1 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––– TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM ––––––––––––––––– NGUYỄN QUỐC NAM HẢI NGUYỄN QUỐC NAM HẢI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ (COFFEA ARABICA, RUBIACEA) NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ (COFFEA ARABICA, RUBIACEA) CHUYÊN NGÀNH: HOÁ HỌC HỮU CƠ MÃ SỐ: 60.44.27 LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC LUẬN VĂN THẠC SĨ HOÁ HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN QUYẾT TIẾN THÁI NGUYÊN - 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên THÁI NGUYÊN - 2009 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN Bản luận văn đƣợc hoàn thành phòng Hoạt chất Sinh học, Viện Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố công trình khác Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Tôi xin chân thành bày tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Quyết Tiến, TS Phạm Thị Hồng Minh, PGS.TS Phạm Văn Thỉnh ngƣời thầy hƣớng nghiên cứu, hƣớng dẫn tận tình, động viên giúp đỡ bƣớc trình nghiên cứu thực luận văn Tác giả Xin chân thành cảm ơn Phòng Hoạt chất Sinh học, Phòng Nghiên cứu Cấu trúc -Viện Hóa học nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành kế hoạch nghiên cứu Nhân dịp này, xin trân trọng cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Lãnh NGUYỄN QUỐC NAM HẢI đạo Khoa Hóa, Khoa Sau đại học - Trƣờng Đại học Sƣ phạm Thái Nguyên, Sở giáo dục đào tạo tỉnh Bắc Ninh, Ban Giám hiệu Trƣờng THPT Thuận Thành số tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành luận văn Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Bố, Mẹ tôi, ngƣời thân gia đình đồng nghiệp giúp đỡ, động viên nhiều trình thực luận văn Thái Nguyên, tháng năm 2009 Tác giả Nguyễn Quốc Nam Hải Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC 1.3.4.1 Ancaloit khung indol 17 Trang 1.3.4.2 Ancaloit khung pyridin - (pyperidin) 18 Lời cam đoan 1.3.4.3 Ancaloit vòng ngưng tụ pyrrolidin-pyperidin (khung tropan) 20 Lời cảm ơn 1.3.4.4 Ancaloit khung ruban (quinin, quinidin, cinchonin, cinchonidin) 21 Danh mục chữ viết tắt dùng luận văn 1.3.4.5 Ancaloit khung benzyl-isoquinolin 22 Danh mục hình, bảng sơ đồ 1.3.4.6 Ancaloit khung morphinan 23 MỞ ĐẦU 1.3.4.7 Ergot ancaloit (dẫn xuất axit lysergic) 23 Chƣơng TỔNG QUAN 1.3.4.8 Ancaloit khung imidazol 24 1.1 CHI COFFEA VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CHÚNG 1.3.4.9 Ancaloit strychnin 25 1.1.1 Giới thiệu chi Coffea 1.3.4.10 Ancaloit kháng sinh 25 1.1.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học Chƣơng THỰC NGHIỆM 30 1.2 CÂY CÀ PHÊ CHÈ VÀ NHỮNG SỬ DỤNG TRONG Y HỌC 2.1 ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 1.2.1 Mô tả thực vật 2.1.1 Thu mẫu cây, xác định tên khoa học phƣơng pháp xử lý mẫu 30 1.2.2 Một số thuốc chữa bệnh sỏi thận Y học cổ truyền 2.1.2 Phƣơng pháp ngâm chiết 31 1.3 MỘT SỐ ANCALOIT SỬ DỤNG TRONG Y HỌC 2.1.3 Thử hoạt tính sinh học 31 1.3.1 Giới thiệu chung ancalnoit 2.1.4 Phƣơng pháp phân lập hợp chất từ dịch chiết 31 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích 10 2.1.5 Phƣơng pháp khảo sát cấu trúc hoá học chất 31 1.3.2.1 Phân tích định tính 10 2.2 DỤNG CỤ, HOÁ CHẤT VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 32 1.3.2.1.1 Các phản ứng tạo tủa 10 2.2.1 Dụng cụ, hoá chất 32 1.3.2.1.2 Các phản tạo màu 11 2.2.2 Thiết bị nghiên cứu 33 1.3.2.2 Phân tích định lượng 12 2.3 THU NHẬN CÁC DỊCH CHIẾT TỪ LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 33 1.3.2.2.1 Xác định hàm lượng ancaloit phương pháp phân tích 2.3.1 Thu nhận dịch chiết 33 trọng lượng 13 2.3.2 Khảo sát định tính dịch chiết 35 1.3.2.2.2 Xác định hàm lượng ancaloit phương pháp “không nước” 15 2.3.2.1 Phát hợp chất sterol 35 1.3.3 Phƣơng pháp phân lập ancaloit 15 2.3.2.2 Phát ancaloit 35 1.3.3.1 Chiết tách phân lập ancaloit phương pháp bazơ - dung môi 2.3.2.3 Phát flavonoid 36 hữu 15 2.3.2.4 Phát cumarin 36 1.3.3.2 Chiết tách phân lập ancaloit phương pháp axit-nước 16 2.3.2.5 Định tính glucosit tim 36 1.3.4 Phân loại ancaloit quan trọng Y dƣợc theo khung 16 2.3.2.6 Định tính