BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC KỸ THUẬT CÔNG NGHỆ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH O0O - ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP NHÂN NHANH PLB MÃN THIÊN HỒNG (Doritaenopsis sp.) TRONG MỘT SỐ HỆ THỐNG NUÔI CẤY KHÁC NHAU CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ NGÀNH: 111 GVHD:CN BÙI VĂN THẾ VINH SVTH: TRẦN XUÂN NGỌC HUY TP HỒ CHÍ MINH, THÁNG 07 NĂM 2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM ĐẠI HỌC KTCN TP HCM ĐỘC LẬP – TỰ DO – HẠNH PHÚC KHOA: MT & CNSH BỘ MÔN: CÔNG NGHỆ SINH HỌC NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP HỌ VÀ TÊN: TRẦN XUÂN NGỌC HUY NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MSSV: 106111012 LỚP: 06DSH Đầu đề đồ án tốt nghiệp NHÂN NHANH PLB MÃN THIÊN HỒNG (Doritaenopsis sp.) TRONG MỘT SỐ HỆ THỐNG NUÔI CẤY KHÁC NHAU Nhiệm vụ (yêu cầu nội dung số liệu ban đầu):  Xác định môi trường tối ưu để nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.)  So sánh khả nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) số hệ thống nuôi cấy khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc  Bước đầu thực nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) hệ thống Bioreactor tự tạo Ngày giao Đồ án tốt nghiệp: ngày 01/04/2010 Ngày hoàn thành Đồ án: 28/06/2010 Họ tên người hướng dẫn CN Bùi Văn Thế Vinh Phần hướng dẫn Toàn Đồ án Nội dung yêu cầu LVTN thông qua Bộ môn Ngày …… tháng …… năm 2010 CHỦ NHIỆM BỘ MÔN NGƯỜI HƯỚNG DẪN CHÍNH (Ký ghi rõ họ tên) PHẦN DÀNH CHO KHOA, BỘ MÔN Người duyệt (chấm sơ bộ):…………………………… Đơn vị:………………………………………………… Ngày bảo vệ:………………………………………… Điểm tổng kết:………………………………………… Nơi lưu trữ Đồ án tốt nghiệp:………………………… (Ký ghi rõ họ tên) LỜI CẢM ƠN Em xin chân thành cảm ơn:  Ban Giám hiệu Trường Đại học Kỹ Thuật Công Nghệ Thành Phố Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Khoa Môi Trường & Công Nghệ Sinh Học, tất Thầy Cô truyền đạt kiến thức cho em suốt trình học tập Trường  Thầy Bùi Văn Thế Vinh tận tình hướng dẫn, truyền đạt kinh nghiệm giúp đỡ em suốt thời gian thực đề tài, khoảng thời gian bốn năm em học Trường  Thầy Cô quản lý phòng thí nghiệm: Thầy Huỳnh Văn Thành, Thầy Nguyễn Trung Dũng, Cô Vũ Ngọc Yến Ly tận tình hướng dẫn giúp đỡ em hoàn thành tốt Đồ án  Xin gửi lời cảm ơn đến bạn Nguyễn Thị Phương Thảo, Nguyễn Thị Thu Thảo, Nguyễn Hoài Mỹ, Dương Thúy Vy, Thiều Quang Thiên Lý tất bạn lớp 06DSH gắn bó, giúp đỡ em suốt bốn năm qua  Con xin vô biết ơn Bố Mẹ, Các Chị Em gái động viên, khuyên bảo cổ vũ tinh thần để hoàn thành tốt bốn năm đại học Đồ án tốt nghiệp Sinh viên thực hiện: Trần Xuân Ngọc Huy MỤC LỤC Lời cảm ơn Mục lục Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đ62 thỊ, vẽ MỞ ĐẦU 1 Mục đích nghiên cứu: Ý nghĩa thực tiễn: Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược Phong Lan Mãn Thiên Hồng: 1.1.1 Phân loại Phong Lan Mãn Thiên Hồng: 1.1.2 Sự sinh trưởng phát triển Mãn Thiên Hồng tự nhiên: 1.1.3 Cây Mãn Thiên Hồng thị trường: 1.1.4 Các kỹ thuật nhân giống Mãn Thiên Hồng: 10 1.2 Tiền củ: 11 1.3 Kỹ thuật nhân giống in vitro (nuôi cấy mô tế bào thực vật): 13 1.3.1 Ưu nhược điểm kỹ thuật nhân giống in vitro: 13 1.3.2 Các giai đoạn quy trình nhân giống vô tính in vitro: 14 1.3.3 Các vấn đề liên quan đến nhân giống in – vitro: 17 1.3.3.1 Ảnh hưởng mẫu cấy môi trường đến nhân giống in – vitro: 17 1.3.3.2 Tính bất định mặt di truyền: 19 1.3.3.3 Việc sản xuất chất gây độc từ mẫu cấy: 19 1.3.3.4 Hiện tượng thủy tinh thể: 20 1.4 Hệ thống nuôi cấy Bioreactor: 21 1.4.1 Giới thiệu: 21 1.4.2 Cấu trúc phân loại bioreactor: 22 1.4.2.1 Cấu trúc bioreactor: 22 1.4.2.2 Phân loại bioreactor: 23 1.4.3 Quy trình nhân sinh khối thực vật