BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRỊNH VĂN LƯƠNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO PACLITAXEL VÀ ARTESUNAT SỬ DỤNG POLYME MANG THUỐC POLY(ACID LACTIC-CO-GLYCOLIC) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRỊNH VĂN LƯƠNG NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIỂU PHÂN NANO PACLITAXEL VÀ ARTESUNAT SỬ DỤNG POLYME MANG THUỐC POLY(ACID LACTIC-CO-GLYCOLIC) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ DƯỢC PHẨM VÀ BÀO CHẾ THUỐC MÃ SỐ: 60.72.04.02 Người hướng dẫn khoa học : PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Lời xin tỏ lòng biết ơn chân thành thầy: PGS.TS Nguyễn Ngọc Chiến Người thầy giàu kinh nghiệm đầy nhiệt huyết định hướng, giúp đỡ thực luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên thuộc Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc Gia, Bộ môn Công nghiệp Dược, Bộ môn Bào chế tạo điều kiện thiết bị, máy móc, hóa chất, giúp đỡ hoàn thành luận văn Tôi xin phép cảm ơn Ban giám Hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo Phòng ban khác, thầy cô cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội dạy bảo, tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành khóa học trường Cuối cùng, xin cảm ơn gia đình tôi, bạn bè động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Hà nội, ngày 30 tháng 03 năm 2016 Trịnh Văn Lương MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ Chương I: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan paclitaxel 1.1.1 Công thức cấu tạo 1.1.2 Tính chất hóa lý 1.1.3 Định tính 1.1.4 Định lượng 1.1.5 Dược động học 1.1.6 Cơ chế tác dụng 1.1.7 Chỉ định 1.1.8 Liều dùng, cách dùng 1.1.9 Chống định 1.1.10 Thận trọng 1.1.11 Tác dụng không mong muốn 1.1.12 Một số phác đồ điều trị ung thư 1.2 Tổng quan artesunat 1.2.1 Công thức 1.2.2 Tính chất hóa lý 1.2.3 Định tính 1.2.4 Định lượng 1.2.5 Dược động học 1.2.6 Cơ chế tác dụng artesunat tế bào ung thư 10 1.2.7 Một số thử nghiệm in vivo dẫn chất artemisinin kết hợp với thuốc điều trị ung thư 11 1.2.8 Tổng quan nghiên cứu chống ung thư paclitaxel phối hợp với dẫn xuất artemisinin 12 1.3 Vài nét sơ lược poly(lactic-co-glycolic) acid gọi tắt (PLGA) 14 1.3.1 Cấu trúc, tính chất PLGA 14 1.3.2 Những khó khăn sử dụng PLGA bào chế nano polyme 15 1.4 Công nghệ nano dược phẩm 16 1.4.1 Khái niệm 16 1.4.2 Phân loại nano polyme mang thuốc 16 1.4.3 Siêu vi nang, siêu vi cầu 17 1.4.4 Tính chất hệ tiểu phân nano số tiêu đánh giá hệ tiểu phân nano 19 1.4.5 Một số chế phẩm chứa tiểu phân nano thị trường 21 1.5 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano nước 22 1.5.1 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano paclitaxel, artemisinin dẫn chất nước sử dụng PLGA làm chất mang 22 1.5.2 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano nước 24 Chương II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng 27 2.1.1 Nguyên liệu 27 2.1.2 Thiết bị 28 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Phương pháp bào chế tiểu phân nano paclitaxel - artesunat 28 2.2.2 Phương pháp đánh giá đặc tính lý hóa tiểu phân nano PTX-ART29 Chương III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 33 3.1 Khảo sát phương pháp định lượng đồng thời hai dược chất 33 3.1.1 Lựa chọn cột sắc ký 33 3.1.2 Lựa chọn bước sóng phát 34 3.1.3 Lựa chọn tỷ lệ pha động 35 3.1.4 Thẩm định phương pháp định lượng mẫu bào chế chứa PTX-ART 36 3.1.5 Độ đặc hiệu 36 3.1.6 Độ tương thích hệ thống 39 3.2.3 Độ tuyến tính 39 3.2.4 Độ 41 3.2 Kết xây dựng công thức bào chế hệ tiểu phân nano chứa PTX ART 43 3.2.1 Ảnh hưởng yếu tố quy trình 44 3.2.2 Ảnh hưởng yếu tố công thức 47 3.3 Độ ổn định hệ tiểu phân nano điều kiện khắc nghiệt 53 3.3.1 Độ ổn định hệ tiểu phân nano điều kiện đông đá - rã đông53 3.3.2 Độ ổn định kích thước tiểu phân