saponin 37 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.3 Thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định(antimicrobial activity) 38 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DÙNG TRONG LUẬN VĂN 2.4 PHÂN LẬP VÀ TINH CHẾ CÁC CHẤT 39 2.4.1 Cặn dịch chiết n-hexan (Cof H) 39  Các phƣơng pháp sắc ký 2.4.1.1 Ancol mạch dài E4C (hexatriacontan-1-ol) 40 CC : Column Chromatography TLC : Thin-layer Chromatography SKLM : Sắc ký lớp mỏng 2.4.1.2 -Sitosterol 40 2.4.1.3 Stigmast-5,22-dien-3-β-ol 41 2.4.2 Cặn dịch chiết etylaxetat 42 2.4.2.1 Tritecpenoit 31H6 42  Các phƣơng pháp phổ 2.4.2.2 3-O--Sitostery - glucopyranosit 43 CAD : Collisional Activated Dissociation 2.4.3 Cặn dịch chiết MeOH 44 MS : Mass Spectroscopy Chƣơng THẢO LUẬN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 45 EI-MS : Electron Impact Mass Spectroscopy 3.1 NGUYÊN TẮC CHUNG 45 ESI-MS : Electron Spray Ionization Mass Spectroscopy 3.2 PHÂN LẬP VÀ NHẬN DẠNG CÁC HỢP CHẤT CÓ TRONG FT-IR : Fourier Transform Infrared Spectroscopy CÁC DỊCH CHIẾT KHÁC NHAU CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 45 NMR : Nuclear Magnetic Resonance 3.2.1 Ancol mạch dài E4C(hexatriacontanol) COF.E4C: C36H74O 46 : 3.2.2 Các hợp chất sterol 46 13 3.2.2.1.-Sitosterol 47 3.2.2.2 Stigmast-5,22-dien-24R-3-ol 47 3.2.2.3 3-Sitostery-1l-O--D-glucopyranosit 49 3.2.2.4 Hợp chất axit lupan-3β-hydroxi-12(13)-en-28-oic (COF18E3-C30H48O3) 50 3.2.2.5 Hợp chất cafein (COF.An – C8H10N4O2) 60 3.3 HOẠT TÍNH BÀI SỎI THẬN CỦA LÁ CÂY CÀ PHÊ CHÈ 61 H-NMR C-NMR : H-Nuclear Magnetic Resonance 13 C- Nuclear Magnetic Resonance DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer COSY : Correlated Spectroscopy HMQC : Heteronuclear Multiple - Quantum Coherence HMBC : Heteronuclear multiple - Bond Correlation  Các lĩnh vực khác KẾT LUẬN 62 MIC : Minimum inhibitory concentration DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN HIV : Human Immunodeficiency Virus LUẬN VĂN 63 đvC : Đơn vị Cacbon TÀI LIỆU THAM KHẢO 64 v/v : Thể tích/thể tích PHỤ LỤC 67 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC BẢNG MỞ ĐẦU Nƣớc ta có diện tích khoảng 330.000 km Đồi núi chiếm 3/4 diện Trang Bảng 2.1: Các hệ dung môi triển khai SKLM 32 tích núi cao 500 m chiếm 1/3 diện tích lãnh thổ Khí hậu Bảng 2.2: Khối lƣợng cặn chiết phân đoạn Cà phê chè 35 nhiệt đới gió mùa, có mùa rõ rệt thay đổi theo địa hình Nhiệt độ trung Bảng 2.3: Kết định tính nhóm chất Cà phê chè 37 bình hàng năm 22 C, lƣợng mƣa vào khoảng 1200 - 2800 mm, độ ẩm Bảng 2.4: Kết thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn tƣơng đối cao (trên 80%) chiết Cà phê chè 39 Những đặc thù điều kiện tự nhiên nhƣ thuận lợi cho hệ sinh thái phát triển Vì nƣớc ta có hệ thực vật vô phong phú đa dạng Bảng 3.1: Số liệu phổ 13C-NMR (CDCl3, 125MHz) số sterol cà phê chè (Coffea arabica) 48 Bảng 3.2: Bảng tƣơng tác xa C  H(HMBC) COF18E3 59 Bảng 3.3: Bảng tƣơng tác xa C  H(HMBC) COF.Anc 60 Theo số liệu thống kê có 12000 loài, có 3200 loài thực vật đƣợc sử dụng làm thuốc y học dân gian [5] Từ xƣa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trò quan trọng đời sống ngƣời Ngày nay, hợp chất tự nhiên DANH MỤC CÁC HÌNH có hoạt tính sinh học đƣợc phân lập từ cỏ đƣợc ứng dụng Trang Hình 2.1: Cây Cà phê chè (Coffea arabica) Hình 3.1: Phổ FT - IR COF18E3 51 Hình 3.2: Phổ EIS - MS COF18E3 52 Hình 3.3: Phổ 1H-NMR COF18E3 53 Hình 3.4: Phổ 13C- NMR COF18E3 54 Hình 3.5: Phổ DEPT COF18E3 55 Hình 3.6: Phổ HSQC COF18E3 56 Hình 3.7: Phổ HMBC COF18E3 57 nhiều ngành công nghiệp nhƣ ngành nông nghiệp, chúng đƣợc sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm… Ngày nay, ngành công nghệ tổng hợp hoá dƣợc phát triển mạnh mẽ tạo biệt dƣợc khác đƣợc sử dụng công tác phòng, chữa bệnh nhờ giảm tỉ lệ tử vong, nâng cao tuổi thọ Tuy nhiên, vai trò thảo dƣợc không chỗ đứng Y học Nó tiếp tục đƣợc dùng làm nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất dẫn đƣờng (lead-compounds) cho công nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm dƣợc phẩm đáp ứng cho việc điều trị chứng bệnh thông thƣờng nhƣ bệnh nan y (Ung