3/16/2016 GV: Nguyễn Thị Ngọc Yến • Nắm mối liên hệ vật chủ - vi khuẩn • Các yếu tố giúp VK gây bệnh người • Các khái niệm miễn dịch học • Nguyên tắc ứng dụng phản ứng huyết chẩn đoán bệnh nhiễm • Cơ chế tác động kháng sinh chế đề kháng kháng sinh vi khuẩn **Phân loại theo mối liên hệ  Ngoại sinh: Sống chất cặn bã hữu hủy hoại từ xác động thực vật  Nội sinh • Hội sinh VD: S epidermidis /da người • Cộng sinh VD: Hệ khuẩn đường ruột • Ký sinh: gây bệnh  Chuyên biệt: triệu chứng rõ ràng, chuyên biệt  Không chuyên biệt  Cơ hội: VK cộng sinh gây bệnh SGMD, có cửa ngõ xâm nhập Là khả VK xuyên qua tuyến phòng vệ, xâm nhập vật chủ tạo bệnh nhiễm Tương tranh tuyến phòng vệ vật chủ lực gây bệnh VK  Sự nhiễm trùng  Lực độc bao gồm khả xâm lấn sx độc tố  Miễn nhiễm Sự xâm lấn  Sự phòng vệ thể giới hạn vi khuẩn nơi gọi nhiễm mầm bệnh Gắn vào tế bào vật chủ: pili, glycocalix  Kháng thực bào: nang, lipid đặc biệt/ VK lao* Sự phòng vệ làm giảm độc hại vi khuẩn: bệnh  Enzym công: hyaluronidase, coagulase, kinase* nhiễm không biểu lộ  Sinh sản mô: VK tăng trưởng tốt VD: Người mang VK lao không bị lao  Đk: VK phải xâm nhập đường có yếu tố:  mô mà chúng có lực 3/16/2016 Sản xuất độc tố*  ID50 (Infection Dose) Lượng VK gây nhiễm 50% thú thử nghiệm So sánh Ngoại độc tố Nội độc tố Vk Gr(+); Gr(-) (lỵ, ho gà) Gr(-) Vị trí* Sx TBC VK phóng thích MT Gắn vào tb VK phóng thích VK bị ly giải Bản chất Protein (exotoxin) LPS (lipopolysaccharid) Độc tính Rất độc Thấp Thay đổi lực độc Tác động Chuyên biệt Không chuyên biệt  Tính kháng nguyên Mạnh Kích thích thể tạo Yếu, kháng thể tạo kháng thể để trung không trung hòa nội hòa làm độc tính độc tố  Tạo vô độc tố + - Bền nhiệt - + LD50 (Lethal Dose) Lượng VK gây chết 50% thú thử nghiệm Gia tăng lực độc: cấy chuyền nhiều lần qua thú, tăng lực độc với thú giảm lực độc với người VD: dại  Giảm lực độc: cấy nhiều lần qua MT nuôi cấy VD: BCG Người bình thường: đ/v VK gây bệnh chuyên biệt, địa quan trọng ◦ Tuổi ◦ Yếu tố di truyền ◦ Trạng thái sinh sống: ăn uống, nhiệt độ, XH,… ◦ Miễn dịch tự nhiên: da, niêm mạc, thực bào ◦ Miễn dịch đặc hiệu: kháng thể Người bệnh ◦ SGMD: di truyền hay suy yếu thụ nhận (VD: AIDS) ◦ Cửa ngõ xâm nhập: chấn thương da niêm, vết thương  Chất thiên nhiên hay tổng hợp nhìn nhận hệ thống miễn dịch thể từ tạo đáp ứng miễn dịch  Mỗi KN có phần chuyên biệt (epitop/ hapten) để tb miễn dịch nhìn nhận phản ứng với kháng thể  Tính chất  Kích thước cấu trúc không gian  Tính lạ  Tính chuyên biệt 3/16/2016  = glycoprotein, imunoglobulin, sản