điều kiện ly tâm khác 54 Chương IV: BÀN LUẬN 56 4.1 Cơ sở phát triển dạng bào chế paclitaxel kết hợp artsunat dạng tiểu phân nano 56 4.2 Về phương pháp định lượng 57 4.3 Về yếu tố ảnh hưởng tới trình bào chế hệ tiểu phân nano PTX-ART 58 4.3.1 Ảnh hưởng thông số quy trình bào chế hệ tiểu phân nano 58 4.3.2 Ảnh hưởng yếu tố thuộc công thức bào chế 60 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADR Phản ứng có hại thuốc (Adverse Drug Reaction) ARS Artemisinin ART Artesunat CI Chỉ số phối hợp (Combination index) DC Dược chất DĐVN Dược điển Việt Nam DCM Dicloromethan DHA Dihydroartemisinin DSC Phân tích nhiệt vi sai (Differentiel scanning calorimetry) EE Hiệu tạo nang (Encapsulation efficiency) EMA Cơ quan quản lý thuốc châu Âu (European Medicines Agency) FDA Cục quản lý Thực phẩm Dược phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High-performance liquid chromatography) I.P Tiêm phúc mạc (Injection Peritoneal) KTTP Kích thước tiểu phân LC Khả nạp thuốc hệ (Loading capacity) P.O Theo đường uống PDI Chỉ số đa phân tán (Polydiversity index) PLGA Poly(lactic-co-glycolic) acid PTX Paclitaxel PVA Polyvinyl alcohol SEM Kính hiển vi điện tử quét (Scanning electron microscopy) TB Trung bình TCNSX Tiêu chuẩn nhà sản xuất TEM Hiển vi điện từ truyền qua (Transmission electron microscopy) RSD Độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Một số kết thử nghiệm in vivo dẫn chất artemisinin 11 kết hợp với thuốc điều trị ung thư Bảng 1.2: Một số chế phẩm chứa tiểu phân nano lưu hành thị trường 21 Bảng 2.1: Danh mục hóa chất, nguyên liệu sử dụng 27 Bảng 3.1: Kết khảo sát thời gian lưu ART PTX với tỷ lệ pha 35 động khác Bảng 3.2: Độ tương thích hệ thống 39 Bảng 3.3: Mối tương quan diện tích pic nồng độ ART pha 40 động Bảng 3.4: Mối tương quan diện tích pic nồng độ PTX pha 40 động Bảng 3.5: Độ phương pháp HPLC ART 42 Bảng 3.6: Độ phương pháp HPLC PTX 43 Bảng 3.7: Ảnh hưởng lượng siêu âm tới đặc tính hệ tiểu phân 44 nano Bảng 3.8: Ảnh hưởng thời gian siêu âm tới đặc tính hệ tiểu phân 46 nano Bảng 3.9: Ảnh hưởng của thể tích pha ngoại tới đặc tính hệ tiểu 47 phân nano Bảng 3.10: Ảnh hưởng loại chất diện hoạt tới đặc tính hệ tiểu phân 48 nano Bảng 3.11: Ảnh hưởng nồng độ chất diện hoạt tới đặc tính hệ tiểu 49 phân nano Bảng 3.12: Ảnh hưởng tỷ lệ PLGA/dược chất tới đặc tính hệ tiểu 51 phân nano Bảng 3.13: Ảnh hưởng điều kiện ly tâm đến độ ổn định kích thước tiểu phân hệ nano PTX-ART 53 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Hình 1.1 Sơ đồ tổng hợp cấu trúc hóa học PLGA 14 Hình 1.2 Hình ảnh siêu vi cầu siêu vi nang 16 Hình 1.3 Hệ màng bao số nano polyme mang thuốc 17 Hình 1.4 Hệ liên kết nano polyme hình thành qua cầu liên kết hóa học 17 Hình 2.1 Sơ đồ mô tả trình bào chế tiểu phân nano PTX-ART 29 Hình 3.1 Hình ảnh thu sắc ký phân tích mẫu cột 33 Hình 3.2 Hình ảnh thu sắc ký phân tích mẫu cột 34 Hình 3.3 Hình ảnh thu sắc ký phân tích mẫu cột 35 Hình 3.4 Sắc ký đồ thu phân tích mẫu mô tả mục 3.1.4 36 Hình 3.5 Sắc ký đồ mẫu trắng (pha động) 37 Hình 3.6 Sắc ký đồ mẫu thử đơn ART 37 Hình 3.7 Sắc ký đồ mẫu thử đơn PTX 38 Hình 3.8 Sắc ký đồ mẫu thử hỗn hợp ART PTX 38 Hình 3.9 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ 40 ART pha động Hình 3.10 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích pic nồng độ 41 PTX pha động Hình 3.11 Đồ thị ảnh hưởng lượng siêu âm tới đặc tính hệ 45 tiểu phân nano PTX-ART Hình 3.12 Đồ thị ảnh hưởng thời gian siêu âm tới đặc tính hệ tiểu 46 phân nano PTX- ART Hình 3.13 Đồ thị ảnh hưởng thể tích pha ngoại đặc tính hệ tiểu 47 phân nano Hình 3.14 Đồ thị ảnh hưởng loại chất diện hoạt tới đặc tính hệ tiểu 48 phân nano Hình 3.15 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ chất diện hoạt tới đặc tính vật lý 50 hệ tiểu phân nano PTX-ART Hình 3.16 