BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Trần Thị Thanh Phương KHẢO SÁT TÍNH THÍCH NGHI CỦA CÂY HOÀNG LAN [Cananga odorata (Lam.) Hook f et Thomson] TẠO ĐƯỢC TỪ CÁC KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG KHÁC NHAU TẠI TỈNH BÌNH PHƯỚC Chuyên ngành: Sinh Thái Học Mã số: 60 42 60 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS Vương Đình Tuấn TS Phạm Văn Ngọt Thành phố Hồ Chí Minh – 2010 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Thầy Vương Đình Tuấn, thầy Phạm Văn Ngot tận tình bảo, giúp đỡ, động viên đưa ý kiên quý báu cho trình học tập, nghiên cứu thực luận văn Quý thầy cô khoa sinh học trường Đại học Sư phạm Thành Phố Hồ Chí Minh giúp đỡ nhiều trình học tập Quý thầy cô thuộc môn thực vật trường Đại học Sư phạm Thành Phố Hồ Chí Minh giúp đỡ trình thực luận văn Các cô chú, anh chị Phân Viện Nghiên cứu Khoa học Lâm Nghiệp Nam Bộ, Đài Khi tượng Thủy văn Nam Bộ, cộng tác, giúp đỡ trình thực luận văn Tất anh chị, bạn bè, đồng nghiệp người thân gia đình giúp đỡ, tạo điều kiện cho hoàn thành luận văn MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN 4T T MỤC LỤC 4T T DANH LỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 4T 4T MỞ ĐẦU 4T T 1.Đặt vấn đề 4T T 2.Mục tiêu nghiên cứu 4T 4T 3.Nội dung nghiên cứu 4T 4T 4.Phạm vi nghiên cứu 4T 4T 5.Thời gian tiến hành thí nghiệm 4T 4T Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4T 4T 1.1.Một số đặc điểm sinh học, sinh thái Hoàng lan 4T T 1.2.Tình hình nghiên cứu hoàng lan giới Việt Nam 11 4T T 1.2.1.Trên giới 11 T 4T 1.2.2.Ở Việt Nam 13 T 4T 1.3.Nghiên cứu giâm cành 14 4T 4T 1.4.Nghiên cứu nuôi cấy invitro 15 4T 4T 1.5.Đặc điểm tự nhiên tỉnh Bình Phước 16 4T 4T 1.5.1.Đặc điểm tự nhiên 16 T 4T 1.5.2.Đặc điểm khí hậu 17 T 4T Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 4T T 2.1.Vật liệu 19 4T T 2.1.1.Vật liệu thí nghiệm giâm cành 19 T T 2.1.2.Vật liệu thí nghiệm nuôi cấy invitro 19 T T 2.1.3.Vật liệu thí nghiệm khảo sát sinh trưởng 19 T T 2.2.Phương pháp tiến hành 20 4T 4T 2.2.1.Nhân giống vô tính hoàng lan 20 T 4T 2.2.1.1.Phương pháp giâm cành hoàng lan 20 T T 2.2.1.2.Phương pháp nuôi cấy mô hoàng lan 22 T T 2.2.2.Khảo sát sinh trưởng Hoàng lan có từ hạt giâm cành Bình Phước 25 T T 2.2.2.1.Bố trí thí nghiệm trồng hoàng lan thị xã Bình Long, tỉnh Bình Phước 25 T T 2.2.2.2.Phương pháp đo chiều cao trung bình đường kính trung bình thân 26 T T 2.2.2.3.Thống kê số trung bình/cây 26 T T 2.1.1.1 Tính diện tích trung bình/cây 26 T T T T 2.2.2.4.Thống kê số cành cấp I/cây (C) 27 T T 2.2.2.5.Phân tích thành phần giới hóa học đất 27 T T 2.2.2.6.Phương pháp đo cường độ ánh sáng 27 T T 2.2.3.Phương pháp xử lý số liệu 27 T 4T Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4T T 3.1.Kết giâm cành hoàng lan 29 4T 4T 3.1.1.Tỷ lệ sống 29 T 4T 3.1.1.1.Tỷ lệ sống đoạn cành giâm cành hoàng lan 29 T T 3.1.1.2.Tỷ lệ sống đoạn thân giâm cành hoàng lan 30 T T 3.1.2.Thời gian rễ 32 T 4T 3.1.3.Tỷ lệ tạo rễ giâm cành hoàng lan 33 T T 3.1.3.1.Tỷ lệ tạo rễ đoạn cành tay giâm cành 33 T T 3.1.3.2.Tỷ lệ tạo rễ đoạn thân giâm cành 35 T T 3.1.4.Số lượng kích thước rễ 37 T 4T 3.1.4.1.Số lượng chiều dài rễ cành tay hoàng lan 37 T T 3.1.4.2.Số lượng chiều dài rễ thân hoàng lan 37 T T 3.2.Kết nuôi cấy invitro chồi hoàng lan 38 4T T 3.2.1.Kết vô trùng chồi hoàng lan 38 T T 3.2.2.Kết tạo chồi hoàng lan nuôi cấy mô 40 T T 3.2.3.Kết vươn chồi hoàng lan 43 T 4T 3.2.4.Kết tạo rễ chồi invitro 45 T 4T 3.2.4.1.Hiệu IBA đến rễ chồi invitro bổ sung vào môi trường dinh dưỡng 45 T T 3.2.4.2.Hiệu xử lý chồi invitro IBA trước cấy lại vào môi trường dinh dưỡng 46 T T 3.3.Sinh trưởng hoàng lan trồng thị xã Bình Long, tỉnh Bình Phước 47 4T T 3.3.1.Một số đặc điểm sinh thái nơi trồng hoàng lan 47 T T 3.3.1.1.Thành phần lý hóa đất 47 T 4T 3.3.1.2.