VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN VIỆN HOÁ HỌC CÁC HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ 2.2 (HĐ số ngày tháng năm 2014) Tên chuyên đề: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG BÌNH VÔI TỪ CỦ (CỦ CON VÀ CỦ MẸ) Thuộc đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách hoạt chất rotundin bình vôi trồng qui mô sản xuất thử, áp dụng tỉnh Thái Bình” Mã số: VAST.NĐP.07/14-15 Người thực hiện: TS Nguyễn Văn Dư Hà Nội, 2014 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VN VIỆN HOÁ HỌC CÁC HỢP CHẤT THIÊN NHIÊN BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ 2.2 (HĐ số ngày tháng năm 201 ) Tên chuyên đề: NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG NHÂN GIỐNG BÌNH VÔI TỪ CỦ (CỦ CON VÀ CỦ MẸ) Thuộc đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách hoạt chất rotundin bình vôi trồng qui mô sản xuất thử, áp dụng tỉnh Thái Bình” Mã số: VAST.NĐP.07/14-15 Người thực Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ trì (Ký, họ tên) (Ký, họ tên) (Ký, họ tên đóng dấu) TS Nguyễn Văn Dư MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU .3 1.1 Giới thiệu chung loài Bình vôi 1.1.1 Đặc điểm hình thái .3 1.1.2 Đặc điểm sinh học .3 1.1.3 Đặc điểm phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng công dụng 1.1.5 Giá trị kinh tế, khoa học, bảo tồn 1.2 Cơ sở việc nhân giống Củ cắt CHƯƠNG 2: MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP .9 1.3 Mục tiêu nghiên cứu .9 1.4 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.5 Nội dung nghiên cứu .9 1.6 Phương pháp nghiên cứu 2.4.1 Phương pháp kế thừa tài liệu .9 2.4.2 Phương pháp ngoại nghiệp 2.4.3 Phương pháp nội nghiệp: 12 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .13 1.7 Kết nghiên cứu giâm củ cắt loài Bình vôi 13 3.1.1 Ảnh hưởng BAP nồng độ thể khác đến số tiêu giâm củ cắt củ loài Bình vôi 13 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KHUYẾN NGHỊ 34 1.8 Kết luận 34 1.9 Khuyến nghị 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Nằm vùng giàu tài nguyên dược liệu giới, Việt Nam đánh giá nước có tài nguyên thuốc phong phú Theo Trung tâm Tài nguyên Môi trường - Đại học Quốc gia Hà Nội (2000) thống kê nước ta có 3.800 loài thực vật có giá trị dược liệu Việc sử dụng thảo dược làm thuốc chữa bệnh có từ xa xưa, song chủ yếu dựa theo kinh nghiệm dân gian Trong năm gần đây, nhu cầu nguyên liệu cho sản xuất dược phẩm tăng mạnh, việc khai thác nguồn tài nguyên thuốc cách bừa bãi làm cho loài có giá trị dược liệu bị suy giảm nghiêm trọng, số loài đứng trước nguy bị tuyệt chủng, phải đưa vào danh mục thực vật rừng nguy cấp, quý, hiếm, nghiêm cấm khai thác sử dụng mục đích thương mại ( Nghị định số 32/2006/NĐ-CP ngày 30 tháng năm 2006 Chính phủ ) Trước thực trạng đó, Thủ tướng Chính phủ ban hành Quyết định số 81/2009/QĐTTg việc phê duyệt Quy hoạch phát triển ngành công nghiệp hóa dược đến năm 2015, tầm nhìn đến năm 2025 Trong đó, ưu tiên đầu tư sản xuất