BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI MAI THỊ NGOAN Mã sinh viên: 1101362 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TĂNG CƢỜNG HOẠT TÍNH ESTROGEN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM CỦA CAO SẮN DÂY CỦ TRÒN DI THỰC TẠI VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ HÀ NỘI – 2016 BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI MAI THỊ NGOAN Mã sinh viên: 1101362 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG TĂNG CƢỜNG HOẠT TÍNH ESTROGEN TRÊN ĐỘNG VẬT THỰC NGHIỆM CỦA CAO SẮN DÂY CỦ TRÒN DI THỰC TẠI VIỆT NAM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƢỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Đào Thị Vui DS Đặng Thị Vân Anh Nơi thực hiện: Bộ môn Dƣợc lực HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Với tất lòng kính trọng biết ơn sâu sắc xin gửi lời cảm ơn tới: PGS.TS Đào Thị Vui - Bộ môn Dược lực-Trường Đại học dược Hà Nội DS Đặng Thị Vân Anh - Trường Đại học Y khoa Vinh Những người cô trực tiếp hướng dẫn hoàn thành khóa luận Các cô dành nhiều thời gian tâm huyết tận tình bảo, quan tâm giúp đỡ hoàn thành khóa luận Các cô gương tác phong làm việc lối sống đạo đức cho noi theo Xin gửi lời cảm ơn đến cô Nguyễn Thu Hằng thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn Dược Lực trường Đại học Dược Hà Nội giúp đỡ, hướng dẫn điều kiện kỹ thuật để hoàn thành nghiên cứu thực nghiệm môn Nhân dịp nà in gửi lời cảm ơn đến an giám hiệu c ng toàn thể thầ cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội d tạo điều kiện thuận lợi cho thời gian học tập trường Cuối cùng, xin bày tỏ thương biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè bên tôi, ủng hộ ch dựa tinh thần gặp khó khăn học tập sống Do thời gian làm thực nghiệm kiến thức thân có hạn, khóa luận nà c n có nhiều thiếu sót Tôi mong nhận góp thầ cô, bạn bè để khóa luận hoàn thiện Hà Nội, ngày 12 tháng năm 2016 Sinh viên Mai Thị Ngoan MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ CHƢƠNG : TỔNG QUAN 1.1 Estrogen thiếu hụt estrogen 1.1.1 Estrogen 1.1.2 Sự thiếu hụt estrogen 1.2 Một số mô hình dược l nghiên cứu tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen 10 1.2.1 In vitro 11 1.2.2 In vivo 13 1.3 Tổng quan câ sắn dâ củ tr n 16 1.3.1 Tên gọi 16 1.3.2 Đặc điểm thực vật 17 1.3.3 Phân bố 17 1.3.4 Bộ phận dùng 17 1.3.5 Thành phần hóa học 18 1.3.6 Các nghiên cứu sắn dây củ tròn 18 CHƢƠNG : ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Đối tượng 23 2.1.1 Nguyên liệu 23 2.1.2 Liều sử dụng nghiên cứu 24 2.1.3 Động vật th nghiệm 24 2.1.4 ụng cụ, h ch t nghi n cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 25 2.2.1 Nội dung nghiên cứu 25 2.2.2 Phương pháp nghi n cứu 26 2.3 Xử l số liệu 32 CHƢƠNG : KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen sắn dâ củ tr n chuột cống non 33 3.1.1 Trên tăng trưởng tử cung 33 3.1.2 Trên tăng trưởng buồng trứng 35 3.1.3 Trên tăng trưởng âm đạo 37 3.2 Tác dụng estrogen sắn dâ củ tr n chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 40 3.2.1 Kiểm tra việc cắt buồng trứng 40 3.2.2 Tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen tăng trưởng tế bào biểu mô âm đạo 41 3.2.3 Tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen tăng trưởng khối lượng quan sinh dục phụ 47 3.2.4 Tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen nồng độ estradiol máu 53 3.3 àn luận 54 3.3.1 Về tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen cao sắn dây củ tròn chuột cống non 55 3.3.2 Về tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen cao sắn dây củ tròn chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 57 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 61 KẾT LUẬN 61 ĐỀ XUẤT 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BC Bạch cầu DMSO Dimethylsulfoxid ER Thụ thể estrogen (Estrogen receptor) ERT Liệu pháp thay estrogen (Estrogen replacement therapy) EtOH Ethanol HPG Trục đồi - tuyến yên - tuyến sinh dục (Hypothalamic - pituitary gonadal) KL Khối lượng MTT 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide NR Thụ thể nhân (Nuclear receptor) ONP O-nitrophenol ONPG O-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside PM Pueraria mirifica PRT Liệu pháp thay phytoestrogen (Phytoestrogen replacement therapy) SD Sinh dục SDCT Sắn dây củ tròn YES Mô hình sàng lọc estrogen tế bào nấm men tái tổ hợp (Yeast estrogen screening of recombinant yeast cells) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng tử cung chuột cống non 33 Bảng 3.2: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng buồng trứng chuột cống non 36 Bảng 3.3: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng âm đạo chuột cống non 38 Bảng 3.4: Ngà xuất tế bào sừng lô chuột thí nghiệm 