Ánh sáng – Nhiệt độ nơi trồng 47 T T 3.3.2.Sự sinh trưởng hoàng lan 48 T 4T 3.3.2.1.Sự phát triển hệ rễ 49 T 4T 3.3.2.2.Sự tăng trưởng đường kính thân 49 T T 3.3.2.3.Sự tăng trưởng chiều cao trung bình 50 T T 3.3.2.4.Sự tăng trưởng số cành cấp I 52 T T 3.3.2.5.Sự tăng trưởng số 53 T T 3.3.2.6.Sự tăng trưởng diện tích trung bình/cây 54 T T KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 4T 4T 1.Kết luận 56 4T T 2.Kiến nghị 57 4T T TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 4T 4T PHỤ LỤC 62 4T T DANH LỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4D : 2,4-dichlorophenoxy acetic acid BA : 6-benzyl aminopurine C : Số cành cấp I D : Đường kính thân GA : Acid gibberellic R R H : Chiều cao IAA : Indole-3-acetic acid IBA : Indole 3-butyric acid L: Số lượng MS : Murashige and Skoog’s NAA : 1-naphthylacetic acid S : Diện tích TB : Trung bình WPM : Woody Plant Media MỞ ĐẦU 1.Đặt vấn đề Cây Hoàng lan (Cananga odorata (Lam.) Hook f & Thomson) hay gọi Ngọc lan tây, thuộc họ Na (Annonaceae), loài thực vật chứa tinh dầu phân bố Việt Nam, nước Đông Nam Á, số nước Châu Phi Châu Mỹ Hoa hoàng lan có chứa tinh dầu (ylangylang oil) ưa chuộng công nghiệp hương liệu Tinh dầu từ lâu sử dụng để điều chế nước hoa tiếng Chanel No5 Và nguyên liệu để sản xuất hầu hết loại nước P P hoa đắt tiền [18], dùng rộng rãi công nghiệp sản xuất nước hoa theo phong 7T cách phương Đông [48] Tinh dầu hoàng lan có mùi thơm hấp dẫn tạo hương vị đặc biệt nên 7T sử dụng công nghiệp chế biến thực phẩm đồ uống Ngoài ra, dùng làm thuốc chữa bệnh cao huyệt áp, chữa chứng nhịp tim nhanh, sốt rét, bệnh đường ruột, viêm gan … [18] Cây hoàng lan trồng có tiềm sinh lợi lớn Cây trồng năm tuổi bắt đầu hoa, đến – năm tuổi hoa nhiều chu kỳ khai thác đến 50 năm Mỗi cho khoảng 20kg hoa/năm Một kg tinh dầu hoàng lan có giá trị từ 81 – 97 đô la Mỹ [18] Trên trang web, lọ 10 ml tinh dầu Ylang Ylang giá khoảng 10 -20USA [49] Cây hoàng lan trồng với quy mô lớn nhiều nước : Philippinnes, Indonesia, quần đảo Camoros, Réunion, tỉnh Quảng Đông (Trung Quốc), đảo Madagasca , nước Châu Phi…, trở thành có tinh dầu đem lại nguồn lợi đáng kể Ở Indonesia, diện tích trồng hoàng lan lên đến 160.000 với sản lượng tinh dầu hàng năm khoảng 120 [18] Tại Việt Nam, Hoàng lan thường trồng rãi rác công viên, trường học, nhà dân để lấy bóng mát làm cảnh, chưa tập trung thành diện tích lớn Nước ta có điều kiện sinh thái phù hợp cho sinh trưởng, phát triển hoàng lan, hoàn toàn trồng với quy mô lớn, nhằm cải thiện thu nhập người dân Tuy nhiên, nghiên cứu giống, kỹ thuật gieo trồng, kỹ thuật thu hái chế biến hoàng lan chưa nghiên cứu Việt Nam Để góp phần đưa hoàng lan – có giá trị kinh tế cao – trồng rộng rãi Việt Nam, đề tài “Khảo sát tính thích nghi hoàng lan [Cananga odorata (Lam.) Hook f et Thomson] tạo từ kỹ thuật nhân giống khác Thị xã Bình Long, tỉnh Bình Phước” tiến hành 2.Mục tiêu nghiên cứu - Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính hoàng lan biện pháp nuôi cấy invitro giâm cành - Khảo sát tính thích nghi Hoàng lan đất tỉnh Bình Phước - So sánh sinh trưởng giống tạo từ hạt cành giâm sau giai đoạn vườn ươm 3.Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống vô tính hoàng lan giâm cành nuôi cấy invitro: o Giâm cành hoàng lan : Sử dụng hóa chất kích thích IBA thuốc thương phẩm o Nuôi cấy invitro hoàng lan : Khảo sát khử trùng chồi, tạo chồi, vươn chồi tạo rễ - Theo dõi sinh trưởng hoàng lan tạo từ hạt cành giâm trồng huyện Bình Long, tỉnh Bình Phước 4.Phạm vi nghiên cứu - Nghiên cứu nồng độ IBA thích hợp cho hình thành rễ đoạn cành đoạn thân hoàng lan - Nghiên cứu kỹ thuật nuôi cấy invitro hoàng lan như: nồng độ chất khử trùng, nồng độ chất điều hòa sinh trưởng (BA, NAA) tạo chồi, nồng độ GA3 vươn chồi, nồng độ IBA tạo rễ - So sánh sinh trưởng hoàng lan tạo từ hạt cành giâm trồng huyện Bình long, tỉnh Bình Phước tháng 5.Thời gian tiến hành thí nghiệm Từ tháng 06/2009 đến tháng 9/2010 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1.Một số đặc điểm sinh học, sinh thái Hoàng lan Cây hoàng lan có vị trí phân loại sau: Kingdom (Giới) : Plantae 0T 0T Subkingdom (Phân giới) : Tracheobionta 0T T Superdivision (Siêu ngành) : Spermatophyta 0T Division (Ngành) : Magnoliophyta 0T T 0T Class (Lớp) : Magnoliopsida T 0T Subclass (Phân lớp) : Magnoliidae 0T Order (Bộ) : Magnoliales T 0T 0T Family (Họ) : Annonaceae 0T 0T Genus (Giống /Chi) : Cananga (DC.) Hook f et Thomson Species (Loài) : Cananga odorata (Lam.) Hook f et Thomson [50] Bảng Tên gọi hoàng lan quốc gia giới STT Quốc gia Tên địa phương T 3T T Cambodia chhke sreng [52] Chuuk pwanang, pwuur, pwalang [51] Cook Islands, Niue, moto‘oi, mata‘oi, mato‘oi [51] Tahiti English ylang ylang, perfume tree, cananga [51] Fiji makosoi, mokohoi, makasui, mokosoi [51] French canang odorant [51] Guam, CNMI ilang-ilang, alang-ilang [51 Hawai‘i Lanalana [51] Indonesia kenanga (Javanese) [51] 10 Kosrae ilahnglahng, ilanlang [51] 11 Malaysia Chenanga [52] 12 Marquesas– Nukuhiva, Niue Motoi [51] T T T T T T T T T T T T 13 Marquesas–Fatuhiva Mutuis [51] 14 Marshall Islands Ilanilan [51] 15 Nauru derangerang, derangirang [51] 16 Palau chiráng, irang [51] 17 Philipine cananga, ilang-ilang [52] 18 Pohnpei ilangilang, lengileng, alangilang, pur-n-wai, pwurenwai, seir en wai [51] 19 Puluwat Atoll Pwalang [51] 20 Samoa moso‘oi [51] 21 Society Islands moto‘I [51] 22 Solomon Kwara‘ae sa‘o [51] 23 Tonga T T T T T T T T T T T Islands: Mohokoi [51] Đặc điểm sinh học : Cây gỗ cao 10 - 15m, đường kính 30 - 50cm Thân tròn, cành thường 3T đâm ngang, dễ gãy Vỏ màu xám tro nhạt, nhẵn Gỗ màu vàng nhạt, mềm Tán hình trụ Lá đơn mọc cách, xếp thành hai hàng cành nhỏ, dể rụng Phiến mềm, mỏng; hình trái xoan hay hình trứng, lệch, gợn sóng; gốc tròn, đầu thuôn; hai mặt nhẵn dài 15 - 20cm Cây hoàng lan hoa quanh năm Hoa có màu vàng hay vàng lục, mọc thành cụm 3T nhánh ngắn lá; cánh hoa dài, hình tam giác Cánh tràng xếp thành hai vòng, dài lượn sóng, đầu thuôn hẹp, thường cuộn phía Nhị đực nhiều, bao phấn hướng trong, trung đới hình nón, noãn - 10, vòi dài, dầu nhụy có lông tơ Khi non, hoa có màu xanh, chín hoa có màu vàng Quả non màu xanh, hình trứng ngược, kích cỡ 15 – 25mm x – 10mm, nhẵn, lông, vỏ dày khoảng 2mm Mỗi có 10 -12 hạt, dẹt [1] T Hình Cây hoàng lan Giồng trôm – Bến Tre Đặc điểm sinh thái : Cây ưa sáng, mọc nhanh, phát triển mạnh mẽ miền cận nhiệt đới, nơi 3T T có lượng mưa hàng năm khoảng (650-)1500-2000(-4000) mm nhiệt độ trung bình hàng năm từ 21-270C Ở Java, hoàng lan sinh trưởng thành cụm rừng mưa ẩm thường xanh rừng tếch Còn P P New Guinea, mọc độ cao 850m [52] Phân bố : Cây có nguồn gốc Đông Nam Á, du nhập vào Trung Quốc, Ấn Độ, Châu Phi 3T 3T Châu Mỹ [52] T Thành phần hóa học Tinh dầu Hoàng lan chứa 0,3 – 25% [2], bao gồm: ethyl anthranilate (pT Cresyl methyl ether), benzyl acetate, methyl benzoate, methyl salicylate, cinnamyl acetate, -linalool, , geranyl acetate, farnesyl acetate and muurolol, p-cresol, eugenol, isoeugenol, benzyl salicylate T [53] Giá trị : Gỗ hoàng lan nhẹ, màu vàng nhạt, thớ mịn, dùng để tiện khắc, làm văn phòng phẩm, dễ gia công chế biến, chịu đựng, dễ nứt nẻ, mối mọt, chủ yếu làm củi Hoa thơm chứa tinh dầu (ylang –ylang oil), dùng để sản xuất nước hoa theo phong cách phương Đông, đặc biệt nước hoa tiếng Chanel No5 Mùi hoàng lan pha trôn tốt với mùi cỏ, hoa P P gỗ, để dùng công nghiệp chế biến thực phẩm đồ uống Tinh dầu hoàng lan tạo cho thể cảm giác thoải mái, tâm trí thản coi loại thuốc làm dịu mệt mỏi thể Tinh dầu giúp điều tiết chất bã nhờn da, làm giảm huyết áp, làm giảm căng cơ, có tác dụng kích thích phấn tình dục, dùng chữa chứng nhịp tim nhanh, bệnh sốt rét, bệnh đường ruột, viêm gan…[18] 1.2.Tình hình nghiên cứu hoàng lan giới Việt Nam 1.2.1.Trên giới Thông tin Hoàng lan biết từ John Ray (1628-1705), nhà phân loại học người Anh, mô tả với tên Arbor saguisen Hoàng lan ghi chép lại nhiều nhà khoa học khác với tên Borga cananga, Unona odorata Theo Oyen cộng (1999) hoàng lan ưa điều kiện nóng ẩm khu vực thấp