Ket-noi.com kho ti liu phớ Lời Cảm ơn Để có kết hoàn thành Khoá Luận Tốt Nghiệp xin gửi lời cảm ơn tới tất bạn bè , tới gia đình động viên trình thực tập, đặc biệt xin chân thành cảm ơn Thầy giáo hớng dẫn tôi, trình thực tập hoàn thành luận văn tốt nghiệp nhận đợc hớng dẫn chu đáo tận tình lời khuyên bổ ích thầy giáo Nguyễn Ngọc Phớc , vô biết ơn quan tâm thầy cô giáo khoa Thuỷ Sản, trờng Đại Học Nông Lâm Huế,và giúp đỡ nhiệt tình cô Khoa Vi Sinh thuộc Bệnh Viện Trung Ương Huế Trong thời gian nghiên cứu hoàn thành đề tài thực tập tốt nghiệp, có nhiều cố gắng, nhiên thời gian có hạn kiến thức hạn chế nên tránh đợc sai xót Rất mong đợc quan tâm, góp ý thầy cô giáo, bạn sinh viên Ket-noi.com kho ti liu phớ Trần Nam Hà Ket-noi.com kho ti liu phớ MC LC DANH MC CC BNG DANH MC CC HèNH .5 1.T VN TNG QUAN TI LIU 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu dch bnh tụm trờn th gii v Vit Nam 2.1.1 Tỡnh hỡnh dch bnh 2.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu bnh 11 2.2.1 Trờn th gii 11 2.2.2 Ti Vit Nam .13 2.3 Tỡnh hỡnh s dng hp cht chit xut t tho dc 14 2.3.1 Trờn th gii .14 2.3.2 Ti Vit Nam .16 2.3 Mt s tho dc s dng nuụi trng thy sn dựng vic cha bnh vi khun trờn ng vt thy sn .17 2.3.1 Cõy thuc cỏ (Derris spp) 17 2.3.2 Cõy xoan (Melia azedarach) 17 2.3.3 Cõy thn mỏt (Milletia ichthyochtona Drake ) 18 2.3.4 Cõy s (Cammellia sasanqua) .18 2.3.5 Cõy b hũn (Sapindus mukorossi Gaetrn) 18 2.3.6 Cõy thu du tớa (Ricinus communis L.) .18 2.3.7 Cõy ngh (Polygonum hydropipe L.) 18 2.3.8 Cõy rau sam (Portulacaoler acea L.) 18 2.3.9 Cõy tớa ( Ricinus communis L.) 19 2.3.10 Ti (Allium sativum L.) 19 2.3.11 Cõy cau (Areca catechu) 19 2.4 Vi nột v ch phm EM v Bokashi tru 19 2.4.1 Ch phm EM 19 2.4.2 Cõy tru .20 2.4.3 Bokashi tru 22 2.4 Mt s loi khỏng sinh thng dựng nuụi trng thy sn 22 2.4.1 Erythromycin 22 2.4.2 Tetracyline 22 2.4.3 Rifampin .23 2.4.4 Nhúm Sunfamid 23 2.4.5 Trimethroprim .23 2.4.6 Co-Trimoxazone ( Bactrim) 23 2.5 Nhng tn ti vic s dng khỏng sinh .23 Ket-noi.com kho ti liu phớ I TNG, THI GIAN, PHNG PHP NGHIấN CU .25 3.1 i tng, thi gian, a im nghiờn cu 25 3.1.1 i tng nghiờn cu 25 3.1.2 Thi gian nghiờn cu 25 3.1.3 a im nghiờn cu 25 3.2 Vt liu nghiờn cu .25 3.2.1 Dng c thớ nghim 25 3.2.2 Mụi trng , hoỏ cht 26 3.3 Ni dung nghiờn cu 26 3.4 Phng phỏp nghiờn cu 26 3.4.1 Phng phỏp thu mu 26 3.4.2 Phng phỏp nuụi cy , phõn lp vi khun 27 3.4.3 Nuụi cy 27 3.4.4 Phng phỏp xỏc nh mt vi khun 27 3.4.5 Phng phỏp nhum vi khun .28 3.4.6 Phng phỏp th nghim khỏng sinh .29 3.4.7 Thit k thớ nghim 29 3.5 Phng phỏp x lý s liu 32 3.5.1 Giỏ tr trung bỡnh 32 3.5.2 lch chun 32 3.5.3 Cụng thc tớnh mt vi khun 32 3.5.4 X lớ s liu 32 KT QU NGHIấN CU V THO LUN 33 4.1 Kt qu phõn lp, nh danh vi khun gõy bnh 33 4.1.1 Du hiu bnh lớ 33 4.1.2 Kt qu phõn lp, nh danh vi khun 33 4.2 Kt qu th nghim kh nng khỏng khun ca cỏc cụng thc Bokashi tru khỏc 37 4.2.1 Kt qu thớ nghim sng lc cỏc cụng thc Bokashi thớ nghim 37 4.2.2 Kt qu thớ nghim sng lc nng c ch .39 4.2.3 Kt qu th nghim nng c ch vi khun ca bokashi tru 40 4.2.4 Kt qu th nghim kh nng tiờu dit vi khun ca bokashi tru41 4.3 Kt qu so sỏnh nhy cỏc loi khỏng sinh v Bokashi tru trờn cỏc chng vi khun th nghim .42 KT LUN V KIN NGH 45 5.1 Kt