TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM BỘ MÔN HÓA HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG ETHOXYQUIN TRÊN THỨC ĂN CHĂN NUÔI BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) Chuyên ngành: Sư phạm Hóa Học Giáo viên hướng dẫn: TS Nguyễn Thị Thu Thủy CN La Văn Thái Sinh viên thực hiện: Đặng Thị Xuân Hoa Lớp: Sư phạm Hóa Học K38 MSSV: B1200580 CẦN THƠ - 2016 Luận văn tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Thời gian làm luận văn học tập tích lũy nhiều kiến thức, nhiều kinh nghiệm làm hành trang vững giúp bước đường tới Để đạt kết ngày hôm nổ lực thân; nhận động viên, giúp đỡ gia đình, thầy cô, bạn bè vào lúc khó khăn Vì xin dành trang để gửi lời cảm ơn chân thành đến:  Cô Nguyễn Thị Thu Thủy – Bộ môn Sư Phạm Hóa Học trực tiếp hướng dẫn, dành thời gian quý báu tận tình dạy, quan tâm, tạo điều kiện giúp đỡ thực tốt luận văn tốt nghiệp  Xin cảm ơn tất quý thầy cô trường Đại học Cần Thơ nói chung, môn Hóa Khoa Sư Phạm nói riêng truyền dạy kiến thức, kỹ quý báu tạo điều kiện cho có môi trường học tập tốt  Thầy Hồ Hoàng Việt cố vấn lớp Hóa K38 dẫn dắt, định hướng giúp đỡ tận tình lớp Hóa suốt bốn năm học qua  Chân thành cảm ơn Ban giám đốc Trung Tâm Phân Tích Giám Định Vinacert Control Cần Thơ giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi trang thiết bị, dụng cụ, hóa chất để hoàn thành tốt luận văn  Anh La Văn Thái - trưởng phòng Trung Tâm Phân Tích – Giám Định Vinacert Control Cần Thơ, chị Võ Thị Thúy An, chị Bùi Thị Quỳnh Hoa anh chị trung tâm, đặc biệt anh chị phòng sắc ký nhiệt tình hướng dẫn, chia sẻ cho kinh nghiệm bổ ích  Cuối cùng, cảm ơn gia đình chỗ dựa vững chắc, yêu thương, tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn chương trình học Cảm ơn tập thể lớp Hóa K38 đặc biệt người bạn bên cạnh ủng hộ, quan tâm, giúp đỡ thời gian qua Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 15 tháng 05, năm 2016 i Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN - - Cần Thơ, ngày tháng năm 2016 Chữ kí cán hướng dẫn Nguyễn Thị Thu Thủy ii Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN - - Cần Thơ, ngày tháng năm 2016 Chữ kí cán phản biện iii Luận văn tốt nghiệp NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN - - Cần Thơ, ngày tháng năm 2016 Chữ kí cán phản biện iv Luận văn tốt nghiệp MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN iii NHẬN XÉT CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN iv MỤC LỤC v DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT viii DANH SÁCH HÌNH ix DANH SÁCH BẢNG BIỂU x MỞ ĐẦU 1 Lí chọn đề tài Mục đích Mục tiêu Đối tượng nghiên cứu Giới hạn đề tài Các bước thực đề tài NỘI DUNG Chương 1: CƠ SỞ LÝ THUYẾT 1.1 CƠ SỞ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Các phương trình đại lượng HPLC .3 1.1.3 Các kiểu sắc ký lỏng hiệu cao .7 1.1.3.1 Sắc ký pha thường 1.1.3.2 Sắc ký trao đổi ion 1.1.3.3 Sắc ký hấp phụ 1.1.3.4 Sắc ký pha đảo 1.1.4 Các cách rửa giải HPLC .8 1.1.5 Giới thiệu thiết bị HPLC .9 1.2 TỔNG QUAN VỀ CHẤT BÉO (LIPIT) VÀ CHẤT CHỐNG OXY HÓA ETHOXYQUIN 16 v Luận văn tốt nghiệp 1.3 TÌM