1 Bộ giáo dục đào tạo Trường đại học sư phạm hà nội Vũ văn khánh Nghiên cứu số đặc tính hoá sinh khả hạ đường huyết dịch chiết từ vỏ mắc mật (Clausena excavata Burm.f.) mô hình chuột thực nghiệm luận văn thạc sĩ sinh học Hà nội, 2010 LI CM N hon thnh lun ny, tụi ó nhn c rt nhiu s giỳp quý bỏu c v vt cht v tinh thn, cng nh kin thc chuyờn mụn ca rt nhiu ngi xung quanh tụi Trc tiờn tụi xin by t lũng kớnh trng v bit n sõu sc ti GS TS Ngc Liờn khoa sinh hc Trng i hc Khoa hc T nhiờn- i hc Quc gia H Ni Thy ó giao ti, tn tỡnh giỳp , ch bo v ng viờn khuyn khớch tụi sut quỏ trỡnh hc tp, cuc sng, to mi iu kin thun li cho tụi hon thnh tt ti nghiờn cu ny Tip n ti xin chõn thnh cm n Ban giỏm hiu, phũng Sau i hc, khoa sinh KTNN, Ban giỏm c Trung tõm h tr nghiờn cu khoa hc v chuyn giao cụng ngh- i hc S phm H Ni 2, ni to iu kin tt cho tụi hon thnh chng trỡnh ca khoỏ hc Tụi xin by t lũng bit n ti s GD v T Bc Giang, Ban giỏm hiu trng THPT Cm Lý, THPT Lc Nam ó to mi iu kin tụi tham gia v hon thnh khúa hc hon thnh ti ny tụi xin chõn thnh cm n s giỳp nhit tỡnh v hiu qu ca cỏc cỏn b, sinh viờn lm vic ti Phũng Min dch hc thuc Trung tõm nghiờn cu khoa hc S sng, Trng i hc KHTN- i hc Quc gia H Ni Cui cựng, tụi xin t lũng bit n sõu sc nht ti gia ỡnh, bn bố, nhng ngi luụn quan tõm, chm súc, chia s v ng viờn tụi sut quỏ trỡnh hc tp, lm cụng vic cng nh cuc sng Mt ln na xin trõn thnh cm n ! H Ni, ngy 06 thỏng 10 nm 2010 Hc viờn V Vn Khỏnh M U Lý chn ti Xó hi phỏt trin lm cho mc sng ca ngi dõn ngy cng c nõng cao, nhng mt trỏi ca s phỏt trin li lm t l bnh tt dõn c gia tng nhanh chúng nh bnh ỏi thỏo ng (T), bnh bộo phỡ (BP), bnh tim mch, bnh truyn nhim, bnh ung th Mc sng c nõng cao, n ung nhiu cht dinh dng, ng ớt, kh nng cung cp nng lng vt quỏ nhu cu ca c th l nguyờn nhõn chớnh lm cho tỡnh trng tha cõn, BP tng lờn vi mc bỏo ng, khụng nhng cỏc quc gia phỏt trin m c cỏc quc gia ang phỏt trin Theo thụng bỏo ca t chc quc t theo dừi bnh BP (IOTF), hin th gii cú khong 1,7 t ngi tha cõn v BP [3], [72] Vit Nam, theo iu tra mi nht ca Vin Dinh dng cho thy tỡnh trng tha cõn v BP (2007) cng ang tng nhanh, ú t l BP ca ngi trng thnh, t 25 64 tui lờn ti 16,8 % [14] Vi nhng hiu bit hin tha cõn, BP c coi l nhng i tng nghim nhiờn tin ti T type [3] ỏi thỏo ng l bnh ni tit ph bin nht, theo hip hi tiu ng quc t (IDF) s ngi mc bnh T nm 1994 l 110 triu ngi, nm 2000 l 146 triu ngi, d oỏn ht nm 2010 l 220 triu ngi v n nm 2025 cú khong 300 330 triu ngi, chim 5% dõn s th gii [3] Vit Nam, s ngi mc bnh T nm 2007 khong triu ngi, n cú khong 4,5 triu ngi, ỏng lo ngi l tui mc bnh ny cng tr hoỏ T chc y t th gii coi T l cn súng thn tn phỏ sc kho ton cu [49] , gõy hng lot cỏc bin chng nh: mự mt, suy gan, thoỏi hoỏ thn kinh, tim mch, hoi t c qua ng nh chõn, tay T l t vong T gõy lờn ng th th gii ch sau bnh tim mch v ung th Tha cõn, BP v T, nht l T type va cú tc gia tng nhanh chúng li cú nhiu bin chng nguy him iu khụng ch l mi quan tõm ln ca ngnh y t, ca cỏc nh khoa hc m cũn thu hỳt s chỳ ý ca cỏc nh qun lý xó hi Ngy cú rt nhiu loi thuc tng hp dựng iu tr BP v T t chc an ton thc phm v dc phm M phờ chun (FDA) nh metformin, orlistat, sibutramin, ephedrin nhng vụ cựng tn kộm v nhiu cú tỏc dng ph nguy him Vớ d nh nm 1997 kinh phớ nc M chi cho iu tr BP l 47,6 t USD, nhng cho T lờn n 98,2 t USD [3] Trc tỡnh hỡnh ú U ban chuyờn gia ca WHO ó khuyn khớch phỏt trin, sn xut v s dng cỏc thuc cú ngun gc tho dc sn cú, d s dng, ớt c, ớt tỏc dng ph, giỏ thnh r rt phự hp vi mt nc nghốo nh Vit Nam Hn th, Vit Nam l nc cú ti nguyờn sinh vt vụ cựng phong phỳ, cú nn y hc dõn tc phỏt trin lõu i T xa xa nhõn ta ó bit s dng cõy c sn cú nh mt ngun dc liu quý giỏ tr bnh v bo v sc kho H Cam tranh (Rutaceae) khỏ ph bin nc ta, hin ó cú mt s cụng trỡnh nghiờn cu v cỏc loi thuc chi Clausena [22], [23], [60] cho kt qu kh quan iu tr BP v T Tuy nhiờn, cha cú tỏc gi no nghiờn cu c tớnh dc hc v tỏc dng tr bnh T ca cõy Mc mt Vỡ vy chỳng tụi quyt nh chn ti: Nghiờn cu mt s c tớnh hoỏ tớnh hoỏ sinh v kh nng h ng huyt ca dch chit t v cõy Mc mt (Clausena excavata Burm.f.) trờn mụ hỡnh chut thc nghim Mc