kỹ thuật nuôi cấy lắc bioreactor: 24 1.4.4 Sự phát triển thực vật bioreator: 25 1.4.4.1 Quá trình phát sinh phôi soma: 25 1.4.4.2 Quá trình phát sinh quan: 25 1.4.5 Một số vấn đề thường gặp nuôi cấy lỏng: 26 1.4.6 Thuận lợi khó khăn nuôi cấy bioreactor: 27 1.4.6.1 Thuận lợi 27 1.4.6.2 Khó khăn: 28 Chương 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu: 29 2.2 Vật liệu: 29 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu: 29 2.2.2 Trang thiết bị dụng cụ: 29 2.2.3 Môi trường nuôi cấy: 29 2.2.4 Điều kiện nuôi cấy phòng nuôi cấy in – vitro: 30 2.3 Phương pháp bố trí thí nghiệm: 30 2.3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát môi trường nhân nhanh PLB Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.) 30 2.3.2 Thí nghiệm 2: So sánh khả nhân PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc 31 2.3.3 Thí nghiệm 3: Bước đầu thử nghiệm khả nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống Bioreactor tự tạo 31 2.4 Phân tích thống kê: 32 Chương 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 3.1 Khảo sát môi trường nhân nhanh PLB Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp.): 33 3.2 Thí nghiệm 2: So sánh khả nhân PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc 38 3.3 Thí nghiệm 3: Bước đầu nghiên cứu khả nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống bioreactor tự tạo: 41 Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 4.1 Kết luận: 43 4.2 Đề Nghị: 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHỤ LỤC 46 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN: acid deoxynucleotide ABA: abscisic acid BA: - benzyladenine BAP: N6 - benzylaminopurine CĐHSTTV: chất điều hòa tăng trưởng thực vật Dtps: Doritaenopsis IAA: indole – – acetic acid GA3: gibberellic acid KNA: potassium α naphtaleneacetate MS: Murashige Skoog NAA: α – naphtaleneacetic acid PLB: protocorm – like - body Phal: Phalaenopsis 2,4-D : 2,4 – dichlorophenoxyacetic acid DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách loài Mãn Thiên Hồng thị trường Bảng 2.1: Môi trường MS ½ bổ sung BA NAA ảnh hưởng lên nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng Bảng 3.1: Ảnh hưởng môi trường nuôi cấy khác đến tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp Bảng 3.2: Ảnh hưởng BA lên tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng Bảng 3.3: Ảnh hưởng NAA lên tăng sinh PLB Mãn Thiên Hồng Bảng 3.4: Ảnh hưởng hệ thống nuôi cấy khác lên hình thành PLB Mãn Thiên Hồng DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, CÁC ĐỒ THỊ, CÁC BẢN VẼ Hình 1.1: Mãn Thiên Hồng Hình 1.2: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại Hình 1.3: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại Hình 1.4: Hình thái PLB quan sát kính hiển vi soi Hình 1.5: PLB nhân nhanh môi trường rắn Hinh 1.6: Hai dạng bioreactor phổ biến Hình 3.1: Hệ thống bioreactor tự tạo Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 3.2 Thí nghiệm 2: So sánh khả nhân PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống khác nhau: rắn, lỏng tĩnh, lỏng lắc Môi trường MS 3.1 (8 mg/l BA, 0.3 mg/l NAA) thí nghiệm môi trường tối ưu cho tăng sinh PLB Sau tuần nuôi cấy, kết trình tăng sinh PLB trình bày bảng 3.3 Bảng 3.4: Ảnh hưởng hệ thống nuôi cấy khác lên hình thành PLB Mãn Thiên Hồng Hệ thống nuôi Số lượng PLB Trọng cấy lượng tươi PLB (g) Rắn 70.2a 0.2166a Lỏng tĩnh 0b 0.2a Lỏng lắc 0b 0.178667a Ghi chú: (*) cột, số liệu giá trị trung bình kí tự a, b khác biệt mặt thống kê mức ý nghĩa α = 0.05% Bảng 3.4 cho thấy hệ thống nuôi cấy rắn, tỷ lệ nhân nhanh PLB đạt cao PLB có màu xanh Một số PLB phát triển thành chồi Ở hệ thống nuôi cấy lỏng tĩnh, không thấy nhân nhanh