề mặt lõm tạo năm liên kết hydro với đoạn cuối N-acyl-D-Alanyl-D-Alanin cầu liên kết chéo peptit chưa nối với pentapeptit - Giai đoạn 3: Liên kết vancomyxin với chuỗi lipit-PP-Glc NAC- pentapeptit liên kết vật lý tương đối bền vững ngăn cản tác động transglycosylaza/transpeptidaza Vancomyxin không công disacaryl pentapeptit mà làm giảm liên kết đồng hóa trị, giảm tính bền học lớp peptidoglycan làm cho tế bào vi khuẩn dễ dàng bị phân giải nhờ thay đổi xảy áp suất thẩm thấu Vancomyxin có hoạt tính mạnh với cầu khuẩn vi khuẩn Gram (+) như: Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium, Enterococcus xoắn khuẩn (Bảng 1.2) [58], [62] CKS có khả tiêu diệt tốt vi khuẩn giai đoạn sinh sản, pH tối ưu 8,0 hoạt tính giảm mạnh pH 6,0 Điều giải thích hai nguyên nhân: khác biệt cấu trúc thành tế bào vi khuẩn Gram (+) vi khuẩn Gram (-) Cấu trúc thành tế bào vi khuẩn Gram (+) gồm có lớp peptidoglycan dầy, axit teichoic axit teichoronic, có màng protein polysaccarit bao quanh Trong thành tế bào vi khuẩn Gram (-) gồm có lớp peptidoglycan mỏng, lipopolysacarit, lipoprotein, photpholipit protein Trong tế bào vi khuẩn Gram (-), lớp peptidoglycan lớp màng bên bao bọc lớp màng ngăn chặn khuếch tán vancomyxin đến lớp peptidoglycan Ngược lại, lớp peptidoglycan vi khuẩn Gram (+) xác định bề mặt thành tế bào mẫn cảm với kháng sinh vancomyxin Hai phân tử glycopeptit phân tử lớn, chúng hòa tan lớp lipit màng tế bào vi khuẩn Gram (-), khó xâm nhập vào lớp bên thành tế bào [40], [58], [71] 1.1.4 Ứng dụng điều trị bệnh vancomyxin Vancomyxin xem phương thuốc cuối cùng, sử dụng sau việc điều trị bệnh kháng sinh khác hiệu Không lâu sau phát hiện, vancomyxin xếp vào danh mục loại dược phẩm hàng đầu đưa vào dùng rộng rãi bệnh viện để điều trị bệnh nhiễm trùng nguy hiểm vi sinh vật kháng KS nhóm β-lactam gây nên [15], [58] Vancomyxin đặc biệt có hiệu cao dùng điều trị bệnh MRSA gây nên, vi khuẩn mối nguy hiểm với bệnh nhân cao tuổi, bệnh nhân sau phẫu thuật người có hệ miễn dịch suy giảm [30] Vancomyxin định để điều trị cho bệnh nhân dị ứng với penixilin, bệnh nhân sử dụng loại thuốc penixilin cephalosporin sử dụng chủng vi sinh vật mẫn cảm với vancomyxin Dưới tác dụng vancomyxin tính bền vững vốn có cầu khuẩn Gram (+) penixilin không phát thấy [58] Mặc dù có nhiều CKS chữa trị bệnh vi khuẩn Gram (+) gây công bố năm gần đây, vancomyxin kháng sinh thay việc chữa trị bệnh Staphyloccus, Enterococcus chủng vi sinh vật kháng nhiều loại kháng sinh thông dụng gây nên [5], [30] 1.2 Streptomyces orientalis VÀ CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG TỚI SINH TỔNG HỢP VANCOMYXIN 1.2.1 Streptomyces orientalis Streptomyces orientalis có khả sinh CKS vancomyxin Lúc đầu, phát hiện, xạ khuẩn có tên Amycolatopsis orientalis, xếp vào chi Nocardia, sau loài phân loại lại xếp vào chi