ớch nghiờn cu Lun trung vo mc tiờu nghiờn cu thnh phn hoỏ hc t v cõy Mc mt cú tỏc dng gim trng lng v ng huyt, iu hũa m mỏu trờn chut BP v T thc nghim, to c s khoa hc cho nhng nghiờn cu tip theo lnh vc tỡm kim thuc cha bnh theo y hc c truyn Nhim v nghiờn cu 3.1 a quy trỡnh chit, tỏch cỏc hp cht t nhiờn t v cõy Mc mt bng cỏc phc h dung mụi hu c 3.2 Kho sỏt thnh phn cỏc hp cht t nhiờn cú v cõy Mc mt 3.3 Thit k mụ hỡnh chut bộo phỡ thc nghim v chut T type 3.4 Nghiờn cu tỏc ng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n trng lng, n mt s ch s hoỏ sinh mỏu ca chut bộo phỡ thc nghim v kh nng iu ho nng ng huyt ca chut T type i tng v phm vi nghiờn cu 4.1 i tng - Thc vt: V cõy Mc mt (Clausena excavata Bumr f.) c thu hỏi vo thỏng nm 2009 ti Lc Ngn - Bc Giang ó c nh tờn phõn loi tin s Vừ Vn Chi nờu [6] - ng vt: Chut nht trng chng swiss (Mus musculus) tun tui ( 1416g/con) v thc n chun c mua ti Vin V sinh Dch t Trung ng cung cp 4.2 Phm vi nghiờn cu Nghiờn cu mt s c tớnh sinh dc hc ca mt s phõn on dch chit (cao ethanol, cao n-hexan, cao chloroform, cao ethylacetat) t v cõy Mc mt trờn mụ hỡnh chut BPTN v chut bộo phỡ gõy T type Phng phỏp nghiờn cu 5.1 Phng phỏp chit tỏch cỏc phõn on dch chit 5.2 Phng phỏp nh tớnh thnh phn hoỏ hc ca v cõy Mc mt 5.3 Phng phỏp phõn lp cỏc hp cht bng k thut sc kớ lp mng, 5.4 Phng phỏp nh lng polyphenol tng s theo phng phỏp FolinCicalteau 5.5 Xõy dng mụ hỡnh chut: bộo phỡ thc nghim, chut T type 5.6 Phng phỏp nh lng mt s ch s hoỏ sinh 5.7 Phng phỏp x lý thụng kờ úng gúp mi ca ti - a quy trỡnh tỏch chit phõn on cỏc hp cht t nhiờn t v cõy Mc mt (Clausena excavata Burm.f.) - ỏnh giỏ c c tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n kh nng gim trng lng v mt s ch s hoỏ sinh ca chut BPTN - ỏnh giỏ c tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n kh nng h glucose huyt v iu ho mt s ch s hoỏ sinh chut T type NI DUNG CHNG TNG QUAN TI LIU 1.1 Cỏc hp cht thc vt th sinh(Plant secondary metabolites) Hp cht hp cht thc vt th sinh l cỏc sn phm ca quỏ trinh trao i cht c sinh thc vt Chỳng l cỏc cht hoỏ hc c tng hp v chuyn hoỏ t cỏc cht trao i bc nht nh axit amin, axit nucleic, carbonhydrate, lipid, peptid hoc cỏc sn phm trung gian ca chu trỡnh ng phõn, chu trỡnh pentose- phosphate, chu trỡnh axit citric cỏc cht trao i bc nht gi vai trũ trung tõm v tham gia trc tip vo quỏ trỡnh trao i cht ca c th Cỏc hp cht thc vt th sinh khụng phi l cỏc yu t c bit cn thit cho quỏ trỡnh sinh trng, phỏt trin, quang hp [75] Chỳng c to cỏc t bo chuyờn bit vi vai trũ iu ho mi quan h qua li gia cỏc t bo c th v l cỏc hp cht phũng th giỳp thc vt chng li cỏc bnh xõm nhim thc vt i vi mụi trng xung quanh [66] Cn c vo cu to v tớnh cht lý hoỏ hc ca chỳng m cỏc hp cht thc vt th sinh c chia thnh nhúm chớnh: nhúm phenolic, nhúm terpen, nhúm alkaloid [31],[36] Gn õy nhiu cụng trỡnh nghiờn cu cho thy cỏc hp cht polyphenol (thuc nhúm phenolic) ngy cng cú nhiu ng dng rng rói iu tr mt s bnh nan y nh: ung th, bộo phỡ, tiu ng [50],[58],[61],63],[72] 1.1.1 Cỏc hp cht phenolic t thc vt Phenolic l nhúm ln hp cht thc cht thc vt th sinh phõn b rng rói c th thc vt v cú mt khp ni t nhiờn Hp cht phenolic cú c im chung l phõn t cha ớt nht mt vũng thm mang mt hay nhiu nhúm hydroxyl Cht ny c hỡnh thnh t nhng sn phm ng phõn v chu trỡnh pentose phosphate qua acid shikimic hay theo ng acetate, malonate, qua acetyl- SCoA [37] Hin cú trờn 8000 loi ó c nhn bit t cỏc ngun khỏc t nhiờn [52] Cỏc hp cht phenolic cú th tn ti dng aglycons t do, dng ether, este, dng glycoside, dng phc hp vi protein, dng carbonhydrate hoc cỏc dng khỏc [13],[15],[37] Da vo cu to v tớnh cht hoỏ hc, hp cht phenolic c chia thnh nhúm ln: Nhúm phenol n gin (simple phenol) v nhúm polyphenol Nhúm phenol n gin li c chia thnh nhúm chớnh: nhúm phenolic acid v nhúm coumarin Nhúm polyphenol cng chia thnh nhúm chớnh: Nhúm flavonoid v nhúm tannin [6], [32], [37], [45], [54] 1.1.1.1 Phõn nhúm phenolic acid Khỏi nim phenolic thc vt dựng ch tt c cỏc hp cht thc vt th sinh cú ti thiu mt nhúm hydroxyl phenolic, gn õy cỏc nh khoa hc thng gii hn phõn nhúm phenolic acid ch