PLB, nhiên PLB có kích thước to so với nuôi cấy hệ thống rắn Tuy không thấy nhân lên số lượng, thấy phân chia để hình thành PLB mẫu PLB ban đầu Tương tự hệ thống lỏng tỉnh, hệ thống lỏng lắc không xuất nhân lên số lượng Nhưng kích thước PLB to Như vậy, kết cho thấy khác biệt đáng kể trọng lượng tươi PLB ba hệ thống Ngược lại, tiêu số lượng PLB, có khác biệt rõ rệt ba hệ thống nuôi cấy khác Trong hệ thống nuôi cấy lỏng (tĩnh lắc) không thấy xuất chồi hệ thống rắn Điều giải thích mẫu ngập chìm hoàn toàn môi trường lỏng phân bố theo không gian ba chiều phá bỏ trạng thái phân cực PLB Vì PLB dạng tiền củ, để gian thích hợp không cấy truyền, đưa vào môi trường thích hợp, chúng hình thành phân cực phát triển PLB thành trãi qua giai đoạn giống giai đoạn 38 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh sinh phôi thể hệ giai đoạn hình cầu, giai đoạn hình tim, giai đoạn mầm cuối giai đoạn Và điều thể rõ nuôi hệ thống lỏng lắc Vì điều giúp cho hệ số nhân giống cao nhiều lần so với hệ thống rắn Tuy nhiên, nhược điểm mẫu nuôi môi trường lỏng xảy tượng thủy tinh thể, kết làm khả phát triển bình thường, thường yếu ớt Chức quang hợp hô hấp không tốt Điều giải thích chu kì thời gian nuôi cấy tuần, hệ thống rắn lại phát triển nhanh Kết thí nghiệm khác so với nghiên cứu “Ứng dụng hệ thống nhập chìm tạm thời nuôi cấy mô Lan Hồ Điệp” Cung Hoàng Phi Phượng thuộc Trung Tâm Công Nghệ Sinh Học Thành Phố Hồ Chí Minh Đối tượng nghiên cứu nghiên cứu loài Lan Hồ Điệp Tuy nhiên thí nghiệm này, đối tượng nghiên cứu loài Lan lai Lan Hồ Điệp Kim Hồ Điệp Có thể loài lan Mãn Thiên Hồng không thích hợp với điều kiện ngập chìm hoàn toàn môi trường lỏng loài lan khác 39 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Tỷ lệ nhân PLB lớn Có xuất chồi PLB tròn, nhỏ, xanh Hệ thống rắn PLB to, không nhận thấy nhân nhanh PLB màu xanh Hệ thống lỏng lắc PLB to, không nhận thấy nhân nhanh PLB Hệ thống lỏng tĩnh 40 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 3.3 Thí nghiệm 3: Bước đầu nghiên cứu khả nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng hệ thống bioreactor tự tạo:  Bioreactor hệ thống nuôi cấy dựa bình nuôi cấy thiết kế chuyên biệt nhằm mục đích nhân số lượng lớn tế bào, mô hay quan môi trường lỏng có hệ thống làm thoáng khí  Đối với thí nghiệm này, hệ thống bioreactor thiết kế dạng sục khí dạng cột  Kết đạt từ thí nghiệm bước đầu tạo điều kiện vô trùng bình nuôi cấy Tuy nhiên, nằm chu kì nuôi cấy, nên chưa thu nhận số liệu để xác định hiệu xác hệ thống 41 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Hình 3.1: Hệ thống bioreactor tự tạo 42 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Chương 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận: Môi trường nhân PLB thích hợp cho giống Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp môi trường MS 3.1 (MS ½ bổ sung mg/l BA 0.3 mg/l NAA, 20% CW, 30 g/l Sucrose, g/l Agar) Môi trường cho hệ số nhân giống cao Đối với giống Lan Hồ Điệp Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp nuôi cấy hệ thống Rắn, Lỏng tĩnh, Lỏng lắc Hệ thống rắn cho kết cao 4.2 Đề Nghị: Thông thường với giống Lan Hồ Điệp nhân giống vô tính phương pháp nuôi cấy mô Thời gian để đạt kết tin cậy xác dao động từ tuần đến 12 tuần Vì đề tài, thời gian nuôi cấy không đủ nên kết chưa thật xác Nếu thời gian dài nuôi cấy dài cho kết tốt Ở thí nghiêm 2, PLB giống Lan Mãn Thiên Hồng không thích hợp môi trường lỏng ngập chìm hoàn toàn Vì vậy, cần nghiên cứu hệ thống nuôi cấy ngập chìm tạm thời phục vụ cho nhân nhanh PLB Cần tiến hành thêm nhiều thí nghiệm khác để xác định kết hợp BA loại CĐHSTTV khác thuộc nhóm cytokinin để có hiệu nhân nahnh PLB cao hơn, hiệu kinh tế 43 