Luận văn Thạc sỹ ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA MÔI TRƯỜNG Trần Thị Thúy NGHIÊN CỨU TUYỂN CHỌN VÀ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM ĐƠN DÒNG NẤM ĐỐI KHÁNG TRICHODERMA PHÒNG TRỪ TÁC NHÂN GÂY BỆNH THỐI ĐEN QUẢ CA CAO LUẬN VĂN THẠC SỸ KHOA HỌC Hà Nội Luận văn Thạc sỹ LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS PHẠM THỊ NGỌC DUNG PGS.TS ĐỒNG KIM LOAN tận tình hướng dẫn, dạy giúp đỡ em suốt trình thực đề tài hoàn thành luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến cán phòng thí nghiệm môn Bệnh Trồng, Viện Bảo vệ Thực vật - Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới Chủ nhiệm thành viên tham gia đề tài “Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen ca cao giải pháp khoa học công nghệ phòng trừ bệnh”, mã số ĐTĐL.2011G/63 giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho em thực đề tài, giúp em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô Khoa Môi trường trường Đại học Khoa học Tự nhiên tận tình truyền đạt kiến thức suốt năm học vừa qua Với vốn kiến thức mà em tiếp thu trình học tập hành trang quý báu để em hoàn thành tốt công việc sau Cuối em xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, người thân bạn bè, người động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện vật chất tinh thần cho em suốt thời gian học tập làm luận văn EM XIN TRÂN TRỌNG CẢM ƠN Học viên TRẦN THỊ THÚY Luận văn Thạc sỹ MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Nấm đối kháng Trichoderma spp 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Trichoderma spp [7, 13, 17, 21, 23, 24, 35, 40, 48] 1.1.2 Cơ chế tác động nấm Trichoderma spp lên tác nhân gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.3 Khả phòng trừ nấm Trichoderma spp loài nấm gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.4 Tình hình nghiên cứu, sản xuất, sử dụng chế phẩm nấm Trichoderma phòng trừ bệnh hại trồng 1.1.5 Một số loại vi sinh vật đối kháng chế phẩm sinh học sử dụng vi sinh vật đối kháng để tiêu diệt nấm bệnh nghiên cứu sử dụng [13, 23, 21, 60] 13 1.2 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen ca cao [52, 55, 58, 59] .15 1.2.1 Tình hình thiệt hại bệnh thối đen ca cao gây nên [38, 44, 47, 49, 52, 57] 15 1.2.2 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Phytophthora palmivora [42] .16 1.2.3 Chu kỳ phát triển bệnh [37, 54] 18 1.2.4 Sự vận chuyển mầm bệnh [50] 18 1.2.5 Nghiên cứu phòng trừ sinh học bệnh thối đen ca cao .19 1.2.5.1 Kiểm dịch thực vật, vệ sinh vườn ươm vườn kinh doanh [32] 19 CHƯƠNG 23 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu .23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu 23 2.2.2 Phương pháp thực nghiệm phòng thí nghiệm 24 Luận văn Thạc sỹ 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết phân lập nấm Phytophthora sp gây thối đen ca cao 31 3.2 Phân lập nấm Trichoderma sp vùng trồng ca cao tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông 31 Trong tổng số 100 mẫu đất quanh vùng rễ ca cao có nguồn Trichoderma có triển vọng, nguồn có sợi nấm phát triển tốt môi trường PDA, màu sắc sợi nấm khác từ xanh đậm, xanh nhạt đến màu xanh mạ… 33 3.3 Khả đối kháng nấm Trichoderma sp nấm Phytophthora gây thối đen ca cao 34 3.3.1 Khả ký sinh nấm Trichoderma sp 34 3.4 Nghiên cứu số đặc điểm hình thái, sinh học sinh thái nấm Trichoderma sp 37 3.4.1 Đặc điểm hình thái nấm Trichoderma sp môi trường nhân tạo 37 3.4.2 Đặc điểm sinh thái nấm Trichoderma sp .39 3.5 Nghiên cứu điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm Trichoderma sp đối kháng với nấm Phytophthora palmivora gây thối đen ca cao 45 3.5.1 Nghiên cứu thành phần chất môi trường nhân sinh khối nấm Trichoderma sp 45 3.5.2 Nghiên cứu lượng nước môi trường nhân sinh khối nấm Trichoderma sp 47 3.5.3 Nghiên cứu xác định thông số kỹ thuật tối ưu lên men nhân sinh khối nấm Trichoderma (ánh sáng, chế độ cấp khí) 52 3.6 Đánh giá sức sống nấm Trichoderma sp sau bảo quản sản phẩm nhân sinh khối .56 3.7 Sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm Trichoderma sp 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 Kết luận .60 Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 Luận văn Thạc sỹ DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ADCI/VOCA Tổ chức hợp tác phát triển nông nghiệp trợ giúp quốc tế a, b, c, d Phân lớp sai khác công thức CMA Môi trường gồm bột ngô (60g), Agar (20g) Cs Cộng CV Độ biến động (%) Czapek Môi trường tổng hợp bao gồm Saccharose (30g), NaNO (3g), K2HPO4 (1g), MgSO4 (0,5g), KCl (0,5g), FeSO4 (0,1g), 1000ml nước IRRISTAT Phần mềm thống kê nông nghiệp P Phytophthora PDA Môi trường nuôi cấy gồm khoai tây (200g), đường dextro (20g), Agar (20g), 1000ml nước PTNT Phát triển nông thôn sp Một loài spp Nhiều loài T Trichoderma VSV Vi sinh vật Luận văn Thạc sỹ DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Nấm đối kháng Trichoderma spp 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Trichoderma spp [7, 13, 17, 21, 23, 24, 35, 40, 48] 1.1.2 Cơ chế tác động nấm Trichoderma spp lên tác nhân gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.3 Khả phòng trừ nấm Trichoderma spp loài nấm gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.4 Tình hình nghiên cứu, sản xuất, sử dụng chế phẩm nấm Trichoderma phòng trừ bệnh hại trồng 1.1.5 Một số loại vi sinh vật đối kháng chế phẩm sinh học sử dụng vi sinh vật đối kháng để tiêu diệt nấm bệnh nghiên cứu sử dụng [13, 23, 21, 60] 13 1.2 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen ca cao [52, 55, 58, 59] .15 1.2.1 Tình hình thiệt hại bệnh thối đen ca cao gây nên [38, 44, 47, 49, 52, 57] 15 1.2.2 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Phytophthora palmivora [42] .16 1.2.3 Chu kỳ phát triển bệnh [37, 54] 18 1.2.4 Sự vận chuyển mầm bệnh [50] 18 1.2.5 Nghiên cứu phòng trừ sinh học bệnh thối đen ca cao .19 1.2.5.1 Kiểm dịch thực vật, vệ sinh vườn ươm vườn kinh doanh [32] 19 Bảng 1.1 Lượng phân bón cho ca cao trồng năm 20 CHƯƠNG 23 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu .23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu 23 Luận văn Thạc sỹ 2.2.2 Phương pháp thực nghiệm phòng thí nghiệm 24 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu 30 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 31 3.1 Kết phân lập nấm Phytophthora sp gây thối đen ca cao 31 Bảng 3.1 Ảnh hưởng vật liệu bẫy đến khả .31 bẫy nấm Phytophthora gây thối đen ca cao .31 3.2 Phân lập nấm Trichoderma sp vùng trồng ca cao tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông 31 Bảng 3.2 Nguồn Trichoderma thu thập từ tỉnh 32 Bình Phước, Đăk Lăk Đăk Nông .32 Hình 3.1 Đồ thị thể hiện tỷ lệ phân lập nguồn nấm Trichoderma từ đất tại tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông .33 Bảng 3.3 Nguồn Trichoderma có triển vọng thu thập tỉnh .33 Bình Phước, Đăk Lăk Đăk Nông .33 Trong tổng số 100 mẫu đất quanh vùng rễ ca cao có nguồn Trichoderma có triển vọng, nguồn có sợi nấm phát triển tốt môi trường PDA, màu sắc sợi nấm khác từ xanh đậm, xanh nhạt đến màu xanh mạ… 33 3.3 Khả đối kháng nấm Trichoderma sp nấm Phytophthora gây thối đen ca cao 34 3.3.1 Khả ký sinh nấm Trichoderma sp 34 Bảng 3.4 Khả ký sinh dòng nấm đối kháng Trichoderma sp 34 nấm Phytophthora palmivora gây thối đen ca cao .34 Hình 3.2 Nấm Trichoderma sp đối kháng với nấm Phytophthora palmivora 36 Bảng 3.5 Khả ức chế nấm Phytophthora palmivora 36 chất kháng sinh bay dòng nấm Trichoderma sp .36 Hình 3.3 Hiệu quả ức chế của giống Trichoderma phân lập 37 đối với nấm Phytophthora palmivora 37 3.4 Nghiên cứu số đặc điểm hình thái, sinh học sinh thái nấm Trichoderma sp 37 3.4.1 Đặc điểm hình thái nấm Trichoderma sp môi trường nhân tạo 37 Hình 3.4 Các giai đoạn phát triển sau nuôi cấy nấm Trichoderma sp 39 môi trường 39 3.4.2 Đặc điểm sinh thái nấm Trichoderma sp .39 Bảng 3.6 Ảnh hưởng môi trường dinh dưỡng tới phát triển 39 nấm Trichoderma sp có triển vọng 39 Bảng 3.7 Ảnh hưởng nhiệt độ tới sinh trưởng, phát triển 40 nấm Trichoderma sp có triển vọng 40 Bảng 3.8 Ảnh hưởng điều kiện chiếu sáng đến sinh trưởng phát triển nấm Trichoderma sp có triển vọng 41 Luận văn Thạc sỹ Bảng 3.9 Ảnh hưởng pH đến phát triển .42 nấm Trichoderma sp có triển vọng 43 Bảng 3.10 Định tính hoạt độ enzyme nấm đối kháng 44 Trichoderma sp có triển vọng 44 Hình 3.5 Định tính hoạt độ enzyme nấm đối kháng Trichoderma sp 45 3.5 Nghiên cứu điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm Trichoderma sp đối kháng với nấm Phytophthora palmivora gây thối đen ca cao 45 3.5.1 Nghiên cứu thành phần chất môi trường nhân sinh khối nấm Trichoderma sp 45 Bảng 3.11 Ảnh hưởng môi trường nhân nuôi đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma sp 46 Hình 3.6 Ảnh hưởng môi trường nhân nuôi nấm Trichoderma .47 3.5.2 Nghiên cứu lượng nước môi trường nhân sinh khối nấm Trichoderma sp 47 Bảng 3.12 Ảnh hưởng lượng nước đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma sp môi trường gạo .48 Hình 3.7 Ảnh hưởng lượng nước đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma môi trường gạo 49 Bảng 3.13 Ảnh hưởng lượng nước đến khả nhân sinh khối 50 nấm Trichoderma sp môi trường bột ngô 50 Hình 3.8 Ảnh hưởng lượng nước đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma môi trường bột ngô 51 Bảng 3.14 Ảnh hưởng lượng nước đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma môi trường thóc 52 3.5.3 Nghiên cứu xác định thông số kỹ thuật tối ưu lên men nhân sinh khối nấm Trichoderma (ánh sáng, chế độ cấp khí) 52 Bảng 3.15 Ảnh hưởng chế độ đậy nút kín đảo trộn đến khả 53 nhân sinh khối nấm Trichoderma 53 Bảng 3.16 Ảnh hưởng chế độ buộc nút hở đảo trộn cấp khí đến .54 khả nhân sinh khối nấm Trichoderma sp .54 Bảng 3.17 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân sinh khối .56 nấm Trichoderma sp .56 3.6 Đánh giá sức sống nấm Trichoderma sp sau bảo quản sản phẩm nhân sinh khối .56 Bảng 3.18 Ảnh hưởng phương pháp bảo quản sản phẩm nhân sinh khối đến sức sống nấm Trichoderma .57 Hình 3.9 Bảo quản chế phẩm Trichoderma túi hút chân không 58 Hình 3.10 Bảo quản chế phẩm 58 Trichoderma túi không hút chân không 58 3.7 Sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm Trichoderma sp 58 Hình 3.11 Quy trình sản xuất chế phẩm nấm Trichoderma sp 59 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 60 Kết luận .60 Luận văn Thạc sỹ Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 Luận văn Thạc sỹ DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Nấm đối kháng Trichoderma spp 1.1.1 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Trichoderma spp [7, 13, 17, 21, 23, 24, 35, 40, 48] 1.1.2 Cơ chế tác động nấm Trichoderma spp lên tác nhân gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.3 Khả phòng trừ nấm Trichoderma spp loài nấm gây bệnh trồng [35, 40, 48] 1.1.4 Tình hình nghiên cứu, sản xuất, sử dụng chế phẩm nấm Trichoderma phòng trừ bệnh hại trồng 1.1.5 Một số loại vi sinh vật đối kháng chế phẩm sinh học sử dụng vi sinh vật đối kháng để tiêu diệt nấm bệnh nghiên cứu sử dụng [13, 23, 21, 60] 13 1.2 Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen ca cao [52, 55, 58, 59] .15 1.2.1 Tình hình thiệt hại bệnh thối đen ca cao gây nên [38, 44, 47, 49, 52, 57] 15 1.2.2 Đặc điểm sinh học sinh thái nấm Phytophthora palmivora [42] .16 1.2.3 Chu kỳ phát triển bệnh [37, 54] 18 1.2.4 Sự vận chuyển mầm bệnh [50] 18 1.2.5 Nghiên cứu phòng trừ sinh học bệnh thối đen ca cao .19 1.2.5.1 Kiểm dịch thực vật, vệ sinh vườn ươm vườn kinh doanh [32] 19 CHƯƠNG 23 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .23 2.1 Đối tượng phạm vi nghiên cứu .23 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu .23 2.2 Phương pháp nghiên cứu 23 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu 23 Luận văn Thạc sỹ Thí nghiệm cho thấy nấm Trichoderma không phát triển thích hợp môi trường yếm khí, việc cấp khí cho môi trường lên men nhân sinh khối quan trọng, nhiên để xác định chế độ cấp khí thích hợp tiến hành thí nghiệm buộc nút hở đảo trộn với mức đảo trộn khác môi trường thóc, kết thể bảng 3.16 Bảng 3.16 Ảnh hưởng chế độ buộc nút hở đảo trộn cấp khí đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma sp Nguồn nấm Tr-tv Tr-H Công thức thí nghiệm Chỉ tiêu theo dõi Số bào tử/g Ngày xuất bào tử (sau cấy) CT23 x 108 a 3–4 CT24 32 x 108 c 3–4 CT25 55 x 108 d 3-4 CT26 35 x 108 c 3–4 CT27 25 x 108 b 3–4 CT28 x 108 a 3-4 CV (%) 11,3 CT23 x 108 a 3–4 CT24 34 x 108 c 3–4 CT25 54 x 108 d 3–4 CT26 37 x 108 c 3-4 CT27 25 x 108 b 3–4 CT28 x 108 a 3–4 CV (%) 7,1 (Viện Bảo vệ Thực vật, 2013) Ghi chú: - Các chữ khác a, b, c, d sai khác có ý nghĩa với P ≤ 0,05 CV: Độ biến động (%) Buộc nút hở mục đích để cấp khí cho môi trường nhân sinh khối, nhiên phía môi trường nhân sinh khối phải cấp khí cách lắc đảo 54 Luận văn Thạc sỹ trộn môi trường Khi lắc đảo trộn, tạo độ thông thoáng, giúp cho bào tử sợi nấm lan sâu vào môi trường nhân sinh khối Tuy nhiên đảo trộn liên tục ngày/ lần hạn chế phát triển nấm Trichoderma, theo nghiên cứu thời gian hình thành bào tử nấm Trichoderma môi trường PDA cho thấy phải ngày xuất bào tử môi trường, đảo trộn liên tục cắt đứt sợi, phá vỡ trình hình thành bào tử nấm, bào tử nấm không hình thành nhiều hạn chế phát tán mọc lan môi trường Ở công thức Buộc nút hở + Đảo trộn cấp khí lần sau ngày 10 ngày (CT25) cho mật độ bào tử đạt cao (54 x 108 bào tử/g), sau ngày bào tử hình thành bề mặt môi trường nhân sinh khối (mặt môi trường nhân sinh khối có màu xanh), đảo nhẹ tạo độ xốp cho môi trường giúp cho bào