8 SựTHỤTINH (Thực hành) GIÚI thiệu Thụ tinh ống nghiệm (IVF) dùng để điều trị cho nhóm bệnh nhân khơng có vòi trứng hoậc rối loạn chức vòi trứng Q trình nhầm muc đích tạo điều kiện thực nghiệm giơng thê đế nỗn tinh trùng gặp Chỉ định điều trị thụ tinh ơng nghiệm (IVF) thay đổi nhiều, nhiên, thường áp dụng đơi với cặp vợ chổng mà người ta khơng biết nguyẻn nhân vơ sinh ngưòi đàn ơng thiếu tinh dịch Dần dần kỹ thuật thụ tinh Ống nghiệm IVF trờ nên tiến bộ, sử dụng kỹ thuật phòng thí nghiệm điểu chỉnh số giai đoạn q trình thụ tinh để gây thụ tinh cho nhóm bệnh nhân khơng thể có thai tự nhiên được, cụ thể kỹ thuật tiêm tinh trùng vào bào tương nỗn (ICSI-intracytoplasmic sperm injection) Sau gây thụ tinh 12 đến 20 xuất hiộn tiền nhân chúng tỏ tượng thụ tinh xẩy vể mặt hình thái vi thể Tuy nhiên, có hay khơng có tiền nhân khơng phải chúng chắn Đơi nhẩm khơng bào nỗn với tiền nhăn, đặc biệt nhũng người nhìn khơng có kinh nghiệm Đây nhầm lẫn tạm thời Nếu khơng nhìn thấy tiền nhân thụ tinh vản xảy ra; tiền nhân hình thành sau nên khơng nhìn thấy lần kiểm tra nỗn sau xảy tượng phân chia Cũng khơng nói phân chia chúng thụ tinh Nguời ta mơ tả phơi giai đoạn tế bào sinh sàn đơn tính khơng có thụ tinh Sự diện cục cáu chúng quan trọng thứ hai chứng tỏ tượng thụ tinh Tuy nhiẽn cục cầu thứ mảnh, muốn xác đinh tượng thụ tinh cách chín cần phải quan sát kết hợp nhiều mặt vào,các thời điếm khác Trước dưa tinh trùng nỗn vào đĩa ống để thụ tinh ống nghiệm cẩn phải xử lý tinh trùng Tinh trùng phải tách khỏi tinh dịch xứ lý theo thủ tục thường lệ để đám báo lây sơ lượng tinh trùng di động tót thu tinh cho nỗn Ĩ chương " Tinh trùng/ thưc hành " nêu lên quan trọng q trình xử lý tinh trùng trước thụ tinh Trong chưcnig dã mỏ tả hai phương pháp xử lý phương pháp "treo" phương pháp Percoll Trơng phần nêu điểm liên quan đến ván để chuẩn bị tinh trùng trước ủ tinh trùng nỗn, sơ lượng tinh trùng cần thiết để đạt hội thụ tinh cao Trong trường hợp tinh dịch q tồi, cần dùng đến phương pháp thụ tinh nhân tạo như: tiêm tinh trùng vào lớp suốt(SUZI/Subzonal spermatozoon injection) tiêm tinh trùng vào bào tương nỗn (ICSI/ intracytoplasmic sperm injection) Trong truờng hợp đặc biệt chọc hút lấy tinh trùng từ thừng tinh, sau sử dụng kỹ thuật thụ tinh ống nghiộm(IVF) Kỹ thuật gọi phưong pháp vi phẫu thuật hút tinh trùng từ thừng tinh (MESA/ Microsurgical epididymal sperm aspiration) Xử lý tỉnh trùng Trước bàn kỹ thuật xử lý tinh trùng ,chúng ta cần xem xét đến việc xử lý tinh dịch, điểm cần đề phòng thực hành thụ tinh nhân tạo ( chất liệu khơng độc sử dụng đễ chứa ) Hai điểm cần phải nghiên