CÁC NEISSERIA Neisseria cầu khuẩn Gram âm, không di động, vỏ, thường xếp thành đôi chia thành hai nhóm: Nhóm Neisseria phải phân lập môi trường đặc biệt, nhóm không sinh sắc tố Có hai loài vi khuẩn gây bệnh cho người N.menigitidis (não mô cầu) N.gonorrhoeae ( cầu khuẩn lậu) Nhóm Neisseria phân lập môi trường nuôi cấy thông thường, nhóm có sắc tố, gồm 14 loài, ký sinh đường hô hấp gây bệnh MÀNG NÃO CẦU (Neisseria meningitidis) CẦU KHUẨN LẬU(Neisseria gonorrhoeae) Mã bài: XN2 18.18 Thời lượng: LT: 3tiết TH:0 GIỚI THIỆU: Màng não cầu cầu khuẩn lậu song cầu Gram(-) hình hạt cà phê vị trí ký sinh tính chất gây bệnh khác Màng não cầu gây viêm màng não số bệnh khác Cầu khuẩn lậu gây nhiễm khuẩn đường sinh dục tiết niệu Bệnh lậu mô tả từ năm 1550 trước công nguyên đến kỷ 13 biết bệnh lây qua đường tình dục Năm 1879, Neisser người mô tả vi khuẩn lậu nguyên gây bệnh lậu Năm 1882, Lestikow Loeffler nuôi cấy thành công cầu khuẩn lậu MỤC TIÊU: Sau học xong này, học sinh có khả năng: 1.Trình bày đặc điểm sinh vật học khả gây bệnh màng não cầu lậu cầu Nêu phương pháp chẩn đoán vi khuẩn học loại vi khuẩn NỘI DUNG Màng não cầu 1.1 Đặc điểm sinh vật học 1.1.1 Hình thể tính chất bắt màu Màng não cầu loại song cầu hình hạt cà phê hai mặt lõm quay vào nhau, kích thước khoảng 1µm, đứng riêng rẽ đôi nhiều đôi tụ với thành đám Có thể nằm bạch cầu đa nhân Trên tiêu nhuộm từ môi trường nuôi cấy vi khuẩn thường đa dạng, to nhỏ khác cách xếp không điển hình Vi khuẩn bệnh phẩm dịch não tuỷ thường có vỏ, bệnh phẩm khác thường vỏ, lông, không di động, không sinh nha bào, bắt màu Gram (-) Nếu nhuộm xanh methylen, vi khuẩn bắt màu xanh 1.1.2 Tính chất nuôi cấy Khi nuôi cấy từ bệnh phẩm, màng não cầu phát triển tốt môi trường giàu chất dinh dưỡng thạch máu, sôcôla khí trường có - 10% CO Sau cấy chuyển nhiều lần đòi hỏi dinh dưỡng vi khuẩn giảm đi, chí phát triển môi trường dinh dưỡng bình thường Nhiệt độ thích hợp 370C, phát triển nhiệt 25 - 420 C - Trên môi trường thạch máu, khuẩn lạc tròn, nhẵn, lồi, bóng, sau 24 đường kính khoảng 1mm, không tan máu, để lâu khuẩn lạc nhầy dính tự ly giải - Trên môi trường thạch sôcôla, khuẩn lạc dạng S, xám óng ánh 1.1.3.Tính chất sinh vật hoá học - Lên men không sinh loại đường maltose, glucose Tính chất lên men đường maltose để phân biệt với cầu khuẩn lậu - Oxydase (+) - ONPG (-): orthonitrophenyl β Galactophranocid để phát orthonitrophenyl β galactosidase 1.1.4 Cấu trúc kháng nguyên Màng não cầu có kháng nguyên vỏ polysaccharid Dựa vào kháng nguyên có 13 nhóm kháng nguyên biết, có nhóm thường gặp