Streptomyces, đặt tên S orientalis, nhiên, nhiều tài liệu gọi tên truyền thống Amycolatopsis orientalis Cho đến nay, phát thấy kháng sinh vancomyxin từ loài xạ khuẩn [23], [26], [31], [35], [51] S orientalis phân biệt với loài khác thuộc chi Streptomyces đặc điểm nuôi cấy, hình thái, sinh lý, sinh hóa… [23] 1.2.2 Sinh tổng hợp vancomyxin xạ khuẩn Cũng giống đường sinh tổng hợp KS nhóm glycopeptit, vancomyxin tổng hợp cách ngưng tụ đơn vị nhỏ mà đơn vị lại tạo thành từ đường sinh tổng hợp riêng (Hình 1.3) Hình 1.3 Quá trình tổng hợp vancomyxin tế bào xạ khuẩn [71] 1.2.3 Nghiên cứu quy trình công nghệ sản xuất vancomyxin 1.2.3.1 Điều kiện nuôi cấy Theo tài liệu công bố [30], [33], [41], [42], [44], [59], xạ khuẩn S orientalis sử dụng sản xuất vancomyxin thường phát triển tốt nhiệt độ 20-35oC, nhiệt độ tối ưu cho trình sinh vancomyxin 28 oC, nhiệt độ 20oC 35oC chủng sinh trưởng yếu, sinh khối tích lũy lượng kháng sinh tạo thấp Độ pH thích hợp cho tổng hợp kháng sinh xạ khuẩn thường trung tính Tuy nhiên dải pH cho phép chủng sinh trưởng thường lớn so với pH tối ưu cho hoạt tính sinh tổng hợp kháng sinh Đối với xạ khuẩn S orientalis pH thích hợp cho sinh trưởng 6-8, pH thích hợp cho sinh vancomyxin từ 6,5-7,5 Môi trường kiềm hay axit ảnh hưởng trực tiếp đến trình sinh kháng sinh [25] 1.3 NGHIÊN CỨU DUY TRÌ VÀ NÂNG CAO HIỆU SUẤT CHỦNG GIỐNG SẢN XUẤT VANCOMYXIN Một yếu tố quan trọng hàng đầu cho trình lên men sinh tổng hợp hoạt chất sinh học chủng giống vi sinh vật Do chủng VSV dễ bị biến dị hoạt tính bị thoái hóa trình nuôi cấy nhiều lần tác động môi trường sống chúng, nên phải tiến hành chọn lọc thường xuyên chủng giống cho lên men Phần lớn chủng sản sinh KS phân lập từ tự nhiên thường có hiệu suất thấp dùng cho sản xuất [6], [7], [12], [26] Để thu chủng có khả siêu tổng hợp KS, có giá trị công nghiệp cần phải áp dụng phương pháp đột biến nhân tạo (đột biến cảm ứng) Các phương pháp đại sinh tổng hợp, kỹ thuật di truyền công nghệ gen, siêu tổng hợp, điều khiển hoạt động gen, gây đột biến định hướng, tạo dung hợp tế bào trần (protoplas)… nâng cao hiệu suất chủng giống thời gian ngắn mà mở phương hướng đầy triển vọng sản xuất CKS [58] 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT VANCOMYXIN Người ta phát thấy CKS vancomyxin thường tổng hợp xạ khuẩn S orientalis (trước có tên Nocardia orientalis Amycolatopsis orientalis) Việc phát vancomyxin coi cứu cánh cho nhân loại, có đặc tính chữa bệnh cao, phần khắc phục tượng kháng thuốc vi sinh vật gây bệnh [58] Vancomyxin đưa vào thử nghiệm chữa bệnh từ năm 1958, Bộ Y tế Mỹ cho phép sử dụng năm 1964 [71], [72] Dạng vancomyxin thương phẩm đóng 500 mg vancomyxin.HCl/lọ, tương đương 0,34 mmol VANCOCIN HCl (Vancomyxin dạng tiêm, USP) hãng Galaxy đóng lọ plastic (PL 2040) sử dụng tiêm tĩnh mạch, làm giảm phát triển vi