nguyên liệu hóa dược để phục vụ sản xuất thuốc thiết yếu, thuốc mạnh xuất khẩu, thuốc từ dược liệu để thay thuốc nhập Ưu tiên việc tạo dựng nguồn nguyên liệu ổn định số lượng chất lượng để cung cấp cho nhà máy chiết xuất Theo quy hoạch, có 22 vùng nguyên liệu sản xuất thuốc củng cố, mở rộng nhằm phát triển giống thuốc quý Việt Nam giới Chi Bình vôi (Stephania) gồm nhiều loài thuốc quý có tác dụng an thần, chữa ho, sốt, lỵ, dày, chữa ngủ, chúng sử dụng để chữa bệnh ung thư bệnh kỷ Hiện tài liệu mô tả đặc điểm sinh vật học, sinh thái học loài Bình vôi hạn chế Trong loài Bình vôi (Stephania rotunda Lour.) bị suy giảm nghiêm trọng tự nhiên Do việc hiểu biết số đặc điểm sinh vật học loài có ý nghĩa lớn nhằm góp phần bảo tồn nguồn gen phát triển loài thuốc quý Bên cạnh đó, hiểu biết tầm quan trọng, lợi ích công tác nhân giống, đặc biệt nhân giống sinh dưỡng loài không giúp cho công tác bảo tồn mà tạo nguồn nguyên liệu đảm bảo số lượng chất lượng cho việc sản xuất hóa dược với quy mô lớn Chính lý đây, đề tài tiến hành thực nội dung nghiên cứu “Nhân giống bình vôi từ củ” nhằm cung cấp thêm thông tin loài nói riêng công tác bảo tồn phát triển thuốc nước ta CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Giới thiệu chung loài Bình vôi Như đề cập, Bình vôi (Stephania rotunda Lour.) thuộc chi Bình vôi (Stephania) Ở Việt Nam biết gần 15 loài, có khoảng 10 loài có rễ phình thành củ, nhìn hình thái bên chúng tương đối giống nhau, có tên chung gọi “Bình vôi”, gồm loài S brachyandra Diels; S cambodia Gagnep; S cepharantha Hayta; S dielsiana Y.C.Wu; S kwangsiensis H S Lo; S pierrei Dield; S rotunda Lour; S venosa (Blume) Spreng v.v… tất dùng làm thuốc 1.1.1 Đặc điểm hình thái Bình vôi dây leo, sống hàng năm Thân non nhẵn, già có nhiều bì khổng, hóa gỗ có xoắn vặn Rễ củ to, vỏ xù xì, màu nâu xám Lá mọc so le, có cuống dài, đính khoảng 1/3 vào phiến lá; phiến mỏng, gân hình tròn tam giác, gốc bằng, đầu tù, mép lượn sóng, hai mép nhẵn, gân xuất phát từ chỗ đính cuống lá, tỏa hình chân vịt rõ mặt Cụm hoa mọc kẽ cành già rụng thành sim tán Hoa đực hoa khác gốc, hoa đực có 5-6 đài, 3-4 cánh hoa màu vàng cam, 36 nhị, thường 4; hoa có đài, cánh hoa; bầu hình trứng Quả hạch, hình cầu, dẹt, màu đỏ chín; hạt cứng, hình móng ngựa với hàng vân ngang dạng gai, hai mặt bên lõm, lỗ thủng 1.1.2 Đặc điểm sinh học Bình vôi loại ưa sáng chịu bóng chịu bóng Cây thường mọc kẽ đá, leo trùm lên loại khác phủ lên đá, loại hình rừng ẩm núi đá vôi Độ cao phân bố loài S sinia Diels thường từ vài chục đến vài trăm mét chưa phát thấy khoảng 100m so với mặt biển Bình vôi có tượng rụng vào mùa đông, mọc lại vào mùa xuân hoa xuất sau non Mùa hoa vào tháng 4-8, cá biệt thấy chín vào tháng 10 Cây tái sinh tự nhiên chủ yếu từ hạt từ phần khác lại sau cắt Ngoài ra, từ củ Bình vôi đem vùi 1/3 xuống đất cần đặt phần gốc tiếp xúc với đất ẩm mọc thành Nhìn chung, loài Bình vôi ưa ẩm Lúc nhỏ, mọc tán rừng Sau 2, năm, leo lên giá thể, ưa sáng Những loài