cứu: cần quan tâm đến thời gian kể từ lấy tinh dịch đến bắt đầu q trình xử lý Các nghiên cứu sử dụng thử nghiệm thâm nhập tinh trùng có liên hệ khả thụ tinh tinh trùng thời gian chưa xử lý Nếu tinh dịch khơng xử lý kết thử nghiệm thâm nhập tinh trùng thấp nhiều Mặc dù nghiên cứu khơng tiến hành thực nghiệm thụ tinh ống nghiệm IVF người, kết có phần quan trọng Thứ quan sát tượng hố lỏng: chất tiết túi tinh góp phần làm cho tinh dịch đơng đặc ỉại Người ta biết phóng tinh tinh J Ế ^ ^ f A m Jtfai « ** r ĩ* : 'Ẩ. i: * V • k i J L I ■^ I f • A • • thực nghiệm chi fa vấn đề hố lỏng xẩy urtĩ 1*3 i' >1r íÚẮ i u I 105 Phuơng pháp sử dụng khả di chun tỉnh trùng Chúng ta lấy tinh trùng tự từ tinh dich mà khơng cần ly tâm cách sử dụng phương pháp "bơi lên" "bơi xuống" Phương pháp bơi lên bơi xuống có lợi tinh trùng khơng bị tổn thương ly tâm Bằng cách sử dụng khả nâng di chuyển tinh trùng, tạo điểu kiện giống tư nhiên Tinh trùng chưa xừ lý chia đổ vào số lọ, sau dó đổ lên tinh dịch lớp mỏi trường ni cấy cách cẩn thận Sau thời gian, người ta hút lớp phía chứa nhiếu tinh trùng có khả hoạt động Khơng hút lớp chứa hỗn hợp với tính dịch Một cách khác sử dụng ống TEA (hình 8.1 xem phụ bàn 4) Tinh trùng chưa xử lý đặt phần bên (A) mơi trường nuỏi cấy bén ngồi (B), lớp mơi trường ni cấy đủ đầv để thơng nối hai phán A B phía Tinh trùng có khả di chun qua lớp để tới phần (B) (bơi lên), Bằng cách này, ta thu nhiều tinh trùng có khả di chuyển Người ta mơ tả dạng "bơi lên" "bơi xuống'' khác Điều bất lợi cùa tất phương pháp chi lấy hồn tồn lượng nhỏ tinh trùng tổng số tinh trùng có khả hoạt động Tất nhiên với mẫu tinh trùng chất lượng thu tinh trùng để sử dụng cho thử nghiệm thụ tinh ống nghiộm (IVF thành cơng Các phương pháp ly tâm Trong năm áp dụng thụ tinh ống nghiệm (IVF), người ta pha tinh dịch với mơi trường ni cấy ly tâm Sau loại bỏ phần mặt cách ly tâm để ngưng tụ lại sau rửa khối tinh trùng lại nhiều lần Một diéu bất lợi tinh trùng khoẻ yếu, tế bào sinh tinh bạch cầu đọng lại khối dược pha lỗng vào nỗn Sau lần rửa cuối khối khơng để ngưng tụ lại mà dược phù lóp mơi truờng ni cấy, tinh trùng khoẻ có Ihể bơi lừ khối lên dung dịch phía Bằng cách này, linh tràng yếu bạch cầu bị loại nhiều hay Vào nẫm 1981 báo Aiken Clarkson mơ tả tác dụng bảo vệ Percoll Tác giả dã cơng bố tinh trùng có hình thái chuyển dộng bình thường khả taọ gốc oxy so với tinh trùng bất thường, bạch cẩu loại tế bào khác Ưong tinh dịch chua xử lý Thơng thường ly lAm 106 tất loại tế bào kết lại thành khơi làm cho khoảng cách tế bào gẩn lại nên gốc oxy tác động đến màng tinh trùng sống Tỷ lệ tinh trùng