Đồ thị ảnh hưởng nồng độ chất diện hoạt lên %EE %LC 50 hệ tiểu phân nano PTX-ART Hình 3.17 Ảnh hưởng tỷ lệ PLGA/dược chất lên đặc tính vật lý 52 hệ tiểu phân nano PTX-ART Hình 3.18 Ảnh hưởng tỷ lệ PLGA/dược chất lên khả mang thuốc 52 hệ tiểu phân nano PTX-ART Hình 3.19 Ảnh hưởng tá dược bảo vệ đến độ ổn định kích thước 54 tiểu phân nano thử nghiệm đông đá – rã đông Hình 4.1 Hình ảnh mô tả mức tăng lượng/cm2 tăng lượng 58 siêu âm để khoảng cách xác định Hình 4.2 Năng lượng nhận đơn vị cm2 tác động với 59 cường độ 500W với tần số siêu âm 23kHz Hình 4.3 Ảnh hưởng loại chất diện hoạt lên kích thước tiểu phân độ nhớt hệ nano 61 nano piperin kết thu với công thức sử dụng Tween 80 cho KTTP 190,00 ± 54,80nm; PDI 0.34 ± 0,04 zeta khoảng −26,62 ± 0,21mV Đối với Cremophor RH40 cho KTTP 245,30 ± 14,38; PDI 0,41 ± 0,06 zeta −21,29 ± 1,95mV [74] Kết Yosra SR Elnaggar cộng cho thấy xu hướng sử dụng chất diện hoạt Tween 80 cho kích thước tiểu phân, PDI giá trị tuyệt đối zeta tốt so với Cremophor RH40 Do lựa chọn Tween 80 chất diện hoạt pha nước để bào chế hệ tiểu phân nano PTX-ART phù hợp 4.3.2.2 Ảnh hưởng nồng độ chất diện hoạt Nồng độ chất diện hoạt ảnh hưởng lớn đến kích thước tiểu phân, tăng nồng độ chất diện hoạt giúp giảm sức căng bề mặt, giảm kết tụ tiểu phân trình đồng hai pha, dẫn đến giảm kích thước tiểu phân Nghiên cứu cho kết phù hợp với nhận định khoảng nồng độ Tween 80 từ 1% đến 3% giúp kích thước giảm từ 309,1 nm xuống 142,6 nm, tiếp tục tăng nồng độ Tween 80 lên 4% không giúp giảm kích thước tiểu phân xuống thấp trái lại làm kích thước tiểu phân tăng PDI cao Việc tăng nồng độ Tween 80 pha nước giúp tăng giá trị tuyệt đối zeta lên cao, giúp hệ tiểu phân có tính ổn định cao Theo nghiên cứu Preeti Wavikar cộng bào chế tiểu phân nano sử dụng nồng độ Tween 80 từ 1% - 4%, thu công thức tối ưu với nồng độ Tween 80 3,0% với kích thước tiểu phân 148,6 ± 0,305 nm, với zeta −20,4 ± 1,2 mV Do lựa chọn Tween 80 với nồng độ 3% phù hợp để bào chế hệ tiểu phân nano PTX-ART 4.3.2.3 Ảnh hưởng tỷ lệ polyme Polyme có vai trò cự kỳ quan trọng việc hình thành nên tiểu phân nano Polyme có nhiện vụ cuộn bao bọc phân tử dược chất kết hợp chất diện hoạt tác động lượng siêu âm tạo thành hệ tiểu phân nano Do lượng polyme phải đảm bảo đủ để nạp đa số phân tử dược chất tạo thành hệ tiểu phân nano ổn định 62 Qua trình nghiên cứu: Với tỷ lệ polyme/dược chất 0,5 hệ có số đa phân tán cao PDI = 0,553, tăng tỷ lệ polyme/dược chất 1,0 lên 2,5 kích thước tiểu phân không thay nhiều với kích thước nằm khoảng 120 – 145 nm việc thay đổi kích thước tiểu phân khoảng hẹp ý nghĩa Giảm tỷ lệ PLGA giúp tăng khả nạp thuốc (loading capacity – LC) hệ nano, có xu hướng làm giảm EE hệ tiểu phân nano PTX-ART Theo nghiên cứu Mohammed Halayqa cộng với tỷ lệ PLGA từ 0,8 đến 1,6% kích thước tiểu phân hệ thay đổi không nhiều từ 340,5 ± 17,8nm lên 382,5 ± 36,5 PDI biến đổi khoảng hẹp Ảnh hưởng lớn PLGA hiệu suất tạo nano EE khả nạp thuốc LC Mohammed Halayqa cộng tiến hành thay đổi tỷ lệ PLGA từ 0,8 đến 1,6% %EE biến đổi tăng từ 46,6% lên 71,6 %LC biến đổi từ 10,2% lên 25,5% [47] Mặt khác tỷ lệ PLGA/dược chất thấp ảnh hưởng tới ổn định hệ tiểu phân nano, để đảm bảo độ ổn định tiểu phân nano khả nạp thuốc tốt lựa chọn PLGA/dược chất = 1,5 tốt cho hệ tiểu phân nano PTXART 63 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT KẾT LUẬN: Qua trình nghiên cứu thực nghiệm đạt số kết sau Đã xây dựng công thức bào chế hệ tiểu phân nano PTX-ART/PLGA Đã xây dụng công thức tốt thông qua trình khảo sát số thông số ảnh hưởng, công thức cụ thể sau: - Pha dầu: - Pha nước + Artesunat 10mg + Tween 80 với nồng độ 3% + Paclitaxel 10mg 50ml nước + PLGA 30mg Dung môi pha dầu 5ml DCM - Năng lượng siêu âm 200W với tần số 20000Hz, nhiệt độ 40C, tốc độ phối hợp pha dầu vào pha nước 