tử nấm phát tán cho toàn môi trường sinh khối, đến 10 ngày sau đảo lại lần nhằm giúp cho bào tử bám bề mặt thóc, phát triển đến mức tối đa sau 15 ngày nuôi cấy, hoàn thiện chu trình nhân nuôi nấm môi trường nhân sinh khối 3.5.3.2 Nghiên cứu chế độ ánh sáng ảnh hưởng đến khả phát triển nấm môi trường nhân sinh khối Để xác định chế độ ánh sáng thích hợp cho phát triển nấm Trichoderma, thí nghiệm tiến hành chọn môi trường nhân sinh khối môi trường thóc đặt điều kiện ánh sáng khác nhau, theo dõi phát triển nấm môi trường, kết thể bảng 3.17 55 Luận văn Thạc sỹ Bảng 3.17 Ảnh hưởng ánh sáng đến khả nhân sinh khối nấm Trichoderma sp Nguồn nấm Công thức thí nghiệm Tr-tv CT29 CT30 CT31 CV (%) Tr-H CT29 CT30 CT31 CV (%) Chỉ tiêu theo dõi 25 x 108 a 54 x 108 b 29 x 108 a 24,2 27 x 108 a 58 x 108 b 31 x 108 a 18,3 3-4 3–4 3-4 3-4 3-4 3-4 3-4 3-4 (Viện Bảo vệ Thực vật, 2013) Ghi chú: - Các chữ khác a, b, c, d sai khác có ý nghĩa với P ≤ 0,05 CV: Độ biến động (%) Chế độ ánh sáng không ảnh hưởng nhiều đến trình phát triển nấm Trichoderma, điều kiện ánh sáng nấm phát triển tốt Tuy nhiên công thức có sai khác có ý nghĩa xử lý thống kê Công thức 12 sáng + 12 tối (CT30) cho lượng bào tử cao đạt 54 – 58 x 108 bào tử/g, công thức khác cho lượng bào tử thấp từ 25 – 31 x 108 bào tử/g 3.6 Đánh giá sức sống nấm Trichoderma sp sau bảo quản sản phẩm nhân sinh khối Đảm bảo sức sống nấm trình bảo quản chế phẩm quan trọng, giảm sức sống đưa đồng ruộng hạn chế hiệu phòng trừ bệnh Tiến hành bảo quản nấm túi nilon điều kiện hút chân không không hút chân không, đặt 28 0C, đánh giá sức sống nấm tháng sau bảo quản, kết thể bảng 3.18 56 Luận văn Thạc sỹ Bảng 3.18 Ảnh hưởng phương pháp bảo quản sản phẩm nhân sinh khối đến sức sống nấm Trichoderma TT Thời gian bảo quản (tháng) Số khuẩn lạc nấm Trichoderma (CFU/g) Bảo quản túi nilon Bảo quản túi nilon hút chân không thường 1 55 x 108 b 54 x 108 c 2 50 x 108 ab 50 x 108 c 3 49 x 108 ab 49 x 108 c 4 51 x 108 ab 42 x 108 bc 5 49 x 108 ab 36 x 108 b 6 46 x 108 a 13 x 108 a CV (%) 9,3 14,0 (Viện Bảo vệ Thực vật, 2013) Ghi chú: - Các chữ khác a, b, c, d sai khác có ý nghĩa với P ≤ 0,05 CV: Độ biến động (%) Sau tháng bảo quản điều kiện 280C, phương pháp bảo quản nấm mọc tốt môi trường Tuy nhiên bảo quản túi nilon hút chân không tốt túi nilon thường, sau tháng bảo quản dạng túi nilon hút chân không mật độ bảo tử không giảm so với sau1tháng bảo quản, sai khác xử lý thống kê Sau tháng bảo quản túi nilon thường mật độ bào tử giảm đi, có sai khác so với sau 1-3 tháng bảo quản Sau tháng mật độ bào tử có giảm so với sau tháng, nhiên mật độ bào tử lớn 46x10 CFU/g bảo quản túi nilon có hút chân không 13x10 8CFU/g bảo quản túi nilon không hút chân không nên sử dụng bình thường Tuy nhiên để đảm bảo hiệu phòng trừ chế phẩm cần nghiên cứu thêm ảnh hưởng thời gian bảo quản đến mật độ bào tử nấm Trichoderma sp từ đưa hướng dẫn bảo quản sử dụng chế phẩm cụ thể 57 Luận văn Thạc sỹ Hình 3.9 Bảo quản chế phẩm Hình 3.10 Bảo quản chế phẩm Trichoderma túi hút chân không Trichoderma túi không hút chân không 3.7 Sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm Trichoderma sp Nấm Trichoderma nuôi môi trường PDA dùng làm nguồn để nhân sinh khối Bào tử nấm Trichoderma dùng làm nguồn nhân sinh khối chuyển vào môi trường nhân sinh khối thóc, gạo ngô Môi trường nhân sinh khối hấp khử trùng 45 phút 1210C với tỷ lệ nước gạo 250g:150ml tỷ lệ thóc nước 200g:250ml, tỷ lệ ngô nước 250g:150ml Sau nguồn nấm Trichoderma nuôi cấy điều kiện tốt đậy nút hở đảo trộn lần sau ngày 10 ngày, điều kiện ánh sáng xen kẽ 12 sáng 12 tối nhiệt độ phòng vòng 15 ngày Sau 15 ngày nuôi cấy, nấm Trichoderma phơi bóng râm khô Chế phẩm sau đóng gói túi nilon, hút chân không bảo quản nhiệt độ 28 0C Quy trình sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm đối kháng Trichoderma nêu cụ thể hình 3.11 58 Luận văn Thạc sỹ Nấm Trichoderma nuôi cấy giữ nguồn môi trường PDA Môi trường nhân sinh khối thóc, gạo ngô cho vào túi nilon bổ sung nước với lượng thích hợp sau hấp khử trùng 45 phút 1210C Bào tử nấm Trichoderma tách khỏi bề mặt PDA cấy vào môi trường nhân sinh khối sau hấp để nguội Lắc nhẹ túi nilon để đảo trộn, đảm bảo bào tử nấm phân bố môi trường nhân sinh khối túi nilon để hở Nấm Trichoderma nuôi cấy điều kiện nhiệt độ phòng, đảo trộn sau ngày, sau 10 ngày nuôi cấy Thời gian nuôi cấy 15 ngày Chế phẩm phơi bóng râm khô Chế phẩm đóng gói túi nilon, hút chân không bảo quản điều kiện nhiệt độ 280 C Hình 3.11 Quy trình sản xuất chế phẩm nấm Trichoderma sp 59 Luận văn Thạc sỹ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Sau thời gian nghiên cứu đề tài tuyển chọn dòng Trichoderma (Tr-tv Tr-H) có hoạt độ enzyme Cellulase, Chitinase, β-Glucanase cao, có hiệu đối kháng cao (85,8 - 95,3%) với nấm Phytophthora gây bệnh thối đen ca cao điều kiện phòng thí nghiệm Nấm Trichoderma sp tuyển chọn phát triển thích hợp môi trường PDA, sau ngày đường kính đạt 8,0 – 8,3 cm, nhiệt độ thích hợp từ 25 - 300C, tốc độ tăng trưởng đạt 2,3 – 2,9 cm/ngày.