lun 45 5.2 Kin ngh 46 TI LIU THAM KHO .47 Ket-noi.com kho ti liu phớ DANH MC CC BNG DANH MC CC HèNH Ket-noi.com kho ti liu phớ T VN Vi hn 1.9 triu din tớch mt nc Vit Nam cú tim nng ln phỏt trin nuụi trng thy sn Cựng vi ngh khai thỏc bin, nh nc ta rt chỳ trng phỏt trin nuụi trng thy sn Nhm cú mt c cu bn vng v ngun li nhm gúp phn m bo an ninh lng thc, xúa gim nghốo, to cụng n vic lm cho ngi lao ng, nuụi trng thy sn ó tr thnh mt ngnh sn xut ch yu c nc, chim v trớ hng u ca nn kinh t nc nh hai thp k qua [ ] Tuy nhiờn, nhng nm gn õy, ngh nuụi trng thy sn ang phi i mt vi nhng th thỏch ln ú l dch bnh v ụ nhim mụi trng Ngh nuụi tụm sỳ bt u phỏt trin t nhng nm u ca thp k 90, nhng s phỏt trin t, cha cú quy hoch c th nờn t nm 1995 1997, dch bnh trờn tụm ó bựng n v gõy thit hi, tn tht ln i vi nn thy sn Vit Nam Thit hi dch bnh gõy trờn tụm sỳ tng t 0,5 t USD nm 1995-1997 lờn n 1,5 t USD giai on 2001 2002 [25] Trong s nhng dch bnh thy sn thỡ bnh vi khun gõy lờn chim t l khỏ ln, gõy nhng v dch bnh quy mụ ln.Vi khun cng l mt tr ngi ln vic phỏt trin cụng nghip sn xut ging thy sn Bnh phõn trng xy trờn tụm sỳ phn ln l nhúm vi khun ng rut tụm gõy lờn, bnh ó gõy thit hi ln i vi ngi nuụi, gõy nhng v mt trng cho ng dõn.[10],[11], [12], [27], [28] Thụng thng, cỏc loi húa cht v khỏng sinh l nhng loi m ngi nuụi thng s dng hn ch dch bnh, nhiờn vic s dng húa cht, khỏng sinh khụng ỳng quy cỏch, khụng ỳng liu lng ó gõy lờn tỏc hi ln nh l to cỏc dũng vi khun khỏng thuc, lm suy thoỏi mụi trng , nh hng khụng tt ti sc khe ngi [21], [27],[28] [31] Hn na hin theo cỏc quy nh v an ton thc phm, nghiờm cm s tn d cỏc loi húa cht v khỏng sinh cú ng vt thy sn Nu chỳng ta khụng cú bin phỏp tt vt qua nhng ro cn ny thỡ s lm gim ỏng k v mt kinh t i vi xut khu thy sn, v thy sn vit nam khú ng vng trờn th trng th gii [8] Ket-noi.com kho ti liu phớ Nhng nm gn õy xu hng dựng tho dc cha tr bnh trờn ng vt thy sn ngy cng c ph bin biờn an ton cao [19], cỏc chit xut t tho dc c s dng rng rói bo qun v iu tr bnh nm v vi khun gõy trờn ng vt thy sn Ti Vit Nam, lỏ tru (Piper betel L) c s dng iu tr bnh vi khun trờn ngi [7] õy l mt loi tho dc cú ngun gc t t nhiờn, cú tỏc dng khỏng sinh mnh m, cht khỏng sinh lỏ tru dit c nhiu vi khun gõy bnh [2] Trong lỏ tru cú cht chavicol, chavibetel v mt s hp cht phenic khỏc Nm 1996, kt qu nghiờn cu t b mụn Ký sinh trựng, i hc Y Dc H Ni cho thy tru cú tỏc dng khỏng sinh mnh i vi vi trựng t cu, B subtilis, trc trựng E coli Trong nuụi trng thy sn, ng dõn nhiu ni ó bit dựng lỏ tru phũng tr bnh cho vt nuụi, nhng a s mi ch dng mc kinh nghim, lm theo ý thớch, cha cú phng phỏp khoa hc c th, cha tỡm liu lng ỳng Qua thc t tỡm hiu v tỏc hi ca bnh vi khun gõy lờn trờn ng vt thy sn, v tỏc dng ca lỏ tru, c s ng ý ca b mụn Ng y, Khoa Thy sn, trng i hc Nụng Lõm Hu, cựng s giỳp ca giỏo viờn hng dn, tụi tin hnh ti : Nghiờn cu tỏc dng ca Bokashi tru lờn s phỏt trin ca vi khun gõy bnh ng rut trờn tụm sỳ (Penaeus monodon) Mc tiờu ti : Phõn lp, xỏc nh loi vi khun gõy bnh ng rut trờn tụm sỳ Th nghim tỏc dng ca hot cht lỏ tru v bokashi tru lờn vic iu tr bnh vi khun gõy bnh ng rut trờn tụm sỳ Tp lm quen vi cụng tỏc nghiờn cu khoa hc Ket-noi.com kho ti liu phớ TNG QUAN TI LIU 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu dch bnh tụm trờn th gii v Vit Nam 2.1.1 Tỡnh hỡnh dch bnh 2.1.1.1 Trờn th gii Ngh nuụi tụm nhng nm gn õy, nuụi trng thy sn ó cú nhng bc tin vt bc v c din tớch ln nng sut nuụi trng ó t c, nhiờn hin chỳng ta dang phi i mt vi nhng thỏch thc t mụi trng, dch bnh lan trn, gõy thit hi ln cho ngi nuụi[27], [30], [31] Nm 1992, Trung Quc l mt nc cú sn lng tụm ln nht th gii 150.000 tn nhng n nm 1993 li b thit hi nng n dch bnh v ó lm sn lng gim 50% so vi nm 1992 Trờn th gii, nng sut tụm sỳ gim ch cũn 639.000 (gim 12% so vi nm 1992) Nm 1996, tng din tớch nuụi tụm trờn th gii l 1.372.800 tng 20,5% so vi nm 1995 nhng nng sut ch t 693000 tn gim 2,5% so vi nm 1995 dch bnh virus bựng phỏt trờn ton th gii [28], [30] Nm 1998, ch tớnh riờng Trung Quc tht thoỏt gn 1t USD dch bnh xy trờn tụm Thỏi Lan thit hi bnh c tớnh khong 40% tng nng sut (70.000 tn) tng ng 500 triu USD Nhng cuc iu tra cp nụng h 16 nc Chõu cho thy rng bnh v cỏc liờn quan n mụi trng gõy tht thoỏt cho sn lng nuụi thu sn trờn t USD/nm [28] Tỡnh hỡnh dch bnh ó tr thnh mt mi e i vi s phỏt trin ca ngh nuụi tụm ,trc nguy c ny cỏc nh khoa hc, nh sn xut ó u t tin bc thi gian nhm hn ch dch bnh v tỡm nhng loi thuc c hiu nhng phng phỏp nuụi mi, nuụi sinh thỏi ngnh nuụi tụm ngy cng phỏt trin mt cỏch bn vng hn [8], [30] 2.1.1.2 Ti Vit Nam Ti Vit Nam, ngh nuụi tụm cng ó phỏt trin khỏ lõu nhng thc s phỏt trin mnh nhng nm gn õy Do nhng li nhun mang li t tụm sỳ (P monodon) v u ói ca thiờn nhiờn nờn ngh nuụi tụm sỳ phỏt trin mnh m c nc c bit l trung v ng bng sụng Cu Long[27], [28] Ket-noi.com kho ti liu phớ Nm 1990, Vit Nam cú 187.000 mt nc nuụi tụm v sn lng t c l 31.000 tn n nm 1995, din tớch nuụi tng lờn 260.000 v sn lng t c l 52.000 tn Nhng mt trỏi ca s phỏt trin nhanh chúng v khụng cú quy hoch l dch bnh bựng phỏt nhiu ni Nm 1994, dch bnh bựng phỏt ti ng bng sụng Cu Long: Tr Vinh, Bn Tre, Súc Trng, Long An, Nha Trang gõy thit hi hng chc t ng cho b nuụi tụm [28] Bng Thit hi bnh tụm gõy cỏc tnh Nam nm 1996 a phng Din tớch b bnh (ha) Qung QCCT canh Bỏn Thõm thõm canh Sn Giỏ tr kinh lng t (t canh Phỳ Yờn 104 2,06 Khỏnh Ho 20 10 Vng Tu 150 246 640 340 500 25 66,2 25,6 23,5 0,358 2.035 110 179,2 20 3.000 800 23,006 750 1.875 2,063 20.000 1.200 205 4.000 700 15 5.219 284,08 Tp H Chớ 1.000 16 0,1 1,5 Minh Tin Giang Bn Tre 1.017 Tr Vinh Súc Trng Minh Hi 50.000 Kiờn Giang Tng 52.017 29.011 3.829,6 Ket-noi.com kho ti liu phớ Ni thit hi ln nht l tnh Bn Tre (20% tụm th b cht ), Tr Vinh l 15% theo bỏo cỏo nghiờn cu khoa hc nm 1997 ca Nguyn Vit Thng thỡ nhng thỏng u ca nm 1997 l thi im dch bnh bựng phỏt nghiờm trng cỏc tnh Min Trung c bit l vo thỏng tng s din tớch b dch bnh chim khong 80% tng din tớch nuụi trng gõy thit hi ln cho cỏc tnh Min Trung 2.1.1.3 Ti Tha Thiờn Hu Nm 2007, din tớch nuụi tụm ca Tha Thiờn Hu l 3.712,1 ha,do thi tit nm din bin phc tp, nng núng kộo di xen gia cú t giú kốm theo ma dn n nhit v mụi trng bin ng quỏ cao rt bt li cho nuụi tụm, t u v ó xy bnh tụm sm trờn tụm t ngoi t nhiờn ti cỏc h nuụi tụm sỳ cha c ci to vựng Qung An, Qung Phc huyn Qung in, qua kim tra thy tụm b nhim virus m trng Tip n l din tớch nuụi tụm sỳ b bnh cỏc xó thuc huyn Phỳ Lc, Phỳ Vang v sau ú lõy lan trờn din rngDin