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt Bùi Trang Việt, 2000, Sinh Lý Thực Vật Đại Cương Phát Triển, Nxb Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh Dương Công Kiên (2003), Nuôi cấy mô thực vật (tập 1, 2, 3), Nxb Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh Dương Tấn Nhựt (2007), Công Nghệ Sinh Học Thực Vật (tập 1, 2), Nxb Nông Nghiệp Dương Tấn Nhựt (2007), Hệ Thống Nuôi Cấy Lớp Mỏng Tế Bào, Nxb Nông Nghiệp Lê Văn Hướng (2005), Tạo Phôi Từ Vài Cơ Quan Của Phalaenopsis sp Trong Nuôi Cấy In – vitro, Luận Văn Thạc Sĩ Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Tp HỒ Chí Minh – Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thu Thủy (2006), Công Nghệ Tế Bào, Nxb Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh Trần Văn Minh (1999), Giáo Trình Công Nghệ Sinh Học Thực Vật, Viện Sinh Học Nhiệt Đới Võ Thị Bạch Mai (2004), Sự phát triển chồi rễ, Nxb Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh Võ Thị Bạch Mai (1996), Nhân Giống Vô Tính Một Số Loài Lan HỒ Điệp (Phalaenopsis sp.), Luận Án Phó Tiến Sĩ, Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh – Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên Tiếng Anh 10 Arditti J And Ernst R., 1993 Micropropagation of Orchids John Wiley and Sons, New York 682 pages 11 Brash J.D and Kocsis I., 1980 You can “meristem” with hormones Am Orchid Soc Bull 49: 1123 – 1131 12 Hackett W.P et al, 1973 Adventitious bud formation on Phalaenopsis nodes as a propagation method Univ Calif Ext Serv Floer Rep., March, – 44 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 13 Grimes J., 1987 An easy method to include Phalaenopsis ‘stem props’ Am Orchid Soc Bull 56: 369 – 371 14 Koch L., 1974 Untersuchungen zur vegetativen Verchrung bei Phalaenopsis in – vitro Diss., Technical Univ., Hannover, Germany 15 McFarlane K., 1977 Hormone node culture of Phalaenopsis Aust Orchid Rev 42: 30 – 31 16 Rotor G., 1959 The Photoperiodic and temperature of orchids In: The Orchids: a scientific survey Withner Ed., Ronald press Co., New York 397 – 417 17 Tse et al, 1971 Adventitious shoot formation on Phalaenopsis nodes Am Orchid Soc Bull 40: 807 – 810 18 Tanaka M And Sakanishi Y., 1978 Factors affecting the growth of in – vitro cultured lateral buds from Phalaenopsis flower stalks Sci Hortic (Amsterdam) 8: 169 – 178 19 Young So Park, H N Murthy & PaeK Kee Yoeup., 2000 Mass Multiplication of protocorm – like bodies using bioreactor system and subsequent plant regeneration in Phalaenopsis Chungbuk National University, Korea 20 Ziv Meira, 1999 Bioreator Technology for Plant Micropropagation The Hebrew University of Jerusalem, Israel 45 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh PHỤ LỤC Thí nghiệm 1: khảo sát môi trường nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng  Ảnh hưởng môi trường đến trọng lượng tươi PLB Mãn Thiên Hồng ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 1.0809 2.37226 3.45316 Df 72 79 Mean Square 0.154414 0.0329481 F-Ratio 4.69 P-Value 0.0002 Summary Statistics moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total Count 10 10 10 10 10 10 10 10 80 Average 0.3324 0.1872 0.2659 0.5031 0.2 0.2536 0.4682 0.4386 0.331125 moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total Stnd kurtosis -0.540491 -0.811062 -0.541208 1.03592 -0.595283 -1.09271 -0.322627 -0.621029 -1.40323 Standard deviation 0.145843 0.0972315 0.253842 0.142276 0.053275 0.198957 0.291178 0.144829 0.209072 Coeff of variation 43.8758% 51.9399% 95.4653% 28.2798% 26.6375% 78.453% 62.1909% 33.0207% 63.1398% Table of Means with 95.0 percent LSD intervals moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total Count 10 