HIỂU CHUNG VỀ ETHOXYQUIN 17 1.3.1 Công thức phân tử, công thức cấu tạo số tính chất ethoxyquin 17 1.3.2 Tác hại ethoxyquin 18 1.3.3 Một số ứng dụng chủ yếu ethoxyquin 18 1.3.4 Tình hình nghiên cứu Ethoxyquin 18 1.3.4.1 Tình hình sử dụng ethoxyquin thức ăn thuỷ sản 18 1.3.4.2 Một số nghiên cứu ethoxyquin 19 1.3.4.3 Qui định mức dư lượng tối đa ethoxyquin 20 Chương 2: THỰC NGHIỆM 21 2.1 DỤNG CỤ, THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 21 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ 21 2.1.2 Hóa chất .21 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Phương pháp thu mẫu 22 2.2.2 Phương pháp phân tích 22 2.2.2.1 Phạm vi, mục đích 22 2.2.2.2 Nguyên tắc 22 2.2.2.3 Phương pháp phân tích 22 2.2.2.4 Điều kiện chạy máy HPLC 25 2.2.2.5 Phương pháp tính kết 25 2.2.2.6 Các biện pháp đảm bảo chất lượng kết thử nghiệm 26 2.2.2.7 Phương pháp đánh giá 26 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ 30 3.1.1 Khoảng tuyến tính 30 3.1.2 Độ lặp lại .31 3.1.3 Khảo sát hiệu suất thu hồi 33 3.1.4 Khảo sát giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ), giới hạn phát phương pháp (MLOD), giới hạn định lượng phương pháp (MLOQ) 34 3.2 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH HÀM LƯỢNG ETHOXYQUIN 35 3.2.1 Một số qui định giới hạn cho phép (MRL) ethoxyquin thức ăn chăn nuôi Việt Nam 35 vi Luận văn tốt nghiệp 3.2.2 Kết phân tích hàm lượng chất chống oxy hóa ethoxyquin mẫu thức ăn chăn nuôi 35 3.2.2.1 Kết phân tích hàm lượng chất chống oxy hóa ethoxyquin mẫu thức ăn cho tôm 36 3.2.2.2 Kết phân tích hàm lượng chất chống oxy hóa ethoxyquin mẫu thức ăn cho cá 38 3.2.2.3 Kết phân tích hàm lượng chất chống oxy hóa ethoxyquin mẫu thức ăn gia cầm thức ăn cho heo 40 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 Kết luận 43 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC 48 vii Luận văn tốt nghiệp DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Các chữ viết tắt C Độ Celcius µl microliters ACN Acetonitrile AOAC Association Of Analytical Communities CRM Certified reference material – Mẫu chuẩn chứng nhận HPLC High Performance Liquid Chromatography– Sắc ký lỏng hiệu cao LOD Limit of detection – Giới hạn phát LOQ Limit of quantitation – Giới hạn định lượng MLOD Method limit of detection – Giới hạn phát phương pháp MLOQ Method limit of quantitation – Giới hạn định lượng phương pháp ml milliliters ppb parts per billion ppm parts per million PTN Phòng Thí Nghiệm QC Quality Control – Kiểm soát kiểm tra chất lượng QUECHERS Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe – Nhanh, dễ, rẻ, hiệu quả, ổn định, an toàn TACN Thức ăn chăn nuôi TAGC Thức ăn gia cầm TACC Thức ăn cho cá TACH Thức ăn cho heo TACT Thức ăn cho tôm UV Ultra Violet – Cực tím viii Luận văn tốt nghiệp DANH SÁCH HÌNH Trang Hình1.1 Thời gian lưu cấu tử phân tích Hình 1.2 Pic sắc ký Hình 1.3 Sơ đồ hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Hình 3.1 Đường chuẩn ethoxyquin nồng độ từ – 40 ppm 30 Hình 3.2 Đường chuẩn xác định hàm lượng ethoxyquin TACT ( từ TACT – TACT 8) 37 Hình 3.3 Đường chuẩn xác định hàm lượng