gm cỏc cht l dn xut ca acid benzoic (C6C1) v acid cinamic(C6C3) [8] Gallic acid procatechuic acid 1.1.1.2 Phõn nhúm coumarins Coumarin l cỏc dn xut ca -pyrone cú cu trỳc C6C3 , d vũng cha oxy v cú nhiu loi cõy Coumarin l nhng cht kt tinh khụng mu, hoc cú mu vng nht, v ng, mt s ln d thng hoa, cú mựi thm, ging nh mựi thm ca valinin hay ca c mi khụ [26] V hoỏ hc coumarin cú th tn ti cõy dng aglycon tan nhiu cỏc dung mụi hu c kộm phõn cc v dng kt hp vi ng glucose to thnh glycoside d tan nc Hin ó cú hn 1500 loi coumarin khỏc tn ti t nhiờn 800 loi thc vt ó c nhn dng [53] Trong cõy coumarin c coi l mt s cỏc cht phũng th hoỏ hc hu hiu giỳp thc vt trỏnh c nhng bt li mụi trng v dch bnh gõy Trong i sng hng ngy, coumarin c s dng lm nc hoa, hng liu, bỏn tng hp cỏc cht hoỏ hc khỏc nhau, c bit l cỏc cht chng ụng mỏu v cht dit loi gm nhm Trong y hc, tỏc dng ỏng chỳ ý ca dn cht coumarin l tỏc dng chng co tht, lm gión n ng mch vnh, lm bn v bo v thnh mch Nhiu cht coumarin cú tớnh khỏng khun, mt s cht khỏc cú tỏc dng khỏng viờm, khỏng nm, khỏng u, tr giun sỏn, gim au v h nhit Coumarin 1.1.1.3 Phõn nhúm Flavonoid Flavonoid l mt nhng nhúm hp cht phenolic thng gp t nhiờn Chỳng thng l nhng sc t, phn ln cú mu vng (flavon, flavonol, chancol), d tan nc nờn cú tờn l flavonoid (flavus cú ngha l mu vng Ngoi cũn cú mt s sc t khỏc nh xanh, , tớm hoc khụng mu cng c xp vo nhúm flavonoid vỡ chỳng cú chung c im cu to hoỏ hc Mu sc ca flavonoid cũn thay i theo pH ca mụi trng (Anthocyanes cú mu mụi trng acid, mu xanh mụi trng kim) [31], [43], [44] Trong cõy, flavonoid cú th tn ti hai dng l dng t aglycon tan nhiu cỏc dung mụi hu c nh ether, ethanol, acetone v hu nh khụng tan nc Dng liờn kt vi ng gi l glycoside tan nc v hu nh khụng tan cỏc dung mụi hu c Khi thu phõn cỏc 10 flavonoid bng acid hoc enzyme thỡ chỳng s phõn tỏch thnh phn glycon v phn ng tng ng [59] V hoỏ hc, khung cacbon ca flavonoids l C6C3-C6, gm 15 nguyờn t cacbon, vũng bezen A v B ni vi qua vũng pyran C, ú A kt hp vi C to thnh khung chroman [31], [37] 2' 10 B 1' 4' C A 3' O 6' 5' Flavan (2-phenyl chroman) Tu theo mc oxy hoỏ ca mch cacbon, s cú mt hay khụng cú mt ca ni ụi gia C2,C3 v nhúm cacbonyl C4 m flavonoid cú th chia thnh nhiu nhúm ph khỏc [67] Cyanidin Epicatechin Quercetin HO OH OH Glucose O - Rhamnose - glucose OH O Saponin O Rutin Flavonoid cú th tham gia vo nhiu phn ng hoỏ hc khỏc nh phn ng ca nhúm hydroxyl (-OH), phn ng vi vũng thm (diazo hoỏ), phn ng ca nhúm cacbonyl (phn ng shinoza) v phn ng to phc vi kim loi [13] Hin ó cú hn 4500 cỏc loi flavonoid khỏc tn ti c th thc vt ó c nhn dng [67] Trong cõy, flavonoid gia rt nhiu vai trũ 69 Trc T Sau 21 ngy 3.7 3.6 3.57 3.57 3.57 3.57 3.57 3.62 LDL-c (mmol/l) 3.5 3.4 3.3 3.25 3.27 3.15 3.2 3.11 3.1 2.9 2.8 1.T+EtOH 2.T+n-hex 3.T+EtOAc 4.T+Metf 5.T+KT Hỡnh 3.17 Biu ch s LDL-c trc v sau 21 ngy iu tr Nghiờn cu ca UKPDS cho thy, LDL-c l yu t nguy c quan trng nhúm nguy c ri lon chuyn hoỏ lipid gõy tng bnh lý mch vnh Ngi ó mc T type 2, ch cn LDL-c tng nh hoc trung bỡnh cng l yu t nguy c lm cho bnh lý mch vnh tng rừ rt [3] Kt qu nghiờn cu trờn cho thy, chut T type cú LDL-c tng cao so vi chut ch bộo phỡ (tng 89,89% t 1,88 lờn 3,57mmol/l) Lụ khụng iu tr thỡ sau 21 ngy LDL-c tng lờn 1,4% Ngc li cỏc lụ c iu tr thỡ LDL-c gim ỏng k, gim ớt nht l lụ iu tr bng phõn on n-hexan gim 8,4%; tip n l phõn on ethanol gim 8,96%; lụ iu tr bng phõn on ethylacetat gim 11,76%; gn bng lụ ung metformin gim 12,89% õy l kt qu kh quan cú ý ngha v mt dc lý tr liu 70 KT LUN V KIN NGH Kt lun Bng cỏc phn ng nh tớnh v k thut sc kớ lp mng ó xỏc nh c thnh phn cỏc hp cht t nhiờn v cõy Mc mt l khỏ phong phỳ bao gm terpen, flavonoid v cỏc polyphenol khỏc nh lng cho thy hm lng polyphenol cao nht thuc phõn on ethylacetat, chim 3,65% theo lng cao Khụng xỏc nh c LD50 ca phõn on dch chit t v cõy Mc mt vi liu ung ti a l 8g/kg th trng, chng t v cõy Mc mt khụng c ó xõy dng thnh cụng mụ hỡnh chut BPTN Sau tun chut nuụi theo ch n giu cht bộo v Cholesterol ó cú trng lng tng 55,76%; cỏc ch s nh Cholesterol, Triglycerid, LDL-c, Glucose tng tng ng l 77,74%; 64,14%; 