vùng nhiệt đới, với nhiệt độ trung bình năm 21 – 27oC, lượng mưa hàng năm khoảng 1500 – P P 2000mm Cây sinh trưởng tốt vùng đất màu mỡ, đất nham thạch, quang đãng, nhiều ánh sáng, đất chua đến kiềm (pH : 4,5 – 8) Manner Elevitch (2006) miêu tả đặc điểm hình thái, phân bố, công dụng Hoàng lan Cây hoàng lan sinh trưởng nhanh gặp điều kiện thuận lợi đạt 2m năm Cây thường phân bố vùng đất thấp rừng tái sinh có độ cao 800 – 1200m so với mực nước biển Những vùng thường có lượng mưa lớn bình quân 700 – 5000mm/năm có nhiều ánh sáng Độ pH thích hợp cho thường trung tính ngả acid yếu Đất nhiễm mặn với nộng độ muối cao không phù hợp cho trồng hoàng lan Cây chịu nhiệt độ thấp từ 10 – 18oC, P P nhiệt độ cao 28 – 35oC Nhiệt độ thích hợp trung bình cho sinh trưởng hoàng lan 18 – P P 28oC Các loại đất cát, sét chứa nhiều mùn đất sét, hay đỏ bazan có nguồn gốc từ nham thạch, P P đất cát màu mỡ có nhiều mùn thích hợp để trồng hoàng lan Cây 1,5 – năm tuổi bắt đầu hoa, trưởng thành cho 20 – 100kg hoa năm Hoàng lan nhân giống chủ yếu hạt Hạt gieo túi bầu đất đến có – 10 đem trồng đất Mật độ trồng hoàng lan thường x 6m [57] Tuy nhiên, đảo Pohnpei thuộc liên bang Micronesia (đảo quốc Thái Bình Dương) người ta trồng hoàng lan với mật độ x 4m [18] Hoang cộng (1986) thuộc Đại học Philippines nghiên cứu nhân giống ilang-ilang [Cananga odorata (Lamk.) Hook.f Thomson] hạt giâm cành Kết nghiên cứu nảy mầm cho thấy, ngâm hạt nước ấm 60oC 24 cách xử lý tốt nhất, cho tỷ lệ P P nảy mầm cao (92%) Nhân giống giâm cành thành công lấy mẫu từ Cành giâm lấy từ cho tỷ lệ sống cao (98%) tỷ lệ rễ cao (92%), số rễ nhiều hơn, rễ dài so với cành giâm vị trí thấp Mặc dù NAA (naphthalene acetic acid), IBA (indole butyric acid) Hormex (chất kích thích rễ thương phẩm) cho thấy ảnh hưởng xấu đến tỷ lệ sống cành giâm, IBA có hiệu tác động nhiều đến hình thành rễ [60] Molabayabas cộng (1995), thuộc trường đại học Philipines, thực nuôi cấy invitro ilang-ilang từ chồi Mẫu cấy rửa, sau vô trùng NaOCl với nồng độ 0,3% Các nghiệm thức cho môi trường thích hợp cho hình thành mô sẹo, thực môi trường MS WPM chứa – 2mg/l BAP kết hợp 0,1 – 0,5mg/l NAA Sự biệt hóa số lượng lớn chồi mầm ghi nhận môi trường MS chứa 2mg/l BAP với NAA từ 0,1 – 0,2mg/l Mầm chồi biệt hóa sinh trưởng bình thường cấy môi trường WPM có BAP riêng rẽ kết hợp với 0,1mg/l 0,5 mg/l NAA; môi trường MS tạo dạng không bình thường Trong môi trường WPM MS có bổ sung kinetin NAA riêng rẽ có tác dụng lên hình thành mô sẹo chồi Tuy nhiên, bổ sung 15% nước dừa vào môi trường WPM BAP từ – 10mg/l, ghi nhận thúc đẩy tạo sẹo, làm giảm hình thành chồi Chồi biệt hóa sinh trưởng bình thường cấy chuyền sang môi trường WPM có 2mg/l BAP, đó, môi trường MS có chất điều hòa sinh trưởng, chồi hình thành nên kết cấu giống protocorn bề mặt Môi trường WPM có hiệu môi trường MS cảm ứng tạo rễ Sự hình thành nhiều rễ tốt môi trường WPM có 0,5mg/l IBA Cây tái sinh từ mô sẹo chồi sinh trưởng điều kiện bình thường [60] Năm 2008, số nhà khoa học Philippine, Lindain, Reglos, Guzman Cedo, thực nuôi cấy invitro hoàng lan, đồng thời, khảo sát lượng sản phẩm tinh dầu mô sẹo tạo từ cánh hoa Tác giả sử dụng nguồn vật liệu khác (chồi ngọn, chồi nách, non, noãn cánh hoa) nhằm khảo sát khả biệt hóa chồi thông qua mô sẹo ( đường gián tiếp) Khử trùng mẫu cấy chất khử trùng : alcohol 70%, thuốc diệt nấm NaOCl Nhúng nhanh mẫu cấy vào alcohol 70%, thời gian tối đa 30s, sau chuyển qua lắc thuốc diệt nấm 20 phút với nồng độ khác nguồn vật liệu khác Cuối sử dụng NaOCl với nồng độ khác khoảng thời gian 10 phút Cảm ứng tạo mô sẹo mẫu cấy vô trùng môi trường có BA 2mg/l kết hợp với NAA 0,2 mg/l, cho tỉ lệ mô sẹo tốt mô sẹo có khả cho chồi Tuy nhiên với loại vật liệu khác màu sắc mô sẹo, tốc độ tăng trưởng mô sẹo có khác Mô sẹo tạo từ cánh hoa cho muộn so với nguồn vật liệu khác Mô sẹo từ bầu nhụy cho tăng trưởng nhanh nhất, mô sẹo từ chồi chồi nách chậm Mầm chồi tạo từ mô sẹo chồi ngọn, chồi nách sau 15 – 16 tuần cấy chuyển môi trường MS có 0,2mg/l NAA +2mg/l BAP Các mầm vươn cao môi trường WPM có 2mg/l BAP Trong khảo sát ảnh hưởng môi trường lên tạo mô sẹo biệt hóa chồi WPM tạo ưu ti lệ hóa nâu thấp, tỉ lệ tạo chồi cao, tỉ lệ bị thủy tinh hóa thấp, điều nồng độ Nitrate WPM thấp MS Tái sinh rễ tạo môi trường ½ WPM có 0,5mg/l IBA [56] 1.2.2.