ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN LỜI CẢM ƠN Thực luận văn thạc sĩ công việc khó khăn mà em phải làm từ trước Trên đường bắt đầu nghiên cứu khoa học thật ĐẶNG UY NHÂN tránh khỏi nhiều bỡ ngỡ, khó khăn nhiều lần thất bại … lời động viên, giúp đỡ chân thành từ thầy cô, bè bạn gia đình chắn em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất người THÀNH PHẦN HÓA HỌC LÁ CÂY DÓ BẦU AQUILARIA CRASSNA PIERRE Em xin cảm ơn thầy Trần Lê Quan, người hết lòng lo lắng, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài Thầy không truyền dạy cho em kiến thức chuyên môn sâu sắc mà hướng dẫn cho em nhiều điều bổ ích sống CHUYÊN NGÀNH: HÓA HỮU CƠ Mà SỐ: 60 44 27 Em xin cảm ơn GS Poul Erik Hansen cộng thầy hết lòng giúp đỡ em thời gian làm việc đại học Roskilde Đan Mạch Xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến GS.TSKH Nguyễn Công Hào, PGS.TS Nguyễn Ngọc Hạnh thầy TS Nguyễn Trung Nhân đóng góp nhiều ý kiến LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC thiết thực quý báu để em hoàn chỉnh luận văn Xin chân thành cảm ơn đến thầy cô, em sinh viên, người bạn khoa Hóa phòng Thí nghiệm Phân tích trung tâm trường Đại học Khoa học tự NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS TRẦN LÊ QUAN nhiên TP HCM, người sát cánh trình thực đề tài Xin cảm ơn em, vợ tôi, người lo lắng, động viên, hỗ trợ hết lòng để vững bước đường nghiên cứu khoa học Con xin cám ơn cha má, người sinh nuôi khôn lớn đến ngày hôm Xin cha phù hộ cho vững bước đường THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2010 2.2.4 Hợp chất DB4 25 MỤC LỤC 2.2.5 Hợp chất DB5 28 Trang LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC Danh mục chữ viết tắt Lời mở đầu 1 TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu dó bầu 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Phân bố 1.1.3 Phân loại 1.1.4 Đặc tính sinh học 1.1.5 Công dụng trầm hương kỳ nam 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học trầm hương 1.2.2 Thành phần hóa học thân dó bầu 12 1.2.3 Thành phần hóa học dó bầu 14 1.3 PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ GỐC TỰ DO DPPH• 15 1.3.1 Khái niệm gốc tự 15 1.3.2 Lợi ích gốc tự 16 1.3.3 Tác hại gốc tự 16 1.3.4 Gốc tự DPPH• 16 1.3.5 Phương pháp xác định khả chống oxy hóa 17 NGHIÊN CỨU 19 2.1 Hoạt tính chống oxy hóa cao chiết từ dó bầu 19 2.2 Thành phần hóa học dó bầu A crassna 21 2.2.1 Hợp chất DB1 21 2.2.2 Hợp chất DB2 22 2.2.3 Hợp chất DB3 23 2.2.6 Hợp chất DB6 29 2.2.7 Hợp chất DB7 32 2.3 Hoạt tính chống oxy hóa chất cô lập 35 2.4 Hàm lượng chất dó bầu 36 THỰC NGHIỆM 37 3.1 Điều kiện thực