2,5 ml/phút thời gian siêu âm phút Thời gian bốc dung môi nhiệt độ phòng Đánh giá số đặc tính hệ tiểu phân nano bào chế - Kích thước tiểu phân số đa phân tán hệ nano PTX-ART/PLGA: Thu hệ tiểu phân nano có kích thước khoảng 120 – 140nm với số đa phân tán PDI hẹp < 0,3 - Thế zeta khoảng – 30mV, tiểu phân tích điện âm trái dấu giảm kết tụ - Hiệu suất tạo nano hai dược chất cao, artesunat > 84,0% paclitaxel > 99,0% - Đánh giá độ ổn định hệ tiểu phân nano PTX-ART/PLGA điều kiện khắc nghiệt điều kiện ly tâm khác ĐỀ XUẤT: Để tiếp tục hướng nghiên cứu đề tài xin đưa số đề xuất sau: + Thực trình đông khô thu hồi sản phẩm, sau phân tán lại, nghiên cứu cứu đặc tính hệ nano PTX-ART thử đặc tính tế bào ung thư so sánh với hệ nano PTX đơn bào chế với quy trình tương tự Để xác định số hiệp đồng ART PTX 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Nguyễn Thị Mai Anh, Trịnh Văn Lẩu, Nguyễn Văn Long (2014), Nghiên cứu bào chế đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano piroxicam dùng cho nhãn khoa, Luận án Tiến sĩ Dược học, Trường Đại Học Dược Hà Nội Trần Trọng Biên, Hồ Hoàng Nhân, Nguyễn Ngọc Chiến (2015), Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano artesunat sử dụng poly(lactic-co-glycolic) acid chitosan, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại Học Dược Hà Nội Bộ môn Bào Chế (2009), Sinh Dược Học Bào Chế, Nhà Xuất Bản Y Học, tr.7 - 32 Bộ Y Tế (2009), Dược Điển Việt Nam IV, Nhà xuất Y học Bộ Y Tế (2012), Dược thư quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học Phạm Gia Điền (2009 - 2010), Nghiên cứu chế tạo polyme sinh học chitosan cấu trúc nano ứng dụng làm chất mang thuốc, Viện Hoá Học thuộc Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Nguyễn Thị Hằng, Dương Thị Hồng Ánh (2010), Nghiên cứu bào chế nanocapsules artemisinin, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại Học Dược Hà Nội Trần Vĩnh Hoàng cộng (2011), "Nghiên cứu chế tạo thử hoạt tính kháng khuẩn dung dịch nano bạc sử dụng chitosan làm chất khử/chất ổn định", Tạp chí khoa học công nghệ - Viện Khoa học & Công nghệ Việt Nam 49(6) Trần Đại Lâm, Nguyễn Thị Thuý Nga, Vũ Đinh Hoàng (2006), "Nghiên cứu phân hủy sinh học trình giải phóng thuốc in vitro từ chất mang nano chitosan gắn hoạt chất artesunat", Tạp chí phân tích hóa, lý sinh học 11(1), tr 73 - 80 10 Lê Thị Lành, Nguyễn Thị Thanh Hải, Trần Thái Hòa (2012), "Tổng hợp nano vàng sử dụng chitosan tan nước làm chất khử chất ổn định", Tạp chí khoa học - Đại học Huế 74A(5), tr 65 - 75 65 11 Khưu Mỹ Lệ cộng (2014), "Khảo sát thành phần công thức thông số điều chế hệ phân tán nano artemisinin phương pháp đồng hóa áp suất cao", Y Học TP Hồ Chí Minh 18(2), tr 295 - 302 12 Võ Xuân Minh, Phạm Thị Minh Huệ (2013), Kỹ thuật nano liposome ứng dụng dược phẩm, mỹ phẩm, Trường Đại Học Dược Hà Nội, tr.1 - 49 13 Nguyễn Phương Nam, Đỗ Thanh Thủy, Nguyễn Thị Thanh Bình (2015), Nghiên cứu tổng hợp tiểu phân nano chứa bạc, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Trường Đại Học Dược Hà Nội 14 Ngô Thị Thu Trang, Nguyễn Trần Linh (2013), "Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano lipid rắn chứa vitamin K1", Nghiên cứu dược Thông tin thuốc(3), tr 93 - 96 15 Dương Thị Ánh Tuyết cộng (2011), "Nghiên cứu chế tạo vật liệu nano chitosan làm chất hấp phụ protein ứng dụng dẫn truyền thuốc", Tạp chí phát triển KH & CN – Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh 14(6), tr 54 - 61 Tài liệu tiếng Anh 16 A Grönroos, et al (2001), "Ultrasonic depolymerization of aqueous polyvinyl alcohol", Ultrasonics Sonochemistry 8(3), pp 259 – 264 17 Aws Alshamsan (2014), "Nanoprecipitation is more efficient than emulsion solvent evaporation method to encapsulate cucurbitacin I in PLGA nanoparticles", Saudi Pharmaceutical Journal 22(3), pp 219 - 