CHUYÊN ĐỀ PHÂN TÍCH HÓA THỰC PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP DỤNG CỤ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH DỤNG CỤ HAY PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH HIỆN ĐẠI -Phương pháp phân tích quang phổ ( Spectroscopic methods) : 1/ Phương pháp đo mầu : UV/VIS spectrophotometry :       2/ PP Hồng ngoại ( Infrared spectrophotometry)- IR : 3/ PP cận hồng ngoại ( near infrared (NIR) spectrophotometry 4/ PP.Huỳnh quang ( Fluorometry method) 5/ PP.Quang kính lửa ( Flame photometry) 6/ PP hấp thu nguyên tử ( Atomic absorpsion spectrophotometry)-AAS 7/ PP quang phổ nguyên tử Phát xạ Plasma – ICP ( Emmision PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH SẮC KÝ ( Chromatography)     1/ Sắc ký khí - GC ( Gas chromatography) 2/ Sắc ký lỏng cao áp – HPLC ( high performance liquid chromatography) 3/ Sắc ký khí ghép khối phổ ( GC/MS) 4/ Sắc ký lỏng ghép khối phổ ( LC/MS) Xác đònh vết nguyên tố ( tạp chất vi lượng ) Khoảng nồng độ các vi lượng tạp chất xác đònh phương khác : Phương pháp phổ phát xạ : 10-5 – 10-4 Phương pháp đo mầu, so mầu : 4.10-7 – 10-5 Quanh phổ lửa : 10-6 – 10-5 Phân tích huỳnh quang: 10-6 – 10-5 Cực phổ : 10-8 – 10-6 Phân tích kích hoạt : 10-9 - 10-8 PHẦN    SPECTROPHOTOMETRY PHƯƠNG PHÁP ĐO MẦU    Đặc điểm của phương pháp : Được ứng dụng rộng rãi PTN Phương pháp đo mầu dựa đo cường độ anh sáng qua dung dòch mầu PP nhà bác học nga V.M.Xeverghin phát minh từ năm 1795 Phương pháp đo mầu sử dụng phản ứng hóa học chất cần xác đònh chuyển thành hợp chất có mầu Đo hấp thụ ánh sáng dung dòch mầu (phân tích đo mầu) so sánh cường độ mầøu chất phân tích với cường độ mầu dung dòch biết trước nồng độ ( phương pháp so mầu) MÁY ĐO MẦU NHỮNG ĐỊNH LUẬT CƠ BẢN VỀ SỰ HẤP THỤ    ÁNH SÁNG Phương pháp phân tích trắc quang ( đo mầu) dựa tính chất vật lý chất có tính hấp thụ chọn lọc dòng ánh sáng đơn sắc Đây phương pháp phân tích đònh lượng không đo trực tiếp mà đo độ hấp thu quang học hay gọi mật độ quang Mẫu rắn chuyển dạng dung dòch cho thuốc thử thích hợp lên mầu dung dòch, đưa mẫu vào máy đo, đo độ hấp thụ mầu dung dòch, cường độ mầu tỷ lệ thuận với nồng độ có mẫu Phương pháp cho phép xác đònh nồng độ có mẫu từ 4.10-7 – 10-5    3.3/ Mật độ quang dung dòch: D Nếu lấy logarít phương trình đònh luật Berer Lamber đổi dấu : I = I010-Ƹ.C.l ( I0 / I ) → lg ( I0 / I ) = ε C.l → D = lg     Io / I : đại lượng đặc trưng quan trọng cho mầu dung dòch gọi mật độ quang dung dòch D Mật độ quang dung dòch tỷ lệ thuận với nồng độ chất mầu chiều dày lớp dung dòch          3.4/ Độ hấp thu -A Gọi T % hệ số truyền ta có T = Io x100 I Độ hấp thụ (A) = log(100/T) Do A = Ƹ.C.l Độ hấp thụ dung dòch tỷ lệ thuận với nồng độ chất mầu chiều dày lớp dung dòch Luôn đo mẫu trắng kèm theo  4/ Dụng cụ đựng mẫu đo  Cuvet sử dụng để đựng mẫu phải tương úng với mục đích phân tích Có