TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (Oroxylum indicum (L.) Vent) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH HÓA HỮU CƠ 2015 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (Oroxylum indicum (L.) Vent) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CAO HỌC NGÀNH HÓA HỮU CƠ MÃ NGÀNH: 60440114 CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Ts TÔN NỮ LIÊN HƢƠNG 2015 KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành biết ơn sâu sắc đến: Ts Tôn Nữ Liên Hương người cô nhiệt tình, chu đáo dẫn, giúp đỡ suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thiện luận văn PGs Ts Bùi Thị Bửu Huê, Ts Lê Thanh Phước, Ts Nguyễn Trọng Tuân tận tình bảo, truyền đạt kỹ bản, kinh nghiệm quý báu tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành tốt luận văn Các anh chị, bạn bè em sinh viên làm việc chung phòng hóa hữu 2, khoa Khoa học Tự Nhiên quan tâm, động viên giúp đỡ suốt trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn! Tác giả luận văn LUẬN VĂN THẠC SĨ i NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) TÓM TẮT QUÁ TRÌNH NGHIÊN CỨU Bột khô vỏ Núc Nác (9,2 kg) chiết bốn lần với methanol 24h nhiệt độ phòng Các cao methanol hòa tan nước chiết với n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate cao phân đoạn tương ứng như: n-hexane (33,54 g), dichloromethane (110,85 g), ethyl acetate (153,35 g) Nghiên cứu tập trung vào cao dichloromethane Các cao dichloromethane (100 g) tinh chế sắc ký cột với dung môi có độ phân cực tăng dần để mang lại 12 phân đoạn Hơn nữa, việc tách tinh chế phân đoạn dẫn đến cô lập chín hợp chất Các cấu trúc hợp chất làm sáng tỏ liệu quang phổ đại: 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC, dựa phân tích MS so sánh với số báo cáo trước Các hợp chất cô lập là: ORI.K1 (Pinocembrin), ORI.K2 (1-oxa-spiro[3,5]nonan-7-one), ORI.K3 (Hispidulin), ORI.P1 (Oroxylin A), ORI.P2 (Chrysin), ORI.P3 (Baicalein), ORI.P4 (3-ethoxy-5,7-dihiroxy-2-phenyl-chromen-4-one), ORI.T1 (3,4-dihydroxy-benzoic acid methylester), ORI.T2 (Rengyolone) Mặt khác, nghiên cứu đề cập đến trình sử dụng bồn siêu âm để chiết flavonoid từ vỏ Oroxylum indicum (L.) Vent sử dụng quang phổ UV-Vis định lượng flavonoids toàn phần LUẬN VĂN THẠC SĨ ii NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) ABSTRACT The dried powder of Oroxylum indicum bark (9,2 kg) were extracted four time with methanol during 24h at room temperature The methanol extract was suspended in water and extracted with n-hexane, dichloromethane, ethylacetat to give the partition extracts like n-hexane (33,54 g), dichloromethane (110,85 g), ethylacetat (153,35 g) respectively This study only focuses on the dichloromethane extract The dichloromethane extract (100 g) was fractionated by column chromatography with the gradient of solvents to yield 12 fractions Further separation and purification of these fractions led to the isolation of nine compounds The structures of these compounds have been elucidated by modern spectral data of: 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HMBC, HSQC, base on the MS analysis and the comparision with some previous reports The isolated compounds are: ORI.K1 (Pinocembrin), ORI.K2 (1-oxa-spiro[3,5]nonan-7one), ORI.K3 (Hispidulin), ORI.P1 (Oroxylin A), ORI.P2 (Chrysin), ORI.P3 (Baicalein), ORI.P4 (3-ethoxy-5,7-dihiroxy-2-phenyl-chromen-4-one), ORI.T1 (3,4-dihydroxy-benzoic acid methylester), ORI.T2 (Rengyolone) On the other hand, this study also mentions the process of using ultra sound basin to extract flavonoid from the bark of Oroxylum indicum (L.) Vent and UV-Vis spectroscopy to quantify the total flavonoids LUẬN VĂN THẠC SĨ iii NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu có nguồn gốc rõ ràng, kết thu trình nghiên cứu trung thực chưa dùng luận văn cấp khác Cần Thơ, ngày 29 tháng năm 2015 LUẬN VĂN THẠC SĨ iv NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN TIẾNG VIỆT ii TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN TIẾNG ANH iii LỜI CAM ĐOAN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH, SƠ ĐỒ ix DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT xi DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC xiii Chƣơng 1: MỞ ĐẦU 1.1 Lý chọn đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Chƣơng 2: TỔNG QUAN 2.1 Đại cương thực vật Núc Nác 2.1.1 Giới thiệu Núc Nác 2.1.2 Phân loại khoa học 2.2 Tác dụng dược lý Núc Nác 2.2.1 Trong y học dân gian 2.2.2 Các hoạt tính sinh học Núc Nác nghiên cứu 2.2.3 Các nghiên cứu y học thử nghiệm lâm sàng 2.3 Tổng hợp kết nghiên cứu thành phần hóa học Núc Nác 2.3.1 Các nghiên cứu nước 2.3.2 Các nghiên cứu nước 2.4 Nhóm hợp chất flavonoid 19 2.4.1 Flavonoid 19 2.4.2 Hoạt tính dược lý flavonoid 19 Chƣơng 3: THỰC NGHIỆM 22 3.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 22 3.1.1 Nguyên liệu 22 3.1.2 Xử lý mẫu nguyên liệu 22 3.1.3 Hóa chất sử dụng 22 3.1.4 Thiết bị 22 3.2 Phương pháp nghiên cứu 23 3.2.1 Phương pháp chiết xuất 23 3.2.2 Phương pháp phân lập hợp chất 24 3.2.3 Phương pháp khảo sát xác định cấu trúc hợp chất 24 3.2.4 Phương pháp xác định độ ẩm dược liệu 24 3.2.5 Phương pháp chiết flavonoid toàn phần có hỗ trợ sóng siêu âm 25 3.2.6 Nguyên tắc định lượng flavonoid phương pháp quang phổ UV-Vis 25 LUẬN VĂN THẠC SĨ v NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) 3.2.7 Phương pháp chọn bước sóng định lượng 25 3.2.8 Phương pháp xác định độ lặp lại 26 3.2.9 Phương pháp xây dựng đường chuẩn 26 3.2.10 Phương pháp xác định giới hạn định lượng 26 3.2.11 Xác định độ phương pháp 27 3.2.12 Phương pháp định lượng flavonoid toàn phần 27 3.3 Thực nghiệm chiết xuất, điều chế cao thô từ vỏ thân Núc Nác 27 3.4 Phân lập, tinh chế số hợp chất từ vỏ thân Núc Nác 29 3.4.1 Khảo sát phân đoạn OD2 30 3.4.2 Khảo sát phân đoạn OD6 32 3.4.3 Khảo sát phân đoạn OD8 36 3.4.4 Khảo sát phân đoạn OD7 36 3.4.5 Khảo sát phân đoạn OD4 37 3.5 Định lượng flavonoid toàn phần vỏ thân Núc Nác theo chất đối chiếu baicalein 38 3.5.1 Xác định độ ẩm dược liệu 38 3.5.2 Chiết flavonoid toàn phần phương pháp chiết trực tiếp có hỗ trợ sóng siêu âm 39 3.5.3 Chọn bước sóng hấp thụ thích hợp 39 3.5.4 Độ lặp lại phương pháp 40 3.5.5 Xây dựng đường chuẩn 40 3.5.6 Giới hạn phương pháp 41 3.5.7 Độ phương pháp 42 3.5.8 Kết định lượng flavonoid toàn phần vỏ thân Núc Nác 43 Chƣơng 4: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 44 4.1 Xác định cấu trúc nhận danh hợp chất 44 4.1.1 Hợp chất ORI.K1 44 4.1.2 Hợp chất ORI.K3 50 4.1.3 Hợp chất ORI.P1 54 4.1.4 Hợp chất ORI.P2 60 4.1.5 Hợp chất ORI.P3 63 4.1.6 Hợp chất ORI.P4 66 4.1.7 Hợp chất ORI.T1 69 4.1.8 Hợp chất ORI.T2 70 4.1.9 Hợp chất ORI.K2 76 4.2 Kết định lượng flavonoid toàn phần 80 Chƣơng 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 81 5.1 Kết luận 81 5.1.1 Phân lập hợp chất 81 5.1.2 Cấu trúc hóa học hợp chất phân lập 82 5.1.3 Hàm lượng flavonoid toàn phần 83 5.2 Kiến nghị 83 TÀI LIỆU THAM KHẢO .84 PHỤ LỤC LUẬN VĂN THẠC SĨ vi NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Các nghiên cứu hoạt tính sinh học phận Núc Nác Bảng 2.2 Thành phần hóa học công bố loài Oroxylum indicum (L.) Vent Bảng 3.1 Kết sắc ký cột nhanh khô .29 Bảng 3.2 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD2 31 Bảng 3.3 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD28 32 Bảng 3.4 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD6 33 Bảng 3.5 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD63 33 Bảng 3.6 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD65 34 Bảng 3.7 Kết sắc ký cột silica gel cao phân đoạn OD67 35 Bảng 3.8 Kết SKC phân đoạn OD4 .37 Bảng 3.9 Kết đo độ ẩm bột vỏ thân Núc Nác 38 Bảng 3.10 Kết độ lặp lại phương pháp 40 Bảng 3.11 Kết xây dựng đường chuẩn theo chất đối chiếu Baicalein .41 Bảng 3.12 Kết xác định độ lệch chuẩn mẫu trắng .41 Bảng 3.13 Kết xác định nồng độ giới hạn LOL chất đối chiếu Baicalein 42 Bảng 3.14 Kết xác định độ phương