222 18 Archana Swami, et al (2012), "Nanoparticles for Targeted and Temporally Controlled Drug Delivery", Springer, pp - 29 19 Avnesh Kumari, Sudesh Kumar Yadav, Subhash C Yadav (2010), "Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems", Colloids and Surfaces B: Biointerfaces 75(1), pp - 18 20 Carrie A Morris, et al (2011), "Review of the clinical pharmacokinetics of artesunate and its active metabolite dihydroartemisinin following intravenous, intramuscular, oral or rectal administration", Malaria Journal 10(263), pp - 17 66 21 British Pharmacopoeia Commission (2013), British Pharmacopoeia 2013, TSO (The Stationery Office) 22 FDA Briefing Document for the Anti-Infective Drugs Advisory Committee (2010), "Artesunate Rectal Suppository", World Heath Organization Global Health Malaria Program 23 Danhier F, et al (2012), "PLGA-based nanoparticles: An overview of biomedical applications", Journal of Controlled Release 161(2), pp 505 – 522 24 Fabienne Danhier;, et al (2009), "Paclitaxel-loaded PEGylated PLGA-based nanoparticles: In vitro and in vivo evaluation", Journal of Controlled Release 133(1), pp 11 - 17 25 Di Bei, Jianing Meng, Bi-Botti C Youan (2010), "Engineering Nanomedicines for Improved Melanoma Therapy: Progress and Promises", Nanomedicine 5(9), pp 1385-1399 26 Cecily V DiPiro (2009), "Oncologic disorders", in Barbara Wells, Joseph DiPiro, Terry Schwinghammer, et al., Editors, Pharmacotherapy Handbook, McGraw-Hill Companies, Inc, pp 679 - 718 27 Ross C Donehower (1996), "The clinical development of paclitaxel: a successful collaboration of academia, industry and the National Cancer Institute", Stem Cells 14(1), pp 25 - 28 28 Duc Trung Bui, et al (2013), "Polymer Prodrug Nanoparticles Based on Naturally Occurring Isoprenoid for Anticancer Therapy", Biomacromolecules 14(8), pp 2837 – 2847 29 Edith A Perez, et al (2001), "Multicenter phase II trial of weekly paclitaxel in women with metastatic breast cancer", Journal of clinical oncology 19(22), pp 4216 - 4223 30 Egbert F Smit, et al (2003), "Three-Arm Randomized Study of Two Cisplatin-Based Regimens and Paclitaxel Plus Gemcitabine in Advanced Non–Small-Cell Lung Cancer: A Phase III Trial of the European 67 Organization for Research and Treatment of Cancer Lung Cancer Group— EORTC 08975", Journal of Clinical Oncology 21(21), pp 3909 - 3917 31 Fernando Henrique Andrade Nogueira, et al (2013), "Development and validation of an HPLC method for the simultaneous determination of artesunate and mefloquine hydrochloride in fixed-dose combination tablets", Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences 49(4), pp 837 - 843 32 G P Stathopoulos, et al (2004), "Front-line paclitaxel–vinorelbine versus paclitaxel–carboplatin in patients with advanced non-small-cell lung cancer: a randomized phase III trial", Annals of Oncology 15(7), pp 1048 – 1055 33 Hanh Thuy Nguyen, et al (2015), "Enhancing the in vitro anti-cancer efficacy of artesunate by loading into poly-D, L-lactide-co-glycolide (PLGA) nanoparticles", Archives of Pharmacal Research 38(5), pp 716 - 724 34 Hirenkumar K Makadia, Steven J Siegel (2011), "Poly Lactic-co-Glycolic Acid (PLGA) as Biodegradable Controlled Drug Delivery Carrier", Polymers (Basel) 3(3), pp 1377 – 1397 35 Hui-Jun Zhou , et al (2010), "Dihydroartemisinin improves the efficiency of chemotherapeutics in lung carcinomas in vivo and inhibits murine Lewis lung carcinoma cell line growth in vitro", Cancer Chemotherapy and Pharmacology 66(1), pp 21 - 29 36 Jeffrey D Clogston, Anil K Patri (2011), "Zeta Potential Measurement", in Scott E McNeil, Editor, Characterization of Nanoparticles Intended for Drug Delivery, Humana Press, pp 63 - 70 37 Shihua Jin, et al (2014), "Transferrin-modified PLGA nanoparticles significantly