khuẩn kháng kháng sinh, bảo vệ hiệu lực vancomyxin thuốc kháng khuẩn khác Vancomyxin nên dùng để chữa chống nhiễm trùng vi khuẩn nghi ngờ nhờn thuốc gây nên Khi dùng vancomyxin thời gian dài liều bị giảm thính giác, gây điếc, tổn thương thận Ngoài vancomyxin có tác dụng tiêm qua đường tĩnh mạch không hấp thụ qua đường tiêu hóa [21], [22] Vancoxyn, VancoxynD, VancoxynD IV, “Vancomycin by Abbott | VANCOCIN HCL | VANCOCIN HCL IN” (tên thương phẩm vancomyxin) bán thị trường giới với giá 18,25 USD/ 500 mg vancomyxin dùng để tiêm [72] Hiện nay, vancomyxin nghiên cứu hoàn thiện sản xuất, tăng độ tinh khiết giảm độ độc [5], [30], [33] CHƢƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 VẬT LIỆU 2.1.1 Chủng giống vi sinh vật - Chủng S orientalis 4912 chủng xạ khuẩn dại, phòng Công nghệ lên men mua từ Công ty TG Biotech thuộc Trường Đại học Kyungpook Hàn Quốc (Kyungpook National University - gọi tắt KNU) 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Bảo quản giống Chủng xạ khuẩn S orientalis 4912 giữ MT 48 thạch nghiêng, nhiệt độ oC cấy chuyền lại hàng tháng Giống sử dụng nghiên cứu hoạt hoá cách nuôi MT 48 thạch nghiêng, nhiệt độ 28oC, kéo dài 5-7 ngày Để bảo quản chủng lâu dài, giữ giống glyxerin -20 oC -70 đến -80 oC [2] CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA CHỦNG Streptomyces orientalis 4912 3.1.1 Đặc điểm nuôi cấy Chủng S orientalis 4912 nuôi môi trường (MT) thạch có thành phần dinh dưỡng khác Đây MT nuôi cấy đặc trưng để phân loại chủng xạ khuẩn Đặc điểm nuôi cấy chủng S orientalis 4912 MT trình bày bảng 3.1 Kết cho thấy, sau 14 ngày nuôi, KTKS chủng S orientalis 4912 MT khác màu trắng Sau xạ khuẩn hình thành bào tử nên bắt đầu có thay đổi màu sắc, MT Gauze ISP-6, KTKS chuyển sang màu đỏ, MT Gauze ISP-4, KTKS chuyển sang màu vàng nhạt, giữ nguyên màu trắng MT 48 MT khoai tây Chủng 4912 phát triển tốt MT Gauze Gauze Trên MT, chủng S orientalis 4912 không sinh sắc tố tan 3.2 KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP KHÁNG SINH CỦA CHỦNG Streptomyces orientalis 4912 Thử nghiệm lên men chủng 4912 với loại MT sở có nguồn dinh dưỡng khác A-4, A-4H, A-9, A-12, Gauze 48 Kết kiểm tra HTKS chủng S orientalis 4912 cho thấy, chủng có hoạt tính kháng khuẩn mạnh Phổ kháng khuẩn xạ khuẩn tiêu phân loại cần nghiên cứu Hoạt tính kháng khuẩn chủng 4912 kiểm tra với loại vi khuẩn kiểm định Bacillus subtilis ATCC 6633, Bacillus cereus ATCC 21778, Sarcina lutea M5 Staphylococcus aureus 209P thuộc nhóm vi khuẩn Gram dương Escherichia coli PA2 thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm 3.3 NÂNG CAO HOẠT TÍNH KHÁNG SINH CỦA CHỦNG S orientalis 4912 Yếu tố quan trọng hàng đầu cho trình lên men sinh tổng hợp hoạt chất sinh học chủng giống vi sinh vật Để đảm bảo chủng giống có hoạt tính cao, việc bảo quản tốt chủng giống phương