Ở Việt Nam Một số tài liệu miêu tả hình thái, đặc điểm phân bố, đặc điểm sinh học hoàng lan Phạm Hoàng Hộ, Võ Văn Chi, Trần Hợp mang tính đại cương Việc nghiên cứu nhân giống khảo sát sinh trưởng hoàng lan Nguyễn Thị Minh Nguyệt (2002) khảo sát trình phát triển, già chín nảy mầm Hoàng lan [6] Trương Mai Hồng cộng (2004) nghiên cứu phát triển già chin hạt hoàng lan (Cananga odorata (Lamk.) Hook.f et Thoms) từ hoàng lan 10 tuổi, trồng trường Đại học Nông lâm Tp Hồ Chí Minh, cho biết : Hạt hoàng lan loại hạt tỏ khó nảy mầm, hạt có miên trạng đáng kể Khi thu hoạch hạt từ già chín (84 ngày sau hoa nở) gieo giấy thấm có 1% hạt nảy mầm; thu hạt từ chín nâu đen (98 ngày sau hoa nở, ẩm độ hạt 25%) gieo giấy thấm tỷ lệ nảy mầm đạt 17% Khi rút khô độ ẩm hạt 10%, 7,4% 4,7% tỷ lệ nảy mầm hạt tăng tương ứng 26%, 31% 51% Khi phơi nắng hạt ngày tỷ lệ nảy mầm 27% Kết nghiên cứu cho thấy hạt hoàng lan chất tồn trữ thống (ưa khô).[19] Phạm Văn Ngọt cộng (2009) thực nghiên cứu khả nảy mầm sinh trưởng hoàng lan trồng huyện Giồng Trôm - Bến Tre, cho thấy, hạt hoàng lan ngâm dung dịch GA3 (0,3 – 0,7ppm) cho tỷ lệ nẩy mầm 47% cao so với đối chứng có 42,67% Sinh trưởng giai đoạn vườn ươm chế độ bón phân N,P,K khác nhau, ghi nhận tỷ lệ sống hoàng lan sau tháng nghiệm thức bón nitơ phosphor 100%, nghiệm thức bón kali nồng độ 1,5% 77.8%, nồng độ 2% 60% Sinh trưởng nồng độ nitơ khác tốt so với đối chứng, tốt nồng độ 2% Ở nồng độ 3% 4% P O , sinh trưởng tốt nghiệm thức lại Bón phân kali R R R R tỏ không hiệu sinh trưởng Quan sát sinh trưởng hoàng lan trồng huyện Giồng Trôm - Bến Tre, cho thấy có – ươm túi bầu sau năm trồng có chiều cao 221,77 – 250,67cm, đường kính thân đạt 4,90 – 6,29cm Cây hoàng lan trồng loại sinh trưởng tốt trồng xen với chuối vườn dừa Hoàng lan trồng xen vườn dừa giai đoạn năm có sinh trưởng Sau năm tiến hành cắt ngọn, hoàng lan trồng loại sinh trưởng tốt nhất, có đường kính thân từ 9,24 – 9,54cm Những trồng vườn dừa có đường kính thân từ 8,22 – 8,62cm không thua hoàng lan trồng xen với chuối Sau 1,5 năm trồng, hoàng lan bắt đầu hoa [18] 1.3.Nghiên cứu giâm cành Mọi tế bào thực vật sống có khả tái tạo lại hoàn chỉnh Khả phụ thuộc vào hai đặc tính tế bào thực vật tính toàn thể (totipotency) phản biệt hóa (dedifferentiation) Trong nhân giống giâm cành, cần điều khiển hình thành rễ (rễ bất định), chồi có sẵn Các yếu tố có ảnh hưởng tới trình : tình trạng sinh lý mẹ, tuổi cành giâm, vị trí cành giâm (chồi ngọn, chồi bên), điều kiện môi trường (nước, nhiệt độ, ánh sáng …) Cành mẹ mang dưỡng chất (các glucids, khoáng chất…) ảnh hưởng đến rễ cành giâm Cành giâm lấy giai đoạn trẻ dễ tái sinh pha sinh trưởng già Từ gốc đến chồi hay cành có phân bố thành phần hóa học khác nhau, nên phản ứng rễ khác Để tránh cho cành mẹ bị stress nước, nên lấy hom vào buổi sáng trạng thái trương nước Một số chất điều hoà sinh trưởng tỏ có ảnh hưởng tích cực đến phát sinh rễ bất định Trong số đó, auxin có tác dụng đến rễ cành giâm - Auxin: Vào năm 30 sau đó, người ta phát chất auxin, hợp chất có tác dụng kích thích sinh trưởng thân, thúc đẩy hình thành rễ, như: o Acid indol acetic (IAA) auxin có chất tự nhiên, có tác dụng thúc đẩy hình thành rễ bất định [43][44][45] o Acid indol butyric (IBA) acid naphtyl acetic (NAA) auxin tổng hợp có tác dụng kích thích rễ cành giâm mạnh IAA [42] [46] Auxin có vai trò tích cực rễ bất định xác định phát động tế bào phụ thuộc vào lượng auxin nội sinh auxin xử lý ngoại sinh [37] Ứng dụng chất điều hoà sinh trưởng thực vật giâm cành : Để xúc tiến hình thành rễ bất định, việc xử lý chất điều hoà