đêm, mật độ bào tử cao ( 34 - 48 x 108 bào tử/ ml) Điều kiện ánh sáng xen tối thuận lợi cho nấm Trichoderma sinh trưởng phát triển, pH thích hợp từ – Trên loại môi trường gạo, thóc, bột ngô, gạo trộn bột ngô dòng nấm Trichoderma (Tr-tv Tr-H) phát triển tốt Tùy theo mục đích sử dụng để chọn môi trường nhân nuôi thích hợp Điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dòng là: Môi trường gạo với lượng 250g gạo + 150ml nước cho mật độ bào tử cao (40 - 44 x 108 bào tử/g), môi trường bột ngô với lượng 250g bột ngô + 150 ml nước, nấm phát triển tốt cho lượng bào tử cao (18 – 19 x 108 bào tử/g) Trên môi trường thóc với lượng 200g thóc + 250ml nước, đạt mật độ bào tử cao ( 54 x 108 bào tử/g) bào tử nấm xuất sau - ngày nuôi cấy Nấm Trichoderma sp phát triển tốt điều kiện sử dụng túi nilon buộc nút hở + Đảo trộn cấp khí lần, sau ngày 10 ngày ánh sáng cần 12 sáng + 12 tối, cho mật độ bào tử đạt cao (54 – 58 x 108 bào tử/g) Chế phẩm nấm Trichoderma sp.được bảo quản điều kiện mát (28 0C) đóng túi nilon hút chân không Việc ứng dụng chế phẩm sinh học vào phòng trừ bệnh hại trồng vừa góp phần nâng cao suất trồng đồng thời bảo vệ môi trường Kiến nghị Tiếp tục nghiên cứu, thử nghiệm đánh giá chế phẩm đồng ruộng để đưa kết luận chắn góp phần giảm thiểu gây hại bệnh thối đen ca cao hoàn thiện hệ thống quản lý bệnh hại tổng hợp cho ca cao 60 Luận văn Thạc sỹ TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT ACRI, 1997 Ca cao trồng có triển vọng phát triển nông nghiệp bền vững Việt Nam 38 trang Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn, 1999 Đầu tư dự án phát triển giống ca cao (giai đoạn 1999 - 2000) Số 5685 QĐ/BNN - XDCB Ngày 30/12/1999 Dương Minh, Tô Huỳnh Như, Trần Thị Cẩm Nhụy Nguyễn Hoàng Phúc (2011), “Khảo sát khả tiết Cellulase chủng nấm Trichoderma thu thập đồng sông Cửu Long”, Trường đại học Cần Thơ, Tạp chí khoa học 2011 (17a), 282-285 Hoàng Thị Hoài (2011), Nghiên cứu quy trình sản xuất chế phẩm sinh học từ số vi sinh vật đối kháng, phòng trừ nấm gây bệnh trồng Khóa luận tốt nghiệp, Đại học Nông nghiệp I, ngành bảo vệ thực vật Hồng Châu (2009), Ứng dụng chế phẩm Trichoderma, Trạm khuyến nông Tân Trụ, trang Ngô Vĩnh Viễn, Phạm Ngọc Dung, Nguyễn Thị Ly, Lê Thu Hiền cộng 61 Luận văn Thạc sỹ (2007), “Phương pháp phân lập nấm Phytophthora từ đất, rễ phận bị bệnh”, Tuyển tập kết Khoa học Công nghệ nông nghiệp 2006 – 2007, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, p 236 – 249 Nguyễn Hồng Tuyên, Phạm Thị Ngọc Dung cộng (2012 – 2013), Nghiên cứu tác nhân gây bệnh thối đen ca cao giải pháp khoa học công nghệ phòng trừ bệnh, mã số ĐTĐL.2011-G/63 Viện Bảo vệ Thực vật Nguyễn Minh Châu (2009), Sử dụng nấm Trichoderma để phòng trừ sâu bệnh cho vườn ăn quả, Viện ăn Miền Nam, nguồn tin thông xã, tr.2 Nguyễn Thị Chắt, Đào Thị Lam Hương (1995), “ Kết số thí nghiệm thực nghiệm nhân giống vô tính ca cao”, Kỷ yếu kết 10 năm nghiên cứu khoa học (1983 - 1993), Viện Nghiên cứu Cà phê Trang 598 - 610 10 Nguyễn Văn Tuất Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất chế biến sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc sinh học, Nhà xuất nông nghiệp, 56tr 11 Nguyễn Văn Tuất Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất chế biến sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc sinh học, Nhà xuất nông nghiệp, 56tr 12 Nguyễn Văn Uyển, 1999 Hướng dẫn kỹ thuật trồng ca cao Nhà Xuất Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 110 trang 13 Nguyễn Văn Uyển, Nguyễn Tài Sum, 1996 Cây ca cao giới triển vọng Việt Nam Nhà xuất nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 183 trang 62 Luận văn Thạc sỹ 14 Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú, Bùi Văn Công (2012), “Nghiên cứu sản xuất sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ số bệnh nấm hại vùng rễ Khoai Tây, Lạc, Đậu Tương” , Tạp chí khoa học phát triển, Tập 10, số 1, tr.95 - 102 15 Phạm Hồng Đức Phước (2003) Kỹ thuật trồng ca cao Việt Nam Nhà