pháp 42 Bảng 3.15 Kết định lượng flavonoid toàn phần vỏ thân Núc Nác 43 Bảng 4.1 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.K1 47 Bảng 4.2 Dữ liệu phổ 1H-NMR,13C-NMR, HSQC HMBC ORI.K1 48 Bảng 4.3 So sánh liệu phổ ORI.K1 Pinocembrin 49 Bảng 4.4 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.K3 52 Bảng 4.5 Dữ liệu phổ 1H-NMR,13C-NMR, HSQC HMBC ORI.K3 .53 Bảng 4.6 So sánh liệu phổ ORI.K3 Hispidulin 54 Bảng 4.7 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.P1 .57 Bảng 4.8 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC ORI.P1.58 Bảng 4.9 So sánh liệu phổ ORI.P1 Oroxylin A 59 Bảng 4.10 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.P2 .61 Bảng 4.11 So sánh liệu phổ ORI.P2 Chrysin 62 LUẬN VĂN THẠC SĨ vii NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Bảng 4.12 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.P3 .64 Bảng 4.13 So sánh liệu phổ ORI.P3 ORI.P1 65 Bảng 4.14 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.P4 .68 Bảng 4.15 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC ORI.P4 69 Bảng 4.16 Dữ liệu phổ 1H, 13C-NMR DEPT ORI.T1 71 Bảng 4.17 So sánh liệu phổ ORI.T1 3,4-dihidroxybenzoic acid 71 Bảng 4.18 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.T2 .73 Bảng 4.19 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC ORI.T2 75 Bảng 4.20 So sánh liệu phổ ORI.T2 Rengyolone 76 Bảng 4.21 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR DEPT ORI.K2 .79 Bảng 4.22 Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC HMBC ORI.K2 79 LUẬN VĂN THẠC SĨ viii NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) PHỤ LỤC Phụ lục 8.1 Phổ MS-ESI ORI.T2 OH O O [M-H2O]+ M = 154 amu LUẬN VĂN THẠC SĨ 45 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.2 Phổ 1H-NMR phổ 13C-NMR ORI.T2 H7e,H7a H3a -H3’4’5’ H3e H  H8eH8a H3e  H5 HO H6 OH O O C3, C7 C1 -H3’4’5’ C8 -H3’4’5’ C2 -H3’4’5’ C5 -H3’4’5’ C6 -H3’4’5’ C4 -H3’4’5’ LUẬN VĂN THẠC SĨ 46 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.3 Phổ 1H-NMR giãn rộng ORI.T2 H7e,H7a -H3’4’5’ H3a H3e OH O O HO H5 H8a H8e H2H3e  H6 LUẬN VĂN THẠC SĨ 47 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.4 Phổ 13C-NMR giãn rộng ORI.T2 C8 -H3’4’5’ C1 -H3’4’5’ C2 -H3’4’5’ C3, C7 C5 -H3’4’5’ OH O O C6 -H3’4’5’ C4 -H3’4’5’ LUẬN VĂN THẠC SĨ 48 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.5 Phổ DEPTcủa ORI.T2 OH O LUẬN VĂN THẠC SĨ O 49 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.6 Phổ HSQC ORI.T2 H7e , H7a →C7 H3e→C3 H3a→C3 H8e→C8 H7a→C7 H8a→C8 H2→C2 OH O O H5→C5 H6→C6 LUẬN VĂN THẠC SĨ 50 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 8.7 Phổ HMBC ORI.T2 H6→C7 H8→C7 H5→C3 H7→C8 H5→C1 H3e→C2 H8e→C2 H6→C2 H8a→C2 H3a→C2 H7→C1 H7→C2 OH→C5 OH O H7→C6 O H3a→C4 H2→C4 H3e→C4 H6→C4 LUẬN VĂN THẠC SĨ 51 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) PHỤ LỤC Phụ lục 9.1 Phổ MS-ESI ORI.K2 [M+H]+=141 M =140 amu LUẬN VĂN THẠC SĨ 52 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.2 Phổ 1H-NMR phổ 13C-NMR ORI.K2 H 3 H6a, H8a H H  H5e, H9e 5a, 9a H6e, H8e H2 C6, C8 C5, C9 C3 C2 C4 C7 LUẬN VĂN THẠC SĨ 53 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.3 Phổ 1H-NMR giãn rộng ORI.K2 H6a, H8a H3 H5a, H9a H5e, H9e H2 H6e, H8e LUẬN VĂN THẠC SĨ 54 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.4 Phổ 13C-NMR giãn rộng ORI.K2 C6, C8 C C  5, C3 C2 C4 LUẬN VĂN THẠC SĨ 55 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.5 Phổ DEPT ORI.K2 LUẬN VĂN THẠC SĨ 56 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.6 Phổ HSQC ORI.K2 H5e,H9e→C5, C9 H6a,H8a→C6, H2’ H2 H6→ C2 C6 H6e, H8e→C6, C8 H5a,H9a→C5, C9 H3→C3 H2→C2 LUẬN VĂN THẠC SĨ 57 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 9.7 Phổ HMBC ORI.K2 LUẬN VĂN THẠC SĨ 58 NGUYỄN ĐĂNG KHOA KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA VỎ CÂY NÚC NÁC (O indicum (L.) Vent) Phụ lục 10: Trang chấp nhận đăng tạp chí khoa học trường Đại học An Giang LUẬN VĂN THẠC SĨ 59 NGUYỄN ĐĂNG KHOA