37,23%; 31,49% so vi chut nuụi thng Trong ch s HDL-c v LPL mỏu li gim ln lt l 28,80% v 41,41% iu ny hon ton phự hp vi biu hin ca BP Sau tun iu tr chut BPTN bng cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt vi liu ung 1000 mg cao khụ /kg th trng, chỳng tụi nhn thy phõn on ethanol v ethylacetat cú tỏc dng tt nht l gim trng lng v mt s ch s hoỏ sinh mỏu chut theo chiu hng tt: - Gim trng lng tng ng vi hai cao l: 12,99% v 17,94% - Gim Cholesterol tng ng vi hai cao l: 13,72% v 16,47% - Gim Triglycerid tng ng vi hai cao l: 31,93% v 39,92% - Tng HDL-c tng ng vi hai cao l: 47,19% v 51,69% - Gim LDL-c tng ng ca hai cao l: 30,32% v 35,64% - Tng LPL tng ng ca hai cao l: 66,25% v 70,28% 71 Tiờm STZ vo chut BPTN, vi liu 110 mmg/kg th trng chỳng tụi ó to thnh cụng mụ hỡnh chut T type thc nghim Sau 72h tiờm STZ glucose huyt luụn trỡ n nh mc cao (> 18 mmol/l) Vic iu tr chut T type sau 21 ngy bng cỏch ung cao phõn on dch chit t v cõy Mc mt vi liu 1000 mg/kg th trng, chỳng tụi ó chng minh phõn on ethanol v ethylacetat cú kh nng gim glucose huyt tt nht, tng ng l: 32,82% v 36,11% Cỏc ch s hoỏ sinh lipid mỏu cng thay i theo hng tớch cc l: - Gim Cholesterol tng ng ca hai cao l: 15,83% v 11,44% - Gim Triglycerid tng ng ca hai cao l: 24,85% v 33,94% - Tng HDL-c tng ng ca hai cao l: 30,77% v 42,31% - Gim LDL-c tng ng ca hai cao l: 8,96% v 11,76% Kin ngh Tip tc nghiờn cu hon thin quy trỡnh iu tr tỡm liu iu tr ti u chut BPTN, chut T type v thi gian iu tr T cho hiu qu cao Cn tip tc nghiờn cu, tỡm hiu sõu hn v thnh phn hoỏ hc ca cỏc hp cht t nhiờn v cõy Mc mt, c bit l hai phõn on ethanol v ethylacetat cú tỏc dng lm gim trng lng v thay i mt s ch s hoỏ sinh mỏu theo hng cú li chut BPTN v chut T type 72 TI LIU THAM KHO TING VIT Trng Quc Bo, Hi Ngc (1994), tiờu khỏt, Cha bnh ni khoa bng y hc c truyn, tr 121-125 Huy Bớch, ng Quang Chung, Bựi Xuõn Chng, Nguyn Thng Dong, Trung m, Phm Vn Hin, V Ngc L, Phm Duy Mai, Phm Kim Món, on Th Thu, Nguyn Tp v Trn Ton (2004), Cõy thuc v ng vt lm thuc Vit Nam I, NXB Khoa hc v K thut H Ni, tr 1061- 1063 T Vn Bỡnh (2007), Nhng nguyờn lý nn tng bnh ỏi thỏo ng-tng glucoza mỏu, NXB Y hc, H Ni T Bỡnh, Trn c Th, Thỏi Hng Quang, Mai Th Trch (2007), Bỏo cỏo ton cỏc ti khoa hc hi ngh khoa hc ton quc chuyờn nghnh ni tit v chuyn hoỏ ln th 3, NXB Y hc, H Ni Phm Th Trõn Chõu, Nguyn Quc Khang, o Kim Nhung (1997), thc sinh húa, i hc tng hp H Ni Vừ Vn Chi (1999), T in cõy thuc Vit Nam, NXB Y hc, H Ni, tr 136- 140 B mụn Y hc C truyn dõn tc - Trng i hc Y H Ni (1999), ỏi thỏo ng, Y hc c truyn, NXB Y hc, tr 542- 543 Nguyn Thng Dong, Bựi Th Hng, Nguyn Kim Cn, Phm Thanh Hng, Nguyn Bớch Thu, Nguyn Duy Thun, Nguyn Vn Thun (2006), Nghiờn cu thuc t tho dc, B giỏo dc v o to- B y t- Vin dc liu, NXB Khoa hc- K thut, tr 33, 305- 311, 344- 370 Cng -8 Trn T Dng (2002), Ri lon lipid mỏu, bi ging sau i hc- Cc Quõn Y, tr 117-132 73 10 Nguyn Th H (2000),Chuyn hoỏ lipid Hoỏ sinh, NXB Y hc, H Ni 11 Phựng Thanh Hng (2009), Nghiờn cu tỏc dng h glucose huyt v nh hng lờn chuyn hoỏ glucose ca dch chit lỏ bng lng nc (Lagerstroemia speciosa L.), Lun ỏn tin s dc hc, H Ni 12 Phựng Thanh Hng, H Mai Anh, Nguyn Xuõn Thng (2002),Tỏc dng hn ch tng glucose huyt ca thõn cõy mp ng (Momordica charantia L Cucubiaceae) trờn mt s mụ hỡnh tng glucose huyt thc nghim, Tp dc hc, B Y t,1, tr.22-25 13 Nguyn Quc Khang (2004-2006), Bi ging chuyờn cao hc v Cỏc hp cht th sinh, tr 1-2, 11-12 14 Nguyn Cụng Khn (2007), Tha cõn bộo phỡ v mt s yu t liờn quan ngi trng thnh Vit Nam 25 64 tui, chin lc quc gia v dinh dng giai on 2001 2010, NXB Y hc, H Ni 15 Ngc Liờn, Nguyn Thnh t, Nguyn Th Thuý Qunh, Nguyn Th Thanh Ngõn (2006), Nghiờn cu mt s hp cht t nhiờn ca dch chit lỏ kh (Averrhoa carambola L.) v tỏc ng h ng huyt ca chỳng trờn chut (Rattus spp) gõy tng ng huyt, Tp khoa hc, i hc Quc Gia H Ni, s 3, tr 39- 44 16 Ngc Liờn, Nguyn Thuý Qunh, Nguyn Hong Quang, Nguyn Th Thanh Ngõn (2009),Tỏc dng chng bộo phỡ v gim lng c th ca cỏc phõn on dch chit v qu qut cnh (Fortunella japonica) trờn chut bộo phỡ thc nghim, Tp khoa hc i hc Quc gia H Ni, 25, tr.172-187 17 