42 Bảng 3.5: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn tăng trưởng tế bào biểu mô âm đạo chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 43 Bảng 3.6: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn phần trăm tế bào sừng âm đạo chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng .46 Bảng 3.7: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng tử cung chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 48 Bảng 3.8: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng âm đạo chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 52 Bảng 3.9: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên nồng độ estradiol máu chuột trưởng thành cắt buồng trứng sau 14 ngà điều trị 53 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Sự tha đổi nồng độ hormon chu kì kinh nguyệt Hình 1.2: Pueraria mirifica Airy Shaw & Suvat.; họ Đậu-Fabaceae 17 Hình 1.3: Cấu trúc hóa học (a) miroestrol, (b) genistein, (c) puerarin (d) estradiol 18 Hình 2.1: Cao bán thành phẩm Sắn dây củ tròn 23 Hình 2.2: Sơ đồ thiết kế nghiên cứu 26 Hình 2.3: Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng estrogen chuột cống non 28 Hình 2.4: Sơ đồ quy trình nghiên cứu tác dụng estrogen chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 31 Hình 3.1: Hình ảnh tử cung sau bóc tách chuột cống non 34 Hình 3.2: Kiểm tra dịch tiết âm đạo chuột cắt buồng trứng 41 Hình 3.4: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn tăng trưởng tế bào biểu mô âm đạo chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng .45 Hình 3.4: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn phần trăm tế bào sừng âm đạo chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 47 Hình 3.5: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trưởng khối lượng tử cung chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 49 Hình 3.6: Hình ảnh tử cung sau bóc tách chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 50 Hình 3.7: Ảnh hưởng cao sắn dây củ tròn lên nồng độ estradiol máu chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng 54 ĐẶT VẤN ĐỀ Estrogen hormon sinh dục tiết chủ yếu từ buồng trứng chu kì kinh nguyệt, đóng vai tr quan trọng phát triển nữ giới Estrogen làm xuất trì đặc tính nữ phát triển tầm vóc, dáng mềm mại, vai hẹp, hông nở, giọng nói trong, phát triển tử cung, vòi trứng, âm đạo, tuyến vú [3] Việc suy giảm nồng độ estrogen gây rối loạn nhiều quan thể rối loạn kinh nguyệt, rối loạn vận mạch, rối loạn tiết niệu- sinh dục, rối loạn tâm lý nhận thức [5] Do vậy, việc nghiên cứu để tìm thuốc có tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen có nghĩa quan trọng giúp cải thiện triệu chứng liên quan đến việc suy giảm nội tiết tố nữ giai đoạn tiền mãn kinh mãn kinh, cải thiện chức sinh dục đối tượng có suy giảm hoạt động chức buồng trứng Bên cạnh hợp chất estrogen tổng hợp, gần đâ việc tìm phytoestrogen hướng liệu pháp bổ sung estrogen Người ta phát loài giàu phytoestrogen, bật sắn dây củ tròn Sắn dây củ tròn tên khoa học Pueraria mirifica phân bố vùng cao phía bắc Thái Lan, Mianma Ở Thái Lan, sắn dây củ tr n sử dụng từ lâu với mục đích làm thuốc bổ làm đẹp cho phụ nữ Từ kỷ 20, nhà khoa học Thái Lan, Nhật Bản, Anh tiến hành nghiên cứu tác dụng thành phần cao chiết xuất từ củ sắn dây củ tròn Cao sắn dây củ tr n ác định có chứa phytoestrogen có tác dụng tương tự nội tiết tố nữ estrogen: kích thích phát triển tuyến ngực mô ngực giúp ngực nở săn chắc, chống lão hóa kích thích mọc tóc, chống bạc tóc sớm, giảm nếp nhăn tàn nhang; giúp vóc dáng eo thon, giảm ngu béo phì ung thư….[29] Với tác dụng tốt giá trị kinh tế cao, sắn dâ củ tr n trồng di thực Việt Nam Tu nhiên, loài câ thực vật khác, hoạt chất dược liệu phụ thuộc vào điều kiện khí hậu, dinh dưỡng, thổ nhưỡng, thời gian trồng, … Liệu câ trồng Việt Nam có giữ tác dụng địa, mức độ tác dụng nào? Để trả lời câu hỏi đặt ra, đề tài thực với mục tiêu: Đánh giá tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen chuột cống non sắn dây củ tròn Đánh giá tác dụng tăng cường hoạt tính estrogen chuột cống trưởng thành cắt buồng trứng sắn dây củ tròn 52 Bảng 3.8: Ảnh hƣởng cao sắn dây củ tròn lên tăng trƣởng khối lƣợng âm đạo chuột cống trƣởng thành cắt buồng trứng Lô chuột Liều dùng n Khối lƣợng % tăng Khối lƣợng % tăng âm đạo ƣớt so với lô âm đạo khô so với lô (mg/100 g cân chứng (mg/100 g chứng nặng) bệnh cân nặng) bệnh Chứng trắng 99,0 ± 5,6 42,1 ± 3,3 Chứng bệnh 61,0 ± 6,0 ## 11,9 ± 1,3## 100 mg/kg 10 99,0 ± 8,0** 62,3 29,3 ± 7,2** 146,2 200 mg/kg 10 109,0 ± 7,0** 78,7 20,2 ± 1,9** 69,8 mg/kg 107,0 ± 12,0** 75,4 22,3 ± 2,4 ** 87,4 SDCT nhập nội SDCT nhập nội Estradiol Số liệu biểu diễn dạng M ± SE; ## < 0,01 so sánh với chứng trắng-cắt buồng trứng giả; *, p