nghiệm 37 3.2 Thu hái – xử lý mẫu 39 3.3 Thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 39 3.3.1 Quy trình thử hoạt tính 39 3.4 Quy trình cô lập 41 3.4.1 Khảo sát cao ethyl acetate 41 3.4.2 Khảo sát cao butanol 41 3.5 Định lượng chất dó bầu 43 3.5.1 Xử lý mẫu 43 3.5.2 Điều kiện phân tích 43 3.5.3 Xử lý số liệu phân tích 45 KẾT LUẬN 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 48 PHỤ LỤC LỜI MỞ ĐẦU DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Cây dó bầu hay gọi trầm hương loại có khả hình thành AC : acetone phần lõi thân sản phẩm quí trầm hương kỳ nam có giá trị kinh tế COSY : Correlation Spectroscopy cao, thị trường quốc tế Là loại đặc trưng phân bố vùng Đông d : doublet, mũi đôi Nam Á, có khả tạo sản phẩm có giá trị, lại thích nghi với địa hình dd : mũi đôi đôi đồi núi nên dó bầu khuyến khích nhân giống phát triển rộng rãi khắp DEPT : Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer tỉnh nước Theo thống kê Hội Trầm hương đến có 23 DMSO : dimethyl sulfoxide tỉnh thành trồng dó bầu với tổng diện tích 8000 Ước tính diện tích trồng DPPH : 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl dó bầu năm tăng từ 2400 - 4000 đến năm 2010 diện tích trồng dó bầu EA nước lên đến 30.000 : ethyl acetate GC-MS : sắc ký khí ghép khối phổ HE : hexane Việc phát triển loài quý việc thu nguồn lợi lớn kinh tế phù hợp để cải thiện tình hình môi trường ngày xuống cấp nạn chặt HMBC : Heteronuclear Multiple Quantum Correlation phá rừng bừa bãi Tuy nhiên thời gian thu hoạch lâu chưa có HPLC : sắc ký lỏng hiệu cao phương pháp cụ thể để tạo trầm, người dân chủ yếu dựa vào kinh nghiệm nên gặp HR-MS : khối phổ phân giải cao phải nhiều rủi ro Vấn đề ảnh hưởng lớn đến doanh nghiệp trồng dó HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence bầu doanh nghiệp vừa nhỏ, việc nghiên cứu nguồn thu khác J : số ghép spin m : multiplet, mũi đa NMR : cộng hưởng từ hạt nhân nhanh hơn, ổn định cho người dân trồng dó bầu vô cần thiết Đã có nhiều nghiên cứu trầm hương (agarwood) tinh dầu trầm công bố nước, nhiên có nghiên cứu PHPLC : sắc ký lỏng hiệu cao điều chế dó bầu Aquilaria crassna Để góp phần giải vấn đề nguồn thu cho người q : quartet, mũi bốn dân mở rộng thêm hiểu biết dó bầu Việt Nam , đề tài s : singlet, mũi đơn tiến hành khảo sát thành phần hóa học dó bầu A SKC : sắc ký cột crassna, thử nghiệm hoạt tính chống oxi hóa cao chiết hợp chất tinh khiết cô t : triplet, mũi ba lập từ đánh giá khả sử dụng dó bầu nguồn nguyên liệu sản xuất sản phẩm thứ cấp tạo nguồn thu cho người dân trồng dó bầu khoảng thời gian chờ cho trầm Cây ba tuổi hoa