thƣ, HIV, ) DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ Trang Trên sở cho thấy, nguồn thuốc dân gian nhƣ Sơ đồ 2.1: Sơ đồ ngâm chiết cà phê chè 34 thuốc đồng bào dân tộc kho tàng vô quí giá để khám phá, tìm kiếm loại thuốc có hiệu lực cao cho công tác phòng chữa Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn bệnh Việc nghiên cứu thuốc giúp cho hiểu rõ thành Chƣơng I phần cấu trúc hoá học, hoạt tính sinh học, tác dụng dƣợc lí TỔNG QUAN thuốc Từ đó, ngƣời ta tạo chất có hoạt tính sinh học cao để làm thuốc chữa bệnh Cây Cà phê chè (Coffea arabica) không công nghiệp 1.1 CHI COFFEA VÀ THÀNH PHẦN HOÁ HỌC CỦA CHÚNG 1.1.1 Giới thiệu chi Coffea quan trọng, mà dƣợc liệu quí Ở Malaysia Theo tác giả Phạm Hoàng Hộ, chi Coffea Việt Nam có năm loài Indonesia ngƣời ta sử dụng Cà phê chè sắc nƣớc để làm thuốc lợi tiểu là: Coffea arabica L (Cà phê chè), Coffea canephora Pierre ex Froehner Lá Cà phê chè đƣợc dùng điều trị bệnh hen xuyễn, nhiễm độc (Coffea rubusta - Cà phê vối), Coffea dewevrei (Coffea excelsa - Cà phê mít), atropin, cúm, đau đầu, nhiễm độc thuốc phiện Ngoài ra, đồng bào dân tộc Coffea liberica Bull ex Hiern (Cà phê dâu da), Coffea tetrandra P Chev in Dao, huyện Đông Triều, tỉnh Quảng Ninh sử dụng Cà phê chè để Herbier (Cà phê tứ hùng) Hiện nay, nƣớc ta trồng cà phê vối tập trung chủ chữa bệnh sỏi thận Đây thuốc độc vị cổ truyền độc đáo Mặc dù yếu Tây Nguyên [1], [3] vậy, có công trình nghiên cứu thành phần hoá học dƣợc lí Cà phê chè Với mục đích nghiên cứu tìm hiểu thành 1.1.2 Những nghiên cứu thành phần hoá học Từ phận loài cà phê, ngƣời ta phân lập đƣợc phần hoá học nhƣ hoạt tính sinh học Cà phê chè góp phần làm tăng thêm kho tàng tri thức thuốc cổ truyền Việt Nam [28-36] số lớp chất nhƣ: glycosit (este), ancaloit, aminoaxit, tecpenoit amit Với lý trên, Cà phê chè (Coffea arabica) đƣợc chọn [9], [20] làm đối tƣợng cho luận văn nghiên cứu với tên đề tài là: “ Nghiên cứu Ancaloit: thành phần hoá học Cà phê chè (Coffea arabica)” Nhằm xác định O H N H N O OH N NH O thành phần cấu trúc hoá học hợp chất có Cà phê chè NH2 O CH3 CH3 1.1 Axit allantoic H3C 1.2a 3-Metylindolin-2-on 1.2b 2-Hydroxy-3-metyl-1H-indol CH3 O H3C N N O H N N O N N O OH O NH2 H3C N O N N N H3CO CH3 N CH3 H3CO N CH3 CH3 1.3 Caffein Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.4 Liberin Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 1.5 Methylliberin http://www.lrc-tnu.edu.vn Amit Glycosit: O O OH OH O OH O O O O O O O OH N H O HN Acylsucroz¬-6-O-(3-Methylbutanoyl) OH 6-O--D-Apiofuranosyl1-O-3-Methyl-2-butenoyl-D-glucoz¬ 1.6 1.7 1.8 N H OH O HN HO HO O O OH N-Caffeoyltryptophan HO N-coumaroyltryptophan R=C19H39 Eicosanoylserotonin R=C23H45 Tetracosanoylserotonin 1.14 1.12 Hiện ngƣời ta biết nhiều hạt cà phê nhƣng thành phần HO O HO O O O O hoá học tác dụng Cà phê chè (Coffea arabica) chƣa thấy có tài liệu, báo cáo đề cập OH O HO OH R OH O OH H N HO N H 1.13 OH O HO HO OH 6-O--D-Apiofuranosyl1-O-3-Methylbutanoyl-D-glucoz¬ OH OH O O HO HO HO OH O HO OH O OH OH OH O HO O OH 1.2 CÂY CÀ PHÊ CHÈ VÀ SỬ DỤNG TRONG Y HỌC CỔ TRUYỀN OH 1.2.1 Mô tả thực vật HO OH 1.9 Mascaroside 1.10 Mozambioside Cây Cà phê chè có tên khoa học Coffea arabica, thuộc chi Coffea, họ Rubiacea, lớp Magloniopsida, ngành Magloniophta, giới Platae Terpenoit Cà phê chè tên gọi theo tiếng Việt, loài cà phê có nhỏ, 17 thƣờng để thấp giống chè loại công nghiệp phổ biến Việt Nam OH 16 15 Phân bố địa lí: Cây cà phê chè (Coffea arabica) có nguồn gốc từ 18 19 O 13 14 21 10 O 12 Ethiopia Cây cà phê chè đƣợc đƣa vào Ả Rập trƣớc kỉ XV đƣợc trồng 11 đảo Java Indonesia vào năm 1690 Sau đó, đƣợc trồng rộng rãi 20 nhiều nơi giới nhƣ: Suriman, Jamaica, Tây Ấn, Trung Mỹ, Yemen, Việt Nam …[39] O 1.11 Bengalensol (3,19-Abeo-11,16-diepoxy-17-hydroxy-3,18-kauradien-2-on) Ở nƣớc ta, cà phê chè đƣợc trồng lần vào năm 1984, lấy giống từ Cuba Cho đến phát triển rộng rãi tỉnh Quảng Ninh, Đắk Lắk, Đắk Nông, Gia Lai, Kon Tum, Lâm Đồng…[6], [45], [46] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Đặc điểm sinh trƣởng phát triển: Cây có tán lớn màu xanh đậm, Đây loài có giá trị