A, B, C, D, X, Y, Z,W-135, E29 Bốn nhóm lại H,I,K,L gặp Các nhóm A,B,C thường gây thành dịch Dựa vào protein màng tế bào lại chia nhóm kháng nguyên thành typ huyết Các kháng nguyên vỏ polysaccharid màng não cầu tìm thấy dịch não tuỷ máu Có thể chẩn đoán nhanh kháng nguyên kỹ thuật miễn dịch 1.1.5 Độc tố Màng não cầu có nội độc tố vững bền với nhiệt độ Khi tiêm nội độc tố vào tĩnh mạch hay phúc mạc thỏ gây chết thỏ, tiêm vào da gây hoại tử da 1.1.6 Sức đề kháng Màng não cầu có sức đề kháng yếu, dễ bị tiêu diệt chất sát khuẩn thông thường điều kiện khô, nóng ánh sáng mặt trời Bị chết sau khỏi thể - giờ, nhiệt độ 600 C / 10 phút Ngoài vi khuẩn dễ bị chết men tự ly giải 1.2 Khả gây bệnh Màng não cầu ký sinh người gây bệnh cho người Chúng thường ký sinh họng mũi người bình thường với tỷ lệ - % không gây bệnh Khi điều kiện thuận lợi, màng não cầu gây viêm họng mũi thường nhẹ, triệu chứng Có thể số từ họng mũi vi khuẩn xâm nhập vào máu gây nhiễm khuẩn huyết Từ máu, vi khuẩn đến màng não gây viêm màng não gây nên ban xuất huyết - hoại tử ( gọi tử ban ) hiếm, gặp não mô cầu gây tổn thương khớp phổi Nhiễm khuẩn huyết não mô cầu dẫn đến tình trạng Shock nội độc tố 1.3 Chẩn đoán vi khuẩn học 1.3.1 Lấy bệnh phẩm Bệnh phẩm dịch não tuỷ viêm màng não, máu nhiễm khuẩn huyết chất dịch họng mũi 1.3.2 Nhuộm soi trực tiếp Trong trường hợp viêm màng não, dịch não tuỷ ly tâm lấy cặn nhuộm soi có màng não cầu chẩn đoán nguyên nhân gây bệnh Hình thể điển hình vi khuẩn nằm tế bào bạch cầu đa nhân Nếu thấy vi khuẩn dịch mũi cần nuôi cấy phân lập phân biệt với Neisseria khác màng não cầu 1.3.3 Nuôi cấy Cấy dịch não tuỷ vào môi trường thạch máu sôcôla, để điều kiện khí trường có CO2 370 C, sau 24 chọn khuẩn lạc nghi ngờ xác định tính chất sinh vật hoá học làm phản ứng ngưng kết lam kính với kháng thể mẫu Nếu điều kiện xác định, sau nuôi cấy dịch não tuỷ mà có Neisseria chắn bệnh màng não cầu 1.3.4 Xác định tính chất sinh vật hoá học - Oxydase (+) - Glucose (+), Mantose (+) Mantose tính chất quan trọng để phân biệt với cầu khuẩn lậu có mantose (-) 1.3.5 Tìm kháng nguyên Lấy dịch não tuỷ làm phản ứng ngưng kết với kháng thể đặc hiệu gắn hạt latex, kỹ thuật chẩn đoán nhanh diện màng não cầu dịch não tuỷ Đây kỹ thuật có giá trị cao chẩn đoán bệnh viêm màng não màng não cầu 1.4 Phòng bệnh điều trị 1.4.1 Phòng bệnh - Phòng đặc hiệu: Hiện có vaccin chế từ vỏ polysaccharid màng nãocầu Vaccin gồm nhóm kháng nguyên ( A,C,Y W-135) nhóm A gây đáp ứng miễn dịch tốt nhóm khác trẻ tháng tuổi Nhóm B tính sinh miễn dịch người nên không dùng để sản xuất vaccin - Phòng không