xuất lympho B, có khả phối hợp chuyên biệt với khu KN   Là PƯ KN-KT, có tính chuyên biệt nhạy cảm cao  Nhận biết PƯ KN-KT cần hệ thống thị (huỳnh quang, KN gặp KT tương ứng có kết hợp đặc hiệu  Sự kết hợp KN-KT giúp bảo vệ thể kết tủa, ngưng kết hồng cầu…) Kháng thể   Tìm KT có KN biết trước Kháng nguyên   PƯ tạo hạt  PƯ kết tủa  PƯ ngưng kết  PƯ lên PƯ dựa vào tác động sinh học kháng thể  PƯ trung hòa  PƯ cố định bổ thể   PƯ dùng kháng nguyên – kháng thể đánh dấu  PƯ miễn dịch phóng xạ Ứng dụng  Tìm KN có KT biết trước  Nguyên tắc: Sự kết hợp KN hòa tan (tầm phân tử) với KT (đặc hiệu) tạo thành hạt (kết tủa) quan sát mắt thường  Thực hiện: gel, môi trường lỏng Đường cong kết tủa: Phản ứng KN-KT cho kết tủa nhiều vùng cân  PƯ miễn dịch huỳnh quang  PƯ miễn dịch men ELISA PƯ miễn dịch điện di 3/16/2016  Nguyên tắc: Sự kết hợp KN hữu hình với KT (đặc hiệu) tạo thành mạng lưới ngưng kết lớn quan sát mắt thường  Phân loại  Trực tiếp: KN hữu hình  Gián tiếp: KN hòa tan gắn lên chất (HC, latex, vi khuẩn…)  Nguyên tắc: Khi KN virus, VK KT (đặc hiệu) kết hợp với KT có khả trung hòa độc lực virus/độc tố VK làm khả gây bệnh Kiểm tra cách tiêm vào thú thử nghiệm Độc tố Tế bào Độc tố KT đặc hiệu Tế bào hoại tử Tế bào Tế bào ko hoại tử 3/16/2016  Bổ thể (C): có thể người, nhiệm vụ bảo vệ thể KT muốn ly giải VK phải có bổ thể (complement)  PƯ (1): Nguyên tắc: KT (đặc hiệu) với tham gia bổ thể KN + HT bệnh nhân (đã loại C) + C • TH1: HT có KT không quan sát PƯ gây ly giải tb VK tb động vật • TH2: HT KT PƯ (2): Hồng cầu cừu + KT kháng HC cừu (đã loại C) Phối hợp PƯ Hồng cầu cừu + Hemolysin + KN + HT bệnh nhân + C • (+): C + KT, không C  HC cừu không ly giải • (-): C + KT kháng HC cừu  HC cừu bị ly giải  Nguyên tắc: Sau điện di, hỗn hợp KN tách Cho KN gặp KT tương ứng, cung kết tủa đặc trưng hình thành  Áp dụng: KN hỗn hợp Điện di KN/ gel agarose KN tạo cung kết tủa KT KN tách tùy theo kích thước Cung kết tủa KT 3/16/2016  Nguyên lý chung: Phản ứng đặc hiệu KN-KT xác định nhờ chất đánh dấu gắn vào KT/KN  Gồm (khác chất đánh dấu):  PƯ miễn dịch huỳnh quang: CĐD phát huỳnh quang  Trực tiếp: tìm KN  Gián tiếp: tìm KT  PƯ miễn dịch phóng xạ: CĐD đồng vị phóng xạ  PƯ miễn dịch men ELISA: CĐD enzym có khả đổi màu chất Gồm: MD huỳnh quang trực tiếp gián tiếp Phản ứng MD huỳnh quang trực tiếp gián tiếp 3/16/2016 Nguyên tắc Sự kết hợp KN hòa tan (tầm phân tử) với KT (đặc hiệu) tạo thành hạt (kết tủa) quan sát mắt thường Ngưng kết Sự kết hợp KN hữu hình với KT (đặc