THUỐC MỠ TRA MẮT TETRACYCLIN HYDROCLORID Oculentum tetracyclini Là thuốc mỡ dùng tra mắt, chứa tetracyclin hydroclorid với tá dược thích hợp Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận " Thuốc mềm dùng da niêm mạc” mục "Thuốc mỡ tra mắt" (Phụ lục 1.12) yêu cầu sau đây: Hàm lượng tetracyclin hydroclorid (C22H24N2O8.HCl) từ 90,0 đến 125,0% so với lượng ghi nhãn Tính chất Thuốc mỡ màu vàng nhạt đồng nhất, có độ mềm thích hợp, dính vào niêm mạc da bôi, không tách lớp điều kiện bình thường, không chảy lỏng 37 0C Định tính A Lấy khoảng g chế phẩm vào cốc có mỏ, thêm khoảng ml nước, đun cách thuỷ cho tan hết tá dược, khuấy đũa thuỷ tinh Để nguội làm lạnh nước đá lớp tá dược đông lại Gạn lấy lớp nước (dung dịch A) để thử phản ứng sau: Lấy ml dung dịch A, cho vào bát sứ, bốc cách thuỷ khô Thêm 1-2 giọt acid sulfuric đậm đặc (TT) có màu đỏ tím Thêm giọt dung dịch sắt (III) clorid 3% (TT), màu chuyển thành nâu đỏ nâu Lấy ml dung dịch A, cho vào ống nghiệm, thêm giọt dung dịch acid nitric 32% (TT) vài giọt dung dịch bạc nitrat 2% (TT), xuất tủa trắng B Trong phần Định lượng, thời gian lưu píc sắc ký đồ dung dịch thử phải tương đương với thời gian lưu pic tetracyclin hydroclorid sắc ký đồ dung dịch chuẩn Định lượng Tiến hành phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Điều kiện sắc ký: Dung môi pha loãng: Hỗn hợp 680 ml dung dịch amoni oxalat 0,1 M với 270 ml dimethylformamid (TT) Pha động: Hỗn hợp 680 ml dung dịch amoni oxalat 0,1 M với 270 ml dimethylformamid (TT) 50 ml dung dịch amonphosphat dibasic 0,2 M Điều chỉnh đến pH 7,6-7,7 dung dịch amoni hydroxyd N dung dịch acid phosphoric N (nếu cần Lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch chuẩn: Cân xác lượng tetracyclin hydroclorid chuẩn, hoà tan methanol (TT) để thu dung dịch có nồng độ khoảng mg/ml Pha loãng 6,0 ml dung dịch thu thành 50,0 ml dung môi pha loãng.Trộn Lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch thử: Cân xác lượng chế phẩm tương đương khoảng 0,300 g tetracyclin hydroclorid, cho vào bình nón nút mài dung tích 100 ml, thêm 20 ml cyclohexan (TT), lắc kỹ Tiếp tục thêm 35 ml methanol (TT), siêu âm 20 phút Gạn, lọc dung dịch vào bình định mức 100 ml Tráng cắn bình nón với 40 ml methanol (TT), lọc vào bình định mức, thêm methanol (TT) đến định mức Pha loãng 2,0 ml dung dịch thu thành 50 ml dung môi pha loãng Trộn Lọc qua màng lọc 0,45 µm Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm), nhồi styren-divinyl-benzen copolyme (8 µm -10 µm) Nhiệt độ cột: 60 0C Detector quang phổ hấp thụ tử ngoại đặt bước sóng 280 nm Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic tetracyclin hydroclorid lần tiêm lặp lại nhỏ 2,0% Tiến hành sắc ký với dung dịch chuẩn dung dịch thử Tính hàm lượng tetracyclin hydroclorid, C 22H24N2O8 HCl, chế phẩm thử dựa vào diện tích pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn, dung dịch thử hàm lượng C 22H24N2O8HCl tetracyclin hydroclorid chuẩn Bảo quản Nơi mát, tránh ánh sáng Loại thuốc Kháng sinh Hàm lượng thường dùng 1%