tớch tụm bnh: 1.052,98 chim t l 36,91% tng din tớch nuụi, tng 31,28% so vi nm 2006, ú hai huyn l Phỳ Lc v Phong in b thit hi nhiu nht [20] 10 Ket-noi.com kho ti liu phớ Theo Th Hũa (2004), s khỏc v s khuch tỏn mu sc trờn mụi trng TCBS ca hai chng vi khun ny khỏc v kh nng lờn men loi ng Saccarose Vi khun V.alginolyticus cú kh nng lờn men ng Saccarose v lm thay i mu sc ca mụi trng t mu xanh sang mu vng (Hỡnh 4.5) Trong ú, vi khun V harveyi khụng cú kh nng lờn men loi ng ny nờn khụng lm thay i mu sc ca mụi trng ( Hỡnh 4.4) Kt qu phõn lp khụng thy s cú mt ca cỏc loi vi khun khac, iu ny cho thy hai chng vi khun phõn lp c l tỏc nhõn chớnh gõy bnh ng rut trờn tụm sỳ Kt qu nghiờn cu ny phự hp vi kt qu nghiờn cu ca D Lightner (1996) phõn lp cỏc tỏc nhõn gõy bnh viờm rut trờn tụm sỳ nuụi Philippin, ụng cng bt gp cỏc loi Vibrio harveyi, Vibrio alginolyticus, V parahaemolyticus trờn cỏc mu bnh phm Hỡnh Khun lc ca vi khun Vibrio alginolyticus trờn mụi trng TCBS 36 Ket-noi.com kho ti liu phớ 4.2 Kt qu th nghim kh nng khỏng khun ca cỏc cụng thc Bokashi tru khỏc Thớ nghim th kh nng khỏng khun ca cỏc cụng thc sn xut Bokashi tru khỏc c tin hnh trờn c hai chng vi khun V harveyi, v V.alginolyticus c coi l nguyờn nhõn chớnh gõy bnh ng rut trờn tụm sỳ 4.2.1 Kt qu thớ nghim sng lc cỏc cụng thc Bokashi thớ nghim Kt qu theo dừi kh nng khỏng khun cụng thc sn xut Bokashi khỏc t cụng thc I, II, III, IV, V, lờn hai chng vi khun V harveyi v V alginolyticus sau ngy, ngy, ngy c th hin bng 4.2 v bng 4.3 Bng Kt qu sng lc kh nng khỏng khun ca cỏc cụng thc Bokashi tru lờn vi khun V harveyi Ch phm Bokashi tru ng kớnh vũng dit khun Cụng thc I II III IV V ngy 10,20 14,20 15 16 18 ngy 10,30 14,30 15 16,30 18.40 ngy 10,50 14,30 15 16,50 18.40 (mm) Bng Kt qu sng lc kh nng khỏng khun ca cỏc cụng thc Bokashi tru lờn vi khun V alginolyticus Cụng thc Ch phm Bokashi tru ng kớnh vũng dit I II III IV V ngy 10,20 14,20 15 16 18 ngy 10,30 14,30 15 16,30 18.40 ngy 10,50 14,30 15 16,50 18.40 khun Qua bng ta thy c cụng thc thớ nghim u cú kh nng khỏng khun khun Sau mt ngy, vũng khỏng khun c to thnh rừ rt Sang ngy th 37 Ket-noi.com kho ti liu phớ vũng khỏng khun th hin rt rừ rt, b mt thch vũng khỏng khun qua sỏt thy rt sch s, iu ú chng t vi khun khụng cú kh nng phỏt trin vựng m cú Bokashi tru Hay núi cỏch khỏc, di nh hng ca Bokashi tru, cỏc vi khun khụng th phỏt trin c Sau by ngy , chỳng ta quan sỏt thy, rng ca vũng khỏng khun thay i khụng ỏng l bao nhiờu v b mt ca vũng khỏng khun vi khụng thy s phỏt trin ca vi khun, iu ny chng t c hai chng vi khun ó b tiờu dit hon ton Trong c nm cụng thc sn xut ch phm Bokashi, thỡ cụng thc V cho kh nng khỏng khun cao nht (18,30mm) so vi cỏc cụng thc cũn li T cỏc kt qu trờn, cụng thc V (100ml r ng, 1000gram tru, 100ml dm, 300 ml EM1) l cụng thc cho kt qu khỏng khun tt nht, vi ng kớnh vũng khỏng khun trung bỡnh l 18,30 mm Hỡnh Kt qu to vũng khỏng khun cu cỏc cụng thc thớ nghim Trong ch phm Bokashi tru ngoi cỏc alkoloid cú kh nng khỏng khun nh cadien, chavibetel, cũn cú cỏc nhúm vi sinh vt nh: nhúm vi khun quang hp Rhodopseudomonas, nhúm vi khun Lactobacillus sp., Bacillus spp., nhúm x khun Strepptomyces spp., nm men: Saccharomyces cerevisiae v nhúm nm si 38 Ket-noi.com kho