Xuất Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, 73 trang 16 Phạm Hồng Đức Phước, 2005 Báo cáo kết khảo nghiệm dòng ca cao nhập nội tỉnh phía Nam, 28 trang 17 Phạm Hồng Đức Phước, Nguyễn Thị Mỹ Nguyệt, 1999 Nhân giống vô tính cho cacao phương pháp ghép Tập san KHKT Nông Lâm Trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Số tháng 9/1999, trang 48 - 50 18 Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Lê Đình Thao, Hà Giang, Trần Thị Như Hoa, Nguyễn Hồng Tuyên, Nguyễn Thúy Hạnh (2012), “Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng Trichoderma asperellum phòng trừ nấm Phytophthora spp gây bệnh cao su” Tạp chí bảo vệ thực vật, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, số 12 19 Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Nguyễn Văn Tuất (2009), “Phân tích chuỗi Internal Transcribed Spacer (ITS) nấm Phytophthora tropicalis gây b ệnh ch ết nhanh hồ tiêu Việt Nam ”, Tạp chí Nông nghiệp phát tri ển nông thôn, B ộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, số 4, p 17 – 21 20 Phạm Ngọc Dung, Lê Đình Thao, Nguyễn Hồng Tuyên, Đoàn Thị Thanh, Nguyễn Văn Liêm, Nguyễn Thúy Hạnh (2011), “Cải tiến môi trường phân lập nấm Phytophthora spp gây bệnh ca cao”, Tạp chí bảo vệ thực vật, số 21 Phạm Ngọc Dung, Ngô Vĩnh Viễn, Nguyễn Văn Tuất, Nguyễn Thị Ly, Trần 63 Luận văn Thạc sỹ Ngọc Khánh, Hồ Gấm, Nguyễn Quang Tuấn (2008), “ Một số kết phòng trừ bệnh chết nhanh gây hại hồ tiêu Đăk Nông”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn, ISSN: 0868-2801, số 3, p 17 - 23 22 Trần Kim Loang, Lê Đình Đôn, Tạ Thanh Nam, Ngô Thị Xuân Thịnh, Nguyễn Thị Tiến Sĩ, Trần Thị Xê (2008), “Phòng trừ bệnh nấm Phytophthora hồ tiêu chế phẩm sinh học Trichoderma (Tricho-VTN) Tây Nguyên”, Kết nghiên cứu khoa học năm 2008, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, tr 307-315 23 Trần Kim Loang, Vũ Văn Tố, Hà Thị Mão (2001), Điều tra xác định thành phần sâu bệnh hại ca cao tỉnh Đăk Lăk, Kết nghiên cứu khoa học năm 2000 - 2001 Buôn Ma Thuột, trang 144 - 155 24 Trần Thị Thuần, Nguyễn Thị Ly, Phạm Ngọc Dung (2004), “Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng Trichoderma để phòng trừ nhóm nấm tồn đất gây hại trồng”, Tạp chí bảo vệ thực vật 25 Trần Thu Hà, Phạm Thanh Hòa (2012), “Khả đối kháng nấm Trichoderma với nấm bệnh hại trồng Scleroitum rolfsii điều kiện invitro”, Tạp chí khoa học, Đại học Huế, tập 75A, số 6, (2012), tr 49 – 55 26 Trịnh Đức Minh cộng (2000), Kết nhân giống vô tính ca cao (Theobroma cacao) phương pháp ghép, Báo cáo khoa học Tiểu ban Trồng trọt Bảo vệ thực vật Hội đồng Khoa học Công nghệ Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn Tháng 9/2000 27 Trịnh Đức Minh, Nguyễn Thị Chắt cộng (1998), “Kết chọn đầu dòng nhân vô tính ca cao Viện Nghiên cứu Cà phê”, Tạp chí Khoa học - Công nghệ Quản lý kinh tế, Nông nghiệp Công nghiệp thực phẩm, số 6, trang 237 - 240 28 Viện Qui hoạch Thiết kế nông nghiệp, 1998 Tổng quan phát triển ca cao Việt Nam TIẾNG ANH 29 Anandaraj M and Sarma Y R (2003), The potential of PGPRS in disease management of spice crops, International PGPR Workshop, Calicut, India 30 Aravind, R., Kumar, A., Eapen, S.J., Ramana, K.V (2009), Endophytic bacterial flora in root and stem tissues of black pepper (Piper nigrum L.) 64 Luận văn Thạc sỹ genotype: isolation, identification and evaluation against Phytophthora capsici, Indian Institute of Spices Research, Calicut, Kerala, India, p.1 31 Aryantha, I.P., Cross, R and Guest, D.I (2000), “Suppression of Phytophthora cinnamomi in potting mixes amended with uncomposted and composted animal manures”, Phytopathology, 90: p 775 - 782 32 Bekele F., End M J and Eskes A B.(2003) Proceeding of the international workshop on cocoa Breeding for improved production systems 198 p 33 Broadley, R.H (1992), Protect your avocados, Brisbane, Australia, Queensland Department of Primary Industries 34 Cohen,Y and Coffey, M.D.