ethoxyquin TACT ( từ TACT – TACT 23) 37 Hình 3.4 Đường chuẩn xác định hàm lượng ethoxyquin TACC ( từ TACC – TACC 17) 38 Hình 3.5 Đường chuẩn xác định hàm lượng ethoxyquin TACC ( từ TACC 18 – TACC 37) 38 Hình 3.6 Đường chuẩn xác định hàm lượng ethoxyquin TAGC TACH 40 ix Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.65 Sắc ký đồ mẫu TACC 36 Phụ lục 1.66 Sắc ký đồ mẫu TACC 37 83 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.67 Sắc ký đồ mẫu TAGC Phụ lục 1.68 Sắc ký đồ mẫu TAGC 84 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.69 Sắc ký đồ mẫu TAGC Phụ lục 1.70 Sắc ký đồ mẫu TAGC 85 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.71 Sắc ký đồ mẫu TAGC Phụ lục 1.72 Sắc ký đồ mẫu TAGC 86 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.73 Sắc ký đồ mẫu TAGC Phụ lục 1.74 Sắc ký đồ mẫu TAGC 87 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.75 Sắc ký đồ mẫu TAGC Phụ lục 1.76 Sắc ký đồ mẫu TAGC 10 88 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.77 Sắc ký đồ mẫu TAGC 11 Phụ lục 1.78 Sắc ký đồ mẫu TAGC 12 89 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.79 Sắc ký đồ mẫu TAGC 13 Phụ lục 1.80 Sắc ký đồ mẫu TAGC 14 90 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.81 Sắc ký đồ mẫu TACH Phụ lục 1.82 Sắc ký đồ mẫu TACH 91 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.83 Sắc ký đồ mẫu TACH Phụ lục 1.84 Sắc ký đồ mẫu TACH 92 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.85 Sắc ký đồ mẫu TACH Phụ lục 1.86 Sắc ký đồ mẫu TACH 93 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.87 Sắc ký đồ mẫu TACH Phụ lục 1.88 Sắc ký đồ mẫu TACH 94 Luận văn tốt nghiệp Phụ lục 1.89 Sắc ký đồ mẫu TACH Phụ lục 1.90 Sắc ký đồ mẫu TACH 10 95 Luận văn tốt nghiệp PHỤ LỤC 2: MỘT SỐ THIẾT BỊ, DỤNG CỤ PHỤC VỤ ĐỀ TÀI Hệ thống HPLC - DAD Máy lắc Máy vortex 96 Luận văn tốt nghiệp Máy ly tâm Cân kỹ thuật số lẻ Cân phân tích số lẻ Cân phân tích số lẻ 97 [...]... phát hiện, giới hạn định lượng) Phân tích hàm lượng ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi đã thu thập bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 4 Đối tượng nghiên cứu Đề tài thực hiện trên 84 mẫu thức ăn chăn nuôi (bao gồm 23 mẫu thức ăn cho tôm, 37 mẫu thức ăn cho cá, 14 mẫu thức ăn gia cầm và 10 mẫu thức ăn cho heo) 5 Giới hạn đề tài Khảo sát trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi do phòng thí... phương pháp phát hiện và định lượng ethoxyquin trong thức ăn chăn nuôi Trong các phương pháp phân tích ethoxyquin trong thức ăn chăn nuôi thì phương pháp phân tích bằng HPLC được xem là đạt hiệu quả cao và phù hợp với các yêu cầu đặt ra Vì vậy, đề tài được chọn nghiên cứu: Khảo sát quy trình xác định hàm lượng ethoxyquin trên thức ăn chăn nuôi bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 2 Mục đích Tìm hiểu... và nồng độ chuẩn Ethoxyquin 30 Bảng 3.2 Độ lặp lại của tín hiệu đo với chuẩn ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi 31 Bảng 3.3 Hiệu suất thu hồi của ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi 33 Bảng 3.4 Kết quả khảo sát MLOD và MLOQ trên nền mẫu thức ăn