kinh tế loài cà phê, chiếm hình bầu dục chiều dài 12cm rộng cm Cây trƣởng thành cao từ - 61% sản phẩm cà phê toàn giới Colombia Brasil hai nƣớc m, để mọc hoang dã cao tới 15 m Hoa màu trắng, nhị vàng, hoa xuất hai loại cà phê Việt Nam nƣớc xuất cà phê lớn thƣờng nở đêm nở hết vào - sáng, cà phê chè có khả tự thứ hai giới nhƣng chủ yếu cà phê vối Năm 2003, Việt Nam giảm 15% thị phấn cao khoảng 90% Quả hình oval, chứa hai hạt cà phê diện tích (khoảng 40.000 ha) cà phê vối để chuyển đổi sang cà phê chè nhằm đem lại giá trị kinh tế cao Trên thực tế, không trồng thử nghiệm trƣớc mà trồng diện rộng vấp phải nhiều khó khăn nhƣ sâu bệnh nấm phá hoại, điều kiện tự nhiên không phù hợp nên xuất thấp [41] 1.2.2 Một số thuốc chữa bệnh sỏi thận Y học cổ truyền Cho đến nay, Y học dân gian Việt Nam sử dụng nhiều thuốc, dƣợc liệu để điều trị bệnh sỏi thận Dƣới số thuốc dƣợc liệu để điều trị sỏi thận * Giáng Thạch Thang: Cam thảo tiêu 30g, Đông quỳ tử 10g, Giáng hƣơng 3g, Hải kim sa: 10g, Hoạt thạch: 10g, Kê nội kim 10g, Kim tiền thảo: 30g, Ngƣ não thạch: 10g, Xuyên ngƣ đằng: 10g Sắc uống Tác dụng: nhiệt, lợi thấp, trị hạ tiêu có thấp nhiệt, sỏi đƣờng tiết niệu * Tang Căn Tam Kim Nhị Thạch Thang: Hải kim sa: 30g, Hoạt thạch: 30g, Kê nội kim(rang với cát): 10g, Kim tiền thảo: 30g, Ngƣ đằng: 10g, Tang Hình 2.1: Cây Cà phê chè (Coffea arabica) Cây Cà phê chè đƣợc trồng chủ yếu nƣớc có khí hậu nhiệt đới Tuy nhiên điều kiện thuận lợi cho phát triển Cà phê chè vùng đất cao từ 1375-1830 m khô Nhiệt độ thích hợp từ 16-25 0C, lƣợng mƣa khoảng 1000 mm Cà phê chè sau trồng khoảng đến năm bắt đầu cho thu hoạch 25 năm dừng lại Thực tế sống đƣợc khoảng 70 năm [1], [5], [6], [38-44] Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên phụ căn: 30g, Thạch vi: 16g, Tỳ giải: 10g, Vƣơng bất lƣu hành: 10g Sắc uống Tác dụng: nhiệt, lợi thấp, thông lâm, thống, trị thận hƣ, thấp nhiệt uẩn kết, sỏi đƣờng tiểu * Thông Phao Thang: Bại tƣơng thảo: 16g, Biển súc: 6g, Cát cánh: 4g, Cù mạch: 6g, Lậu lô: 10g, Mông hoa: 16g, Thanh bì: 10g, Vƣơng bất lƣu hành: 15g Sắc uống Tác dụng: Hành ứ, thông lâm Trị thấp nhiệt bàng quang, ứ trệ hạ tiêu, sỏi đƣờng tiểu http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn * Trân Kim Thang Gia Giảm: Hải kim sa: 16g, Kê nội kim: 12g, Lộ lô Tác dụng: Ôn thận, hành thuỷ Trị thận khí hƣ tổn, sỏi đƣờng tiểu thông: 16g, Mạch môn: 10g, Tiểu hồi: 10g, Trạch tả: 12g, Trân châu: 60g, Ty [28-36] Hầu hết thuốc trị sỏi thận gồm nhiều vị thuốc phổ qua lạc: 12g, Vƣơng bất lƣu hàng: 12g Sắc uống biến có mặt Kim tiền thảo, điều trị kéo dài Riêng thuốc cổ truyền Tác dụng: Thanh nhiệt lợi thấp, thông lâm, thạch Trị thấp nhiệt hạ chú, uất kết lâu ngày làm cho tạp chất nƣớc tiểu đọng lại thành sỏi, đƣờng tiểu có sỏi * Niệu Lộ Bài Thạch Thang: Biển súc: 24g, Chi tử: 20g, Chỉ xác: 10g, Chích thảo: 10g, Cù mạch: 15g, Đại hoàng: 12g, Hoạt thạch: 15g, Kim tiền thảo 30g, Mộc thông: 10g, Ngƣ tất 15g, Thạch vi: 30g, Xa tiền sử: 24g Sắc uống Tác dụng: Tiêu sỏi, thông lâm, hành khí, hoá ứ, lợi thấp nhiệt Trị dân tộc Dao, thuộc loại độc vị, thuốc cổ truyền độc đáo sử dụng loại thảo dƣợc cà phê chè, tác dụng sỏi thận với kích thƣớc nhỏ 10mm tốt thời gian ngắn 20 - 30 ngày Bài thuốc đƣợc đồng bào dân tộc Dao sử dụng có hiệu nhƣ sau: + Thu hái thuốc: Thu hái quanh năm, thời gian thu hái thích hợp ngày từ - 12 sáng, thu hái bánh tẻ già + Sơ chế bảo quản thuốc: Sau thu hái, cà phê đƣợc hong khô sấy nhiệt độ 600C, tránh ánh nắng tốt Khi đủ khô đƣợc đem thái nghiền nhỏ (giống nhƣ chè cám) bảo quản nơi khô thoáng mát thấp hạ chú, sỏi đƣờng tiểu + Cách sử dụng: Lấy 15 - 20g cà phê chè sấy khô nghiền nhỏ cho Bài thuốc thích hợp với chứng sau: + Sỏi có đƣờng kính ngang nhỏ 1cm, đƣờng kính dài nhỏ 2cm + Hệ tiết niệu dị dạng giải phẫu biến đổi bệnh lý * Liệu Lộ Kết Thạch Thang: Bạch vân linh: 10g, Hải kim sa: 15g, Hoạt vào x 250 ml nƣớc sôi (giống nhƣ pha trà) chiết đƣợc khoảng 700 ml dịch dùng uống hết ngày (4-5 lần: sáng, trƣa, chiều tối giống nhƣ uống trà) Khoảng thời gian điều trị từ 20 - 30 ngày, tuỳ thuộc vào kích cỡ viên sỏi + Tác dụng: Có tác dụng sỏi thậnvới