sống núi đá vôi trảng cát ven biển có mọc thường có hệ rễ phát triển, len lõi khe đá đâu sâu xuống cát để hút nước chất dinh dưỡng Có thể rễ củ to, chứa nhiều nước nên loái sống núi đá vôi có khả chống chịu cao với điện kiện thời tiết khắc nghiệt khô hạn nắng nóng mùa hè Đặc điệm tượng học Bình vôi thể rõ nét qua đặc điểm sinh trưởng phát triển chồi Nhìn chung, loài Bình vôi có Việt Nam có hai vụ chồi năm Vụ chồi Đông Xuân, bao gồm chồi sớm xuất thân đầu củ từ tháng 11 – 12 Những chồi trạng thái chồi ngủ mùa Xuân tháng 1-2 bắt đầu thời kỳ sinh trưởng mạnh Chỉ vòng 1-2 tháng, chồi dài tới 1m Chồi Đông Xuân lứa chồi quan trọng Bình vôi, Xuân Hè (chồ cấp II) Số chồi cấp II nhiều gấp bội so với chồi Đông Xuân tính đơn vị chiều dài chồi Lá trưởng thành gnay mùa Hè rụng hết vào mùa khô hanh (tháng 10) Sự rụng hàng năm tập tính quan trọng Bình vôi Sự tái sinh chồi mạnh mẽ Bình vôi thể khả mọc mầm mảnh bổ tf củ đem vùi xuống đất Những mảnh đầu củ (khoảng 1/3 củ trở lên) mọc mầm tốt mảnh khác Có thể áp dụng khả để nhân giống Bình vôi 1.1.3 Đặc điểm phân bố Thế giới: Trung Quốc, Lào Việt Nam: Trong loài Bình vôi kể trên, có số loài S sinica Diels, S kwangsiensis H S Lo, S rotunda Lour thường mọc lẫn với rừng núi đá vôi tỉnh Ninh Bình, Hà Nam, Thanh Hóa, Quảng Bình, Hải Phòng(Cát Bà), Lạng Sơn, Cao Bằng, Hà Tây (cũ) 1.1.4 Bộ phận dùng công dụng Bộ phận dùng: Củ thái lát phơi hay sấy khô, dùng làm thuốc theo y học cổ truyền Để chiết xuất hoạt tính làm thuốc dùng củ tươi Thành phần hóa học: Trong củ loài Bình vôi nói chung thường có số nhóm hoạt chất, thành phần chủ yếu alkaloid như: Ltetrahydropamatin, stepharin, cycleanin, tuduranin, palmatin, dihydropalmatin, dicentrin… Công dụng: Trong y học cổ truyền dùng củ Bình vôi thái lát phơi khô sắc uống có tác dụng an thần, chữa ho, sốt, lỵ, dày… Liều dùng 3-6 g/ngày Tuy nhiên, cách dùng áp dụng, dễ bị ngộ độc (gây nôn) có alkaloid Bình vôi nguyên liệu chiết alcalid làm thuốc an thần, chữa ngủ Thuốc làm dạng viên có tên Rotunda, viên chứa 0,05g L-tetrahydropalmatin clohydrat Liều dùng viên 1-2 viên trước ngủ 1.1.5 Giá trị kinh tế, khoa học, bảo tồn Bình vôi thuốc quý Do nguồn nguyên liệu tương đối dồi nên giá thu mua rẻ Tại nơi khai thác, giá mua khoảng 4.000 – 4.500 đ/kg tươi Bởi giá thành thuốc rẻ (3.000- 3.500 đồng vỉ 10 viên) Tuy nhiên, phát động khai thác ạt (từ năm 1992 đến nay) nhằm cung cấp cho thị trường nước xuất nên nguồn Bình vôi tỉnh miền núi phía Bắc mau cạn kiệt Bên cạnh đó, Việt Nam có số loài Bình vôi coi quý hiếm, như: Stephania brachyandra Diels có hàm lượng L-tetrahydropalmatin cao số loài biết (khoảng 2,3-3,5%), phân bố số vùng núi cao 1.000m Hoặc loài Stephania cepharantha Hayta chứa hợp chất Cepharantin, có tác dụng làm thuốc chữa ung thư, phát điểm Quảng Ninh Hòa Bình … Những loài đưa vào danh mục Sách đỏ Danh lục đỏ thuốc Việt Nam để bảo vệ, mức đe dọa tuyệt chủng cao Để khai thác lâu dài nguồn Bình vôi Việt Nam, trước mắt nên khai thác hạn chế, với