10 10 10 10 10 10 10 80 Mean 0.3324 0.1872 0.2659 0.5031 0.2 0.2536 0.4682 0.4386 0.331125 Stnd error (pooled s) 0.0574004 0.0574004 0.0574004 0.0574004 0.0574004 0.0574004 0.0574004 0.0574004 Lower limit 0.251489 0.106289 0.184989 0.422189 0.119089 0.172689 0.387289 0.357689 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD moi truong Count Mean ms 1.2 10 0.1872 ms 3.1 10 0.2 ms 3.2 10 0.2536 ms 2.1 10 0.2659 ms 1.1 10 0.3324 Homogeneous Groups X X X X XX 46 Upper limit 0.413311 0.268111 0.346811 0.584011 0.280911 0.334511 0.549111 0.519511 Minimum 0.123 0.03 0.023 0.19 0.113 0.0 0.0 0.202 0.0 Maximum 0.563 0.313 0.723 0.617 0.274 0.51 0.883 0.607 0.883 Range 0.44 0.283 0.7 0.427 0.161 0.51 0.883 0.405 0.883 Stnd skewness 0.352995 -0.39922 1.05483 -1.97804 -0.0620924 0.0599225 -0.671659 -0.896563 1.13568 Đồ án tốt nghiệp ms 4.2 ms 4.1 ms 2.2 10 10 10 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 0.4386 0.4682 0.5031 XX XX X Contrast Sig Difference +/- Limits ms 1.1 - ms 1.2 0.1452 0.161823 ms 1.1 - ms 2.1 0.0665 0.161823 ms 1.1 - ms 2.2 * -0.1707 0.161823 ms 1.1 - ms 3.1 0.1324 0.161823 ms 1.1 - ms 3.2 0.0788 0.161823 ms 1.1 - ms 4.1 -0.1358 0.161823 ms 1.1 - ms 4.2 -0.1062 0.161823 ms 1.2 - ms 2.1 -0.0787 0.161823 ms 1.2 - ms 2.2 * -0.3159 0.161823 ms 1.2 - ms 3.1 -0.0128 0.161823 ms 1.2 - ms 3.2 -0.0664 0.161823 ms 1.2 - ms 4.1 * -0.281 0.161823 ms 1.2 - ms 4.2 * -0.2514 0.161823 ms 2.1 - ms 2.2 * -0.2372 0.161823 ms 2.1 - ms 3.1 0.0659 0.161823 ms 2.1 - ms 3.2 0.0123 0.161823 ms 2.1 - ms 4.1 * -0.2023 0.161823 ms 2.1 - ms 4.2 * -0.1727 0.161823 ms 2.2 - ms 3.1 * 0.3031 0.161823 ms 2.2 - ms 3.2 * 0.2495 0.161823 ms 2.2 - ms 4.1 0.0349 0.161823 ms 2.2 - ms 4.2 0.0645 0.161823 ms 3.1 - ms 3.2 -0.0536 0.161823 ms 3.1 - ms 4.1 * -0.2682 0.161823 ms 3.1 - ms 4.2 * -0.2386 0.161823 ms 3.2 - ms 4.1 * -0.2146 0.161823 ms 3.2 - ms 4.2 * -0.185 0.161823 ms 4.1 - ms 4.2 0.0296 0.161823 * denotes a statistically significant difference  Ảnh hưởng môi trường đến số lượng PLB Mãn Thiên Hồng ANOVA Table Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 27695.0 48315.7 76010.6 Df 68 75 Mean Square 3956.43 710.524 F-Ratio 5.57 P-Value 0.0000 Summary Statistics moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total Count 10 10 10 10 10 76 Average 18.8 24.4 23.0 51.9 76.3 31.75 30.7778 19.2 34.7895 moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 Stnd kurtosis 0.438825 0.92045 2.77187 -1.05242 -0.925408 Standard deviation 19.7698 26.3194 26.3391 36.78 38.1344 19.0019 20.1481 14.8159 31.8351 Coeff of variation 105.158% 107.866% 114.518% 70.867% 49.9796% 59.8484% 65.463% 77.1662% 91.5079% 47 Minimum 2.0 0.0 0.0 4.0 26.0 5.0 11.0 3.0 0.0 Maximum 59.0 82.0 86.0 104.0 130.0 56.0 64.0 56.0 130.0 Range 57.0 82.0 86.0 100.0 104.0 51.0 53.0 53.0 130.0 Stnd skewness 1.64759 1.57763 2.39306 -0.17485 -0.345812 -0.192221 0.965066 2.40877 3.8922 Đồ án tốt nghiệp ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh -0.871992 -0.77913 2.83866 0.666549 Table of Means with 95.0 percent LSD intervals moi truong ms 1.1 ms 1.2 ms 2.1 ms 2.2 ms 3.1 ms 3.2 ms 4.1 ms 4.2 Total Count 10 10 10 10 10 76 Mean 18.8 24.4 23.0 51.9 76.3 31.75 30.7778 19.2 34.7895 Stnd error (pooled s) 8.42926 8.42926 8.88522 8.42926 8.42926 9.4242 8.88522 8.42926 Lower limit 6.90621 12.5062 10.4628 40.0062 64.4062 18.4523 18.2406 7.30621 Multiple Range Tests Method: 95.0 percent LSD moi truong Count Mean ms 1.1 10 18.8 ms 4.2 10 19.2 ms 2.1 23.0 ms 1.2 10 24.4 ms 4.1 30.7778 ms 3.2 31.75 ms 2.2 10 51.9 ms 3.1 10 76.3 Homogeneous Groups X X X X XX XX X X Contrast Sig Difference +/- Limits ms 1.1 - ms 1.2 -5.6 23.7876 ms 1.1 - ms 2.1 -4.2 