kích cỡ nhỏ 10 mm tốt thạch: 12g, Hổ phách: 3g, Kim tiền thảo: 15g, Mộc thông: 6g, Thanh bì: 10g, Xa tiền tử: 10g Sắc uống thời gian ngắn 20 - 30 ngày Hiện ngƣời ta biết nhiều hạt cà phê nhƣng thành phần Tác dụng: lợi thấp, hoá ứ, trị sỏi bàng quang hoá học tác dụng Cà phê chè (Coffea arabica) chƣa thấy có tài * Thược Dược Cam Thảo Thang Gia Vị: Bạch thƣợc, Trân châu mẫu: liệu, báo cáo đề cập 30g, Cam Thảo, Đàn hƣơng, Nga truật, Nguyên hồ, Hồi hƣơng đều: 10g, Điền 1.3 MỘT SỐ ANCALOIT QUAN TRỌNG SỬ DỤNG TRONG Y HỌC sâm, Mạch môn, Bạch vân linh 12g Sác uống 1.3.1 Giới thiệu chung ancalnoit Tác dụng: Hoãn cấp, thống Trị thận hƣ, lƣng đau, khí âm suy, khí nghịch, sỏi niệu quản * Phụ Kim Thang: Kim tiền thảo: 30g, Phụ tử 12g, Thục địa: 20g, Trạch tả 10g Sắc uống Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Ngày nay, khái niệm ancaloit đƣợc hiểu hợp chất tồn giới thực vật (thƣờng hợp chất vòng) chứa nitơ, có tính kiềm yếu phần lớn số chúng có hoạt tính sinh học mạnh, liều cao chất độc, với liều thấp chúng lại dƣợc phẩm vô hữu ích tên “alcaloids” nghĩa có tính kiềm yếu http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 10 11 Các hợp chất ancaloit nhóm dƣợc phẩm dị vòng chứa nitơ quan trọng nhất, cho dù năm gần có nhiều dƣợc phẩm dị vòng chứa nitơ đƣợc tổng hợp đƣa chữa bệnh Trong thực vật, ancaloit thƣờng có cấu trúc hóa học gần giống Ancaloit tự nhiên phần lớn thƣờng dạng liên kết (dạng muối) với axit hữu đơn giản (axit axêtic, axit oxalic, axit sữa, táo, axit 2,3-dihydroxisuccinic, axit chanh, ), vài thực vật (đặc biệt thực vật giàu ancaloit) ancaloit liên kết với axit hữu đặc chƣng với chúng nhƣ: axit fumaric, axit cevadinic, axit meconic, Phần lớn ancaloit hợp chất tinh thể rắn, vài hợp chất số chúng dạng lỏng làm phƣơng pháp chƣng cất mà không bị phân hủy (coniin, arecolin, nicotin ) nhiệt độ phòng Các ancaloit rắn  Thuốc thử Dragendorff hay Kraut (1881): KBiI4 [Kali-bizmut-iodua]: Thuốc thử ancaloit cho tủa kết tinh màu vàng cam (đỏ)  Thuốc thử Bouchardat (1839) hay Wagner (1863): KI3 [dung dịch kali-iodua 0,1N + I2]: cho tủa kết tinh màu nâu đỏ sẫm với ancaloit  Thuốc thử Sonnenchein (1857): H3[P(Mo3O10)4], axit phosphormolibdenic: Tạo tủa tƣơng đƣơng mol với hầu hết ancaloit Đặc biệt nhạy quinin strychnin  Thuốc thử Godeffroys: K4[Si(W3O10)4], axit silicowonframic: Ngƣời ta sử dụng dung dịch nƣớc 5% muối natri nó, cho phản ứng nhạy với ancaloit cho tủa màu trắng  Axit cheric (tannin): Tạo tủa vô định hình không màu trắng vàng  Muối Reinecke: NH4[Cr(SCN)4(NH3)2], Amoni-tetrarodanato-diammin- thƣờng có vị đắng ancaloit lỏng thƣờng có vị cay Các hợp chất ancaloit dạng bazơ tự hầu hết không tan nƣớc, cromat(III): Ban đầu, ngƣời ta sử dụng nhƣ tác nhân tạo tủa với amin bậc nhiên tan tốt chloroform Trong ancaloit thƣờng chứa II amin tercier Rosenhaler sử dụng để xác nhận có mặt cacbon bất đối, hoạt động quang học (αD) thƣờng tồn thực vật ancaloit cho tinh thể đặc trƣng dạng định [21], [22]  Natri-tetraphenyl-borat (Kalignost), Na[B(C6H5)4]: Ban đầu, ngƣời ta 1.3.2 Phƣơng pháp phân tích sử dụng nhƣ tác nhân thử kali, sau đƣợc sử dụng thử ancaloit thông 1.3.2.1 Phân tích định tính thƣờng, cho tủa màu trắng axit axêtic Ngƣời ta sử dụng nhiều thuốc thử để xác nhận có mặt Cần lƣu ý rằng: amin tổng hợp tercier quaternary amin ancaloit thực vật Do sở phản ứng hóa học ancaloit phần lớn thƣờng cho phản ứng tủa ancaloit [21], [22] không rõ ràng, nên ngƣời ta phân biệt phản ứng phản ứng màu 1.3.2.1.2 Các phản ứng tạo màu phản ứng tạo tủa Trong số phản ứng ancaloit, phản ứng ancaloit với axit 1.3.2.1.1 Các phản ứng tạo tủa  Thuốc thử Mayer (1865): K2HgI4 [kali-thủy ngân (II) iodua kaliumiodomercurat]: Là thuốc thử ancaloit thông thƣờng cho tủa màu trắng (vàng trắng) không tan kể dung dịch axit loãng Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên khoáng đặc cho khả phân biệt Các phản ứng cho kết tốt ancaloit có độ cần thiết Đặc biệt phản ứng tạo màu với axit H2SO4 đậm đặc dựa sở khả hút nƣớc ôxy hóa [21], [22] http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 60 61 3.2.2.6 Hợp chất cafein (COF.Anc - C8H10N4O2) O H-NMR: 500MHz, δ (ppm), nội chuẩn TMS, dung môi CDCl3: H8 (s, 10 N 7,53); H10 (s, 3,4); H11 (s, 3,58); H12 (s, 4,0) 13 C-NMR: 125 MHz, δ (ppm), nội chuẩn TMS, dung môi CDCl3: C2 (s, 151,8); C4 (s, 148,8); C5 (s, 107,7); C6 (s, 155,5); C8 (d, 141,4); C10 (q, 12 O 27,9); C11 (q, 29,8); C12 (q, 33,6) N N N 11 Cafein Phổ 1H-NMR cho biết phân tử COF.Anc có loại H xuất độ dịch chuyển hóa học 3,4; 3,58; 4,0 7,53 ppm Theo tính toán tích phân cho biết phân tử có 10 nguyên tử H Phân tích phổ 13C-NMR thấy phân tử có cacbon độ dịch chuyển hóa học 151,8; 148,8; 107,7; 155,5; 141,4; 33,6; 29,8; 27,9 ppm Các phổ 13C-NMR, DEPT HSQC cho biết phân tử có nhóm metyl (CH3) độ dịch chuyển hóa học 33,6; 3.3 VỀ HOẠT TÍNH BÀI SỎI THẬN CỦA LÁ CÀ PHÊ CHÈ Để thử hoạt tính sỏi thận cà phê chè, thực theo phƣơng pháp Đông Y kết hợp với việc kiểm tra phƣơng pháp siêu âm cho bệnh nhân sỏi thận đƣợc điều trị thuốc kim tiền thảo mà kết tích cực 29,8; 27,9 ppm, nhóm metin (CH) độ dịch chuyển hóa học 141,4 ppm Cả bệnh nhân sỏi thận đƣợc sử dụng thuốc độc vị cà phê chè cacbon bậc độ dịch chuyển hóa học 151,8; 148,8; 107,7; 155,5 thời gian 25 - 30 ngày cho kết tốt (các bệnh nhân sỏi thận đƣợc Quan sát phổ HMBC COF.Anc cho thấy tƣơng tác xa nhƣ bảng sau kiểm tra kích cỡ trƣớc, sau sử dụng thuốc) Tất bệnh nhân Bảng 3.3: Bảng tƣơng tác xa C STT Tƣơng tác xa C → H (HMBC) STT H(HMBC) COF.Anc khỏi bệnh sau điều trị Kết siêu âm cho thấy bệnh nhân hết Tƣơng tác xa C → H (HMBC) sỏi trở lại trạng thái bình thƣờng Các kết hoạt tính sỏi thậncủa C2 H10, H11 C8 H11 C4 H8 C10 - C5 H8, H11 C11 - C6 H10 C12 - cà phê chè xem phần phụ lục Qua phân tích số liệu phổ 1D 2D-NMR chất COF.Anc so sánh số liệu phổ chất chuẩn cafein khẳng định hợp chất COF.Anc phân lập đƣợc từ dịch chiết EtOAc cà phê chè cafein với cấu trúc hóa học nhƣ sau: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 62 63 KẾT LUẬN DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Lần cà phê chè trồng Việt Nam đƣợc sàng lọc hoá thực vật cho biết cà phê chè có lớp chất sau: ancol mạch dài Báo cáo hội nghị khoa học công nghệ sinh học toàn quốc năm 2009: „„VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA (chất béo), phytosterol, ancaloit, glycosit, triterpen LÁ CÀ PHÊ CHÈ (COFFEA ARABICA)’’ Các dịch có n-hexan, EtOAc MeOH cà phê chè tác dụng kháng vi sinh vật thử gồm: Nguyễn Quyết Tiến1, Phạm Thị Hồng Minh1, Nguyễn Quốc Nam Hải2 - Vi khuẩn Gr (-) - Vi khuẩn Gr (+) Viện Hóa học, Viện KH Công nghệ Việt Nam, 18-Hoàng Quốc - Nấm men Việt, Cầu Giấy, Hà Nội Từ cà phê chè phân lập đƣợc chất gồm: Ancol mạch dài (hexatriacontanol), -sitosterol,, Stigmast-5,22-dien-24R-3β-ol, 3β-Sitosteryl-1-O- Đại học Thái Nguyên, Đại học Sƣ phạm Thái Nguyên, thành phố Thái Nguyên β-D-glucopyranosit, axit lup-3β-hydroxi-12(13)-en-28-oic cafein Triterpen (axit lup-3β-hydroxi-12(13)-en-28-oic) chất lần phân lập đƣợc từ cà phê chè Bằng phƣơng pháp phổ đại (IR, MS, 1H-NMR, 13 C-NMR, 1D 2D) cấu trúc hoá học đƣợc chứng minh Hoạt tính sỏi thận cà phê chè đƣợc khẳng định phƣơng pháp Đông Y thực nghiệm kiểm tra phƣơng pháp siêu âm cho kết tốt Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 64 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO 15 Wanner, H et al., Phytochemistry, 1975, 14, 747-750 (isol, synth, uv, ms) A Tiếng Việt 16 Zheng, X.-Q et al., Phytochemistry, 2002, 60, 129-134 (isol, bibl) Võ Văn Chi, Từ điển thuốc Việt Nam, tr 155, 1999 17 Ducruix, A et al., Chem Comm., 1975, 396 (Mascaroside) Phan Đình Châu, Hoá Dƣợc Kĩ Thuật Tổng Hợp I, tr 244- 18 Prewo, R et al., Phytochemistry, 1990, 29, 990 (cryst struct, Mozambiosi_ de) 245,186-187, 2006 Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam, III, NXB trẻ, tr 175- 19 (cinnamoyltryptophans) 176, 2003 Phạm Hữu Điển, Nguyễn Quyết Tiến, Giáo trình Hoá Dƣợc NXB 20 Natural products Dictionary CD-ROM 2007 ĐHSP 2008 21 Végh Anital- Szász György- Takács Mihály, Gyógyszerészi 1900 loài có ích Việt Nam, NXB giới, Hà Nội, (9/1993) Vũ Triệu Mân, Lê Lƣơng Tề, Giáo trình nông nghiệp, tr.168- kémia, Franklin nyomda, Budapest, 1977 22 Töke László, Szeghy