khối lượng vừa đủ cho nhu cầu sử dụng nước (ước tính 50100 tấn/năm) Bên cạnh đó, cần hoàn tất việc nghiên cứu, phát triển số loài có hàm lượng cao Stephania brachyandra Diels Stephania kwangsienssis H S Lo tỉnh phía Bắc 1.2 Cơ sở việc nhân giống Củ cắt Thực vật có hai hình thức sinh sản chủ yếu, sinh sản hữu tính sinh sản vô tính Sinh sản hữu tính hình thức sinh sản có sở dựa phân bào giảm nhiễm Hợp tử hình thành kết hợp hai giao tử đực giao tử hai thể bố mẹ Do sinh sản hữu tính có phân ly tái tổ hợp gen, nên thể thường không giữ đặc tính di truyền thể bố mẹ cách nguyên vẹn Sinh sản sinh dưỡng hình thức sinh sản có sở dựa vào phân bào nguyên nhiễm Tế bào mẹ sinh tế bào có nhiễm sắc thể giống hệt Do mà thực vật sinh sản sinh dưỡng trì đặc điểm di truyền thể mẹ ổn định qua nhiều hệ Nhân giống sinh dưỡng (vegatative propagation) kĩ thuật tạo từ phận sinh dưỡng lá, cành, củ, thân, mô phân sinh tiếp hợp phận dinh dưỡng (ghép) để tạo thành Theo nghĩa rộng nhân giống sinh dưỡng bao gồm nhân giống củ (mảnh cắt củ), chiết cành, ghép nuôi cấy mô – tế bào + Phương pháp chiết việc tạo rễ cho đoạn cành (thân) mẹ tách cành (thân) khỏi thân mẹ để nhân giống Phương pháp có ưu điểm chiết sớm Tuy nhiên, hệ số nhân giống thấp, chiết nhanh bị cỗi + Phương pháp ghép dùng phân sinh dưỡng mẹ định thân giống ghép lên khác (gốc ghép) để tạo nên hoàn chỉnh Phương pháp cho hệ số nhân giống cao, ghép sinh trưởng tốt, tuổi thọ cao Nhưng phương pháp yêu cầu ghép phức tạp, phương pháp đòi hỏi người có kinh nghiệm để lựa chon cành mắt chiết đạt yêu cầu để đảm bảo chất lượng tốt + Phương pháp nhân giống nuôi cấy mô – tế bào phương pháp tạo từ phân nhỏ (các quan, mô, tế bào) cách nuôi chúng bình nuôi điều kiện vô trùng có môi trường thích hợp kiểm sóat nghiêm ngặt Đây phương pháp nhân giống vô tính mang lại hiệu cao nhất, chất lượng tốt, đồng Tuy nhiên, việc nuôi cấy mô thực với quy trình thật nghiêm túc tỉ mỉ, điều kiện trang thiết bị đầy đủ mô phát triển môi trường hoàn toàn vô trùng, việc nhân giống thực với quy mô nhỏ phục vụ cho nghiên cứu + Phương pháp nhân giống hom củ (mảnh cắt củ) phương pháp dùng phần lá, đoạn thân, đoạn cành đoạn rễ để tạo gọi Củ phương pháp nhân giống giữ nguyên tính trạng mẹ (do có kiểu gen hoàn toàn giống mẹ ban đầu), đơn giản có hệ số nhân lớn, tương đối rẻ tiền nên ngày sử dụng rộng rãi nhân giống rừng, ăn quả, cảnh… Loại thể Kết giâm củ cắt Thể Thể Nồng độ Đối chứng 10ppm 20ppm 30ppm Số Củ TN 45 45 45 45 Số Củ chồi 26 30 34 34 Tỷ lệ (%) 57,8 66,7 75,6 75,6 Số Củ chồi 22 30 31 30 Tỷ lệ (%) 48,8 66,7 68,9 66,7 22 Biểu đồ 04: Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến tỷ lệ Củ chồi Ảnh 01: Ảnh hưởng nồng độ Kinetin đến giâm củ cắt Bình vôi Qua bảng 3.6 biểu đồ 04 thấy xử lý Bình vôi Kinetin thể nồng độ khác cho tỷ lệ Củ chồi có khác biệt rõ rệt Trong công thức xử lý cho tỷ lệ Củ chồi cao Kinetin nồng độ 20ppm 30ppm thể với 34 Củ chồi đạt 75,6% Còn công thức đối chứng cho tỷ lệ Củ chồi thấp