đặc hiệu: Phát sớm bệnh nhân cách ly bệnh viêm màng não não mô cầu lây đường hô hấp Dùng kháng sinh phòng cho người tiếp xúc với bệnh nhân vùng dịch.Thường dùng rifampicin minocyclin 1.4.2 Điều trị Nên điều trị sớm cho bệnh nhân penicillin, dùng erythromycin chloramphenicol Cầu khuẩn lậu 2.1 Đặc điểm sinh vật học 2.1.1 Hình thể tính chất bắt màu Cầu khuẩn lậu có hình thể giống não mô cầu Trên tiêu nhuộm gram, cầu khuẩn hình hạt cà phê đứng thành đôi, bắt màu gram(-) Nếu nhuộm xanh methylen vi khuẩn bắt màu xanh Trong trường hợp lậu điển hình, vi khuẩn đứng tế bào bạch cầu đa nhân trung tính thoái hoá, lèn chặt tế bào Trong trường hợp lậu mạn tính, tiêu vi khuẩn thường thấy vi khuẩn nằm tế bào Trong môi trường nuôi cấy, cầu khuẩn lậu thường đa dạng, kích thước thay đổi xếp không điển hình Cầu khuẩn lậu vỏ, lông, không di động, không sinh nha bào 2.1.2 Tính chất nuôi cấy Nuôi cấy cầu khuẩn lậu thường khó khăn, sau khỏi thể vi khuẩn dễ chết Môi trường nuôi cấy cầu khuẩn lậu phải giàu chất dinh dưỡng máu, huyết yếu tố phát triển Khí trường phải có 3-10% CO nhiệt độ 35 -370C Trên môi trường nuôi cấy thạch sôcôla, Thayer-Martin (các môi trường thường có loại kháng sinh colistin, vancomycin, nystatin, lincomycin để ức chế vi khuẩn khác nấm không ảnh hưởng tới cầu khuẩn lậu) Sau 24 kích thước khuẩn lạc từ 0,4-1mm, xám trắng, mờ đục, lồi, tròn, lấp lánh sáng Nếu để 48-72giờ, khuẩn lạc tới 3mm Sau 72 giờ, vi khuẩn thường tự ly giải 2.1.3 Tính chất sinh vật hoá học - Oxydase(+) - Catalase (+) - Lên men đường glucose - Không lên men đường maltose, levulose Dựa vào lên men loại đường để phân biệt cầu khuẩn lậu với não mô cầu Vi khuẩn Glucose Maltose Levulose Lậu cầu Não mô cầu + + + - 2.1.4 Cấu trúc kháng nguyên Cấu trúc kháng nguyên cầu khuẩn lậu phức tạp có nhiều kháng nguyên đặc hiệu cho nhóm cho typ ý nghĩa chẩn đoán bệnh 2.1.5 Độc tố Cầu khuẩn lậu ngoại độc tố Nội độc tố cầu khuẩn lậu chưa biết rõ Nếu tiêm liều cao vào tĩnh mạch màng bụng gây chết súc vật 2.1.6 Sức để kháng Cầu khuẩn lậu có sức đề kháng yếu Ở nhiệt độ 58 0C vi khuẩn chết sau phút Sau khỏi thể, vi khuẩn chết sau 1-2 Các chất sát khuẩn thông thường phenol 1%, formol 0,1%, sublim 0,1% vi khuẩn chết sau 2-5 phút tiếp xúc 2.2 Khả gây bệnh Cầu khuẩn lậu có vật chủ người Cầu khuẩn lậu có pili giúp cho vi khuẩn bám vào niêm mạc, loại pili độc lực Bệnh lây truyền chủ yếu đường tình dục Vi khuẩn gây viêm niệu đạo, triệu chứng chủ yếu đái buốt, đái khó, đái mủ Ở phụ nữ tăng tiết dịch niệu đạo, âm đạo, viêm cổ tử cung, viêm tử cung, vòi trứng, buồng trứng Ở nam gặp