24.4394 ms 1.1 - ms 2.2 * -33.1 23.7876 ms 1.1 - ms 3.1 * -57.5 23.7876 ms 1.1 - ms 3.2 -12.95 25.2305 ms 1.1 - ms 4.1 -11.9778 24.4394 ms 1.1 - ms 4.2 -0.4 23.7876 ms 1.2 - ms 2.1 1.4 24.4394 ms 1.2 - ms 2.2 * -27.5 23.7876 ms 1.2 - ms 3.1 * -51.9 23.7876 ms 1.2 - ms 3.2 -7.35 25.2305 ms 1.2 - ms 4.1 -6.37778 24.4394 ms 1.2 - ms 4.2 5.2 23.7876 ms 2.1 - ms 2.2 * -28.9 24.4394 ms 2.1 - ms 3.1 * -53.3 24.4394 ms 2.1 - ms 3.2 -8.75 25.846 ms 2.1 - ms 4.1 -7.77778 25.0743 ms 2.1 - ms 4.2 3.8 24.4394 ms 2.2 - ms 3.1 * -24.4 23.7876 ms 2.2 - ms 3.2 20.15 25.2305 ms 2.2 - ms 4.1 21.1222 24.4394 ms 2.2 - ms 4.2 * 32.7 23.7876 ms 3.1 - ms 3.2 * 44.55 25.2305 ms 3.1 - ms 4.1 * 45.5222 24.4394 ms 3.1 - ms 4.2 * 57.1 23.7876 ms 3.2 - ms 4.1 0.972222 25.846 ms 3.2 - ms 4.2 12.55 25.2305 ms 4.1 - ms 4.2 11.5778 24.4394 * denotes a statistically significant difference 48 Upper limit 30.6938 36.2938 35.5372 63.7938 88.1938 45.0477 43.3149 31.0938 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh  Ảnh hưởng BA, NAA lên trọng lượng tươi PLB Mãn Thiên Hồng Analysis of Variance - Type III Sums of Squares Source MAIN EFFECTS A:BA B:NAA RESIDUAL TOTAL (CORRECTED) Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 0.675421 0.01682 2.76092 3.45316 75 79 0.22514 0.01682 0.0368123 6.12 0.46 0.0009 0.5011 Table of Least Squares Means with 95.0 Percent Confidence Intervals Level GRAND MEAN BA 10 NAA 0.3 0.5 Stnd Error Lower Limit Upper Limit 0.2598 0.3845 0.2268 0.4534 0.0429024 0.0429024 0.0429024 0.0429024 0.174334 0.299034 0.141334 0.367934 0.345266 0.469966 0.312266 0.538866 0.316625 0.345625 0.0303366 0.0303366 0.256191 0.285191 0.377059 0.406059 Count 80 Mean 0.331125 20 20 20 20 40 40 Multiple Range Tests cho ảnh hưởng BA lên trọng lượng tươi PLB Method: 95.0 percent LSD BA Count LS Mean 20 0.2268 20 0.2598 20 0.3845 10 20 0.4534 LS Sigma 0.0429024 0.0429024 0.0429024 0.0429024 Homogeneous Groups X X X X Contrast Sig Difference +/- Limits 4-6 * -0.1247 0.120867 4-8 0.033 0.120867 - 10 * -0.1936 0.120867 6-8 * 0.1577 0.120867 - 10 -0.0689 0.120867 - 10 * -0.2266 0.120867 * denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for khoi luong mau tang by NAA Method: 95.0 percent LSD NAA Count LS Mean 0.3 40 0.316625 0.5 40 0.345625 LS Sigma 0.0303366 0.0303366 Homogeneous Groups X X Contrast Sig Difference +/- Limits 0.3 - 0.5 -0.029 0.0854661 * denotes a statistically significant difference  Ảnh hưởng BA NAA lên số lượng PLB Mãn Thiên Hồng Analysis of Variance - Type III Sums of Squares Source MAIN EFFECTS A:NAA B:BA RESIDUAL Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value 408.853 13862.9 61475.7 71 408.853 4620.96 865.855 0.47 5.34 0.4942 0.0023 49 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh TOTAL (CORRECTED) 76010.6 75 All F-ratios are based on the residual mean square error Table of Least Squares Means for so luong PLB with 95.0 Percent Confidence Intervals Level GRAND MEAN NAA 0.3 0.5 BA 10 Stnd Error Lower Limit Upper Limit 37.5697 32.9209 4.77675 4.78375 28.0451 23.3823 47.0943 42.4594 21.6 38.3329 56.2417 24.8065 6.57972 6.753 6.94581 6.753 8.48038 24.8677 42.3921 11.3414 34.7196 51.798 70.0913 38.2717 Count 76 Mean 35.2453 38 38 20 19 18 19 Multiple Range Tests for so luong PLB by NAA Method: 95.0 percent LSD NAA Count LS Mean 0.5 38 32.9209 0.3 38 37.5697 LS Sigma 4.78375 4.77675 Homogeneous Groups X X Contrast Sig Difference +/- Limits 0.3 - 0.5 4.64884 13.4895 * denotes a statistically significant difference Multiple Range Tests for so luong PLB by BA Method: 95.0 percent LSD BA Count LS Mean 20 21.6 10 19 24.8065 19 38.3329 18 56.2417 LS Sigma 6.57972 6.753 6.753 6.94581 Homogeneous