loại cuvette sử dụng - Cuvet nhựa : - Cuvet thuỷ tinh : dùng cho phân tích dung môi hữu , đo vùng UV không dùng cuvette thuỷ tinh - Cuvet thạch anh sử dụng trường hợp nhiên gía thành cao      5/ Kinh lọc Việc chọn kính lọc quan trọng , kính lọc mầu tương ứng với bước sóng xác đònh đo mẫu có độ hấp thụ cực đại ổn đònh suốt qúa trình đo Để làm kinh lọc người ta sử dụng lọai thủy tinh mầu chất lỏng mầu Trong máy đo mầu thường sử dụng kính lọc mầu                  Bảng kính lọc mầu theo dung dòch phân tích Bước sóng 10-3 – 10-2 nm 10-2 - 10 nm 10 – 400 nm 400 – 700nm 435 nm 475nm 515nm 580nm 600nm 670nm 800 – 2500nm 2500 – 15000nm 0,1 – 1cm 0,1 – 50cm 10- 1500m Loại Gramma rays X – ray UV ( ultraviolet) VIS Mầu tím ( violet ) mầu xanh ( blue) mầu xanh cây( green) mầu vàng vàng da cam mầu đỏ cận hồng ngoại Hồng ngoại sóng Ra sóng cực ngắn ( Microwave) VIBA sóng vô tuyến (Radio ) Đặc tính phương pháp đo mầu    Có thể đo cường độ mầu dung dòch phương pháp khác nhau: 1/ Phương pháp nhìn mắt : Đánh gía cường độ mầu dung dòch nhìn mắt Với phương pháp phải xây dựng dãy chuẩn mầu mầu chất nghiên cứu phải nằm số     2/ Phương pháp đo mầu quang điện Nguyên tắc : chùm sáng qua cuvet đựng đầy dung dòch chất mầu nghiên cứu Chùm sáng qua dung dòch thu nhận tế bào quang điện quang biến thành điện Để xác đònh nồng độ chất nghiên cứu, phải đo mật độ quang dung dòch thử D dung dòch chuẩn biết nồng độ Dch Cx = (Dx/ Dch ) Cch       Lập đường chuẩn Pha dãy dung dòch chuẩn có nồng độ từ thấp đến cao, có mẫu trắng kèm theo nồng độ mg/l Mẫu sau xử lý lên mầu với thuốc thử giống làm dãy chuẩn Sau mẫu chuẩn đo máy đo mầu Mỗi mẫu chuẩn ứng với mật độ quang D, mẫu nghiên cứu ứng với Dnc Dựng đồ thò : Trục tung (Y) mật độ quang đo D Trục hòanh (X) trục nồng độ C Từ đồ thò tính hàm lượng chất nghiên cứu  ĐỒ THỊ D số đo D4 D D3 Dm D2 D1 C1 C2 Cx C3 C4 C mg/l [...]... đi qua dung dịch Io : Cường độ ánh sáng tới dung dịch Ƹ : Hệ số hấp thụ ánh sáng đặc trung cho mỗi mẫu là đại lượng khơng đổi( mol/cm) C : Nồng độ dung dịch ( mol/l) L : Là chiều dày của lớp dung dịch hấp thụ ánh sáng ( cm) phụ thuộc vào kích cỡ của Cuvet  3/ Ý nghóa vật lý của đònh luật: 3. 1/ Các dung dòch của cùng một chất mầu khi có cùng nồng độ của chất mầu đó và cùng chiều dày của lớp dung dòch... chất mầu và chiều dày của lớp dung dòch Luôn đo mẫu trắng kèm theo  4/ Dụng cụ đựng mẫu đo  Cuvet sử dụng để đựng mẫu phải tương úng với mục đích phân tích Có 3 loại cuvette sử dụng - Cuvet nhựa : - Cuvet thuỷ tinh : dùng cho phân tích là dung môi hữu cơ , đo trong vùng UV không dùng cuvette thuỷ tinh - Cuvet bằng thạch anh sử dụng được trong mọi trường hợp tuy nhiên gía thành khá cao      ... dòch thì hấp thụ một lượng năng lượng ánh sáng như nhau tức là sự hấp thụ của những dung dòch đó như nhau    3. 