Trn Th Chi Mai (2007), Nghiờn cu tỏc dng ca polyphenol chố xanh (camellia sinensis) lờn cỏc ch s lipid v trng thỏi chng oxy hoỏ mỏu chut cng trng ỏi thỏo ng thc nghim, LATS Y hc, H Ni 74 18 Chu Vn Mn (2000), ng dng tin hc sinh hc, NXB Giỏo dc H Ni 19 Nguyn Vn Mựi (2002), Thc hnh hoỏ sinh hc, NXB i hc Quc Gia H Ni 20 Phan S Quc (1990), Ri lon lipid mỏu ngi tha cõn, bộo phỡ, Tp y hc thc hnh, 446, tr 31-40 21 V Th Ngc Thanh, Nguyn Trng Thụng, Phm Th Võn Anh, Bựi Thu Dng (2005), Bc u nghiờn cu tỏc dng ca flavonoid chit xut t hoa kim ngõn lờn mt s ch s lipid mỏu, Tp dc hc, s 1, tr 15- 18 22 Trn ỡnh Thng (2007), Nghiờn cu thnh phn hoỏ hc cõy Ci xay(Abutilon indicum (L.) Sweet) cõy hng bỡ (Clausena lansium (Lour.) Skeels) cõy trỏm trng (Canarium album (Lour.) Raeusch) v cõy trỏm en (Canarium nigrium (Lour.) Englo) Vit Nam, LATS hoỏ sinh, Vinh 23 Trn ỡnh Thng, Nguyn Xuõn Dung (2005), Nhng nghiờn cu gn õy ca cỏc loi thuc chi Clausena Vit Nam, Hi tho quc gia v sinh thỏi v ti nguyờn sinh vt, NXB Nụng nghip, H Ni, Tr 650-654 24 Nguyn Xuõn Thng (2006), Hoỏ sinh hc (dựng o to dc s i hc), NXB Y hc, H Ni 25 Trn c Th (2002), Bnh ỏi thỏo ng, Bi ging bnh hc ni khoa, I, NXB Y hc ,tr 258-272 26 Nguyn Vn Thu (2004), Bi ging dc liu 1, NXB Y hc, tr 240, 335, 368 27 Th Tớnh (2001), Gúp phn nghiờn cu cỏc ri lon Lipid mỏu bnh nhõn bộo phỡ trờn cỏc thụng s hoỏ sinh, Lun ỏn Tin S Y hcH Ni 75 28 Nguyn Ngc Xuõn (2004), Nghiờn cu tỏc dng h ng huyt ca Th phc linh (Smilax glabra Roxb Smilacaeae) trờn sỳc vt thc nghim, Lun ỏn tin s Dc hc, i hc Y H Ni TING ANH 29 Aekakom W., Chaiyapong Y., Chariyalertsak S Phoolcharoen W., (2004), Prevalence and determinants of overweight and obesity in Thai adults: results of the Second National Health Examination Survey, J Med Assoc Thai, 87 (6): 685-693 30 Amos A., McCarty D., Zimmet P (1997), The rising global burden of diabetes and its complication: estimates and projections to the year 2010, Diabetes Med, Vol 14, pp 1-85 31 Andersen O.M (2005), Flavonoids: Chemistry, Biochemistry and applications, CRC Publisher 32 Antolovich M, Prenzler.P, Robards K, Ryan D (2000), Sample preparation in the determination of phenolic compounds in fruits, analyst, 125, pp 989- 1009 33 Atkintin Mark A (2000), Type diabetes, Atlats of diabetes, pp.45- 58 34 Barnett H.H and Kumar S (2009), Obesity and diabetes, Second edition, Wiley Balacwell, printed in Great Britain 35 Barton D.P., Roger I.D., William E.C.(2001), Disorders of lipids metabolism, Endocrinology $ metabolism, 23, pp 993- 1075 36 Buchanan B.B., Gruissem W.,Rones R.L (2000), Biochemistry $ molecular Biology of Plants, American Society of Plant Physiologists, 2(24), pp.1250-1318 37 Cannell R.J.P (1998), Natural products isolation, Humana Press, pp 354 38 Dattjirao K., Iliya P (1990), Dietary Tannins, pp 5-7 76 39 Donald R., Linden K.G (2003), Antioxidant activities of flavonoids, Oregon State University USA 40 Falbe and M Regitz, CD Rom PP chime Lexikon, Version 1.0, Georg thieme Verlag, Stutgart/ New York, (1995) 41 Ferrannini E Natali A., Bell P., (1997), Insulin resistance and hypersecretion in obesity, J Clin Invert., pp 1166-1173 42 Gao K., Henning S M., Niu Y., Arthur A Y (2006), The citrus flavonoid naringenin stimulates DNA repair in prostate cancer cell, Journal of Nutritional Biochemistry 17: 89- 95 43 Greesman (1975), The chemistry of flavonoid compounds, Academicporess, London 44 Groteword E (2006), Science of flavonoids, Spinger publisher Hng-30 45 Harbonne J.B (1964), Biochemistry of phenolic compounds, Acadenic press, London and New York 46 Haslam (1989), Plant polyphenol- vegtable Tannins Revisiter Chemistry and Pharmacology of Natural products, Cambridge University Pres, Cambride, pp 165 47 Jung U J., Park Y B (2006), Effect of citrus flavonoids on lipid metabolism and glucoza- reglulating enzyme mARN levels in type diabetic mice, The International Journal of Biochemistry $ Cell Biology, Vol 38(7): 1134- 1145 48 Kim S Y., Kim H J., Lee M K., Jeon S M., (2006), Narigin time dependently lowers hepatic cholesterol biosynthesis and plasma cholesterol diet, Journal of medicinal food, vol9(4): 582-586 49 Kumar S., ORahilly S (2007), Insulin Resistance, Willey Press 50 LifeScan INC., Johnson $ Johnson company (1996),Glucose testing and reagent chemitry, LifeScan learning modules, pp 1-26 77 51 Lorke D A (1983), A new approach to practical acute toxicity testing, Arch Toxicol, Vol 54, pp 275- 287 52 Luthria D and Mukhopadhyay S (2006), Influence of sample preparation on assay of phenolic acid from Egg plant, J, Agric, Food Chem, 54, pp 41- 47 53 Marbry F J., Markman R B., Thomas M B.