ti liu phớ nh Aspergillus sp v Penicillium sp cú ch phm EM gc nờn cú kh nng khỏng khun rt mnh (Hiruga, 1980 ; Nguyn Ngc Phc, 2007) Cỏc loi vi sinh ny s t sn sinh cỏc yu t dinh dng, t to khỏng cht giỳp vt nuụi tiờu dit vi khun c hi, kớch thớch vt nuụi phỏt trin tt (Phm Danh, 2006) Cỏc chng Strepptomyces spp., Aspergillus sp v Penicillium sp quỏ trỡnh phỏt trin s sn xut cỏc loi khỏng sinh cú kh nng tiờu dit cỏc loi vi khun Gram (-).S cú mt ca nhúm vi khun lờn men lactic nh Lactobacillus sp., Bacillus spp., s c ch s phỏt trin ca vi khun Vibrio spp Ngoi ra, quỏ trỡnh lờn men ca cỏc chng vi khun ny s to axit lactic l dung mụi thớch hp cho vic chit xut cỏc loi khỏng sinh t lỏ tru Chớnh vỡ vy s kt hp gia EM v lỏ tru ó lm tng hot tớnh khỏng khun gp 100 ln so vi dch chit lỏ tru (Nguyn Ngc Phc, 2007) 4.2.2 Kt qu thớ nghim sng lc nng c ch Sau cú kt qu ca thớ nghim sng lc cỏc cụng thc thớ nghim, chỳng tụi nhn thy cụng thc V cho qu tt nht, vi rng ca vũng khỏng khun trung bỡnh l 18,30mm Chỳng tụi quyt inh la chn ch phm Bokashi tru c sn xut t cụng thc V cho cỏc thớ nghim sng lc nng c ch vi khun Kt qu sng lc nng c ch vi khun ca dch chit lỏ tru v bokashi tru c trỡnh by qua bng 4.4 v 4.5 Bng 4 Kt qu sng lc nng c ch trờn vi khun V.harveyi Nng vi khun thớ nghim Nng (ppm) Bokashi tru 10000 1000 100 10 106 CFU/ml Ghi chỳ: (+) : Dng tớnh; S phỏt trin ca vi khun/ thi gian nuụi cy ngy ngy ngy + + + (-) : m tớnh Bng Kt qu sng lc nng c ch trờn vi khun V alginolyticus 39 Ket-noi.com kho ti liu phớ Nng (ppm) Bokashi tru 10000 1000 100 10 Nng vi khun thớ nghim 106 CFU/ml Ghi chỳ: (+) : Dng tớnh; S phỏt trin ca vi khun/ thi gian nuụi cy ngy ngy ngy + + + (-) : m tớnh Bokshi tru nng 10 ppm cú th tiờu dit c hai chng vi khun: V harveyi v V alginolyticus sau ngy nuụi cy Cỏc chng ny khụng mc tr li sau ngy nuụi cy T kt qu ny cho thy: Bokashi tru cú th c ch s phỏt trin ca vi khun nng rt thp 4.2.3 Kt qu th nghim nng c ch vi khun ca bokashi tru Kt qu th nghim nng c ch vi khun ca Bokashi tru trờn hai loi vi khun V harveyi v V alginolyticus c th hin bng sau: Bng Kh nng c ch ca bokashi tru lờn vi khun V harveyi Nng vi khun thớ nghim Nng (ppm) Bokashi tru 10 2.5 1.25 106 CFU/ml S phỏt trin ca vi khun/ thi gian nuụi cy ngy ngy ngy + + + + Bng Kh nng c ch ca bokashi tru lờn vi khun V alginolyticus Nng vi khun thớ nghim Nng (ppm) Bokashi tru 10 2.5 1.25 106 CFU/ml 40 S phỏt trin ca vi khun/ thi gian nuụi cy ngy ngy ngy + + + + + Ket-noi.com kho ti liu phớ Ch phm bokashi tru cú th c ch c hai chng vi khun ny nng rt thp (1,25ppm) sau ngy nuụi cy, nhiờn vo ngy th vi khun tip tc phỏt trin; nng 2,5ppm Bokashi tru cú th tiờu dit c vi khun v khụng thy cú hin tng phỏt trin tr li ca hai chng vi khun ny Qua ú thy c kh nng c ch ca Bokashi tru lờn hai loi vi khun nng rt thp 1,25ppm Tuy nhiờn, i vi vi khun V alginolyticus cú hin tng vi khun mc tr li sau ngy nuụi cy, cũn vi khun V harveyi thỡ sau ngy quan sỏt thy cú vi khun mc tr li 4.2.4 Kt qu th nghim kh nng tiờu dit vi khun ca bokashi tru Kh nng tiờu dit vi khun ca Bokashi tru c th hin bng 4.8 v 4.9 Bng Kh nng tiờu dit vi khun V harveyi ca Bokashi tru Nng vi khun thớ Nng (ppm) Bokashi tru 10 2.5 106 CFU/ml Thi gian ngõm 10 phỳt 30 phỳt 1gi + + + + + + + + 24 gi + Bng Kh nng tiờu dit vi khun V alginolyticus ca dch lỏ tru v Bokashi tru Nng vi khun thớ Nng (ppm) Bokashi tru 10 2.5 106 CFU/ml Thi gian ngõm 10 phỳt 30 phỳt 1gi + + + + + + + + 24 gi + Cú th thy nng Bokashi tru tng dn thỡ kh nng tiờu dit vi khun cng tng lờn Sau gi vi khun phỏt trin nng 2,5 ppm nhng sau 24 gi Bokashi tru c ch c c hai loi vi khun trờn nng 5ppm hoc cao hn, bokashi tru tiờu dit V harveyi v V alginolyticus ch sau gi Nh vy, Bokashi tru cú kh nng c ch v tiờu dit vi khun cỏc nng khỏc Kt qu c th hin bng 4.10 Bng 10 Cỏc nng c ch v tiờu dit vi khun ca Bokashi tru 41 Ket-noi.com kho ti liu phớ Chng vi khun V harveyi V alginolyticus Bokashi tru Nng c ch vi khun Nng tiờu dit vi khun ti ti thiu (MIC) thiu (MBC) 2,5 ppm ppm 2,5 ppm ppm Nhiu nghiờn cu ó xỏc nhn lỏ tru cú tỏc dng khỏng sinh mnh Theo Vừ Vn Chi (2000), cht khỏng sinh chit xut t lỏ tru dit c nhiu loi vi khun gõy bnh ngi, cỏc hot cht lỏ tru cú tỏc dng khỏng sinh rt mnh i vi cỏc loi vi trựng T cu, B subtilis v trc trựng E coli, lỏ tru gm ch yu l hai phenol: betel- phenol l ng phõn ca eugenol v chavicol kốm theo nhiu hp cht phenolic khỏc, chỳng cú tỏc dng khỏng sinh rt mnh i vi cỏc loi vi khun, nm, v kớ sinh trựng (Vừ Vn Chi, 2000; Th Hũa, 2004) Khi nghiờn cu v kh nng khỏng khun ca dch chit lỏ tru v Bokashi tru lờn hai loi vi khun Vibrio parahaemolyticus v Aeromonas hydrophyla, Nguyn Ngc Phc (2007) ó kt lun vi nng 2.5ppm Bokashi tru cú kh nng c ch hon ton hai loi vi khun ny S kt hp lỏ tru v ch phm EM5 cho kt qu khỏng khun mnh khụng nhng cỏc loi alkaloid cú lỏ tru m cũnndo s to thnh -carotenoid quỏ trỡnh lờn men r mt ca nm Sacharomyces cú thnh phn EM -carotenoid l cht tin sinh trng, ngoi tỏc dng kớch thớch sinh trng cho ng vt giỏp xỏc cũn cú tỏc dng cung cp cht dinh dng cho cỏc loi x khun, nm si, vi khun lờn men lactic hot ng, t ú nú lm tng hot tớnh khỏng khun ca Bokashi tru (Nguyn Ngc Phc, 2007) T nhng kt qu bc u cho thy, Bokashi tru cú tỏc dng tiờu dit vi khun Vibrio spp rt mnh Nh vy Bokashi tru cú nng c ch v tiờu dit hai loi vi khun V harveyi v V alginolyticus rt thp C th, nng c ch vi khun ti thiu ca Bokashi tru vi hai loi vi khun ( MIC) l 2,5ppm v nng tiờu dit vi khun ti thiu l 5ppm 4.3 Kt qu so sỏnh nhy cỏc loi khỏng sinh v Bokashi tru trờn cỏc chng vi khun th nghim Sau xỏc nh cỏc nng c ch v tiờu dit vi khun ca Bokashi truchỳng tụi tin hnh th nhy ch phm Bokashi tru trờn vi khun Vibrio 42 Ket-noi.com kho ti liu phớ harvey v Vibrio alginolyticus so sỏnh vi cỏc loi khỏng sinh thng dựng Kt qu th hin bng 4.11 v 4.12 Bng 11 Kt qu so sỏnh nhy ca cỏc loi khỏng sinh v Bokashi tru trờn vi khun V harveyi Khỏng sinh Tờn Tazocine (15 àg ) Bactrim (25 àg) Gentamicine (10 àg) Ofloxacine (5 àg) Ampiciline (10 àg) ng kớnh chun (mm) 14 - 20 11 - 15 Bokashi tru ng kớnh vũng dit khun (mm) Nng (ppm) ng kớnh ban u (mm) ng kớnh vũng dit khun (mm) 30 35 20 22 2.5 2-3 2-3 30-34 18-22 13 - 14 19 21 13 - 14 30 31 14 - 17 Bng 12 Kt qu so sỏnh nhy ca cỏc loi khỏng sinh, Bokashi tru trờn vi khun V alginolyticus Khỏng sinh Tờn Tazocine (15 àg ) Bactrim (25 àg) Gentamicine (10 àg) Ofloxacine (5 àg) Ampiciline (10 àg) Bokashi tru ng kớnh chun (mm) 14 - 20 11 - 15 ng kớnh vũng dit khun (mm) 20-25 20 22 13 - 14 13-19 