2/ Cùng với sự tăng nồng độ và chiều dày của lớp dung dòch thì mầu tăng lên Cường độ I của ánh sáng truyền qua dung dòch hấp thụ bò giảm đi so với cường độ của ánh sáng tới I0 I < Io    3. 3/ Mật độ quang của dung dòch: D Nếu lấy logarít phương trình đònh luật Berer Lamber và đổi dấu : I... quan trọng cho mầu của dung dòch và được gọi là mật độ quang của dung dòch D Mật độ quang của dung dòch tỷ lệ thuận với nồng độ của chất mầu và chiều dày của lớp dung dòch          3. 4/ Độ hấp thu -A Gọi T là % hệ số truyền ta có T = Io x100 I Độ hấp thụ (A) = log(100/T) Do đó A = Ƹ.C.l Độ hấp thụ của dung dòch tỷ lệ thuận với nồng độ của chất mầu và chiều dày của lớp dung dòch Luôn đo mẫu... → → Nguồn sáng Cuvette → → I →  Io I2 kính lọc Ia photocell I đo I < Io Io = I a + I + I 2 Io : cường độ ban đầu ( dòng tới) I : cường độ ánh sáng đi ra khỏi dung dòch Ia : Cường độ ánh sáng dung dòch hấp thụ I2 : cường độ ánh sáng phản xạ bởi thành cuvette 2/ Nguyên tắc hoạt động: Nguồn ánh sáng trắng ( ánh sáng đơn sắc) phát ra từ đèn tungsten đi qua cuvette đựng dung dòch mẫu và cuvette của mẫu... cường độ mầu của các dung dòch bằng các phương pháp khác nhau: 1/ Phương pháp nhìn bằng mắt : Đánh gía cường độ mầu của dung dòch nhìn bằng mắt Với phương pháp này phải xây dựng một dãy chuẩn mầu và mầu của chất nghiên cứu phải nằm trong số đó     2/ Phương pháp đo mầu quang điện Nguyên tắc : chùm sáng được đi qua cuvet đựng đầy dung dòch chất mầu nghiên cứu Chùm sáng đi qua dung dòch được thu nhận... sử dụng các lọai thủy tinh mầu và các chất lỏng mầu Trong các máy đo mầu thường sử dụng kính lọc mầu                  Bảng kính lọc mầu theo dung dòch phân tích Bước sóng 10 -3 – 10-2 nm 10-2 - 10 nm 10 – 400 nm 400 – 700nm 435 nm 475nm 515nm 580nm 600nm 670nm 800 – 2500nm 2500 – 15000nm 0,1 – 1cm 0,1 – 50cm 10- 1500m Loại Gramma rays X – ray UV ( ultraviolet) VIS Mầu tím ( violet... dung dòch mẫu và cuvette của mẫu trắng làm mẫu so sánh tại đây ánh sáng đã bò dung dòch mầu hấp thụ, còn ánh sáng đi vào mẫu trắng thì bò hấp thụ phần nào bởi dung dòch sau đó chuyển đi qua kính lọc đã được chọn trước theo bảng [1] kính lọc có nhiệm vụ chọn những tia có chiều dài sóng xác đònh từ ánh sáng đơn sắc khi đi qua dung dòch và ở đó có độ hấp phụ cực đại Sau đó ánh sáng tiếp tục đi đến tế bào... thu nhận bởi một tế bào quang điện trong đó quang năng biến thành điện năng Để xác đònh nồng độ của chất nghiên cứu, phải đo mật độ quang của dung dòch thử D và của dung dòch chuẩn đã biết nồng độ Dch Cx = (Dx/ Dch ) Cch       Lập đường chuẩn Pha dãy dung dòch chuẩn có nồng độ từ thấp đến cao, có mẫu trắng kèm theo ở nồng độ mg/l Mẫu sau khi được xử lý và lên mầu với các thuốc thử giống như... D, và mẫu nghiên cứu ứng với Dnc Dựng đồ thò : Trục tung (Y) mật độ quang đo được D Trục hòanh (X) là trục nồng độ C Từ đồ thò sẽ tính được hàm lượng chất nghiên cứu  ĐỒ THỊ D số đo D4 D 4 D3 Dm D2 D1 C1 C2 Cx C3 C4 C mg/l