có 26 22 Củ chồi tương ứng với 57,8% 48,9% thể Kiểm tra ảnh hưởng thể nồng độ Kinetin đến tỷ lệ Củ chồi sử dụng phương pháp phân tích phương sai nhân tố cho kết sau: Với ảnh hưởng thể ta có F A = 6,990 < F 05(k1=1, k2=3) =10,13 Như ảnh hưởng công thức thể không rõ ràng Trong đó, với công thức ảnh hưởng nồng độ Kinetin, có F B = 39,435 > F 05 (k1=3, k2=3) =10,13 Do ảnh hưởng nồng độ Kinetin khác khác rõ 23 ràng Điều có nghĩa rằng, nồng độ Kinetin có ảnh hưởng đến khả chồi loài Bình vôi Dựa vào tiêu chuẩn Duncan bảng cuối ta thấy Kinetin nồng độ 20ppm có giá trị cao 72,25% công thức cho kết tốt 3.1.2.2 Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến số chồi Củ Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến số lượng chồi Bình vôi tổng hợp bảng 3.7 biểu đồ 05 sau: Bảng 3.7 Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến số chồi Củ Nồng độ Số chồi trung bình/Củ củ cắt Đối chứng 10ppm 20ppm 30ppm Thể 2,12 3,93 3,35 5,94 Thể 2,46 6,90 6,16 5,77 24 Biểu đồ 05: Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến số chồi Củ Qua bảng 3.7 biểu đồ 05 ta thấy số lượng chồi trung bình Củ dao động từ 2,12 – 6,90 chồi/Củ củ cắt Công thức có số chồi trung bình Củ tốt Công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 10ppm, thể (cho số chồi trung bình Củ cao có 6,9 chồi /Củ), tiếp công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 20ppm thể có 6,16 chồi/Củ củ cắt Trong công thức đối chứng cho tỷ lệ chồi Củ thấp 2,12 chồi/Củ củ cắt thể 2,46 chồi/Củ củ cắt thể Kiểm tra ảnh hưởng thể nồng độ Kinetin đến số lượng chồi Củ mô hình phân tích phương sai nhân tố Kết cho sau: - Với công thức thể ta có F A = 1,11 < F05 (k1=1, k2=3) =10,13 Điều khẳng định ảnh hưởng thể đến số lượng chồi/Củ củ cắt không rõ ràng Cho nên chọn hai loại thể để tiến hành giâm củ cắt Bình vôi - Với công thức nồng độ Kinetin ta có, F B = 4,62 < F 05 (k1=1, k2=3) = 9,28 Như vậy, trường hợp này, nồng độ Kinetin chưa cho thấy ảnh hưởng rõ rệt đến số chồi/Củ củ cắt Khi sử dụng tiêu chuẩn U phân bố chuẩn tiêu chuẩn để kiểm tra ảnh hưởng Kinetin công thức nồng độ 10ppm 20ppm cho kết /U/ = 1,05 < 1,96, nên ảnh hưởng Kinetin hai loại nồng độ 10ppm 20ppm đến số chồi Củ Với công thức nồng độ Kinetin 20ppm 30ppm vậy: /U/ = 0,58 < 1,96 Và với công thức Kinetin 10ppm 30ppm cho /U/ = 1,88 < 1,96 Vậy ảnh hưởng Kinetin nồng độ khác đến số chồi Củ không rõ Tóm lại qua phân tích kết giâm củ cắt ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến số chồi Củ Bình vôi chưa rõ 25 ràng Nói cách khác, loại thể loại nồng độ Kinetin khác có ảnh hưởng không hoàn toàn khác tới số lượng chồi Bình vôi 3.1.2.3 Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến chiều dài chồi Củ Kết nghiên cứu ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến chiều dài trung bình chồi Củ Bình vôi tổng hợp bảng 3.8 biểu đồ 06 sau: Bảng 3.8 Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến chiều dài chồi Nồng độ Số chồi trung bình/Củ củ cắt Đối