(1970), The sysrematic identification of flavonoids, Springer Verlag- Berlin- Heidelberg- New York 54 Martin B C., Warram J H., Krolewski A S., et al (1992), Role of glucose and insulin resistance in development of type diabetes mellitus, Lancet, pp 925- 929 55 Mary J.M., john P.K (2001), Disorder of lipoprotein metabolism, Basic $ Clinical Endocrinology, International Edition, 6,pp 716-744 56 Mayer P.A., Bebder D A (2003), Tanic acid stimulates glucose transport and inhibit adipocyte diferention in 3T3 l1 cell, Journal of Nutrition, 135, pp 165-171 57 Mim S.Y., Kim H.J., Lee M.K., Jeon S.M (2006), Naringin timedependently lower hepatic chlesterol biosynthesis and plasma cholesterol in rats fed hight-fat and hingt-cholesterol diet, Jornal of medicinal food, Vol 9(4), pp 582-586 58 Miura T et at (2004), : Corosolic acid induces GLUT4 translocation in genetically type diabetic mice, Biol Pharm Bull, 27(7), pp 1103-1105 59 Muller A L (1996), Antioxidant flavonoids: structure, fuction and clinical usage, Alter Medicine Review Vol.l (2), 103-111 60 Ojewole J.A.O.(2002), Hypoglycaemic effect of Clausena anisata (Willd) Hook methanolic root Ethnopharmacology,81, pp 231-237 extract in rats, Journal of 78 61 Ono Y., Hattori E., Fukaya Y, Imai S (2006) Anti-obesity effect of Nelumbo nucifera leaves extract in mice and rats, Journal of Ethnopharmacology, 206(2), pp 238-244 62 Packer L.(2001), Flavonoid and ather polyphenol, methods in Enzymology, Academic Press, Vol.335 63 Purintrapiban J (2006), Differential Activation of Glucose Transport in Cultured Muscle Cell by polyphenolic Compounds from Cana indica L Root, BiologycalmPharmaceutical Bulletin 29(10), pp 1995- 1998 64 Rajnikant, Dinesh and Kamni (2005), Weak C-H O hydrogen bonds in Alkaloids: An overview, Bull Master Sci, vol 28, No 3, pp 187- 198 65 Reed S.J., Choi J.H., Park M.R (2000), A new rat model of type diabetes: the fat- fed, strepzotocin- treated rat, Metabolism, 49(11), pp 1390- 1394 66 Rence J.G., Tetsusok (2000), Plant-fungal interaction the earch for phytoalexin and ather antifungal compounds from higher plants Phytochemistry, Vol.56, pp.253-263 67 Rodney Croteau, Toni M Kuchan, Norman G Lewis (2002), Natural products (secondary metabolites), Chapter 24, pp.1250- 1318 68 Ronald Khan C (2000), The pathogenesis of type non-insulindependent diabetes, Atlats of diabetes, pp 71-81 69 Samuel klein (2003), Medical management pf obesity: Present and future therapy, Journal of Gastroyntestinal surgery, Vol 7(4): 464-467 70 Schinari R., Lin Y M., Anderson H (1997), In vitro anti HIV activity of flavonoids isolater from Rhus succedanea and Garcinia multiflora, J Nat Prod, Sep, 60(9), pp.884-888 71 Shafrir E (2007), Animal models of diabetes: Frontiers in Research, CRC Publisher 79 72 Sharon C Cheetham, Helen C Jackson, Steven P Vickers, Keith Dickinson, Robert B Jones, David J Heal (2004) Novel targets for the treatment of obesity: a review of progress, Elsevier Cardiovascular and metabolic disease, Vol 1(2) 227-235 73 Singleton V L., Orthofer L., Lamuela-Raventos R.M (1999), Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Forlin- Ciocalteu Reagent, Metthods in Enzymemology,299, pp 152178 74 Srinivasan K., Viswanad B., Asrat L., Kaul C L., Ramarao P (2005), Combination of hight-fat-Diet and low-does STZ treated rat: A model for type diabetes and pharmacological screening, Department Pharmacological Reseach, 52, pp 313- 320 75 Taiz, Lincoln, and Eduardo Zeiger (1991), Surface protection and