increase the cytotoxicity of paclitaxel in bladder cancer cells by increasing intracellular retention", Journal of Nanoparticle Research 16(10) 38 Josue Addiel Venegas-Sanchez, Motohiro Tagaya, Takaomi Kobayashi (2013), "Effect of ultrasound on the aqueous viscosity of several watersoluble polymers", Polymer Journal 45, pp 1224 – 1233 39 Junmei Hou, et al (2008), "Experimental Therapy of Hepatoma with Artemisinin and Its Derivatives: In vitro and In vivo Activity, 68 Chemosensitization, and Mechanisms of Action", Clinical Cancer Research 14(17), pp 5519 – 5530 40 Kelly K, et al (2001), "Randomized Phase III Trial of Paclitaxel Plus Carboplatin Versus Vinorelbine Plus Cisplatin in the Treatment of Patients With Advanced Non–Small-Cell Lung Cancer: A Southwest Oncology Group Trial", Journal of clinical oncology 19(13), pp 3210 - 3218 41 Khodaverdi Elham, et al (2013), "Preparation and characterisation of PLGAPEG-PLGA nanospheres prepared with a new thermogelling method for insulin delivery", Journal of Chemical and Pharmaceutical Research 5(10), pp 311 - 319 42 Lai HC, Singh NP, Sasaki T (2013), "Development of artemisinin compounds for cancer treatment", Investigational New Drugs 31(1), pp 230 - 246 43 M L Houchin, E M Topp (2009), "Physical Properties of PLGA Films During Polymer Degradation", Journal of Applied Polymer Science 114(5), pp 2848 – 2854 44 Maria P Crespo-Ortiz, Ming Q Wei (2012), "Antitumor Activity of Artemisinin and Its Derivatives: From a Well-Known Antimalarial Agent to a Potential Anticancer Drug", Journal of Biomedicine and Biotechnology 2012(2012), pp -18 45 Marian E Gindy, Robert K Prud’homme (2009), "Multifunctional nanoparticles for imaging, delivery and targeting in cancer therapy", Expert Opinion on Drug Delivery 6(8), pp 865 - 878 46 Melgardt M de Villiers, Pornanong Aramwit, Glen S Kwon (2009), Nanotechnology in Drug Delivery, Springer Science & Business Media 47 Mohammed Halayqa, Urszula Domańska (2014), "PLGA Biodegradable Nanoparticles Containing Perphenazine or Chlorpromazine Hydrochloride: Effect of Formulation and Release", International Journal of Molecular Sciences 15(12), pp 23909 - 23923 69 48 Nava Shterman, Batya Kupfer, Chaya Moroz (1991), "Comparison of transferrin receptors, iron content and isoferritin profile in normal and malignant human breast cell lines", Pathobiology 59(1), pp 19 - 25 49 Neha Yadav, Sunil Khatak, Udai Vir Singh Sara (2013), "Soild Lipid Nanoparticles - A Review", International Journal of Applied Pharmaceutics 5(2) 50 Piergiorgio Gentile, et al (2014), "An Overview of Poly(lactic-co-glycolic) Acid (PLGA)-Based Biomaterials for Bone Tissue Engineering", International Journal of Molecular Sciences 15(3), pp 3640 - 3659 51 Prashant Kesarwani, Rakesh K Tekade, N K Jain (2011), "Spectrophotometric estimation of paclitaxel", International Journal of Advances in Pharmaceutical Sciences 2, pp 29 - 32 52 Ram B Gupta, Uday B Kompella (2006), Nanoparticle Technology for Drug Delivery, CRC Press 53 Josué Addiel Venegas Sanchez (2013), Effect of Ultrasound on Hydrogen Bond Breaking Appeared in Aqueous Polymers, Energy and Environmental Science Nagaoka University of Technology 54 Sarbari Acharya, Sanjeeb K Sahoo (2011), "PLGA nanoparticles containing various anticancer agents and tumour delivery by EPR effect", Advanced Drug Delivery Reviews 63(3), pp 170 – 183 55 Schiller JH, et al (2002), "Comparison of four chemotherapy regimens for advanced non-small-cell lung cancer", The New England Journal of Medicine 346(2), pp 92 -98 56 Shahryar Shakeri, et al (2015), "Preparation of protein-loaded PLGA-PVP blend nanoparticles by nanoprecipitation method: entrapment, Initial burst and drug release kinetic studies", Nanomedicine Journal 2(3), pp 176 - 190 57 