sinh trưởng cần thiết Các nhóm chất auxin có tác dụng kích thích rễ rõ rệt Xử lý hỗn hợp chất rễ tỏ có tác dung cao xử lý riêng rẽ Thí dụ, hỗn hợp IBA α-NAA có tỷ lệ 1/1 tỏ có hiệu tạo rễ rộng rãi cho nhiều loài cao so với việc sử dụng riêng rẽ chất [34] 1.4.Nghiên cứu nuôi cấy invitro Chồi sau vô trùng, nuôi cấy môi trường thích hợp, phát triển thành hay nhiều chồi Sau đó, chồi tiếp tục phát triển vươn cao, rễ trở thành hoàn chỉnh Cây chuyển đất để sinh trưởng phát triển bình thường [12] Theo Lindain cộng (2008) nuôi cấy in-vitro Ilang-Ilang để xác định phản ứng mẫu cấy khác (chồi ngọn, chồi nách, non bầu noãn cánh hoa) với loại môi trường MS (Murashige Skoog), WPM (Woody Plant Medium) Mô sẹo từ chồi ngọn, chồi nách non có khả biệt hóa tạo chồi Với hai nguồn vật liệu lại không cho chồi điều kiện nuôi cấy Điều chứng tỏ nguồn gốc vật liệu đóng vai trò quan trọng tái sinh [56] Một số chất điều hòa sinh trưởng thường dùng nuôi cấy invitro Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật thành phần môi trường có tính định xác định đường phát triển tế bào thực vật Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật phổ biến hormone thực vật hay chất tổng hợp có chức tương tự chúng Các nhóm chất điều hòa sinh trưởng thực vật sử dụng nuôi cấy, là: Auxin : Hoạt hoá phân bào, sinh trưởng kéo dài, cần cho tạo mạch dẫn rễ.[8] Tất - trồng tổng hợp auxin tuỳ theo giai đoạn phát triển chúng Auxins tự nhiên quan trọng IAA (indole-3-acetic acid), sử dụng hạn chế dễ bị phân hủy nhiệt ánh sáng Một số loại auxin tổng hợp khác như: 2,4D (2,4dichlorophenoxy acetic acid), IBA (Indole 3-butyric acid), NAA (1-naphthylacetic acid), … Cytokinin : Kích thích mạnh lên phân chia tế bào với điều kiện có diện auxin - Cytokinin giúp gia tăng kích thước tế bào sinh tổng hợp protein, ngăn cản lão hoá mô, thúc đẩy hình thành chồi non, lại ức chế tạo rễ [17] Sự sinh tổng hợp cytokinin xảy vùng khác nhau, đặc biệt nơi có phân chia tế bào mạnh (ở thân rễ) Nó diện hầu hết mô, đặc biệt hạt, trái rễ, nhiên rễ nơi tổng hợp nhiều [12] - Gibberellin : Kích thích phân chia tế bào, mô vỏ biểu bì Nhóm chất kích thích kéo dài lóng, vùa kéo dài, vùa phân chia tế bào thân Gibberellin liều cao (hay phối hợp với cytokinin) kích thích mạnh tăng trưởng lá.[ 8] 1.5.Đặc điểm tự nhiên tỉnh Bình Phước Bình Phước tỉnh miền núi phía Tây vùng Đông Nam Bộ, phía Đông giáp tỉnh 8T Lâm Đồng Đồng Nai, phía Tây giáp tỉnh Tây Ninh Campuchia, phía Nam giáp tỉnh Bình Dương phía Bắc tỉnh Đắk Lắk Campuchia Thí nghiệm khảo sát tính thích nghi sinh trưởng tạo từ hạt giâm cành 8T thực Bình Long Địa danh thị xã thuộc tỉnh Bình Phước, cách Đồng Xoài khoảng 40km, phía đông Nơi mang đặc điểm tự nhiên khí hậu tỉnh Bình Phước 1.5.1.Đặc điểm tự nhiên Địa hình vùng lãnh thổ Bình Phước cao nguyên phía Bắc Đông Bắc, dạng địa hình đồi 8T núi, thấp dần phía Tây Tây Nam Tỉnh Bình Phước có tổng diện tích tự nhiên 6.855,99 km2, có nhóm đất với 13 loại 8T đất Đất có chất lượng cao trở lên (đất đen, đất đỏ bazan, đất phù sa) chiếm 61,13% tổng diện tích tự 8T 8T nhiên tỉnh, đất chất lượng trung bình chiếm 36,90% Là tỉnh có chất lượng đất tốt so với nước điều kiện quan trọng việc phát triển sản xuất nông nghiệp tỉnh 1.5.2.Đặc điểm khí hậu Tỉnh Bình Phước nằm vùng mang đặc trưng khí hậu nhiệt đới cận xích đạo gió mùa, có 8T mùa rõ rệt: mùa mưa mùa khô Nhiệt độ bình quân năm cao ổn định từ 25,8 - 26,2oC Nhiệt độ bình quân thấp 8T P P Hình Bản đồ hành tỉnh Bình Phước 21,5 – 22oC Nhiệt độ bình quân cao từ 31,7 - 32,2oC Nhìn chung thay đổi nhiệt độ P P P P qua tháng không lớn, song chênh lệch nhiệt độ ngày đêm lớn, khoảng – 9oC P P vào tháng mùa khô Nhiệt độ cao vào tháng 3,4,5 (từ 37-37,2oC) thấp P P vào tháng 12 19oC P P Nằm vùng dồi nắng Tổng số nắng năm từ 2400 - 2500 Số nắng 8T bình quân ngày từ 6,2 - 6,6 Thời gian nắng nhiều vào tháng 1,2,3,4 thời gian nắng vào tháng 7,8,9 Lượng mưa bình quân hàng năm biến động từ 2045 - 2325 