Secondary defense Compounds Plant Physiology, New York: Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc, pp 320-345 76 The Word Health Report (1997), WHO, Switzelend 77 Unger R H., Foster D W (1998), Diabetes mellitus, Williams textbox of endocrinology, th edition, pp 1255-1320 78 Williams G., Pickup J.C (1992), Handbook of diabetes, blackwell Scientific Publisher 80 MC LC Trang Danh mc cỏc kớ hiu, ch vit tt Danh mc cỏc bng Danh mc cỏc hỡnh M U NI DUNG CHNG TNG QUAN TI LIU 1.1 Cỏc hp cht thc vt th sinh 1.1.1 Cỏc hp cht phenolic t thc vt 1.1.1.1 Phõn nhúm phenolic acid 1.1.1.2 Phõn nhúm coumarins 1.1.1.3 Phõn nhúm Flavonoid 1.1.1.4 Phõn nhúm tannin 11 1.1.2.Nhúm cỏc hp cht terpene 12 1.1.3 Phõn nhúm alkaloid thc vt 12 1.2 Bnh bộo phỡ 14 1.2.1 Khỏi nim v phõn loi bnh bộo phỡ 14 1.2.2 Thc trng bộo phỡ trờn th gii v Vit Nam 14 1.2.3 Nguyờn nhõn gõy bộo phỡ 15 1.2.4 Tỏc hi ca bnh bộo phỡ 16 1.2.5 Ri lon trao i lipid mỏu 16 1.2.6 Mi quan h gia bộo phỡ vi ỏi thỏo ng 18 1.2.7 Cỏch phũng tr 19 1.3 Bnh ỏi thỏo ng 20 1.3.1 Khỏi nim 20 1.3.2 Thc trng ỏi thỏo ng trờn th gii v Vit Nam 21 1.3.3 Phõn loi bnh ỏi thỏo ng 22 1.3.4 C ch sinh bnh T 22 1.3.4.1 C ch sinh bnh T type 22 1.3.4.2 C ch sinh bnh T type 23 1.3.5 Cỏch phũng v iu tr ỏi thỏo ng 24 1.3.5.1 Insulin v cỏc thuc kớch thớch bi tit insulin 24 1.3.5.2 Cỏc thuc lm tng nhy cm ca mụ ớch vi insulin 25 1.3.5.3 Thuc chng tng glucose huyt sau ba n 26 1.3.6 ỏi thỏo ng vi y hc c truyn 26 1.4 Vi nột v cõy Mc mt 26 1.4.1 c im sinh hc 26 1.4.2 Phõn b, sinh thỏi 27 81 1.4.3 c tớnh cha bnh ca cõy Mc mt 27 CHNG I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 29 2.1 i tng nghiờn cu 29 2.1.1 Nguyờn liu thc vt 29 2.1.2 Mu ng vt 29 2.1.3 Dng c, hoỏ cht thớ nghim 29 2.2 Phng phỏp nghiờn cu 30 2.2.1 Quy trỡnh chit xut 30 2.2.2 Phng phỏp kho sỏt thnh phn hoỏ hc ca v cõy Mc mt 30 2.2.2.1 nh tớnh mt s hp cht t nhiờn v cõy Mc mt [33] 30 2.2.2.2 Phõn tớch thnh phn cỏc hp cht t nhiờn bng sc ký lp mng 32 2.2.2.3 nh lng hp cht polyphenol tng s theo phng phỏp FolinCiocalteau 32 2.2.3 Nghiờn cu tỏc dng ca dch chit n trng lng v mt s ch s hoỏ sinh 33 2.2.3.1 Th c tớnh cp, xỏc nh LD50 33 2.2.3.2 Xõy dng mụ hỡnh chut bộo phỡ thc nghim 34 2.2.3.3 nh hng ca cỏc phõn on dch chit lờn trng lng v mt s ch s hoỏ sinh trờn mụ hỡnh chut bộo phỡ thc nghim 35 2.2.4 Nghiờn cu tỏc dng h ng huyt ca dch chit t v cõy Mc mt 35 2.2.4.1 To mụ hỡnh chut T type 35 2.2.4.2 Th kh nng h ng huyt ca cỏc phõn on dch chit 36 2.2.5 Phng phỏp nh lng mt s ch s hoỏ sinh mỏu 36 2.2.5.1 nh lng glucose huyt 36 2.2.5.2 nh lng trigycerid huyt 37 2.2.5.3 nh lng cholesterol ton phn huyt 37 2.2.5.4 nh lng HDL-c 38 2.2.6 X lý s liu 38 CHNG KT QU V THO LUN 39 3.1 Quy trỡnh tỏch chit cỏc phõn on t v cõy Mc mt 39 3.2 Kt qu kho sỏt thnh phn cỏc hp cht t nhiờn cú cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt 40 3.2.1 nh tớnh mt s hp cht t nhiờn cú v cõy Mc mt 40 3.2.2 Phõn tớch thnh phn hp cht t nhiờn t v cõy Mc mt bng sc ký lp mng 42 3.2.3 nh lng hp cht polyphenol cỏc phõn on dch chit 44 3.3 Kt qu xỏc nh liu c cp 45 3.4 Kt qu xõy dng mụ hỡnh chut bộo phỡ thc nghim 45 82 3.5 Tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n trng lng v mt s ch s hoỏ sinh mỏu chut bộo phỡ thc nghim 48 3.5.1 Tỏc ng n trng lng ca chut BP 48 3.5.2 Tỏc ng n mt s ch s hoỏ sinh mỏu chut 50 3.5.2.1 Ch s cholesterol ton phn 50 3.5.2.2 Ch s triglycerid 51 3.5.2.3 Ch s HDL-c 53 3.5.2.4 Ch s LDL-c 54 3.5.5 Ch s lipase 55 3.6 Kt qu xõy dng mụ hỡnh chut T type thc nghim 57 3.7 Tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n kh nng h glucose huyt ca chut T type 59 3.7.1 Tỏc dng h glucose huyt chut T type sau 10 gi iu tr 59 3.7.2 Tỏc dng h glucose huyt chut T type sau 21 ngy iu tr 61 3.8 Tỏc dng ca cỏc phõn on dch chit t v cõy Mc mt n mt s ch s hoỏ sinh mỏu chut T type sau 21 ngy iu tr 64 3.8.1 Ch s cholesterol ton phn 64 3.8.2 Ch s triglycerid 65 3.8.3 Ch s HDL-c 67 3.8.4 Ch s LDL-c 68 KT LUN V KIN NGH 70 TI LIU THAM KHO 72 83 DANH LC BNG DANH MC CC HèNH [...]