VIÊN NÉN SULFADOXIN VÀ PYRIMETHAMIN Tabellae Sulfadoxini Pyrimethamini Là viên nén chứa sulfadoxin pyrimethamin Chế phẩm phải đáp ứng yêu cầu chuyên luận "Thuốc viên nén" mục (Phụ lục 1.20) yêu cầu sau: Hàm lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Hàm lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng ghi nhãn Tính chất Viên nén màu trắng Định tính A Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel GF254 dày 0,25 mm Dung môi khai triển: Heptan - cloroform - dung dịch methanol 5% (tt/tt) ethanol - acid acetic băng (4 : : : 1) Dung dịch thử: Lấy lượng bột viên tương ứng với khoảng 100 mg sulfadoxin, thêm 10 ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol, lắc kỹ phút lọc Dung dịch đối chiếu (1): Dung dịch sulfadoxin chuẩn có nồng độ 10 mg/ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol Dung dịch đối chiếu (2): Dung dịch pyrimethamin chuẩn có nồng độ 0,5 mg/ml dung dịch amoniac 2% (tt/tt) methanol Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 10 µl dung dịch Triển khai sắc ký đến dung môi khoảng 3/4 chiều dài mỏng Lấy mỏng để khô không khí Quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm Hai vết sắc ký đồ dung dịch thử phải phù hợp với hai vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu vị trí màu sắc B Trong phần định lượng, thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch thử phải tương ứng với thời gian lưu hai pic sắc ký đồ dung dịch chuẩn Độ hòa tan (Phụ lục 11.4) Thiết bị: Kiểu cánh khuấy Môi trường: 1000 ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8 (TT) Tốc độ quay: 75 vòng/phút Thời gian: 30 phút Tiến hành: Lấy phần dung dịch môi trường hoà tan mẫu thử, lọc, bỏ 20 ml dịch lọc đầu Pha loãng dịch lọc thu tới nồng độ thích hợp với pha động (nếu cần) Tiến hành định lượng sulfadoxin pyrimethamin hoà tan phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động, điều kiện sắc ký dung dịch chuẩn phần định lượng, thay đổi điều kiện sắc ký cho phù hợp Yêu cầu: Không 60% lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Không 60% lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, so với lượng ghi nhãn hoà tan 30 phút Định lượng Phương pháp sắc ký lỏng (Phụ lục 5.3) Pha động: Hỗn hợp dung dịch đệm pH 5,9 acetonitril (4 : 1) Dung dịch đệm pH 5,9: Thêm 1ml triethylamin 200ml acetonitril vào 700ml nước, điều chỉnh đến pH 5,9 dung dịch acid acetic 1%, sau thêm nước vừa đủ 1000ml, trộn đều, lọc Dung dịch chuẩn nội: Dung dịch phenacetin có nồng độ mg/ml acetonitril (TT) Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác khoảng 500 mg sulfadoxin chuẩn 25 mg pyrimethamin chuẩn vào bình định mức 100 ml, thêm 35 ml acetonitril (TT), lắc kỹ để hòa tan pha loãng pha động đến định mức, lắc Dung dịch chuẩn (1): Hút xác 25,0 ml dung dịch chuẩn gốc 2,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch chuẩn (2): Hút xác 2,0 ml dung dịch chuẩn gốc 10,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 250 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch thử: Cân 20 viên, tính khối lượng trung bình viên nghiền thành bột mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 500 mg sulfadoxin 25 mg pyrimethamin vào bình định mức 100 ml, thêm 35 ml acetonitril (TT) lắc siêu âm 30 phút Pha loãng pha động đến định mức, lắc Lọc qua giấy lọc bỏ 20 ml dịch lọc đầu Hút xác 25,0 ml dịch lọc 2,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 50 ml, pha loãng pha động đến định mức Lọc qua màng lọc 0,45 µm thu dung dịch thử (1) Hút xác 2,0 ml dịch lọc 10,0 ml dung dịch chuẩn nội vào bình định mức 250 ml, pha loãng pha động vừa đủ đến vạch Lọc qua màng lọc 0,45 µm thu dung dịch thử (2) Điều kiện sắc ký: Cột thép không gỉ (30 cm x 3,9 mm) nhồi pha tĩnh B (5 µm) ( Cột RP8 thích hợp) Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 230 nm Tốc độ dòng: 2,0 ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Cách tiến hành: Kiểm tra khả thích hợp hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn Phép thử có giá trị độ phân giải hai pic sulfadoxin phenacetin không nhỏ 1,0; độ phân giải hai pic pyrimethamin phenacetin không nhỏ 1,0; độ lệch chuẩn tương đối diện tích pic không lớn 2,5% Tiến hành sắc ký dung dịch chuẩn dung dịch thử Thời gian lưu tương đối khoảng 0,7 sulfadoxin, 1,0 phenacetin 1,3 pyrimethamin Tính hàm lượng pyrimethamin, C12H13ClN4, có viên dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch thử (1), dung dịch chuẩn (1) hàm lượng C12H13ClN4 pyrimethamin chuẩn Tính hàm lượng sulfadoxin, C12H14N4O4S, có viên dựa vào diện tích pic thu từ dung dịch thử (2), dung dịch chuẩn (2) hàm lượng C12H14N4O4S sulfadoxin chuẩn Bảo quản Trong vỉ nhôm hay chai lọ nút kín Để nơi khô mát, tránh ánh sáng Loại thuốc Kháng sinh Hàm lượng thường dùng Sulfadoxin 500 mg pyrimethamin 25 mg