sống với tế bào bất thường nhỏ khả nãng phá huỷ tinh trùng lớn Nếu sử dụng phương pháp Percoll khơng hình thành khối hỗn hợp tinh trùng sống phân tách cách nhanh chóng với tế bào bất thường Các tinh trùng sống có mặt trội khối Percoll, tế bào khơng bình thường đọng lại phần thấp Phương pháp tạo tượng phân tách tốt chọn nhiều tinh trùng Người ta tiến hành số thử nghiệm có kiểm tra so sánh tác dụng kỹ thuật xử lý lên kết điều trị thụ tinh ống nghiộm (IVF) Berger mơ tả khả thâm nhập tinh trùng sau xử lý phương pháp Percoll tốt so với tinh trùng xử lý ly tâm phương pháp "bơi lên" Tuy nhiên thực nghiệm này, sau thực phương pháp bơi lên lại ly tâm tinh trùng người ta khơng so sánh chức tinh trùng có ly tâm hay khơng ly tâm Gần Alvarez cộng mơ tả số tổn thương tinh trùng ly tâm Người ta chứng minh tinh trùng khơng bị ly tầm trì khả chuyển động khoẻ thời gian dài, khả chuyển động tinh trùng ly tâm giảm hẩn xuống sau 48 Bằng phương pháp "bơi lên" tinh trùng thu nhận giai đoạn đầu có khả khác biệt rõ ràng sau 24 Người ta chưa biết đến ảnh hưởng ly tâm lên chức tinh trùng thực nghiệm thụ tinh ống nghiệm ( IVF) Trong thực hành hàng ngày thường cần ly tâm Nói cách khác việc sử dụng mẫu tinh trùng có tinh trùng tinh trùng có khả di chuyển khơng có lợi r • xử lỷ hỗn hợp gò mỉm GỊ mầm xung quanh nỗn hàng rào tinh trùng Chất nhầy tử cung có đặc tính giống với chất nhầy cổ tử cung Trong số truờng hợp, xuất tế bào hạt tử cung thực bào tinh trùng Đối với tinh trùng cổ khả thụ tinh yếu nên loại bỏ gò mầm trước thụ tinh Các nghiên cứu Mahadevan Trounson sử dụng hyaluronidase để loại bỏ gò mầm khơng có hại cho nỗn phơi 107 Sự thụ tỉnh • ■ Mơi trường ni cấy Vé mặt lâm sàng, người ta sử dung loai mơi trường ni giai đoạn thu tinh giai đoạn hình thành phát triển phơi vẻ sau Trước nồng độ huyết dùng Ihụ tinh thường nửa so với nồng độ huyết dùng cho phơi phát triển hiệu tác dụng khơng chắn Trong mơi truờng ni cấy khác sử dụng cho thụ tinh ơng nghiệm bao gồm chất quan trọng đơi với tinh trùng: ion Ca++, gluco, lactat, bicarbonat, tỉ lệ Na+/ K* gần giống với dịch ống dẫn trúng chất protein phụ thêm Ion Ca** cần thiết cho phản ứng cực đầu, thòi thúc đẩv chế tiến triển Glucose lactat nguổn nàng lượng dự phòng cho tinh trùng Lượng ATP cùa tinh trùng nguời tàng cho thêm gluco lactat; Khi cho thêm chất kích thích chuyển động tinh trùng lượng gluco sử dụng phải tăng lên Protein, đặc biệt albumin thúc đẩy khả di chuyển cần thiết cho hoạt hố tinh trùng hầu hết sinh vật Nhiều trung tâm thụ tinh ống nghiệm sử dụng huyết người phụ nữ nhận phơi làm nguồn protein Điều thuận lợi huyết họ an