13 - 14 20-23 14 - 17 Nng (ppm) 2.5 ng kớnh ban u (mm) 3 ng kớnh vũng dit khun (mm) 30-32 19-22 Cỏc loi khỏng sinh: Tazocine, Ofloxacine, Bactrim u cho vũng khỏng khun ln i vi vi khun V harveyi v V alginolyticus Ampiciline v Gentamycine khụng cú tỏc dng hoc tỏc dng yu lờn c hai chng vi khun nghiờn cu Bokashi tru cỏc nng th nghim 10ppm, 5ppm, 2,5ppm u cú kh nng dit khun i vi vi khun V harveyi v V alginolyticus ng kớnh vũng 43 Ket-noi.com kho ti liu phớ dit khun ca Bokashi tru nng 2,5ppm gp ln ng kớnh ban u Theo mt s tỏc gi (Fairbrother, R W v Rao, A., 1968) ng kớnh vũng vụ khun c xem l khỏng c vi khun phi bng ln kớch thc ca ng kớnh a giy khỏng sinh Bokashi tru cho vũng dit khun cao nht nng thp 2,5 ppm So sỏnh vũng dit khun ca bokashi tru vi vũng dit khun ca cỏc loi khỏng sinh thy kh nng khỏng khun ca bokashi tru mnh hn rt nhiu ln Nhng sau ngy theo dừi, ng kớnh vũng khỏng khun th nghim Bokashi tru khụng thy khun lc ca vi khun mc tr li tt c cỏc nng th nghim Cũn cỏc loi khỏng sinh thỡ hu ht vũng khỏng khun u cú khun lc vi khun mc tr li iu ny chng t dch chit lỏ tru v bokashi tru cú tỏc dng rt mnh i vi vi khun V harveyi v Vibrio alginolyticus T nhng kt qu trờn cho thy Bokashi tru cú th c xem nh cht khỏng khun, cú th s dng cỏc loi ch phm ny iu tr bnh vi khun V harveyi v Vibrio alginolyticus gõy trờn ng vt thu sn Qua ú ta thy i vi vi khun Vibrio cú th dựng cỏc loi khỏng sinh trờn, cỏc loi khỏng sinh ny u cho vũng khỏng khun ln i vi Vibrio spp., c bit l ciprofloxacine (ng kớnh 25 - 27 cm) Tuy nhiờn vic s dng khỏng sinh khụng phi lỳc no cng thnh cụng, mt mt l bnh cú nhiu nguyờn nhõn khỏc nhau, v vic s dng khỏng sinh gõy hin tung ln thuc, khỏng thuc bờn cnh ú vic s dng khỏng sinh d gõy hi cho sc kho ca ngi vic tn d khỏng sinh c th ng vt thu sn (Nguyn Xuõn Bỏch, 2004) Khi so sỏnh vi Bokashi tru thỡ thy c Bokashi tru cho ng kớnh vũng khỏng khun ln, mc dự ng kớnh chun nh hn rt nhiu so vi ng kớnh chun ca cỏc loi khỏng sinh ( - mm) Vic s dng Bokashi tru cú li ớch rt ln, khụng nhng tiờu dit cỏc mm gõy bnh Bokashi tru cũn giỳp ci thin mụi trng ao nuụi, lm sch mụi trng nuụi v khụng gõy hin tng khỏng thuc 44 Ket-noi.com kho ti liu phớ KT LUN V KIN NGH 5.1 Kt lun Kt qu phõn lp, nh danh cỏc mu bnh phm ng rut ca tụm sỳ, ó xỏc nh c hai loi vi khun V harveyi v V alginolyticus 45 Ket-noi.com kho ti liu phớ Ch phm Bokashi tru c sn xut t cụng thc V (1 r ng: 10 tru: dm: EM1) cho kt qu khỏng khun tt nht cỏc cụng thc sn xut Bokashi em thớ nghim Nng c ch ti thiu ca Bokashi tru i vi vi khun V harveyi v V alginolyticus l 2,5ppm Nng tiờu dit ti thiu ca Bokashi tru vi hai loi vi khun V harveyi v V alginolyticus l 5ppm Ch phm Bokashi tru cỏc nng 2,5 ppm, ppm, v 10ppm u cú tỏc dng dit vi khun Vibrio harveyi v Vibrio alginolyticus tt hn cỏc loi khỏng sinh Tazocine, Bactrim, Gentamicine, Ofloxacine v Ampiciline ng kớnh vũng khỏng khun ca Bokashi tru ln gp ln ng kớnh vũng khỏng khun ca cỏc loi khỏng sinh trờn 5.2 Kin ngh Thớ nghim mi ch tin hnh iu kin invitro, nờn ỏp dng rng rói sn xut, em th nghim nuụi trng, gim i nguy c bnh dch Cn nghiờn cu thờm tỏc dng ca Bokashi tru nờn cỏc i tng khỏc trờn ng vt thu sn ng dng rng rói Bokashi phũng v tr bnh 46 Ket-noi.com kho ti liu phớ TI LIU THAM KHO Vừ Vn Chi, 1997 T in cõy thuc Vit Nam Nh xut bn Y hc, H Ni Vừ Vn Chi, 2000 Cõy thuc tr bnh thụng dng, NXB Thanh Húa Tụn Tht Cht, 2006 Giỏo trỡnh K Thut nuụi giỏp xỏc, trng i Hc Nụng Lõm Hu Nguyn Vn Dõn, 1980 Thuc cha bnh ng rut t cõy c nc, NXB Y hc, H Ni Th Hũa, Bựi Quang T, Nguyn Hu Dng v Nguyn Th Mui, 2004 Bnh hc thy sn, NXB Nụng Nghip, H Ni H Ký v ctv, 1995 Phũng v tr bnh cho tụm cỏ, Bỏo cỏo tng kt cp Nh nc mó s KN - 04 - 12, H Ni Tt Li, 1968 Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, NXB Khoa hc v k thut, H Ni Chu Vit Luõn, 2003 Thy sn Vit nam phỏt trin v hi nhp, NXB Chớnh tr quc gia H Ni Phan Th Hoa Nam, 2001 Xỏc nh thnh phn húa hc ca tinh du cõy Tru khụng (Piper betle L.) Ngh An, Lun thc s húa hc 10 Nguyn Ngc Phc, 2002 Bi ging bnh hc thy sn, trng i hc Nụng Lõm Hu 11 Nguyn Ngc Phc, Phm Th Phng lan, Nguyn Quang Linh, Kishio Hatai ,2007 Nghiờn cu kh nng khỏng nm v vi khu n ca dch chit lỏ Tru (Piper betle L) 12 Nguyn Ngc Phc, Nguyn Anh Tun, Nguyn Quang Linh, Ngụ Th Hng Giang, Nguyn Nam QUang, 2007 S dng tho dc v ch phm t tho dc iu tr bnh vi khun cho ng vt thy sn K yu Khoa hc Cễng ngh, 2007 Liờn hip khoa hc K thut Vit Nam H ni Ket-noi.com kho ti liu phớ 13 Bựi Quang T, 2002 Bnh ca tụm nuụi v biờn phỏp phũng tr, NXB Nụng Nghip, H Ni 14 Bựi Quang T v V Th Tỏm, 1999 Nhng bnh thng gp ca tụm cỏ v bin phỏp phũng tr", NXB Nụng Nghip, TP H Chớ Minh 15 Nguyn Th Võn Thỏi, 2004 Xõy dng bi thuc y hc c truyn ng dng phũng v cha bnh cho tụm cỏ, Bnh vin Y hc c truyn TW, Tuyn Hi tho ton quc v nghiờn cu v ng dng khoa hc cụng ngh NTTS (22 - 23/12/2004 ti Vng Tu), NXB Nụng Nghip 16 Khuờ Lp Trung, 1985 K thut phũng tr bnh tụm, cỏ v nhuyn th, NXB Nụng Thụn trung Quc 17 Trung tõm phỏt trin Cụng ngh Vit Nht, 2004 Gii thiu cụng ngh vi sinh vt hu hiu EM (Effetive Microorganisms), H Ni 18 Trn Linh Thc, 2002 Phng phỏp phõn tớch vi sinh vt nc, thc phm v m phm, NXB Giỏo dc 19 Phm Thip, V Ngc Thuý, 2001 Thuc bit dc v cỏch s dng Nh xut bn Y hc 20 Kobori, K., and Tanabe, T., 1993 Atimicrobial activity of Hinokitiol for methicillin resistant staphylococus aureus (in Japanese) Med Examinat 1639 1642 21 Tỡnh hỡnh nuụi trng thu sn Tha Thiờn Hu nm 2007, Bỏo cỏo ca S thu sn Tha Thiờn Hu 22 Bựi Quang T, Th Ho, Lờ Xuõn Thnh v cng tỏc viờn, 2006 D tho danh mc cỏc cht thay th hoỏ cht, khỏng sinh v ch phm sinh hc cm s dng nuụi trng thu sn 23 Nguyn Th Võn Thỏi v cng tỏc viờn, 2006 Bn v tim nng phũng v cha bnh nhim khun bng khỏng sinh tho mc nuụi trng thu sn 48 Ket-noi.com kho ti liu phớ 24 Bựi Quang T, Lờ Xuõn Thnh v cng tỏc viờn, 2006 Kt qu nghiờn cu ch phm ( VTS1-C) ( VTS1 T) tỏch chit t tho dc phũng tr bnh cho tụm sỳ v cỏ tra 25 Mai Vn Ti, 2004 iu tra ỏnh giỏ hin trng cỏc loi thuc v hoỏ cht dựng nuụi trng thu sn nhm xut cỏc gii phỏp qun l 26 Tng kờt tỡnh hỡnh nuụi trng thu sn nm 2002 Bỏo cỏo ca B Thu Sn 27 Phan Xuõn Thanh va cng tỏc viờn, 2002 Tuyn ngh cỏ ng bng sụng cu long Cỏc website: 27 Website chuyờn v Nụng nghip v Thu sn: www.vietlinh.com.vn 28 Website ca B Thu Snwww.fishtenet.gov.vn 29 http:// www.en.wikipedia.org 30 http :// www.vnexpress.net www.24h.com.vn www.dantri.com.vn 31 Website ca Viờn nghiờn cu nuụi trng thu sn I: www.ria1.mofi.gov.vn 49 Ket-noi.com kho ti liu phớ 50