pháp giữ giống, người ta thường xuyên tuyển chọn nâng cao hiệu suất kĩ thuật di truyền 3.3.1 Thu nhận bào tử tế bào trần từ chủng S orientalis 4912 Để thu bào tử cho xử lý đột biến, chủng S orientalis 4912 nuôi ống thạch nghiêng chứa MT 48 từ 8-10 ngày Nhỏ nước cất vô trùng theo mặt thạch, cạo nhẹ bề mặt để gạt bào tử vào nước đổ qua dụng cụ lọc để lấy bào tử Để thu TBT, chủng 4912 nuôi MT YEME dịch thể, sau sinh khối xử lý với lysozym Tuy nhiên, việc tạo TBT phụ thuộc chủ yếu vào thời gian nuôi cấy chủng giống, nồng độ thời gian xử lý với lysozym, nồng độ glyxin MT nuôi cấy Cần xác định giá trị yếu tố để thu kết tốt 3.3.3.1 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy tới khả hình thành tế bào trần chủng S orientalis 4912 Thời gian nuôi cấy giống có ảnh hưởng lớn tới trình hình thành tế bào trần Kiểm tra tạo thành tế bào trần chủng S orientalis 4912 thời điểm sinh trưởng khác 24, 36, 48, 60 72 Sau 60 phút xử lý sinh khối với lysozym (1 mg/ml), làm tiêu soi kính hiển vi thấy khuẩn ty bị cắt nhỏ hình thành tế bào trần Sử dụng buồng đếm hồng cầu, đếm số lượng TBT tạo thành, kết thể hình 3.6 cho thấy, trình tạo tế bào trần từ khuẩn ty 48 nuôi cấy diễn nhanh có hiệu 3.3.3.2 Ảnh hưởng thời gian xử lý lysozym tới khả hình thành tế bào trần chủng S orientalis 4912 Giống nuôi 48 giờ, sau xử lý lysozym với nồng độ mg/ml từ 30 đến 120 phút Trong trình thí nghiệm, làm tiêu soi kính hiển vi thấy sau 30 phút đoạn khuẩn ty bị cắt, tế bào trần tạo thành, sau 60 phút lượng tế bào trần tạo thành nhiều, sau 90 phút số lượng tế bào trần đi, số tế bào trần bắt đầu bị phá hủy Kết cho thấy khả tạo tế bào trần khả bền vững tế bào trần phụ thuộc nhiều vào thời gian xử lý lysozym Tại thời điểm trước 60 phút lượng tế bào trần tạo chưa đáng kể, sau 90 phút tế bào trần tạo bắt đầu bị phá huỷ, thời gian xử lý thích hợp từ 60-70 phút, lượng tế bào trần tạo nhiều ổn định Nếu kéo dài thời gian xử lý nữa, lysozym phá hủy TBT vừa tạo thành Làm tiêu soi kính hiển vi, dùng buồng đếm hồng cầu đếm số lượng TBT tạo thành, kết thể hình 3.7 3.3.3.3 Ảnh hưởng nồng độ lysozym tới khả hình thành tế bào trần chủng S orientalis 4912 Giống nuôi 48 giờ, sau xử lý lysozym với nồng độ từ 0,5 đến mg/ml 60 phút Kết thúc thí nghiệm, làm tiêu soi kính hiển vi đếm số lượng TBT Kết bảng 3.3 cho thấy, khả tạo tế bào trần khả bền vững tế bào trần tốt xử lý với lysozym nồng độ mg/ml Tại nồng độ 0,5 mg/ml, enzym nên lượng tế bào trần tạo chưa đáng kể Sau 60 phút xử lý nồng độ mg/ml trở lên, nồng độ lysozym cao nên tế bào trần tạo bị enzym phá huỷ gần hoàn toàn 3.3.3.4 Ảnh hưởng nồng độ glyxin tới khả hình thành tế bào trần chủng S orientalis 4912 Khi nuôi xạ khuẩn MT có chứa glyxin sinh trưởng bị ức chế Theo Baltz, sinh trưởng chủng xạ khuẩn S fradiae MT có 0,4% glyxin bị chậm lại, cụ thể thời gian