tồn vé măt vi sinh học Điều khơng thuận lợi sơ phụ nữ tạo kháng thể độc tế bào (VD: kháng thể kháng tinh trùng) Tuy nhiên xét nghiêm trước tát mẫu huyết để tìm kháng thể nhiều thời gian Cán lựa chọn phương pháp chuẩn bị protein ví dụ: sử dụng phương pháp tiệt Ịiùng phương pháp Pasteur Albuminar Các nghiên cứu khác nêu lên chuẩn bị protein kích thích thụ tinh huyết Tuy nhiên chuột, người ta thấy albumin hấp thụ lượng lớn acid béo có tác dụng ức chế thụ tinh Do khơng nên lấv huyết làm mơi trường ni cấy sau ãn ul Độ tập trung dung tích lò ấp tinh trùng Như nói cn sách này, ưong tự nhiên có sổ tinh trùng có mặt bóng vòi trứng thời điểm thụ tinh Tuy nhiên ưong q trình thụ tinh thực nghiệm cố hàng chục nghìn tinh trùng có mặt xung quanh trúng phụ thuộc vào thể tích lò ấp dược sử dụng Độ tập trung 50 000 tinb trùng/mỉ khơng phải tốt Độ tập trung tinh trùng q cao 108 điêu kiên khơng thuận lợi tăng khả đa bội Hơn q trình th u tinh với độ tập trung tinh trùng cao ảnh hưởng tới sơng phổi Cuối men cực đầu tinh trùng men phân huỷ có hại cho trứng phơi Trong mẫu tinh trùng chuẩn bị thường có tinh trùng khỏ chết gáy tổn thương cho nỗn gốc oxy Người ta cho tỷ lệ thụ tinh có thê giảm sử dụng nhiéu tinh trùng Mặc dù vấn đề bàn cãi có ý kiến cho việc sử dụng nhiều tinh trùng thu kết thụ tinh ống nghiệm tốt Hammitt ủ tinh trùng có khả nãng chuyển động thê tích nhỏ với nồng độ tinh trùng cao ( lượng nhỏ chất bảo quản đơng lạnh) nhận thấy phơi tạo có hội làm tổ tốt Tất nhiên nên điều chỉnh nồng độ tinh trùng theo u cầu cần thiết để kết khơng tăng nguy đa bội ( lớn tiền nhân) khơng tăng sơ thụ tinh thất bại Bổng 8.1: Tóm tắt kết Hammitt, 1993 Độ tập trung tinh trùng chuyển động (* 106) 1,0 Túi phơi/vận chuyển phơi 134/952 (14%) 24/115 (21%) 20/94 (21%) Khả có thai/ vận chun phơi 87/237 (37%) 14/31 (45%) 11/28 (39%) Đối với nhiều bệnh nhân có tinh trùng yếu làm giảm thể tích ủ đạt độ tập trung cao, số lượng tinh trùng có thường Người ta mơ tả viộc ủ giọt nhỏ có dầu, ống thuỷ tinh nhỏ lượng nhỏ chất bảo quản đơng lạnh Khi số lượng tinh trùng có khả di chuyển vài trăm nghìn hội thụ tinh giảm nhiều sử dụng thể tích ủ nhỏ Khi xử lý tinh trùng phải tính đến xem sử dụng kỹ thuật thụ tinh Cần nhớ tinh trùng dần qua bước xử lý ! ^ ỉ Thu câm với honnon 58 Thụ cám với tinh trùng 93 9-i Thử nghiệm acrosin 46 Thử nghiệm bị gần khám: thê 38 Thừ nghiệm Hemizona 40 I Sinh thiết cực cáu 142, 143 Sinh thiếl giai đoạn tế bào mẩm 146 Sinh thiết tê bào phơi 143, 144 145 Thử nghiệm kết dính tinh trùne 38 Thứ nghiệm ngưng két khay 38 Thứ nghiệm xâm nhập tinh trùng vào màng nỗn bào 47, 48 SPAT (Sperm agglulination test) 38 Sucrose 111, 165 Superoxyd dis-mutase 85 SUZI (Subzonal spematozoon ineclion ,1 1 ,1 ,1 Thê tinh trùng 98 “Swim up” 40 T TAT (Tray agglutination test) 38 Tái thụ tinh 110 Tái thụ tinh 110 Tạm bội 100, 102 Taq polymesase (men) 150 Tan đơng (qui trình) 180 Tan đơng (tốc độ) 18, 184 Taurin 86 TE (trophotoderm) 119 Tốc độ khử nước 157, 163 Tốc độ làm lạnh 158, 159 Terlosteron 8, 20 TGF p (Trans-forming growth factor) 87 Thơng tin (chuyển tiếp) 122 Thơng tin từ mẹ sang hợp tử 122, 134 Thân nhiệt 60 Thấm nước màng tế bào 157 Thẩm thấu (độ) 70 Thời kỳ GI 119 Thời ky G2 120 206 Thụ tinh 92 Thụ tinh (khả năng) 131 Thụ tinh (ức chê") 108 Thụ tinh (thời gian thích hợp) 110 Thụ tinh 77, 90, 104, 108 Thụ tinh bất thường 99 Thụ tinh lai 110 Thụ tinh thêm 100 Thụ tinh ống nghiệm (với phơi đơng lạnh)183 Thụ tinh ống nghiệm 29 Thụ tinh tử cung 29 Thừng tính Tích trữ phơi 175 Tiêu chuẩn an tồn I 198 Tiêu chuẩn an tồn II 198 Tinh bào cấp I, II 19 Tinh dịch (nguổn cho) 196 Tinh địch ,24, 27, ! 94 Tinh hồn 8, 14,21 Tinh thể đá (hệ thống tạo) 177 Tinh thể nước đá 156 Tinh tử 19 Tinh trùng (di chuyển) 106, 113 Tinh trùng (xử lý) 105 Tinh trùng đem thụ linh 77 TRPs (Transcription requiring protein) 123 Tử cung 60 Túi ối rỗng 11.12 Túi mầm 118 119 Tinh trùng 13, 22, 23, 25 27, 29, 31, 91 Tinh Irùng di chuyến 34 - 35 Tinh trung ngun thuy 18 I inh trùng thám nhập gò mầm 93 95, ^ Tinh trùng thứ cáp 18 Tinh trùng xâm nhập nỗn bào 55 Tinh trùng u 36 Ticn liệt tuyến 22, 23 31 Tuyến n Tý lệ diện tích bề mặt/thê tích tê hào 157 Ty rode 129 u Ticn nhân(di ch uy ến)98 Tiển nhân (hình thành) 98 99, 100 Tiển nhân 56 ban an tồn Uvomorulin 118 Tiền nhân nữ 56 Tiền linh trùng 17, 18 Tế bào bên 119 Tế bào mầm ngun thúy 53 Vơ sinh nữ 12 Vero (tế bào) 134 Vi thụ tinh 110 Vùng suốt 54 Y-Z Yếu tò đảm bảo an tồn cho IVF 191 Yếu tố an tồn xử lý men 196 Yếu tố an tồn vể vi sinh học 19 ỉ Yếu tơ' gây nhiễm khuẩn 194, 195, 196 Yếu tơ' kết dính cadherion 118 Yếu tơ' kích thích trưởng thành 120 Yếu tố ức chế 21 Yếu tơ' phát triển 87 Yếu tơ' phát triển biến đổi dạng p 87 Yếu tố phát triển biểu bì 87 Yếu tơ' phát triển tiểu cầu 87 ZIFT (zygote intrafallopiam transfer) 132 zp 1; Zp2; Zp3 93, 97 tiê u chn VC IVF 198 V Tế bào dinh dưỡng 119 Tế bào giết 77 Tế bào hạt 54 Tế bào kẻ 14 Tế bào Legdig 8, 20, 21 Tế bào lưỡng bội 14 Tế bào phơi 118 Tế bào phân chia 119 Tế bào Sertoli 8, 17, 22 Tế bào sinh dục 53, 54 Tế bào Vero 86, 134 Túi tinh 23 Treo (phương pháp) 41, 106 Trifon X - 100 (dung dịch tẩy) 45 Trong suốt (lớp) 25, 26,42, 92, 93, 110 I - i l l ' ' ) • * * ? t c * ■ ■ n v