(1986), “Systemic fungicides and the control of Oomycetes”, Annual Review of Phytopathology, 24, 311 - 338 35 Diby, P and Sarma, Y.R (2006), “Antagonistic effects of metabolites of Pseudomonas fluorescens strains on the different growth phases of Phytophthora capsici, foot rot pathogen of black pepper (Piper nigrum L.)”, Arch Phytopathol Plant Protect., 39, p 113–118 36 Diby, P., Saju, K.A., Jisha, P.J., Sarma, Y.R., Kumar, A and Anandajai, M (2003), “Mycolytic enzymes produced by Pseudomonas fluorescens and Trichoderma spp against Phytophthora capsici, the foot rot pathogen of black pepper (Piper nigrum Linn.)”, Soil Biology and Biochemistry 37 Diby, P., Sarma, Y.R., Sinivasan, V and Anandaraj, M (2005b), “Pseudomonas fluorescens mediated vigour in black pepper (Piper nigrum L.) under green house cultivation” Ann Microbiol., 55, p 171–174 38 Drenth, A and Guest, D.I (2004), Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia, Australian Centre for International Agricultural Research Canberra, 235 pp 39 Drenth, A and Sendall, B (2004), “Isolation of Phytophthora from infected Plant Tisue and soil, and Principles of Species Identification” In “Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia”, Australian Centre for International Agricultural Research Canberra, pp 94 – 102 40 Duncan, J., and Cooke, D (2002) Identifying, diagnosing and detecting 65 Luận văn Thạc sỹ Phytophthora by molecular methods Mycologist, Vol.16, Part 2: 59-66 41 Dutta, P and Das, B.C (1999), “Control of Rhizoctonia solani in soybean ( Glycine max) by farmyard manure culture of Trichoderma harzianum” Indian Journal of Agricultural Sciences, p.596-598 42 Ebon, A.H., Lu, A.T.T and Tiong, R.H.C (1978), Early growth result of cocoa on some Sarawak soil Proc Int Conf Cocoa Coconuts, Kuala Lumpur, pp: 224 – 242 43 Erwin, D.C and Riberrio O.K (1996), “Phytophthora diseases worldwide”, St Paul, Minnessota, USA, American Phytopathological Society Press, 562 pp 44 Freeman, G.H (1964), Present nursery and establishment methods for cocoa in Western Nigeria Ann Rep W Afr Cocoa Res Inst (Nigeria), pp 13 -14 45 Fulton, R.H (1989), The cacao disease trilogy: black pod, Monilia pod rot and witch broom Plant Dis, 73: 601 – 603 46 Galindo, J.J (1992), “Prospects for biological control of cacao”, In: Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australasia, Rome, FAO Plant Production and Protection, p 112 47 Guest, D.I., Pegg, K.G.and Whiley, A.W.(1995), “Control of Phytophthora diseases of tree crops using trunk-injected phosphonates”, Horticultural Reviews, 17, p 299 - 330 48 Jackson, G.V.H and Newhook, F.J (1978), Sources of Phytophthora palmivora inoculum in Solomon Island cocoa plantations Trans.Br.Mycol.Soc 71: 239 – 249 49 Jollès Muzzarelli (1999), Chitin and chitinases, Basel, Boston, Berlin, Birkhauser Switzerland, p.38 - 68 50 Keane, P.J (1992), Disease of pest and cocoa: an overview In: Keane, P.J and Putter, C.A., ed., Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australia, Rome, Italya, Food and Agriculture Organization of the United Nations, FAO Plant Production and Protection Paper No.112 51 Konam, J.K and Guest, D.I (2004), “Role of Flying beetles (Coleoptera: Scolytidae and Nitidulae) in the spread of Phytophthora pod rot of cocoa in 66 Luận văn Thạc sỹ Papua New Guinea”, Australasian Plant Pathology, in press 52 Kyung Seok Park, et al (2007), “Induced systemic Resistance by Bacillus vallismortis EXTN-1 suppressed bacterial wilt in tomato caused by Ralstonia solanacearum”, Plant Pathology, J.23 (1), 2007 53 Lee, B.S and Lum, K.Y (2004), Phytophthora Diseases in Malaysia, Malaysian Agricultural Research and Development Institute, GPO Box 12301, 50774 Kuala Lumpur, Malaysia 54 Lutz, A., Menge, L.A and Bender,G (1989), “Phytophthora root rot in citrus: can it be controlled by manipulation of irrigation practices”, California Grower, 13, p - 10 55 Medeiros, A.G (1976), Sporulation of Phytophthora palmivora (Butl.) Butl In relation to epidemiology and chemical control of black pod disease PhD thesis, University of California, Riverside, California, USA Cited in Pereira 56 Morris, P.F and Gow, N.A.R (1993), “Mechanism of electrotaxis of zoospore of phytopathogenic fungi”, Phytopathology, 83, p 877-882 57 Pokou, N.D., N’Goran, J.A.K., Kebe, I., Eskes, A., Tahi, M and Sangare, A (2008), Levels of resistance to Phytophthora pod rot in cocoa accessions selected on-farm in Côte d’Ivoire Centre National de Recherche Agronomique (CNRA), 01 BP 1740 Abidjan 01, Côte-d’Ivoire, 27 :302 – 309 58 Purwantara, A (1987), Penyebab penyakit Phytophthora pada tanaman kakao di Jawa In: Proceedings of the Indonesia Plant Pathology Society Conference 1987, Surabaya, 283 – 290 59 Purwantara, A (2003), Eoidemiology and control of Phytophthora diseases of cocoa in Java, Indonesia Paper presented at International Congress of Plant Pathology, at Christchurch, New Zealand Paper number 28.1 60 Tan, K.S.R (2000), “Effect of fertiliser on the susceptibility of durian and papaya towards Phytophthora palmivora” BSc (Honours) thesis, School of Botany 61 Tran Ha, Ficke, A., Asiimwe, T., Ho¨fte, M and Raaijmakers, J.M (2007), “Role of cyclic lipopeptide massetolide A in biological control of 67 Luận văn Thạc sỹ Phytophthora infestans and in colonization of tomato plants by Pseudomonas fluoresens”, New Phytol., 175, p 731–742 68 [...]... nấm bệnh cao là hết sức cần thiết , góp phần nâng cao hiệu quả phòng trừ, an toàn với môi trường và sức khỏe của con người [13] Xuất phát từ những yêu cầu thực tiễn đó, trong khuôn khổ luận văn sẽ thực hiện: Nghiên cứu tuyển chọn và sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm đối kháng 2 Luận văn Thạc sỹ Trichoderma phòng trừ tác nhân gây bệnh thối đen quả ca cao Nội dung nghiên cứu bao gồm:... môi trường và con người CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng và phạm vi nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng được nghiên cứu là nấm đối kháng Trichoderma được phân lập từ mẫu đất trồng ca cao được thu thập từ 3 tỉnh Đăk Lăk, Đăk Nông và Bình Phước, có khả năng phòng trừ bệnh thối đen quả cao cao 2.1.2 Phạm vi nghiên cứu - Nghiên cứu khả năng đối kháng của nấm Trichoderma. .. nhanh và gây hại nặng, làm giảm năng suất, chất lượng quả ca cao Bệnh thối đen quả ca cao cũng là bệnh chính gây hại ca cao trên thế giới cũng như ở Việt Nam Để phát triển và sản xuất ca cao có hiệu quả, bền vững cần phải có các biện pháp phòng trừ các bệnh hại nghiêm trọng này, trong đó có bệnh thối đen quả ca cao [25, 27] Ở Việt Nam, việc ứng dụng biện pháp sinh học trong phòng trừ bệnh do nấm Phytophthora... lập và tuyển chọn đối với nấm Phytophthora gây bệnh thối đen ở quả ca cao - Nghiên cứu các điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm đối kháng Trichoderma phòng trừ nấm Phytophthora palmivora 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu + Thu thập mẫu đất ở các vùng trồng ca cao của tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông: 23 Luận văn Thạc sỹ - Lấy đất quanh vùng rễ của các cây ca cao khỏe,... cứu các điều kiện tối ưu để sản xuất chế phẩm đơn dòng nấm đối kháng Trichoderma sp có khả năng đối kháng nấm Phytophthora sp gây thối đen quả ca cao CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Nấm đối kháng Trichoderma spp 1.1.1 Đặc điểm sinh học và sinh thái của nấm Trichoderma spp [7, 13, 17, 21, 23, 24, 35, 40, 48] Giống nấm Trichoderma Pers thuộc họ Moniliaceae, bộ moniliales, lớp nấm bất toàn Deuteromycetes Nấm Trichoderma. .. nấm Trichoderma spp từ đất và nấm Phytophthora palmivora từ mẫu bệnh thối đen quả ca cao lấy ở một số vùng trồng ca cao của tỉnh Đăk lăk, Đăk Nông và Bình Phước - Xác định khả năng đối kháng của nấm Trichoderma sp đối với nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca cao - Nghiên cứu một số đặc điểm hình thái, sinh học và sinh thái của nấm Trichoderma sp đã tuyển chọn được - Nghiên. .. dân sản xuất nhỏ và nghèo Theo Ross Jaaz (trưởng đại diện ADCI /VOCA), hơn 80 % ca cao trên thế giới được sản xuất từ mảnh đất nhỏ dưới 1ha [12] Bệnh thối đen quả ca cao (black pod) là bệnh phổ biến và gây hại nghiêm trọng nhất đối với các vùng trồng ca cao trên thế giới, ảnh hưởng trực tiếp đến năng suất và chất lượng hạt ca cao, do nấm Phytophthora palmivora gây ra Bệnh gây hại không những trên quả. .. Chế phẩm sinh học đa chức năng MT1 của Viện Bảo vệ thực vật ứng dụng trong phòng trừ bệnh chết nhanh hồ tiêu do nấm Phytophthora spp., chế phẩm Trichoderma spp phòng trừ bệnh thối quả ca cao do nấm Phytophthora palmivora của Viện Nông Lâm nghiệp Tây Nguyên Các kết quả nghiên cứu của Nguyễn Văn Tuất và Lê Văn Thuyết, 2001 đã phát hiện những điểm kí sinh hoặc sự quấn của sợi nấm đối kháng lên sợi nấm bệnh, ... fosetyl-Al rất có tác dụng đối với bệnh thối củ do Phytophthora infestans gây ra, nhưng lại vô hiệu trong việc phòng chống bệnh rụng lá muộn ở khoai tây (Erwin và Ribeiro, 1996) Các biện pháp phòng trừ sinh học đối với bệnh thối đen quả ca cao do nấm Phytophthora palmivora gây ra chưa có công trình nào nghiên cứu cụ thể Do vậy, cần nghiên cứu và đưa ra được các biện pháp phòng trừ tổng hợp bệnh trên theo... tác nhân gây bệnh thối đen quả ca cao [52, 55, 58, 59] 1.2.1 Tình hình thiệt hại do bệnh thối đen quả ca cao gây nên [38, 44, 47, 49, 52, 57] Ước tính thiệt hại hàng năm do loại bệnh thối đen quả ca cao gây ra trên thế giới là rất lớn làm giảm năng suất ca cao từ 10 % đến 30 % và có thể lên đến 90 100 %, phụ thuộc vào vị trí địa lý, giống trồng trọt, chủng gây bệnh và điều kiện môi trường từng vùng