Suphiya Parveen, Sanjeeb K Sahoo (2011), "Long circulating chitosan/PEG blended PLGA nanoparticle for tumor drug delivery", European Journal of Pharmacology 670(2 -3), pp 372 – 383 70 58 Swati A Guhagarkar, Vinod C Malshe, Padma V Devarajan (2009), "Nanoparticles of Polyethylene Sebacate: A New Biodegradable Polymer", AAPS PharmSciTech 10(3), pp 935 – 942 59 Sean C Sweetman (2009), Martindale: The Complete Drug Reference, 36, Pharmaceutical Press 60 Tahereh Sadat Jafarzadeh Kashi, et al (2012), "Improved drug loading and antibacterial activity of minocycline-loaded PLGA nanoparticles prepared by solid/oil/water ion pairing method", International Journal of Nanomedicine 7, pp 221 - 234 61 Tao Chen, et al (2009), "Dihydroartemisinin induces apoptosis and sensitizes human ovarian cancer cells to carboplatin therapy", Journal of Cellular and Molecular Medicine 13(7), pp 1358 - 1370 62 N.K Tolochko, "History of nanotechnology", Nanoscience and nanotechnologies 63 Tooru Ooya, Jaehwi Lee, Kinam Park (2003), "Effects of ethylene glycolbased graft, star-shaped, and dendritic polymers on solubilization and controlled release of paclitaxel", Journal of Controlled Release 93, pp 121 – 127 64 Tuan Hiep Tran , et al (2016), "Targeted and controlled drug delivery system loading artersunate for effective chemotherapy on CD44 overexpressing cancer cells", Archives of Pharmacal Research, pp - 65 USP (2010), "Artesunate", USP 's Non-US Monographs Guideline 66 USP (2013), United States Pharmacopeia 36 - National Formulary 31, Tập 3, United Book Press, Inc 67 Virginia Zabaleta, et al (2012), "Oral administration of paclitaxel with pegylated poly(anhydride) nanoparticles: Permeability and pharmacokinetic study", European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 81(13), pp 514 - 523 68 Wai M Liu, Andrew M Gravett, Angus G Dalgleish (2011), "The antimalarial agent artesunate possesses anticancer properties that can be 71 enhanced by combination strategies", International Journal of Cancer 128(6), pp 1471 - 1480 69 Wang SJ, et al (2010), "Experimental study of the function and mechanism combining dihydroartemisinin and gemcitabine in treating pancreatic cancer", Zhonghua wai ke za zhi [Chinese Journal of Surgery 48(7), pp 530 - 534 70 Muzamil Yaqub Want, et al (2014), "A new approach for the delivery of artemisinin: Formulation, characterization, and ex-vivo antileishmanial studies", Journal of Colloid and Interface Science 432, pp 258 - 269 71 WHO (2013), WHO Model List of Essential Medicines - 18th 72 WHO (2014), The International Pharmacopoeia 4th Supplemen 73 Yi Chen, et al (2014), "Abstract 470: Artemisinin derivatives synergize with paclitaxel by targeting FOXM1 through Raf/MEK/MAPK signaling pathway in ovarian cancer", Cancer Research 74 74 Yosra SR Elnaggar, et al (2015), "Novel piperine-loaded Tween-integrated monoolein cubosomes as brain-targeted oral nanomedicine in Alzheimer’s disease: pharmaceutical, biological, and toxicological studies", International Journal of Nanomedicine 10(1), pp 5459 - 5473 72 PHỤ LỤC Phụ lục I: Phổ hấp thụ UV artesunat paclitaxel Hình 1.1 Phổ hấp thụ UV artesunat Hình 1.2 Phổ hấp thụ UV paclitaxel Phụ lục II: Đặc tính tính vật lý hệ tiểu phân nano PTX-ART Hình 2.1 Kích thước tiểu phân số đa phân tán PDI hệ tiểu phân nano PTXART/PLGA Hình 2.2 Thế zeta hệ tiểu phân nano PTX-ART/PLGA [...]