i! - • ■ ; - f I ^ H • ' J /I'.'b ■ Li •' * * ’i m-jfc ỎL ]£ f;ii ,i’ X i) "\ rruf'lijs Ỉ' tu MỤC LỤC • * T rang SỤSINH SAN Giới tính Điéu kiện hoạt động sinh dục Tuyến n Tinh hồn Buồng trứng Sự làm tố Sự mang thai 12 TINH TRÙNG (LÝ THUYẾT) • Sư sinh tinh + Phân bào giảm nhiễm + Sự tạo giao tử Sự biệt hố chức nãng tinh trùng Nội tiết học + Sự sản sinh Androgen + Điều hồ chức tinh hồn Sự vận chuyển tinh trùng Tinh dịch + Sự xuất tinh + Thành phần tinh dịch Hình thái học cùa tinh trùng + Đầu tinh trùng phản ứng cực đầu + Tiêu chuẩn WHO hình thái học tinh trùng 13 20 22 23 24 TINH TRÙNG (THỤC HÀNH) Các xét nghiệm chung vé tinh dịch Xét nghiệm đại thể hố sinh + Xác định thể tích, hoạt động phosphatase acid, nổng độ fructose tinh dịch, dơ acid 208 29 31 Xét nghiệm vi thể tinh dịch + Nồng độ khả di chuyển tinh trùng + Các tế bào có nhân tinh dịch + Đặc điểm hình thái tinh trùng + Phân tích tinh dịch với trợ giúp máy tính (CASA) Kích thích tinh trùng chuyển động Xác định kháng thể tinh dịch huyết + Xét nghiệm phản ứng hỗn hợp chống globulin (MAR) + Xét nghiệm kết dính tinh trùng (SPAT) (xét nghiệm ngưng kết khay (TAT) + Xét nghiệm miễn dịch bi gắn kháng thể (TIT) Xét nghiệm chức q trình thụ tinh + Phản ứng hoạt hố tinh trùng Phương pháp bơi lên Phương pháp Percoll + Xét nghiệm Hemizona xác định khả tinh trùng gắn vào lớp suốt + Phản ứng cực đầu tinh trùng Hoạt động acrosin + Xác định khả xâm nhập tinh trùng 32 35 36 39 42 44 47 NỖN Sự hình thành tế bào sinh dục + Các giao tử + Sự phát triển tế bào mầm ngun thủy + Sự phân bào giảm nhiễm + Sự hình thành nỗn + Cấu trúc nỗn + Nỗn bào chín Sự hoạt hố nỗn Chu kì kinh nguyệt Các thay đổi theo chu kỳ buồng trúng + Giai đoạn nang nỗn Giai đoạn rụng trúng Giai đoạn hồng thể * Sự điểu hồ chu kì kinh nguyệt r c +tóv Hormon giải phóng kích thích sinh dục (GnRH) 53 55 56 57 + Hormon hướng sinh due FSH CLH + Estradion progteron + Điều hồ phát triển cùa nang + Sự chín muồi cùa nang nỗn, phóng nỗn + Hồng thể Ảnh hườns cùa estrogen progesteron lên quan khác 59 + Tư cung + Các quan khác Sư kích thích hormon 61 + Gomiphen citrat hormon kích thích sinh dục (hMG) + Chất giống GnRH gonadotropin Phương thức kích thích ngắn cực ngắn Phương thức kích thích dài Những thuận lợi chất tương tự LHRH Hội chứng q mẫn cùa buồng trứng NỖN BÀO (THỤC HÀNH) Thành phần mơi trường + Độ acid + Hệ thống đệm + Độ thẩm thấu + Dầu khống + Nguồn protein + Nguồn lượng + Muối + Nước Lò ấp C Phát đánh giá chất lượng nỗn bào + Xác định nỗn bào + Đánh giá chất lượng nỗn bào + Phương pháp đánh giá n (i.ií : * + Thời gian thụ tinh + Sự thụ tinh Vật dụng sử