Lajos, Fejzetek a gyógyszerkémiából, Tankönyvkiadó, Budapest, 2002 169, 2001 Murata, M et al., Biosci., Biotechnol., Biochem., 1995, 59, 1887 Nguyễn Văn Đàn (1997), Các phương pháp nghiên cứu thuốc, 23 Pual Pual Cos, Louis Maes, Jean - BoscoSindambiwe, Arnold J.Vlietinck, Dirk Vanden Berghe,” Bioassay for antibacterial and NXB Y- Dƣợc, Tp Hồ Chí Minh antifungal activities”, Laboratory for Microbiology, Pasitology and B Tiếng nƣớc Hygien, Faculty of Pharmaceutical, Biomedical and Veterinary Schlee, D et al.,biosynth, Phytochemistry, 1963, 2, 231-236 Weckerle, B et al., coffee constits, Phytochemistry, 2002, 60, Sciences, University of Antwerp Belgium, tr 1-13, 2005 24 Franz Hadacek, Harald Greger “ Testing of Antifungal Natural 409-414 Products: Methodologies, Comparability of Results and Assay 10 Hasan, C.M et al., Nat Prod Lett., 1994, 5, 55 (isol, pmr, cmr) Choice”, Phytochemical analyis, tr 137-147, 2000 11 Weinberg, B.A et al., The World of Caffeine, Routledge, 2001 (book) 12 Gremaud, G et al., Phytochemistry, 1996, 42, 1547 (isol) pentacyclic triterpenoids - a compilation and some salient 13 Folstar, P et al., J Agric., coffee amides, hplc, Food Chem, 1979, features; Phytochemistry, Vol.39, No.6, pp 1517-1575; 1994 26 27, 12-15 14 25 Shashi B., Mahato and Asish P Kundu; 13 C-NMR spectra of Arnoln Weiss Berger and Edward C Taylor, Indoles Parts 1, 2, Nishida, R et al., Experientia, 1987, 43, 342-344 (5-Hydroxy-N- The chemistry of Heterocyclic compounds, John Wiley and Sons methyltryptamine) Inc, New York, London, Sydney, Toronto, 1972 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 66 67 PHỤ LỤC C Trang Web 27 http://www.machsong.org/modules.php?name=News&file=article &sid=344 28 1.1 Phổ 1H - NMR COF.E4C 69 http://www.yhoccotruyen.htmedsoft.com/benhhoc/htmdocs/Benh_ VanS_ /SoiThan.htm 29 http://www.thaythuoccuaban.com/thuoc_chua_benh_viem_dau_ct uong_ /soithan.html 31 http://www.suckhoedoisong.vn/home/Chua-benh-bangYHCT/Chua-soi-than-bang-Dong-y/60/20085209275869.htm 32 http://www.ykhoanet.com/yhoccotruyen/29_410.htm 33 http://www.nhantrachoc.net.vn/nthportal/forum/showthread.php?t=5585 34 http://www.vtv.vn/VN/TrangChu/TinTuc/DoiSong/2007/3/17/91467/ 35 http://www.khoahocphothong.net/forum/showthread.php?t=74436 36 http://www.thanhnien.com.vn/Suckhoe/2008/4/19/235178.tno 37 http://www.en.wikipedia.org/wiki/ancaloit 38 http://www.Wapedia - Wiki Cà phê chè.htm 39 http://www.humixvn.com/Articles/?id=423 40 http://thuvien-ebook.com/forums/archive/index.php/t-1390.html 41 http://www.kAo_coffee 24h.htm 42 http://www.thuvien-ebook.com/forums/archive/index.php/t-1390.html 43 http://www.KHOA NÔNG HỌC.htm 44 http://www.docstoc.com/docs/3050809/hoi dap ve ca phe-Rubiaceae 45 http:// www.diendan.bacgiangview.com/showthread.php?t=401 46 http://www.saga.vn/view.aspx?id=5965 47 http://www.nomafsi.com.vn/newsdetail.asp?mnz=169&mno=0&ms=415 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 1.2 Phổ 13C-NMR COF.E4C 70 1.3 Phổ DEPT COF.E4C 71 http://www.thuvienkhoahoc.com/tusach/S%E1%BB%8Fith%E1% BA%A_ dn 30 Ancol mạch dài (hexatriacontanol) COF.4C Các hợp chất sterol 2.1 -Sitosterol 2.1.1.Phổ hồng ngoại FT-IR 72 2.1.2 Phổ khối lƣợng EI-MS 73 2.1.3 Phổ 1H-NMR 74 2.1.4 Phổ 13C-NMR 75 2.2 Stigmast-5,22-dien-24R-3β-ol 2.2.1 Phổ hồng ngoại FT-IR 76 2.2.2 Phổ khối lƣợng EI-MS 77 2.2.3 Phổ 1H-NMR 78 2.2.4 Phổ 13C-NMR 79 2.3 3β-Sitosteryl-1-O-β-D-glucopyranosit 2.3.1 Phổ 1H-NMR 80 http://www.lrc-tnu.edu.vn 2.3.2 Phổ 13C-NMR DEPT 81 Hợp chất caffein COFE.4C 3.3.1 Phổ 1H-NMR 82 3.3.2 Phổ 13C-NMR 83 3.3.3 Phổ DEPT 84 3.3.4 Phổ HSQC 85 3.3.5 Phổ HMBC 86 Kết thử hoạt tính chữa sỏi thận chị Tùng 87 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phổ 13C – NMR COFE4C 69 Phổ H-NMR COFE4C 68 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 71 Phổ DEPT COF4EC 70 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 73 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 74 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 75 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 76 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 