mm Mùa mưa diễn từ tháng 8T 11, chiếm 85-90% tổng lượng mưa năm, tháng có lượng mưa lớn 376mm (tháng 7) Mùa khô từ cuối tháng 11 đến đầu tháng năm sau, lượng mưa chiếm 10 - 15% tổng lượng mưa năm, tháng có lượng mưa tháng 2,3 Lượng bốc hàng năm cao từ 1113 - 1447mm Thời gian kéo dài trình bốc lớn vào tháng 2,3,4 Do chế độ mưa theo mùa nên biên độ giao động độ ẩm không khí mùa mưa mùa 8T khô lớn Độ ẩm trung bình hàng năm từ 80,8 - 81,4% Bình quân năm thấp 45,6 - 53,2%, tháng có độ ẩm cao 88,2%, tháng có độ ẩm thấp 16% Các điều kiện tự nhiên khí hậu tỉnh Bình Phước phù hợp với đặc điểm sinh thái 8T hoàng lan Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1.Vật liệu 2.1.1.Vật liệu thí nghiệm giâm cành Cành giâm (hom) cành tay (cành cấp 1) thân hoàng lan lấy từ – tháng tuổi đặt vườn trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh Giá thể để cắm hom cát Nhà giâm hom che sáng lưới đen, cường độ sáng 40 – 50% Trên luống giâm có khung chụp nilon trắng để giữ ẩm Các chất điều hoà sinh trưởng dùng là: IBA, IAA, 2.4D, thuốc kích thích rễ thương phẩm: OXYBERON Dust 0.5 (Nhật) N3M (Việt Nam) Và số dụng cụ khác : kéo cắt cành, dụng cụ chăm sóc vườn ươm, … 2.1.2.Vật liệu thí nghiệm nuôi cấy invitro Vật liệu dùng nuôi cấy mô Hoàng lan : Chồi chồi nách lấy từ năm tuổi mang từ huyện Giồng Trôm – Bến Tre, đặt vườn ươm Phân viện Nghiên cứu Khoa học Lâm nghiệp Nam Bộ Các hóa chất sử dụng thí nghiệm nuôi cấy chồi hoàng lan như: hóa chất khử trùng (Javel, HgCl ), chất điều hòa sinh trưởng (BA, IBA, NAA, GA3), hóa chất để pha R R môi trường nuôi cấy (xuất xứ từ hãng hóa chất như: Prolab, Himedia, Merck, Sigma…) Và số dụng cụ khác: tủ cấy, ống nghiệm, bình tam giác, Môi trường dùng thí nghiệm WPM (Wood Plant Media), chuẩn pH từ 5,7 – 5,8 Địa điểm thực hiện: phòng thí nghiệm Phân viện Nghiên cứu Khoa học Lâm nghiệp Nam Bộ 2.1.3.Vật liệu thí nghiệm khảo sát sinh trưởng Cây trồng để theo dõi sinh trưởng nảy mầm từ hạt (cây từ hạt) tạo từ giâm cành (cây giâm cành) Cây giâm cành cành giâm rễ trồng vào túi bầu đất, tưới nước lần/ ngày Cây tháng mang trồng đất, tiếp tục khảo sát sinh trưởng, để đánh giá tính thích nghi Tiến hành gieo hạt hoàng lan : Hạt lấy từ chín huyện Giồng Trôm – Bến Tre Các hạt chọn đem gieo hạt chắc, không bị sâu bệnh Trong mầm phôi hạt Hoàng lan có nhiều dầu nên sau thu hoạch, loại bỏ hạt lép, hong khô nắng nhẹ nơi mát mẻ đem gieo ngay.[16] Đặt hạt vào đĩa Petri có giấy thấm tưới ẩm, – ngày tưới nước thay giấy thấm hạt nẩy mầm Sau đó, chuyển hạt nảy mầm sang túi bầu đựng đất, đục lỗ xung quanh đáy, tưới nước lần/ngày vào buổi sáng chiều Cây mọc – tháng, đem trồng đất để khảo sát sinh trưởng đối chứng với có từ giâm cành Thời gian tiến Hình Gieo hạt hoàng lan hành: tháng 05/2009 Địa điểm thực hiện: vườn ươm Phân viện Nghiên cứu Khoa học Lâm nghiệp Nam Bộ 2.2.Phương pháp tiến hành 2.2.1.Nhân giống vô tính hoàng lan 2.2.1.1.Phương pháp giâm cành hoàng lan 2.2.1.1.1.Tiến hành Mỗi cành tay thân cắt thành đoạn: đoạn (đoạn 1), đoạn (đoạn 2), đoạn gốc cành (đoạn 3) Hom dài khoảng – 7cm, cắt vát gốc Mỗi hom có bị cắt bỏ 1/2 – 1/3 để giảm diện tích thoát nước Hom cắt xong nhúng vào chậu nước tránh nước làm giảm sức sống hom Tiếp tục nhúng đồng thời cành giâm vào dung dịch chất điều hòa sinh trưởng, cho dung dịch ngập đến ¼ đoạn cành Thời gian ngâm cành giâm dung dịch 10 phút Sau đó, lấy đồng thời hom cắm vào giá thể Sau cắm hom, phun nước giữ ẩm cho hom thể Hàng ngày tưới ẩm lần Chất điều hoà sinh trưởng dùng nghiệm thức rễ IBA, pha mức từ 50 – 1000ppm Bên cạnh đó, tiến hành nghiệm thức rễ có phối hợp IBA chất kích thích sinh trưởng khác Đồng thời, thực nghiệm thức đối chứng nước lã Các thuốc kích thích rễ pha theo hướng dẫn sử dụng nhà sản xuất in vỏ bao bì [...]