dụng thụ tỉnh ống nghiệm 69 73 74 78 NI CẤY PHƠI Sự tạo thành mơi truờng ni cấy cho phơi động vật có vú 210 81 • + Thành phần + Nguổn lượng + Acid amin Những điều kiện ni cấy gần tối ưu • Các nhân tơ hạn c h ế phát triển cùa • + + + + Cải + + phơi Tác động qua lại glucose phosphat Tác động áp suất thấm thấu Hypoxanthin mơi trường ni cấy Phản ứng phân tử oxy thiện mơi trường hồn hảo Ni cấy có tổ chức - (Co-culture) Các yếu tố phát triển polypeptid SựTHỤ TINH (LÝ THUYẾT) • • • Các giao tử (nỗn tinh trùng) Vi trí thụ tinh Hàng rào tinh trùng + Khối gổ mầm + Lớp suốt - Sự gắn tinh trùng - Phản ứng cực đầu - Sự xâm nhập tinh trùng + Màng bào tương nỗn - Tinh trùng bám vào nỗn - Phản ứng vùng vỏ - Sự hồ nhập thâm nhập tinh trừng Tiền nhân + Sự hình thành tiền nhân , + Sự di chuyển tiền nhân Hiện tượng sinh sản hữu tịnh Sự thụ tinh bất thường V ,J Khổng có tiền nhân Một tién nhân + Nhiều tiền nhân Thành phần di truyền hợp tử tiền nhân » * • * * i i S ự T H Ụ TINH (THUC HÀNH) • • • • Xử lý tinh trùng + Phương pháp SỪdụns khả di chuyển cùa tinh trùng + Phương pháp li tâm Xử lý hỗn hợp gò mầm Sự thụ tinh + Mơi trường ni cấy + Độ tập trung dung tích lò ấp tinh trùng + Thời gian thụ tinh + Tái thụ tinh + Thụ tinh phương pháp vi thụ tinh + Phẫu tích phần vùng suốt (PZD) + Tiêm tinh trùng vào vùng suốt (SUZI) + Tiêm tinh trùng vào bào tương (ICSI) + So sánh kỹ thuật vi thụ tinh Kỹ thuật vi phẫu thuật thừng tinh để hút tinh trùng (MESA) PHƠI (LÝ THUYẾT) • Sự phát triển phơi trước làm tổ + Sự phân chia tế bào + Sự biểu lộ gen tổng hợp protein phơi 10 PHƠI (THỤC HÀNH) • • • • Các đặc điểm hình thái định tính phơi Các giai đoạn phân tách phát triển phơi + Các hình ảnh kính hiển vi + Chỉ số phơi, số phơi tích lũy Thời điểm chuyển phơi + Chuyển hợp tử vào ngày thứ + Chuyển hợp tử vào ngày thứ + Chuyển hợp tử vào ngày thứ 3,4-5 Các phương pháp nghiên cứu chất lượng phơi 11 CHẨN ĐỐN TRƯỚC KHI LÀM TỔ • • Dự định chẩn dốn trước làm tổ cho dối tượng Các giai đoạn sinh thiết + + Sinh thiết cực cầu Sinh thiết giai đoạn - tế bào + Sinh thiết giai đoạn tê bào m ầm Hiện có phương pháp chẩn đốn + Phương pháp lai huỳnh quang tai chỗ (FISH) + Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) 12 BẢO QUẢN ĐƠNG LẠNH (LÝ THUYẾT) • • • • • Mặt lý hố bảo quản đơng lạnh + Hình thành tinh thể đá + Độ thẩm thấu mơi trường lạnh + Phản ứng tế bào sống với q trình đơng lạnh + Tốc độ khử nước + Tốc độ làm lạnh tốt Kiểm tra lý thuyết bảo quản đơng lạnh + Tốc độ tốt để đơng lạnh tế bào lâm sàng + Sự giảm thể tích thực tế bào + Hình thành bọt khí + Đơng lạnh nhanh - ý kiến trái ngược Chất bảo