viêm tiền liệt tuyến, viêm mào tinh hoàn Có thể gặp bệnh lậu trẻ em, thường gặp viêm mủ kết mạc mắt sau đẻ 17 ngày vi khuẩn lây từ đường sinh dục người mẹ bị bệnh lậu sang trẻ sơ sinh qua đường sinh dục Ngoài gặp nhiễm cầu khuẩn lậu lan toả: Bệnh thường gặp người bị bệnh lậu không điều trị có biểu viêm khớp, viêm gan, viêm màng não Hầu hết bệnh gặp phụ nữ Bệnh lậu không miễn dịch kháng thể vai trò bảo vệ Có thể chẩn đoán huyết bệnh lậu đường sinh dục viêm khớp 2.3 Chẩn đoán vi khuẩn học 2.3.1 Nhuộm soi trực tiếp - Ở nam: Lấy mủ niệu đạo vào sáng sớm trước tiểu nhuộm Gram xanh methylen Nếu có 10 bạch cầu vi trường có song cầu hình hạt cà phê bắ màu Gr (-) chắn bệnh nhân bị bệnh lậu Nếu không lấy mủ, lấy nước tiểu ly tâm nhuộm soi cặn thường có kết - Ở nữ: Lấy mủ niệu đạo, mủ cổ tử cung lỗ tuyến âm đạo Bệnh phẩm nhuộm gram xanh methylen, cầu khuẩn lậu nằm tế bào bạch cầu đa nhân Phương pháp nhuộm soi dịch âm đạo thường không chắn độ đặc hiệu đạt 50-90%, cần kết hợp với nuôi cấy Trường hợp bệnh nhân bị lậu mạn tính thấy vi khuẩn vi khuẩn nằm tế bào 2.3.2 Nuôi cấy Bệnh phẩm cấy vào môi trường giàu chất dinh dưỡng sôcôla,Thayer Martin có chất tăng sinh chất ức chế, để nhiệt độ 35-37 0C, khí trường 3-10% CO2 Sau 48 giờ, nhận xét hình thái khuẩn lạc, nhuộm soi lại Nếu song cầu gram âm xác định cầu khuẩn lậu phản ứng sinh vật hoá học thử nghiệm oxydase, catalase tính chất lên men đường 2.3.3 Chẩn đoán gián tiếp - Trong số bệnh viêm khớp cầu khuẩn lậu nuôi cấy kết thường âm tính, làm phản ứng huyết để chẩn đoán ELISA, phản ứng kết hợp bổ thể - Kỹ thuật PCR áp dụng trung tâm chuyên sâu 2.4 Phòng bệnh điều trị 2.4.1 Phòng bệnh Vaccin phòng bệnh hiệu Chủ yếu giải nạn mại dâm, tuyên truyền giáo dục biện pháp phòng bệnh quan hệ tình dục Phát sớm điều trị triệt bệnh nhân Đặc biệt điều trị cho phụ nữ có thai bị bệnh lậu tránh lây sang trẻ sơ sinh 2.4.2 Điều trị Kháng sinh penixillin tác dụng tốt với cầu khuẩn lậu Tuy nhiên, xuất nhiều cầu khuẩn lậu kháng penicilin kháng sinh khác, phải làm kháng sinh đồ để lựa chọn kháng sinh thích hợp Trong trường hợp không làm kháng sinh đồ dùng cephalosporin thích hợp Cần ý điều trị triệt để tránh bệnh chuyển sang mạn tính khó chẩn đoán điều trị LƯỢNG GIÁ Trả lời ngắn câu sau: - Điền cho đủ tính chất đặc điểm sinh vật học não mô cầu: A Hình thể B……………………… C………………………………… D……………………………… E…………………………………… F……………………………… - Nêu bước thường áp dụng chẩn đoán não mô cầu: A…………………………………B……………………………… C………………………………….D……………………………… - Kể tên môi trường thường dùng để nuôi cấy não mô cầu A………………………….B…………………………… - Hai