chăn nuôi 35 Bảng 3.5 Kết quả phân tích hàm lượng chất chống oxy hóa ethoxyquin trên 84 mẫu thức ăn chăn nuôi ... tích hàm lượng ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn cho tôm 37 Bảng 3.7 Kết quả phân tích hàm lượng ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn cho cá 39 Bảng 3.8 Kết quả phân tích hàm lượng ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn gia cầm (bao gồm gà và vịt) 41 Bảng 3.9 Kết quả phân tích hàm lượng ethoxyquin trên nền mẫu thức ăn cho heo 41 x Luận văn tốt nghiệp MỞ ĐẦU 1 Lí do chọn đề tài Trong thức ăn chăn nuôi, ... Bảng 1.1 Qui định giới hạn cho phép của ethoxyquin trong thức ăn chăn nuôi, thực phẩm Tên khu vực hay quốc gia EU Nhật Bản Mỹ Thức ăn chăn nuôi, thực phẩm Giới hạn cho phép Thức ăn chăn nuôi 150 ppm Thực vật, động vật trên cạn, lưỡng cư, bò sát 0,05 ppm Sản phẩm thủy sản 0,01 ppm Thức ăn chăn nuôi 150 ppm Sản phẩm cá 1 ppm Sản phẩm tôm 0,2 ppm Thức ăn chăn nuôi 150 ppm 20 Luận văn tốt nghiệp Chương... tích ethoxyquin trên thức ăn chăn nuôi bằng HPLC Tối ưu hóa các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình phân tích (bao gồm hiệu suất thu hồi, khoảng tuyến tính, độ lặp lại, giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng) Xác định hàm lượng của chất chống oxy hoá – Ethoxyquin trong 84 mẫu thức ăn chăn nuôi (trong đó 1 Luận văn tốt nghiệp 23 mẫu thức ăn cho tôm, 37 mẫu thức ăn cho cá, 14 mẫu thức ăn gia cầm và 10 mẫu thức. .. Vinacert Cần Thơ 2 Luận văn tốt nghiệp NỘI DUNG Chương 1: CƠ SỞ LÝ THUYẾT 1.1 CƠ SỞ SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO 1.1.1 Khái niệm[12, 18] HPLC là chữ viết tắt của 04 chữ cái đầu bằng tiếng Anh của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước kia gọi là phương pháp sắc ký lỏng cao áp (High Pressure Liquid Chromatography) Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ra đời...  Chuẩn ethoxyquin  Muối MgSO4 khan  Muối NaCl  Methanol 21 Luận văn tốt nghiệp 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp thu mẫu Mẫu phân tích là thức ăn chăn nuôi do phòng thí nghiệm hóa Trung tâm Phân tích dịch vụ thí nghiệm Vinacert Cần Thơ cung cấp Bảng 2.1 Số lượng các mẫu thức ăn chăn nuôi được phân tích Loại thức ăn chăn nuôi Số lượng Ngày thu Thức ăn cho tôm 23 03/01/2016 Thức ăn cho... thức ăn gia cầm và 10 mẫu thức ăn cho heo) Nhận định được tình hình sử dụng chất chống oxy hoá – Ethoxyquin có trong thức ăn chăn nuôi để giúp người tiêu dùng sử dụng sản phẩm hợp lý và phục vụ tốt cho xuất khẩu thủy sản ở nước ta 3 Mục tiêu Trình bày quy trình phân tích ethoxyquin trên thức ăn chăn nuôi bằng HPLC Khảo sát các điều kiện thích hợp cho phân tích (bao gồm hiệu suất thu hồi, khoảng tuyến... vật nuôi tăng trưởng nhanh, hiệu quả nuôi trồng cao Ngoài ra, trong thức ăn chăn nuôi còn bổ sung thêm một số chất phụ gia, chất bảo quản, chất chống oxy hóa,… Ethoxyquin là một chất chống oxy hoá được sử dụng rộng rãi trong thức ăn chăn nuôi Từ lâu ethoxyquin đã bị cấm sử dụng trong thức ăn dành cho người (trừ một số gia vị như bột ớt, …) Nhưng con người có thể tiếp xúc với ethoxyquin thông qua vật nuôi