Groups X X XX X Contrast Sig Difference +/- Limits 4-6 -16.7329 18.7998 4-8 * -34.6417 19.0771 - 10 -3.20655 18.7998 6-8 -17.9089 19.3301 - 10 13.5263 19.0359 - 10 * 31.4352 19.3301 * denotes a statistically significant difference Thí nghiệm 2: So sánh khả nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng số hệ thống khác  Ảnh hưởng hệ thống khác đến trọng lượng tươi PLB Summary Statistics for luong tuoi PLB moi truong long lac long tinh ran Total Count 5 15 Average 0.1768 0.2166 0.1918 0.195067 moi truong long lac long tinh Stnd kurtosis 0.764008 -0.450209 Standard deviation 0.0841528 0.0679434 0.0508006 0.0660924 Coeff of variation 47.5978% 31.3681% 26.4862% 33.882% 50 Minimum 0.06 0.16 0.113 0.06 Maximum 0.296 0.316 0.244 0.316 Range 0.236 0.156 0.131 0.256 Stnd skewness 0.061569 0.83289 -0.95746 0.00537494 Đồ án tốt nghiệp ran Total GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 0.345042 0.303453 ANOVA Table for luong tuoi PLB by moi truong Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 0.00404013 0.0571148 0.0611549 Df 12 14 Mean Square 0.00202007 0.00475957 F-Ratio 0.42 P-Value 0.6636 Table of Means for luong tuoi PLB by moi truong with 95.0 percent LSD intervals moi truong long lac long tinh ran Total Count 5 15 Stnd error (pooled s) 0.0308531 0.0308531 0.0308531 Mean 0.1768 0.2166 0.1918 0.195067 Lower limit 0.129266 0.169066 0.144266 Upper limit 0.224334 0.264134 0.239334 Multiple Range Tests for luong tuoi PLB by moi truong Method: 95.0 percent LSD moi truong Count Mean long lac 0.1768 ran 0.1918 long tinh 0.2166 Homogeneous Groups X X X Contrast Sig Difference +/- Limits long lac - long tinh -0.0398 0.0950681 long lac - ran -0.015 0.0950681 long tinh - ran 0.0248 0.0950681 * denotes a statistically significant difference  Ảnh hưởng hệ thống khác đến số lượng PLB Summary Statistics for so luong PLB moi truong long lac long tinh ran Total Count 5 15 Average 0.0 0.0 70.2 23.4 moi truong long lac long tinh ran Total Stnd kurtosis Standard deviation 0.0 0.0 44.5892 41.7301 Coeff of variation % % 63.5174% 178.334% Minimum 0.0 0.0 26.0 0.0 Maximum 0.0 0.0 130.0 130.0 Range 0.0 0.0 104.0 130.0 Stnd skewness 0.212763 2.78053 -0.680917 1.64287 ANOVA Table for so luong PLB by moi truong Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 16426.8 7952.8 24379.6 Df 12 14 Mean Square 8213.4 662.733 F-Ratio 12.39 P-Value 0.0012 Table of Means for so luong PLB by moi truong with 95.0 percent LSD intervals moi truong long lac long tinh ran Count 5 Mean 0.0 0.0 70.2 Stnd error (pooled s) 11.5129 11.5129 11.5129 Lower limit -17.7374 -17.7374 52.4626 Upper limit 17.7374 17.7374 87.9374 51 Đồ án tốt nghiệp Total 15 GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 23.4 Multiple Range Tests for so luong PLB by moi truong Method: 95.0 percent LSD moi truong long tinh long lac ran Count 5 Mean 0.0 0.0 70.2 Homogeneous Groups X X X Contrast Sig Difference +/- Limits long lac - long tinh 0.0 35.4748 long lac - ran * -70.2 35.4748 long tinh - ran * -70.2 35.4748 * denotes a statistically significant difference 52 [...]... giống trong sản xuất là cấp thiết ở nước ta hiện nay Đề tài Nhân nhanh PLB Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp. ) trong một 1 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh số hệ thống nuôi cấy khác nhau nhằm mục đích tìm ra môi trường thích hợp nhất để nhân PLB Mãn Thiên Hồng Doritaenopsis sp nhằm đạt hiệu suất nhân giống cao nhất, đồng thời xác định với hệ thống nuôi cấy nào sẽ cho hiệu suất nhân nhanh. .. rắn 1.3 Kỹ thuật nhân giống in vitro (nuôi cấy mô tế bào thực vật): 1.3.1 Ưu và nhược điểm của kỹ thuật nhân giống in vitro:  Ưu điểm: Nhân