nhân đôi tế bào kéo dài từ 1,6 lên tới 2,7 Mặc dù glyxin có tác dụng làm cho thành tế bào xạ khuẩn mẫn cảm với lysozym Đó glyxin thay D-alanin phân tử peptidoglycan thành tế bào làm cho lysozym dễ tác động vào mối liên kết glycozit Vì vậy, muốn tạo tế bào trần xạ khuẩn, glyxin thường lựa chọn để bổ sung vào MT nuôi cấy Để trình tạo tế bào trần diễn nhanh hiệu việc tìm nồng độ glyxin thích hợp cần thiết Theo nhiều tài liệu nghiên cứu thành tế bào loài xạ khuẩn mẫn cảm với lysozym khác [24] Vì thế, nồng độ glyxin thích hợp cho tạo tế bào trần mà không ảnh hưởng tới sinh trưởng loài xạ khuẩn khác 3.3.2 Nâng cao HTKS chủng S orientalis 4912 phƣơng pháp gây đột biến dùng tia UV N-metyl-N’-nitro-N-Nitrosoguanidin (MNNG) 3.3.2.1 Xác định tỷ lệ sống sót chủng S orientalis 4912 sau chiếu tia UV xử lý MNNG Để xây dựng đường cong sống sót xử lý với tia UV, dịch bào tử TBT xử lý với khoảng cách 20 cm Sau thời gian xử lý từ - 80 giây, cấy lên đĩa thạch MT 48 (với bào tử) R2YE (với TBT), nuôi tủ ấm 28-30oC ngày Đồ thị sống sót tế bào trần bào tử chủng S orientalis 4912 sau gây đột biến cho thấy (Hình 3.8), thời gian chiếu UV lâu tỷ lệ sống sót giảm Thời gian chiếu 30 giây, tỷ lệ bào tử sống sót 26,8% TBT 12,6% Thời gian chiếu 40 giây tỷ lệ sống sót bào tử 10,10% tế bào trần 8,6%; thời gian chiếu 50 60 giây tỷ lệ TBT sống sót 3,2% 10 0,03%; bào tử 4,22 0,1% Thời gian chiếu 70 giây số cá thể sống không tồn Rõ ràng khả tác động tia UV lên tế bào trần chủng 4912 mạnh lên bào tử Điều phù hợp với quy luật tự nhiên 3.4 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA BIẾN CHỦNG Streptomyces orientalis 4912-81-61 Chủng 61 có khả ức chế vi sinh vật kiểm định Bacillus subtilis ATCC 6633, B cereus ATCC 21778, Sarcina lutea M5 Staphylococcus aureus 209P Escherichia coli PA2, mức độ mạnh so với chủng 4912 có HTKS cao chủng gốc Giống chủng 4912, chủng 61 sử dụng tốt nguồn đường thông dụng glucoza, sacaroza, fructoza, lactoza, maltoza… Ngoài chủng 61 có khả sinh enzym thủy phân tinh bột, cazein, gelatin, pepton hóa sữa nên thuận lợi cho việc lựa chọn nguồn dinh dưỡng lên men sản xuất vancomyxin điều kiện Việt Nam Bảng 3.10 Một số đặc điểm sinh học biến chủng S orientalis 4912-81-61 Các tiêu Khuẩn lạc MT 48 Chủng 61 Tròn, đường kính 6-8mm, không xẻ thùy, bề mặt khô, có mấu lồi trung tâm Chủng 4912 Tròn, bề mặt xù xì, khô nhăn nheo tạo thành nếp gấp, có mấu lồi trung tâm, có vết nứt màu nâu nhạt, đường kính 3-5mm KTKS Màu trắng, dạng sợi mảnh Màu trắng, dạng sợi mảnh phân phân nhánh, bện chặt làm nhánh bề mặt khuẩn lạc màng dẻo Màu trắng Vàng nhạt Tạo bào tử Có Có Sử dụng glucoza, sacaroza Có Có Không Không Phân giải cazein Có Có Phân giải gelatin Có Có Khả pepton hoá sữa Có Có Thuỷ phân tinh bột Có Có Không Không 28 - 30 28 - 30 pH tối ưu cho sinh trưởng 6-8 6-8 Khả chịu muối (%)