chứng 10ppm 20ppm 30ppm Thể 2,55 4,89 5,13 5,30 Thể 1,56 5,35 5,60 5,72 Biểu đồ 06: Ảnh hưởng Kinetin nồng độ thể khác đến chiều dài chồi 26 Qua bảng 3.8 biểu đồ 06 ta thấy chiều dài chồi trung bình Củ dao động từ 1,56 – 5,72cm chồi/Củ củ cắt Công thức có chiều dài chồi trung bình Củ tốt công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 30ppm, thể cho chiều dài chồi trung bình Củ cao có 5,72cm chồi /Củ, tiếp công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 20ppm thể có 5,60cm chồi/Củ củ cắt Công thức đối chứng thể thể cho chiều dài chồi/Củ củ cắt thấp có 2,55cm 1,56cm chồi/Củ củ cắt Tuy nhiên, kiểm tra ảnh hưởng thể nồng độ Kinetin đến chiều dài chồi Củ mô hình phân tích phương sai nhân tố lại cho kết sau: Với công thức thể khác cho giá trị F A = 0,62 < F 05 (k1=1, k2=3) =10,13; có nghĩa thể chưa có ảnh hưởng rõ rệt đến chiều dài chồi trung bình Trong đó, với công thức ảnh hưởng nồng độ Kinetin khác cho giá trị F B = 20,892 > F 05(k1=1, k2=3) = 9,28 Điều này, chứng tỏ nồng độ Kinetin khác có ảnh hưởng khác đến chiều dài chồi Củ giâm Tiếp tục sử dụng tiêu chuẩn U phân bố chuẩn tiêu chuẩn để kiểm tra cặp nồng độ, thu kết giá trị /U/ nhỏ 1,96 Cụ thể là: Với công thức Kinetin 10ppm Kinetin 20ppm, /U/ = 0,48; với công thức Kinetin 20ppm Kinetin 30ppm, /U/ = 0,28 với công thức Kinetin 10ppm Kinetin 20ppm, /U/ = 0,48 Như vậy, ảnh hưởng Kinetin ba loại nồng độ 10ppm, 20ppm 30ppm đến chiều dài chồi Củ Tuy nhiên, so với đối chứng nồng độ cho kết tốt 3.1.3 So sánh ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP vÀ Kinetin đến kết giâm củ cắt loài Bình vôi Như phân tích, ảnh hưởng thể đến tiêu giâm củ cắt nghiên cứu không rõ ràng, phần nghiên cứu ảnh hưởng hai chất BAP Kinetin thể 27 3.1.3.1 Ảnh hưởng BAP Kinetin đến tỷ lệ Củ chồi Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin nồng độ đến tỷ lệ Củ chồi Bình vôi tổng hợp bảng 3.9 biểu đồ 07 sau: Bảng 3.9 So sánh ảnh hưởng BAP Kinetin đến tỷ lệ chồi Chất điều hòa Tỷ lệ chồi (%) sinh trưởng 10ppm 20ppm 30ppm BAP 75,6 71,1 40,0 Kinetin 66,7 68,9 66,7 Biểu đồ 07: Tỷ lệ Củ chồi với BAP Kinetin nồng độ khác 28 Ảnh 02: Ảnh hưởng BAP Kinetin nồng độ 10ppm thể Bảng 3.9 biểu đồ 07 cho thấy, xử lý Bình vôi BAP Kinetin nồng độ khác nhau, tỷ lệ Củ chồi có khác biệt rõ rệt Trong công thức xử lý cho tỷ lệ Củ chồi cao BAP nồng độ 10ppm 20ppm với tỷ lệ Củ chồi tương ứng đạt 75,6% 71,1% Còn công thức cho tỷ lệ Củ chồi thấp BAP 30ppm với 40,0% Sử dụng mô hình phân tích hai nhân tố để kiểm tra ảnh hưởng Kinetin BAP với nồng độ khác đến tỷ lệ Củ chồi Kết là: Ta thấy: hai giá trị F A FB nhỏ F05 Cụ thể F A = 0,227 < F 05 (k1=1, k2=2) =18,51 F B = 1,109 < F 05 (k1=2, k2=2) =19,00 ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin nồng độ khác không thật rõ ràng Dựa vào tiêu chuẩn Duncan bảng cuối ta thấy BAP Kinetin nồng độ 10ppm có giá trị cao 71,15% công thức cho kết tốt 3.1.3.2 Ảnh hưởng BAP Kinetin đến số chồi trung bình Củ Bảng 3.10 So sánh ảnh