... chỉ số hoá sinh trên mô hình chuột béo phì thực nghiệm Chuột BPTN được chia thành 5 lô, mỗi lô từ 6- 9 con và đem làm thí nghiệm tiếp để đánh giá tác dụng của các phân đoạn dịch chiết đến trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh máu Cao của các phân đoạn dịch chiết được hoà vào nước nóng và cho chuột uống hàng ngày vào mỗi buổi sáng Bảng 2.3 Mô hình nghiên cứu khả năng giảm béo của các phân đoạn dịch chiết. .. không thu cao chiết tương ứng 2.2.2 Phương pháp khảo sát thành phần hoá học của vỏ cây Mắc mật 2.2.2.1 Định tính một số hợp chất tự nhiên trong vỏ cây Mắc mật [33] a Định tính Flavonoid: Pha mẫu thử trong ethanol với một lượng thích hợp Sau đó cho vài giọt HCl đặc vào, chia dung dịch nhận được vào hai ống nghiệm rồi tiến hành các thí nghiệm sau - Phản ứng Shinoda:Cho mẫu vào hai ống nghiệm, một ống đối... định trọng lượng và lấy máu chuột đem phân tích một số chỉ số hoá sinh gồm glucose, cholesterol, triglycerid, HDL-c, LDL-c, lipase 2.2.4 Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết của dịch chiết từ vỏ cây Mắc mật 2.2.4.1 Tạo mô hình chuột ĐTĐ type 2 Chọn những con chuột béo phì thực nghiệm, cho nhịn đói 16h và kiểm tra đường huyết chuột Sau đó, tiến hành gây ĐTĐ type 2 trên chuột bằng cách tiêm vào màng bụng... núi Lá và vỏ thu hái quanh năm, hạt lấy ở những quả già, dùng tươi hay phơi khô 1.4.3 Đặc tính chữa bệnh của cây Mắc mật Lá, vỏ và thân cây có vị đắng Lá dùng làm gia vị, có tác dụng tiêu viêm, sát trùng và trừ giun Lá dùng trị ho, trừ giun, ghẻ và mụn nhọt, đắp lên chân sưng đau do viêm khớp, trị loét mũi, nấu nước xông Vỏ cây và thân cây bổ và làm se Vỏ cây dùng chữa đau bụng kém tiêu, ho đờm khản... định lượng acid gallic để dựng đường chuẩn Bảng 2.1 Kết quả xây dựng đường chuẩn acid gallic STT Gallic acid OD 765nm (mg/l) 1 0 0,009 2 50 0,062 3 100 0,119 4 150 0,168 5 250 0,265 6 500 0,519 2.2.3 Nghiên cứu tác dụng của dịch chiết đến trọng lượng và một số chỉ số hoá sinh 2.2.3.1 Thử độc tính cấp, xác định LD50 34 Xác định LD50 của dịch chiết vỏ cây Mắc mật bằng đường uống theo phương pháp Lorke... dịch FeCl3 5% vàd 50ml dung dịch acid acetic 10% + Dung dịch B: Thêm 0,5ml dung dịch FeCl3 5% vào 50ml dung dịch acid sunfuric đặc Cho 0,01g cặn dịch chiết vào ống nghiệm Thêm 1ml dung dịch A lắc cho tan hết mẫu, nghiêng ống nghiệm cho từ từ vào Phản ứng dương tính khi xuất hiện vòng nâu đỏ giữa hai lớp chất lỏng e Định tính alkaloid Mẫu thử được pha trong dung dịch acid acetic 2% với một lượng thích... khả năng hạ đường huyết của các phân đoạn dịch chiết từ vỏ cây Mắc mật Lô Chế độ ăn Điều trị 21 ngày (1000mg/kg) 1.ĐTĐ + EtOH Thức ăn béo Cao ethanol 2.ĐTĐ + n-hex Thức ăn béo Cao n-hexan 3.ĐTĐ + EtOAc Thức ăn béo Cao ethylacetat 4.ĐTĐ + Metf Thức ăn béo Metformin (500mg/kg thể trọng) 5.ĐTĐ + KĐT Thức ăn béo Nước muối sinh lý (KĐT) Sau khi cho uống thuốc và dịch chiết chúng tôi tiến hành đo đường huyết. .. độ đường huyết những con chuột nào sau khi tiêm STZ 72h đạt ≥ 18mmol/l và ổn định thì được coi là ĐTĐ type 2 và chọn để thực hiện các thí nghiệm tiếp theo [74] 2.2.4.2 Thử khả năng hạ đường huyết của các phân đoạn dịch chiết Chuột ĐTĐ type 2 được phân lô (6con/lô) cho ăn và điều trị hằng ngày bằng thuốc và các phân đoạn dịch chiết (1lần/ ngày) trong vòng 21 ngày như bảng 2.4 Bảng 2.4 Mô hình nghiên cứu. .. dương tính khi xuất hiện màu vàng da cam - Phản ứng với acid sunfuric: Cho dung dịch mẫu vào hai ống nghiệm, một ống đối chứng, ống kia thêm vài giọt acid sunfuric đặc Phản ứng cho màu vàng đậm cho thấy sự có mặt của flavon và flavonol, màu đỏ hay màu nâu cho thấy sự có mặt của chalcon và auron 31 b Phản ứng định tính catechin: Nhỏ một giọt dung dịch mẫu lên giấy lọc, nhỏ tiếp lên một giọt dung dịch. .. lượng của từng con chuột được kiểm tra hàng tuần Vào ngày cuối cùng của tuần thứ 6 tiến hành chọn ngẫu nhiên mỗi nhóm ra 10 con chuột lấy máu rồi đem xét nghiệm một số chỉ số hoá sinh như: glucose máu; chỉ số lipid máu gồm cholesterol, 35 triglycerid, HDL-c, LDL-c, lipase để xác định mức độ khác nhau của các lô theo 2 chế độ ăn 2.2.3.3 Ảnh hưởng của các phân đoạn dịch chiết lên trọng lượng và một số chỉ