... Văn Chi, Trần Hợp mang tính đại cương Việc nghi n cứu nhân giống và khảo sát sinh trưởng cây hoàng lan hiện còn khá mới Nguyễn Thị Minh Nguyệt (200 2) đã khảo sát quá trình phát triển, già chín và nảy mầm ở Hoàng lan [6] Trương Mai Hồng và cộng sự (200 4) đã nghi n cứu sự phát triển và già chin của hạt hoàng lan (Cananga odorata (Lamk .) Hook. f et Thoms) từ cây hoàng lan 10 tuổi, được trồng ở trường Đại... các thí nghi m là WPM (Wood Plant Media), được chuẩn pH về từ 5,7 – 5,8 Địa điểm thực hiện: phòng thí nghi m Phân viện Nghi n cứu Khoa học Lâm nghi p Nam Bộ 2.1.3.Vật liệu trong thí nghi m khảo sát sinh trưởng Cây con được trồng để theo dõi sinh trưởng là những cây đã nảy mầm từ hạt (cây từ hạt) và cây được tạo ra từ giâm cành (cây giâm cành) Cây giâm cành là các cành giâm đã ra rễ được trồng vào các. .. giáp tỉnh Bình Dương và phía Bắc tỉnh Đắk Lắk và Campuchia Thí nghi m khảo sát tính thích nghi và sinh trưởng của các cây tạo từ hạt và giâm cành được 8T thực hiện tại Bình Long Địa danh này là một trong những thị xã thuộc tỉnh Bình Phước, cách Đồng Xoài khoảng 40km, về phía đông Nơi này mang những đặc điểm tự nhiên và khí hậu của tỉnh Bình Phước 1.5.1.Đặc điểm tự nhiên Địa hình vùng lãnh thổ Bình Phước. .. và cộng sự (198 6) thuộc Đại học Philippines đã nghi n cứu nhân giống ilang-ilang [Cananga odorata (Lamk .) Hook. f và Thomson] bằng hạt và giâm cành Kết quả khi nghi n cứu nảy mầm cho thấy, ngâm hạt trong nước ấm 60oC trong 24 giờ là cách xử lý tốt nhất, và cho tỷ lệ P P nảy mầm khá cao (92 %) Nhân giống bằng giâm cành chỉ thành công khi lấy mẫu từ những cây con Cành giâm lấy từ ngọn của cây con cho tỷ... bầu đất, được tưới nước 2 lần/ ngày Cây ra ngôi được 3 tháng được mang trồng ra đất, tiếp tục khảo sát sinh trưởng, để đánh giá tính thích nghi của những cây này Tiến hành gieo hạt hoàng lan : Hạt được lấy từ các quả chín tại huyện Giồng Trôm – Bến Tre Các hạt được chọn đem gieo là những hạt chắc, không bị sâu bệnh Trong lá mầm và phôi hạt Hoàng lan có nhiều dầu nên sau khi thu hoạch, loại bỏ các hạt... 16% Các điều kiện tự nhiên và khí hậu của tỉnh Bình Phước phù hợp với đặc điểm sinh thái của cây 8T hoàng lan Chương 2 PHƯƠNG PHÁP NGHI N CỨU 2.1.Vật liệu 2.1.1.Vật liệu trong thí nghi m giâm cành Cành giâm (hom) là các cành tay (cành cấp 1) và thân hoàng lan được lấy từ các cây 5 – 6 tháng tuổi đặt trong vườn trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh Giá thể để cắm hom là cát sạch Nhà giâm hom được. .. Phân viện Nghi n cứu Khoa học Lâm nghi p Nam Bộ Các hóa chất được sử dụng trong các thí nghi m nuôi cấy chồi hoàng lan như: các hóa chất khử trùng (Javel, HgCl 2 ), các chất điều hòa sinh trưởng (BA, IBA, NAA, GA 3), các hóa chất để pha R R môi trường nuôi cấy (xuất xứ từ các hãng hóa chất như: Prolab, Himedia, Merck, Sigma ) Và một số dụng cụ khác: tủ cấy, ống nghi m, bình tam giác, Môi trường được dùng... tiến hành cắt ngọn, các cây hoàng lan trồng thuần loại sinh trưởng tốt nhất, có đường kính thân cây từ 9,24 – 9,54cm Những cây trồng trong vườn dừa có đường kính thân cây từ 8,22 – 8,62cm không thua kém những cây hoàng lan trồng xen với chuối Sau 1,5 năm trồng, cây hoàng lan bắt đầu ra hoa [18] 1.3 .Nghi n cứu về giâm cành Mọi tế bào thực vật sống đều có khả năng tái tạo lại một cây hoàn chỉnh Khả năng... đoạn vườn ươm ở các chế độ bón phân N,P,K khác nhau, đã ghi nhận tỷ lệ sống của cây hoàng lan con sau 5 tháng ở các nghi m thức bón nitơ và phosphor là 100%, ở nghi m thức bón kali nồng độ 1,5% là 77.8%, nồng độ 2% là 60% Sinh trưởng của cây con ở các nồng độ nitơ khác nhau đều tốt hơn so với đối chứng, và tốt nhất ở nồng độ 2% Ở nồng độ 3% và 4% P 2 O 5 , cây sinh trưởng tốt hơn các nghi m thức còn... hợp để trồng hoàng lan Cây 1,5 – 2 năm tuổi thì bắt đầu ra hoa, mỗi cây trưởng thành có thể cho 20 – 100kg hoa trong 1 năm Hoàng lan được nhân giống chủ yếu bằng hạt Hạt được gieo trong các túi bầu đất đến khi có 6 – 10 lá thì đem trồng ra đất Mật độ trồng hoàng lan thường là 6 x 6m [57] Tuy nhiên, ở đảo Pohnpei thuộc liên bang Micronesia (đảo quốc ở Thái Bình Dương) người ta trồng hoàng lan với mật