trợ đơng lạnh + Sự khử nước + Sự bù lại nước + Các chất khơng thấm DMSO Các phương pháp làm đơng lạnh nhanh + Đơng lạnh nhanh cực nhanh + Thủy tinh hố Các nguy việc bảo quản đơng lạnh + Nguy sinh học + Các mặt pháp lý đạo đức 1 1 13 BẢO QUẢN ĐƠNG LẠNH (THỤC HÀNH) ' ' « Bảo quản đơng lạnh nỗn + Mơi trường bảo quản đơng lạnh nỗn Bảo quản đơng lạnh phơi » ' I / ' 1 % lạnh phơi Chất bảo trợ giai đoạn phân chia + Chất thêm vào mơi trường bảo quản đỏng lanh + Nồng độ chất bảo trợ đỏng lạnh Tích trữ phơi đầu + Báo quản đơng lạnh + Cung cấp nitrogen + Hệ thống tạo tinh thể đá Mẫu chương trình bào quản đơng lạnh + Chuẩn bị mơi trường bảo quản đơng lạnh ampul ống dự trữ + Chương trình làm lạnh Q trình làm tan đơng + Qui trình làm tan đơng + Chu trình làm tan đơng Thời điểm chuyển phơi Chu kì tự nhiên Chu kì kích thích Chu kì thay Chương trình bảo quản đơng lạnh thụ tinh ống nghiêm + Tiến hành bảo quản đơng lạnh thường xun + Tiến hành làm tan đơng thường xun cho đối tượng + Ai mang thai sau chuyển phơi làm tan đơng + Bảo quản đơng lạnh phơi có ý nghĩa bệnh nhân + Bảo quản đơng lạnh phơi có ýnghĩa chương trình thụ tinh ống nghiệm + Liệu cách kích thích chu kỳ thụ tinh ống nghiệm có ảnh hưởng tới thành cơng cuối q trình đơng lạnh tan đơng Thủ tục áp dụng bảo quản đơng lạnh + Hợp đồng + Hồ sơ + Các vấn đề liên quan với đơng lạnh làm tan đơng CÁC KHÍA CẠNH v ề CÁC PHAN • • • • • • • l iê n q u a n đ e n an tồn Các yếu tố an tồn sinh học + Kiểm tra bệnh nhân dê phát vi sinh vật gây bệnh + Nhiễm khuẩn mơi trường ni cấy Sự chuẩn bị an tồn cho mơi trường ni cấy Nhiễm khuẩn mơi trường ni cấy bắt ngồn từ thành phần huyết Nhiễn khuẩn mơi trường ni cấy bắt nguồn từ dịch nang Nhiễm khuẩn mơi trường ni cấy bắt nguồn từ tinh dịch Nhiễm khuẩn mơi trường ni cấy bắt nguồn từ mơi trường phòng thí nghiêm Các nhiễm khuẩn thường gặp mơi trường ni cấy Tinh dịch người cho Đồng ni cấy với tế bào mơ Vấn đề an tồn xử lý men Các vấn đề an tồn khác + Những người vào phòng thí nghiệm thụ tinh Ống nghiệm + Hộ thống cấp cứu Các qui tắc để tránh tình trạng lẫn lộngiao tử, phơi Uỷ ban an tồn tiêu chuẩn (ESHRE) > '’i Y BẳMỈ ỈỀUX BíiV1 ru I ỵr gn ỉ - ĩ ru* ri ■ * I > / -ỉ ị JKK & m f.u ì.ỉ-ĩ Vi ’p : ? A -'.* -A : i • • 1 ] I í ỉ NHÀ XUẤT BẢN Y HỌC THỤ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM Chịu trách nhiệm xuất bản: HỒNG TRỌNG QUANG NGUYỄN THỊ KIM LIÊN Biên tập: BS NGUYỄN t h ị t ố t Sửa in: BS NGUYỄN THỊ TỐT Trình bày bia: Cty PRINTAD In 1000 cuốn, khổ 16x24cm Xưởng in Nhà xuất Y học Giấy đăng ký kế hoạch xuất số: 217-115/XB-QLXB ngày 17/01/2001 ỉn xong nộp lưu chiểu q m năm 2001