hưởng BAP Kinetin đến số chồi trung bình/Củ củ cắt Chất điều Số chồi trung bình/Củ củ cắt (cái) hòa sinh 29 10ppm 20ppm 30ppm BAP 2,79 2,5 2,17 Kinetin 6,90 6,16 5,77 Biểu đồ 08: Ảnh hưởng BAP Kinetin nồng độ khác đến số chồi trung bình Củ Qua bảng 3.10 biểu đồ 08 ta thấy, số lượng chồi trung bình Củ dao động từ 2,17 – 6,9 Hai công thức có số chồi trung bình Củ cao công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 10ppm (số chồi trung bình đạt 6,9 chồi/Củ củ cắt), tiếp công thức thí nghiệm Kinetin nồng độ 20ppm với có 6,16 chồi/Củ củ cắt Trong công thức xử lý BAP cho số lượng chồi/Củ củ cắt nhỏ hơn, nhỏ nồng độ 30ppm với số chồi/Củ củ cắt 2,17 Kiểm tra ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin nồng độ khác đến số lượng chồi Củ mô hình phân tích phương sai nhân tố cho thấy: 30 - Với ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng ta có F A = 554,6 > F 05 (k1=1, k2=2) =18,51 Như vậy, ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin khác số lượng chồi/Củ củ cắt - Với ảnh hưởng nồng độ ta có F B = 1,43 < F 05 (k1=2, k2=2) =19,0 Như ảnh hưởng nồng độ BAP Kinetin khác không rõ rệt số lượng chồi Củ Tóm lại qua phân tích kết giâm củ cắt ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin đến số chồi trung bình Củ Bình vôi cho thấy, hai loại thuốc BAP Kinetin có ảnh hưởng khác đến số chồi trung bình Củ Còn nồng độ khác lại không ảnh hưởng rõ rệt Nhìn chung, Kinetin có ảnh hưởng tốt đến số lượng chồi/Củ củ cắt so với BAP Qua phân tích trên, xác định công thức thí nghiệm tốt cho số lượng chồi Củ sử dụng chất điều hòa sinh trưởng Kinetin nồng độ 10ppm 3.1.3.3 Ảnh hưởng BAP Kinetin đến chiều dài chồi trung bình Củ Kết nghiên cứu ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin nồng độ đến chiều dài chồi Củ Bình vôi tổng hợp bảng 3.11 biểu đồ 09 Bảng 3.11 So sánh ảnh hưởng BAP Kinetin đến chiều dài chồi trung bình Củ Chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin Chiều dài chồi TB/Củ (cm) 10ppm 20ppm 30ppm 2,36 2,5 2,22 5,35 5,60 5,72 31 Biểu đồ 09: Ảnh hưởng BAP Kinetin nồng độ khác đến chiều dài chồi trung bình Củ Qua bảng 3.11 biểu đồ 09 ta thấy chiều dài chồi trung bình Củ dao động từ 2,22 – 5,72cm Hai công thức có chiều chồi trung bình Củ tốt Kinetin nồng độ 30ppm 200ppm cho chiều chồi trung bình Củ cao 5,72 cm 5,60 cm Kiểm tra ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin nồng độ khác đến chiều dài chồi Củ, kết sau: - Với ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng ta có F A = 425,6 > F 05 (k1=1, k2=2) =18,51 Rõ ràng chất điều hòa sinh trưởng khác cho chiều dài chồi trung bình/Củ củ cắt khác Trong chất điều hòa sinh trưởng Kinetin cho kết tốt chất BAP Dựa vào tiêu chuẩn Duncan bảng cuối ta thấy nồng độ 20ppm có giá trị cao 4,05 công thức cho kết tốt - Với ảnh hưởng nồng độ, ta có F B = 0.534 < F 05 (k1=3, k2=3) =19,0 Như ảnh hưởng nồng độ BAP Kinetin khác không rõ ràng 32 Tóm lại qua phân tích ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng BAP Kinetin tới số tiêu giâm củ cắt củ loài Bình vôi Kết giâm củ cắt sử dụng loại thuốc BAP Kinetin khẳng định hai chất có ảnh hưởng khác đến số chồi trung bình Củ chiều dài chồi Củ không ảnh hưởng rõ rệt tỷ lệ Củ chồi Công thức thí nghiệm tốt cho phát triển chiều dài chồi Củ cao Kinetin 30ppm làm công thức thí nghiệm tốt 33 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN - TỒN TẠI - KHUYẾN NGHỊ 1.8 Kết luận Từ kết cho ta thấy ảnh hưởng loại chất kích thích ảnh hưởng thể đến kết giâm củ cắt Bình vôi, đến tỷ lệ chồi chiều dài chồi giâm củ cắt - Kết nghiên cứu khẳng định, công thức sử dụng chất kích thích Kinetin cho tỷ lệ chồi chiều dài chồi tốt chất kích thích BAP - Thể sử dụng công thức 100% cát cho kết tốt thể sử dụng công thức 70% cát + 30% đất tầng B xử lý Trong chất kích thích Kinetin ta chọn nồng độ 10ppm công thức tốt 1.9 Khuyến nghị Từ kết luận tồn xin đưa số khuyến nghị sau: - Đối với nội dung giâm củ cắt cần tiếp tục theo dõi rễ đem Củ trồng - Thử nghiệm giâm củ cắt với nhiều loại thuốc khác nhau, với nồng độ khác nhau, để tìm loại thuốc nồng độ thích hợp cho kết giâm củ cắt - Thử nghiệm kết nghiên cứu vào thực tiễn - Tiến hành điều tra đặc điểm sinh vật học Bình vôi nhiều tỉnh khác để tổng hợp nhận xét đưa kết tốt 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Đỗ Thị Đào (2008 ), “Ảnh hưởng số nhân tố tới kết giâm củ cắt Tai chua ” Khoá luận tốt nghiệp 2008, GVHD Kiều Văn Thịnh Phan Nguyên Hồng, Vũ Văn Dũng (1978); Sinh thái thực vật, NXB Giáo dục, Hà Nội Dương Mộng Hùng “ Nhân giống Phi lao Củ cành” ĐH Lâm Nghiệp số 11/1992 Lê Đình Khả, 1993, “ Nhân giống Keo tràm Keo tai tượng” Tạp chí lâm nghiệp số 5/1993 Lê Đình Khả, Dương Mộng Hùng, giáo trình giống rừng, 2003 Lê Đình Khả, Đoàn Thị Bích, Trần Cự, “ Nghiên cứu tạo chồi, môi trường giá thể giâm củ cắt Bạch đàn trắng”, tạp chí Lâm nghiệp dố 10/1996 Lê Đình Khả, Trần Cự, Lê Thị Xuân (1996 ), “ Nhân giống Thông đỏ bắng Củ”, tạp chí Lâm nghiệp số 9/1996 Lê Đình Khả, Nguyễn Đình Hải, Cấn Thị Lan (1998) “ Nhân giống Sao đen thuốc bột TTG”, tạp chí khoa học lâm nghiệp số 8/1998 Ngô Kim Khôi (1998), Thống kê toán học Lâm nghiệp, NXB Nông Nghiệp Hà Nội 10 Hoàng Kin Ngũ – Phùng Ngọc Lan: Giáo trình sinh thái rừng, ĐH Lâm nghiệp, NXB nông nghiệp, Hà Nội 11 Lê Đức Thọ (2007 ) “ Nhân giống vô tính chàm (Melaleula caujuputy Powell ) phương pháp giâm củ cắt” Luận văn tốt nghiệp trường ĐH Lâm Nghiệp 35 12 Nguyễn Hữu Thước cộng sự: “Ảnh hưởng chế đọ che sáng đến Xà Cừ” Tập san SVĐH III 1964 Tr.35-38 13 Nguyễn Hữu Thước, Lê Văn Khôi: “Nghiên cứu yêu cầu ánh sáng Mỡ giai đoạn tuổi non” Tập san SVĐH III 14 Thái Văn Trừng (2000): “Những hệ sinh thái rừng mưa nhiệt đới Việt Nam”, NXB Khoa học kỹ thuật, Hà Nội 15 Phạm Văn Tuấn (1997) “ Nhân giống rừng Củ, thành tựu khả áp dụng Việt Nam” Tổng luận chuyên khảo kỹ thuật Lâm nghiệp Việt Nam NXB Viện khoa học Lâm nghiệp Việt Nam 16 Đỗ Tất Lợi, 1991 Những thuốc vị thuốc Việt Nam NXB BNN 36