nhanh với hệ số nhân giống cao: Trong hầu hết các trường hợp, công nghệ vi nhân giống đáp ứng tốc độ nhân nhanh cao, từ một cây trong vòng 1 – 2 năm có thể tạo thành hàng triệu cây Sản phẩm cây giống đồng nhất: Vi nhân giống về cơ bản là công nghệ nhân dòng Nó tạo... (Salu Spot x Hoa màu đỏ tươi với Happy Beauty) những đường viền cánh hoa màu vàng kem 7 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Hình 1.2: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại 8 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Hình 1.3: Một số loài Mãn Thiên Hồng thương mại 9 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh 1.1.4 Các kỹ thuật nhân giống Mãn Thiên Hồng:  Nhân giống in – vivo: Nhân giống Mãn Thiên. .. thân, sống biểu sinh, thuộc: Ngành: Magnoliophyta Lớp : Liliopsida Bộ : Orchidales Họ : Orchidaceae Hình 1.1: Mãn Thiên Hồng  Mãn Thiên Hồng là một loại lan lai Chúng được lai từ Lan Hồ Điệp (Phalaenopsis sp. ) và Kim Hồ Điệp (Doritis sp. ) Do đó Mãn Thiên Hồng được mang cả hai ưu điểm của cây cha và mẹ như hoa nhiều, to, đẹp và cây dễ trồng, rất khỏe chịu đựng được nhiều mức độ khí hậu khác nhau 1.1.2... như nước ngoài Trong tự nhiên cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng tăng trưởng chậm Thông thường, việc tạo cây con trong tự nhiên được thực hiện bằng hạt và bằng cách tách chiết, tuy nhiên với phương pháp này thời gian nhân giống rất dài và hệ số nhân giống rất thấp, hơn nữa cây con tạo thành có sức sống không cao Trong những năm gần đây, cùng với sự phát triển của công nghệ sinh học, ngành vi nhân giống cây... giống trong sản xuất hiện nay, từng bước nâng cao trình độ kỹ thuật nhân giống và thu nhập cho người sản xuất, hạn chế sự lây lan nguồn bệnh từ nước ngoài qua con đường nhập cây giống 2 Đồ án tốt nghiệp GVHD: CN Bùi Văn Thế Vinh Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Sơ lược về Phong Lan Mãn Thiên Hồng: 1.1.1 Phân loại cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng:  Cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp. ) là loài... Phong Lan Mãn Thiên Hồng là một trong những cây cảnh được mọi người ưa chuộng nhiều vì hoa có màu sắc đẹp, phát hoa có nhiều hoa, lâu tàn, dễ dàng chăm sóc và có thể đặt ở những nơi ít ánh sáng Chính vì thế, rất tiện lợi khi trồng trong nhà, nên rất thích hợp cho việc trồng thưởng thức của người dân ở Thành Phố Cây Phong Lan Mãn Thiên Hồng (Doritaenopsis sp. ) có giá trị kinh tế cao ở trong nước cũng... (cutting) đốt ngoài ra còn có tiền củ (protocorm) Tạo thể nhân giống in –vitro dựa vào đặc điểm nhân giống ngoài tự nhiên của cây trồng Tuy nhiên có những cây trồng không có khả năng nhân giống người ta thường nhân giống bằng cách tạo cụm chồi bằng mô sẹo Để tạo thể nhân giống trong môi trường thường bổ sung Cytokinin, Auxin, GA3 và các chất hữu cơ khác  Nhân giống in – vitro: Là giai đoạn quan trọng trong. .. ty về vi nhân giống cây trồng thương mại với quy mô lớn lần lượt ra đời Tuy nhiên, số công ty thu được lợi nhuận cao vẫn không nhiều Nguyên nhân chủ yếu là do chi phí cao cho người lao động để thực hiện các công đoạn như cấy chuyền, tách mẫu bên trong tủ cấy Chính vì vậy, cần phải có một hệ thống nuôi cấy mới làm sao có thể tự động hóa giúp giảm thời gian và công lao động Một trong những hệ thống tự... sống của mẫu: Mẫu cây mẹ có ảnh hưởng rất quan trọng đến nuôi cấy in – vitro Nuôi cấy đỉnh sinh trưởng để loại virus sản xuất ra cây sạch bệnh  Ảnh hưởng của môi trường: Môi trường MS (Murashige và Skoog, 196 2) được sử dụng phổ biến nhất trong nuôi cấy đỉnh sinh trưởng Nhưng các loài khác nhau có thể đòi hỏi môi trường nuôi cấy khác nhau Samartin (198 9) đã sử dụng 6 công thức muối đa lượng khác nhau