phương pháp thường dùng nhuộm cầu khuẩn lậu là: A B - Kể tên môi trường nuôi cấy cầu khuẩn lậu: A B - Cầu khuẩn lậu đường maltose - Cầu khuẩn lậu bắt màu sau nhuộm gram Trả lời sai câu sau: TT Nội dung Đ S Não mô cầu nằm tế bào bạch cầu Não mô cầu vỏ, có lông di động Môi trường nuôi cấy não mô cầu cần có CO2 khí trường Não mô cầu phát triển môi trường giàu chất dinh dưỡng Não mô cầu gây bệnh ngoại độc tố Trong nước não tuỷ có màng não cầu kết luận vi khuẩn gây bệnh viêm màng não Não mô cầu có sức đề kháng cao Khi nhuộm soi chất ngoáy họng có song cầu hình hạt cà phê Gram (-) kết luận não mô cầu Phản ứng ngưng kết lam kính để chẩn đoán tìm kháng thể huyết Não mô cầu gây nhiễm khuẩn huyết Não mô cầu có men oxydase Não mô cầu chết sau khỏi thể - nên nuôi cấy nước não tuỷ cần tiến hành sớm sau lấy bệnh phẩm Trên tiêu nhuộm soi, cầu khuẩn lậu nằm tế bào Cầu khuẩn lậu không phát triển môi trường thông thường Cầu khuẩn lậu không xâm nhập vào máu Các thuốc sát khuẩn thông thường giết chết cầu khuẩn lậu Nhuộm soi có giá trị chẩn đoán cầu khuẩn lậu Chọn câu trả lời - Tính chất sau dùng để phân biệt não mô cầu với lậu cầu: A Hình thể D Lên men đường maltose B Tính chất bắt mầu E Oxydase (+) C Lên men đường glucose - Tính chất sau não mô cầu: A Sinh nha bào B Phát triển tốt môi trường thạch thường C Tan máu D Gây bệnh viêm màng não E Song cầu gram (+) - Thử nghiệm sau không dùng để chẩn đoán não mô cầu: A Nhuộm soi D Xác định tính sinh Indol B Xác định men oxydase E Cấy môi trường sôcôla C Tính chất lên men đường glucose - Trên môi trường thạch máu, khuẩn lạc não mô cầu tính chất sau: A Tròn, lồi B Tan máu C Dạng S D Nhẵn bóng E Có sau 24h nuôi cấy - Nhuộm soi có giá trị chẩn đoán não mô cầu bệnh phẩm là: A Máu D Dịch âm đạo B Chất ngoái họng E Đờm C Dịch não tuỷ - Môi trường sau không dùng để chẩn đoán phân lập não mô cầu: A Thạch máu B Thạch thường C Macconkey D Thạch sôcôla E Cả B+C - Yếu tố sau dùng để phân biệt lậu cầu với não mô cầu sau nhuộm soi: A Phương pháp nhuộm D Cách xắp xếp vi khuẩn B Tính chất bắt màu E Cả A+B C Loại bệnh phẩm - Kháng sinh môi trường nuôi cấy cầu khuẩn lậu có tác dụng: A Kích thích cầu khuẩn lậu phát triển D ức chế nấm B Tạo mầu sắc khuẩn lạc E Cả C+D C ức chế vi khuẩn khác - Các cầu khuẩn gram (-) có tính chất sau: A Di động B Tan máu C Phát triển môi trường thông thường D Oxydase (+) E.Song cầu hình nến - Cầu khuẩn lậu có tính chất sau, trừ: A Chỉ gây bệnh cho người B Sức đề kháng yếu C Chỉ gây bệnh đường sinh dục D Bắt màu xanh nhuộm xanh methylen E Khuẩn lạc có sau nuôi cấy 24-48giờ