... việc bào chế hệ tiểu phân nano paclitaxel ở trên thế giới đã có rất nhiều các nghiên cứu đã được tiến hành Còn tại Việt Nam chưa có các nghiên cứu tiến hành bào chế tiểu phân nano paclitaxel Còn các tiểu phân nano được bào chế từ artemisinin và dẫn chất trên thế giới và Việt Nam đã được tiến hành tương đối nhiều Từ đó là cơ sở để tiến hành nghiên cứu bào chế hệ tiểu phân nano paclitaxel phối hợp với artesunat. .. amphotericin B 21 1.5 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano trong và ngoài nước 1.5.1 Một số nghiên cứu về hệ tiểu phân nano paclitaxel, artemisinin và dẫn chất ở nước ngoài sử dụng PLGA làm chất mang Đã có rất nhiều các nghiên cứu sử dụng chất mang PLGA được đăng tải trên các tạp chí quốc tế Năm 2009 trong nghiên cứu của Fabienne Danhier và cộng sự đã PLGA gắn sẵn PEG bào chế hệ tiểu phân nano paclitaxel theo phương... thứ hai gặp phải, PLGA giải phóng thuốc một cách ồ ạt từ hệ tiểu phân nano làm mất đi mục đích khi bào chế nano Bởi vì khi bào chế một hệ tiểu phân nano thì mong muốn là giải phóng thuốc một cách có kiểm soát nên cơ chế giải phóng thuốc cũng rất quan trọng [23] Cơ chế giải phóng thuốc phụ thuộc vào polyme sử dụng và khả năng mang thuốc trên polyme đó Nói chung, ban đầu thuốc được giải phóng một cách nhanh... hiệu suất và khả năng hấp phụ protein của nano chitosan chế tạo được là 96,41% và 1,93mg/mg tại 0,5mg hạt nano chitosan [15] Trong nước đã có rất nhiều các công trình ứng dụng công nghệ nano vào nghiên cứu các tiểu phân nano bạc và nano vàng [8], [10], [13] Năm 2013 Ngô Thị Thu Trang và Nguyễn Trần Linh công bố nghiên cứu bào chế tiểu phân nano lipid rắn chứa vitamin K1 với kích thước tiểu phân trung... Không những thế artesunat cho thấy khả năng chống ung thư khi điều trị kết hợp [68] Theo nghiên cứu của Yi Chen và các cộng sự, DHA có tác dụng hiệp đồng cùng với paclitaxel với giá trị chỉ số kết hợp CI từ 0,6 đến 0,73 [73] Với những ưu điểm nêu trên, chúng tôi xin được tiến hành nghiên cứu đề tài Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano paclitaxel và artesunat sử dụng polyme mang thuốc poly( acid lactic-co-glycolic)”... điều trị bệnh [46], [52] 1.4.2 Phân loại nano polyme mang thuốc Theo cơ chế mang dược chất có thể chia làm ba nhóm [12] Nhóm một: Hệ cốt, tiểu phân nano dược chất phân tán trong giá mang polyme: Siêu vi cầu (nanospheres), tiểu phân lipid rắn Hình 1.2 Hình ảnh siêu vi cầu và siêu vi nang [25] Nhóm hai: Hệ màng bao, polyme bao bên ngoài tiểu phân nano dược chất: Siêu vi nang (nanocapsules), liposome, micelles,... trong bào chế nano polyme Tiểu phân nano cần phải có một sự cuộn xoắn tạo cầu tốt và tỷ lệ mang thuốc cao Nhưng một trong những khó khăn lớn nhất trong bào chế nano PLGA là tỷ lệ mang thuốc thấp (Chỉ có khoảng 1 mg dược chất trên 100 mg polyme của tiểu phân nano) đặc biệt với các dược chất kém tan trong nước Nồng độ thuốc trong polyme thấp là một vấn đề chính trong quá trình thiết kế tiểu phân nano PLGA... chế tạo polyme phân huỷ sinh học 24 chitosan dạng nano ứng dụng làm vector dẫn truyền (chất mang) artesunat và paclitaxel làm thuốc nhả chậm” Nhưng hiện tại chưa có một bài báo khoa học liên quan về paclitaxel được công bố [6] 1.5.3 Một số nghiên cứu về hệ tiểu phân nano của artemisinin và dẫn chất Trong nước bước đầu đã có một số nghiên cứu về bào chế tiểu phân nano của artemisinin và dẫn chất: Năm... của thuốc sau ba giờ thuốc giải phóng được 82,43 ± 3,75% [14] 1.5.2 Một số nghiên cứu hệ tiểu phân nano paclitaxel Qua tham khảo một số tài liệu trong nước mới chỉ có Viện Hoá Học trực thuộc Viện hàn lâm khoa học và công nghệ Việt Nam Thực hiện đề tài Nghiên cứu chế tạo polyme sinh học chitosan cấu trúc nano ứng dụng làm chất mang thuốc với ba mục tiêu trong đó có một mục tiêu Nghiên cứu chế tạo polyme. .. Bào chế siêu vi cầu: Được bào chế bằng phương pháp polyme hóa từ dung dịch polyme: Thêm từ từ polyme vào dung dịch nước đã có sẵn chất diện hoạt, vừa cho vừa lắc Dùng acid điều chỉnh pH về khoảng 2 – 3, polyme sẽ tự trùng hợp ở nhiệt độ thường tạo thành tiểu phân nano [12] c Phương pháp đun chảy Áp dụng bào chế các siêu vi cầu dùng chất mang lipid rắn qua các bước: Đun chảy chất mang, hòa tan hay phân