hiệu) tạo thành mạng lưới ngưng kết lớn quan sát mắt thường Trung hòa Khi KN virus, VK KT (đặc hiệu) kết hợp với KT có khả trung hòa độc lực virus/ độc tố VK làm khả gây bệnh Kiểm tra cách tiêm vào thú thử nghiệm Cố định bổ KT (đặc hiệu) với tham gia thể bổ thể gây ly giải tb VK tb động vật Kết tủa Áp dụng KN hòa tan Nhóm máu, VK thương hàn (Widal) Độc tố, kháng độc tố, virus, kháng thể chống virus Nguyên tắc Áp dụng Phản ứng đặc hiệu KN-KT xác định nhờ chất đánh dấu gắn vào KT/KN MD huỳnh CĐD phát huỳnh quang Ứng dụng quang rộng Chính xác cao MD phóng CĐD đồng vị phóng xạ Chính xác cao xạ PTN chuyên biệt MD men CĐD enzym có khả đổi màu Chính xác cao, ELISA chất rẻ tiền MD điện di Sau điện di, hỗn hợp KN tách Hỗn hợp KN Cho KN gặp KT tương ứng, cung kết tủa đặc trưng hình thành 3/16/2016 Đề kháng kháng sinh VK sinh trưởng [KS] cao nhiều lần so với [KS] ngăn chặn sinh trưởng VK khác Phân loại  ĐK tự nhiên: loài chi đề kháng 1KS, tính di truyền  ĐK thụ nhận: phát triển, thay đổi theo thgian, cách sử dụng KS, có tính khu vực Gồm: oĐột biến NST oTiếp nhận gen ĐK So sánh Nguyên nhân Tỷ lệ Tần suất xảy Đề kháng đa kháng sinh Khả di chuyển ĐK sang VK loài loài lân cận Đột biến NST Tiếp nhận gen ĐK Plasmid R (R-factor), Kháng sinh, hóa chất, gen nhảy (tiếp hợp, tia tử ngoại biến nạp, tải nạp) 10-20% 80-90% 10-9 –10-10 10-6 Rất Có Rất Có ĐK không thấm  Nang: Klebsiella, Haemophilus  Tiết lớp slime* ĐK liên quan cấu trúc màng VK Gr(-)    ĐK không thấm  ĐK liên quan cấu trúc màng  ĐK làm hoạt tính KS  ĐK thay đổi tính thấm màng tb  ĐK thay đổi đích tác động KS  ĐK thay đổi chuyển hóa VK  ĐK với nhiều họ KS ĐK thay đổi tính thấm màng tb  Streptococcus ĐK tự nhiên với aminosid không tạo NL ATP vận chuyển KS qua màng  ĐKKS thân lipid: KS thân lipid (macrolid, fusidic, VK ĐR ĐK tetracyclin protein màng làm thất thoát NL có mặt KS  đẩy tetracyclin khỏi tb rifampicin) không qua lớp màng cấu trúc ĐK thay đổi đích tác động KS bất đối xứng + LPS lớp  ĐK tự nhiên VK Gr(-)  ĐKKS thân nước: KS thân nước qua màng nhờ porin Staph, phế cầu ĐK tất β-lactam đột biến protein PBP gây giảm lực KS với protein VK (ĐR, Pseudomonas) ĐKKS (β-lactam, aminosid,  Thay aa/protein ribosom tạo ĐK với aminosid quinolon, cloramphenicol) nhờ thay đổi đặc tính chức  Phong bế gyrase tạo ĐK quinolon số porin  Cầu khuẩn Gr(+) methyl hóa rARN làm giảm lực ĐK làm hoạt tính KS: tiết enzym biến đổi, phá hủy cấu trúc KS (VD: β-lactamase) KS với ribosom  Đột biến ARN polymerase tạo ĐK rifampicin 3/16/2016