77 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 78 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 79 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 81 Phổ 1H-NMR COF.Anc 80 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 83 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phổ DEPT COF.Anc Phổ 13C – NMR COF.Anc 82 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 84 85 Phổ HMBC COF.Anc Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 86 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 87 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 88 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 89 http://www.lrc-tnu.edu.vn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn [...]... chố (Coffea arabica) xem s 2.1 Sc ký ct thng s dng silica gel Merck 60, c ht 70 - 230 mesh (0,040 - 0,063 mm) v 230-400 mesh (0,063 - 0,200 mm) S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 34 35 S 2.1: S ngõm chit mu lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) Bng 2.2: Khi lng cỏc cn chit thu c t lỏ cõy C phờ chố (Coffea. .. Nu cht lng ng cú kim trong hn ng Kt qu phõn tớch nh tớnh cỏc nhúm cht trong lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) c nờu trong bng 2.2 khụng kim cú th xem l phn ng dng tớnh, nu em axit hoỏ ng cú Bng 2.3: Kt qu nh tớnh cỏc nhúm cht trong lỏ cõy C phờ chố kim bng mt vi git HCl m c s lm cho dch ang trong vn c v (Coffea arabica) mu vng xut hin cú th to ra ta l phn ng dng tớnh STT Nhúm cht trng axit, nu cho... cha cỏc hp cht (q, 27,9); C11 (q, 29,8); C12 (q, 33,6) cú phõn cc tng i ging nhau Quỏ trỡnh ngõm chit lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) c thc hin theo phng ỏn 1 (S 2.1) 3.2 PHN LP V NHN DNG CC HP CHT Cể TRONG CC DCH CHIT KHC NHAU CA L CY C PHấ CHẩ Cỏc dch chit t lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) u l nhng hn hp phc tp cha cỏc hp cht khỏc nhau phõn lp tng cht ra khi hn hp, ó s dng cỏc phng phỏp sc... ngy Vỡ th, lỏ cõy c phờ chố c chn lm i tng Cụng ngh Vit Nam nghiờn cu hoỏ thc vt 2.1.4 Phng phỏp phõn lp cỏc hp cht t dch chit Nhim v ca lun vn l tỡm hiu mt s thnh phn hoỏ hc cú trong lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) c trng ti xó Hong Qu, huyn ụng phõn tớch v phõn tỏch hn hp cỏc cht cng nh phõn lp cỏc hp cht cn s dng phi hp cỏc phng phỏp sc ký nh: - Sc ký lp mng (SKLM) Triu, tnh Qung Ninh 2.1 I TNG... kim nh bao gm: Ampicilin, Tetracylin, Amphoterixin B v Nystatin subtillis (Bs) ATCC 6633 Bng 2.4: Kt qu th hot tớnh khỏng vi sinh vt kim nh cỏc cn chit Lactobasillus fermentun N4, ca lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) Enterococus faecium B650 - Nm men: Candida albicans (Ca) ATCC10231 Tờn chng vi sinh vt kim nh * Mụi trng nuụi cy MHB (Mueller - Hinton Broth), MHA (Mueller - Hinton Agar), TSB (Tryptic... http://www.lrc-tnu.edu.vn 30 31 CHNG 2 2.1.2 Phng phỏp ngõm chit 1,2 kg mu khụ ó nghin nh c ngõm chit ln lt vi tng loi PHN THC NGHIM dung mụi: n-Hexan, etylaxetat, metanol trong thit b siờu õm, nhit 50 Cõy c phờ chố (Coffea arabica) l loi cõy cụng nghip c du nhp sm vo Vit Nam ó cú nhiu cụng trỡnh nghiờn cu v ht c phờ chố nhng nhng hiu bit v thnh phn hoỏ hc v tỏc dng dc lớ ca lỏ cõy c phờ chố vn cũn rt s si Malaysia... ton phự hp vi ph ca stigmast-5,22-dien-24R-3-ol S húa bi Trung tõm Hc liu i hc Thỏi Nguyờn http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 49 Bng 3.1 S liu ph 13C-NMR (CDCl3, 125Mhz) ca mt s sterol trong lỏ cõy C phờ chố (Coffea arabica) STT Stigmasterol (ppm) -Sitosterol (ppm) STT Stigmasterol (ppm) -Sitosterol (ppm) 3-Sitosteryl-1-O-D-glucopyranosit 3-Sitosteryl-1-O-- 23 129.2 d 26.1 t 28.8 t D-glucopyranosit 24 50.1... phờ chố cú cỏc lp cht sau: ancol mch di Bỏo cỏo hi ngh khoa hc cụng ngh sinh hc ton quc nm 2009: V THNH PHN HểA HC V HOT TNH SINH HC CA (cht bộo), phytosterol, ancaloit, glycosit, triterpen L C PHấ CHẩ (COFFEA ARABICA) 2 Cỏc dch cú n-hexan, EtOAc v MeOH ca lỏ c phờ chố khụng cú tỏc dng khỏng cỏc vi sinh vt ó th gm: Nguyn Quyt Tin1, Phm Th Hng Minh1, Nguyn Quc Nam Hi2 - Vi khun Gr (-) - Vi khun Gr (+)