Hoa nhỏ có TỔNG QUAN hình chuông màu vàng lục, trắng nhạt vàng 1.1 GIỚI THIỆU VỀ CÂY DÓ BẦU xám Hoa mọc thành chùm hay thành tán Cây Tên khoa học: Aquilaria crassna Pierre thường hoa, kết từ tháng đến tháng Tên thông thường: trầm hương, dó bầu Họ: Trầm hương (Thymelacaceae ) Hình 1.3 Hoa dó bầu Bộ: Mytales Hạt có phần dạng nón Lớp: Magnoliopsida phần kéo dài dưới, vỏ hoá gỗ, bên Hình 1.1 Cây dó bầu mềm Quả khô, loại nang, hình lê có lông 1.1.1 Đặc điểm thực vật [2][3] Cây dó bầu loại thân gỗ sống lâu năm, cao đến 30-40 m, đường mịn, thông thường dài cm, rộng cm, dày cm Hình 1.4 Quả dó bầu kính 1-1.5 m, vỏ xám, tán thưa, thân thẳng, có xơ Cây dó bầu phân bố rải rác khu rừng thuộc kiểu ẩm nhiệt đới 1.1.2 Phân bố [2][3] nguyên sinh thứ sinh, sống thích hợp rừng hỗn giao, rộng Cây dó Cây dó bầu thường mọc rải rác vùng rừng dọc miền Trung bầu tái sinh chồi hay hạt, sinh trưởng phát triển điều tỉnh phía Nam, xuống tận An Giang, Kiên Giang đảo Phú Quốc, có nơi có mật độ kiện nhiệt độ ban ngày 15-36 oC, ban đêm 5-25 oC cao đạt đến 120-150 cây/ha Ba Rền (Quảng Bình), Hương Khê (Hà Tĩnh) Phân Lá mọc so le, thuôn hay bầu dục giáo, bố tập trung nhiều tỉnh Quảng Ninh, Hà Bắc, Hoà Bình, Tuyên nhọn gốc, thon hẹp đầu, phiến dài 8-10 cm, Quang, Hà Tĩnh, Quảng Bình, Quảng Nam, Gia Lai, Kon Tum, Bình Ðịnh, Phú Yên rộng 3.5-5.5 cm, có mép phồng lên thành vòng, Kiên Giang (đảo Phú Quốc Hà Tiên) mặt màu lục, sáng bóng, nhẵn, mặt nhạt 1.1.3 Phân loại [5] hơn, có lông mềm, cuống dài 4-6 mm Trên giới, có khoảng 25 loài dó bầu Ở nước ta, dó bầu có tất bốn loài A crassna Pierre ex Lecomte, A baillonii Pierre ex Lecomte, A banaense Pham-Hoang-Ho A rugosa L.C.Kiệt & PJ.A Kessler A rugosa L.C.Kiệt & PJ.A Hình 1.2 Lá dó bầu Kessler loài phát gần (2005) GS.TS Lê Công Kiệt (Việt Nam) TS Paul Kessler (Hà Lan) tìm thấy cao nguyên Trung Bộ, xem loài thứ Việt Nam thứ 25 giới 1.1.4 Đặc tính sinh học [5] Cây dó bầu có khả hình thành phần lõi thân loại sản phẩm đặc biệt có giá trị kinh tế cao gọi trầm hương hay kỳ nam Những nghiên cứu trước cho thấy, thân dó bầu có trầm hương kỳ nam Chỉ có số có bệnh chứa trầm phần lõi thân trình xảy dó bầu sống Sản phẩm trầm hương hay kỳ nam kết trình chuyển hóa bệnh lý nơi bị bệnh, bị thương, bị tác động yếu tố bên tạo nên vết thương Ngày nay, người ta sử dụng loài vi sinh để Hình 1.5 Lõi dó bầu sau cấy tạo trầm ba tháng Hình 1.6 Trầm hương tạo nên vết thương cho nhằm tăng khả hình thành trầm hương Tùy thuộc vào tạo trầm hương mà thu sản phẩm khác : Tóc: biến đổi phần chất gỗ hình thành đường đen sợi tóc lượng tinh dầu nên dùng làm nhang đốt Trầm hương: gỗ trầm hương nhẹ, có vị cay, đắng, mùi thơm nhẹ, có màu nâu hay sọc đen, ngấm tinh dầu trầm nhiều tóc Trầm hương tốt dễ chìm nước Khi đốt cháy trầm hương bốc khói lên hình vòng tan biến nhanh không khí Kỳ nam: loại tốt có biến đổi hoàn toàn phần gỗ, thấm nhiều 1.1.5 Công dụng trầm hương kỳ nam [5] Trong y học cổ truyền nước ta, trầm coi vị thuốc quý hiếm, có vị cay, tính ôn, có tác dụng giáng khí, nạp thận, tráng nguyên dương, dùng chủ yếu để chữa bệnh đau ngực, đau bụng, nôn mữa, tiêu chảy, đau dày, hen suyễn, lợi tiểu, giảm đau, trấn tĩnh, hạ sốt, khó thở Ở Ấn Độ Trung Quốc, hương trầm sử dụng để điều trị bệnh ung thư, đặc biệt bệnh ung thư tuyến giáp trạng Y học dân tộc Thái Lan dùng trầm hương để điều trị bệnh tiêu chảy, lợi tiểu, hạ sốt, chống nôn, bổ huyết trợ tim tinh dầu trầm, sản phẩm có màu nâu đậm, đen, xanh, vàng hay trắng Theo Đông y, kỳ nam dùng để trị chứng độc thủy phong thổ gây nên, Kỳ nam nặng nhuyễn, chìm nước, có đủ vị đắng, cay, chua, thơm, làm tiêu chứng chướng mãn, no hơi, đau bụng, ói mửa, hen suyễn, thở gấp, hạ thường hình thành phần lõi trầm hương Kỳ nam chứa nhiều tinh dầu trầm nghịch khí, thông chứng bế khí hư gây nên nên cháy tạo lửa màu xanh, khói lên thẳng cao, bay lơ lửng không khí lâu Người ta thường gói kỳ nam chuối thật kín đem phơi nắng, đến tối đem vào có nhiều chất dầu chảy tốt Muốn giữ kỳ nam tốt lâu nên bọc vào giấy thiếc, bỏ vào hộp có nắp đậy kín để tinh dầu khỏi bay chảy Nước sắc từ gỗ trầm có tác dụng kháng khuẩn, đặc biệt với loại khuẩn Mycobacterium tuberculosis Shigella flexneri Trầm hương có tính cháy cao, đốt tỏa mùi thơm, nhiều quốc gia có tập quán đốt trầm hương nhang sản xuất từ trầm hương dịp lễ cúng Gỗ trầm làm đồ trang trí nội thất quý giá R3 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.2.1 Thành phần hóa học trầm hương 2' Từ năm 1980, thành phần hóa học trầm hương (agarwood) R2 nhóm nhà khoa học T Nakanishi; nhóm Yasuo Shimada; nhóm Masakazu Ishihara ; nhóm Tenji Konishi ; nhóm Regula Naf quan tâm có 8' 1' 7' R1 O 10 nhiều công trình nghiên cứu Các báo cáo cho thấy thành phần hóa học 3' 5' 6' O R1 = OH, R2 =R3=H R1 = OCH3, R2 =R3= H R1 = R3= OCH3 ,R2 = H R1 = R2= OCH3, R3= H R1 = OH, R2 =H R1 = H, R2 = OCH3 4' trầm hương bao gồm chromone sesquiterpen [7-11][14-18] R1 Một số hợp chất chromone[10][11] tìm thấy trầm hương : 6hydroxy-2-(2-phenylethyl)chromone (1), 6-methoxy-2-(2-phenylethyl)chromone O R2 (2), 6-methoxy-2-[2-(3-metoxyphenyl)ethyl]chromone (3), 6,7-dimethoxy-2-(2phenylethyl)chromone (4), 5,8-dihydroxy-2-(2-phenylethyl)chromone (5), 6,7dimethoxy-2-[2(4'-methoxyphenyl)ethyl]chromone (6), (5S, 6S, 7R)-2-[2-(2'acetoxyphenyl)ethyl]-5,6,7-triacethoxy-5,6,7,8,8-pentahydrochromone R2 (7), (5S,6S,7R,8S)-2-(2-phenylethyl-6,7,8-trihydroxy-5,6,7,8-tetrahydroxy-5-[2(phenylethyl)chromonyl-6-oxy]chromone (8), O R1 CH3CO 2,2'-di-(2-phenylethyl)-8,6'- O dihydroxyl-5,5'-bichromone (9), (5S,6S,7R,8S)-2-(2-phenylethyl)-6,7,8-trihydroxy5,6,7,8-tetrahydro-5-[2-(phenylethyl)-7-hydroxychromonyl-6-oxy]chromone CH3CO CH3CO (10), CH3CO bi-(5S,6S,7R,8S)-2-(2-phenylethyl)-6,7,8-trihydroxyl-5,6,7,8-tetrahydro-5-[2(phenylethyl)chromonyl-6,7-dioxy]chromone (11) O O O O O O OH O OH OH HO O O O OH 9 (20), (-)-guaia-1(10),11-dien-15,2-olide (21), (-)-rotundone (22) HO O CHO O OH O OH O O OH O OH 13 12 R 10 14 O O OH OH O 15 R = CHO OH 19 16 R = CH2OH O O O 17 R = CO2H OH 18 R = CO2CH3 O H H H H O 20 O H O O 21 OH O 22 O OH Một số sesquiterpen có khung sườn eudesmane[9] cô lập từ trầm 11 hương (-)-selina-3,11-dien-14-al (23), (+)-selina-4,11-dien-14-al (24), (-)-methyl OH selina-3,11-dien-14-oate (25), (+)-methylselina-4,11-dien-14-oate (26), (+)-methyl 9-hydroxyselina-4,11-dien-14-oate [8][24] Một số hợp chất sesquiterpen có khung sườn guaiane tìm thấy trầm hương α-agarofuran (12), (-)-10-epi-γ-eudesmol (13), oxoagarospirol (14), guaiane (15), (-)-guaia-1(10),11-dien-15-ol (16), (-)-guaia1(10),11-diene-15-carboxylic acid (17), methyl guaia-1(10),11-diene-15- carboxylate (18), (+)-guaia-1,(10),11-dien-9-one (19), (-)-1,10-epoxyguai-11-ene (27), (-)-dehydrojinkoh-eremol (28), neopetasane (29) Năm 2006, nhóm nghiên cứu S Kadota cô lập sesquiterpen có khung spirovetivane (4R,5R,7R)-1(10)-spirovetiven-11-ol-2-one (30).[30] 10 H CHO 23 11 H COOCH3 CHO COOCH3 26 25 24 OH 08 (2R,4aS)-2-(4a-Methyl-1,2,3,4,4a,5,6,7-octahydro-2-napthyl)propanol 0.7 09 nor-Cetoagarofuran 0.5 10 epi-γ-Eudesmol 3.8 11 2-(1,2,3,4,5,6,7,8,8a-Octahydro-8,8a-dimethyl-2-naphtyl)propanal 0.5 12 Agarospirol 4.8 13 Jinkoh-eremol 4.7 14 Valerianol 5.6 O O OH COOCH3 27 28 OH 29 30 Năm 1995, tác giả Regular Naf cộng tiến hành nghiên cứu thành 15 phần hóa học tinh dầu mẫu trầm hương có nguồn gốc từ Ấn Độ (A agallocha Roxb.), sau đem phân tích mẫu tinh dầu phương pháp 16 GC/MS thu kết sau [5] ( Bảng 1.1) 17 Bảng 1.1 Kết GC/MS mẫu trầm hương A agallocha Roxb Ấn Độ STT Hợp chất %GC/MS 18 01 (S)-4a-Methyl-2-(1-methylethyl)-3,4,4a,5,6,7-hexahydronaphthalen 0.6 02 β-Agarofuran 6.4 03 β-Vetispiren 1.4 04 4-Phenyl-2-butanon 3.5 05 α-Vetispiren 1.8 06 (1R,2R)-9-Isopropyl-2-metyl-8-oxatricyclo[7.2.1.01,6]-4,6-dodecadien 6.0 07 (1R,2R)-9-Isopropyl-2-methyl-8-oxatricyclo[7.2.1.01,6]-5-dodecadien 3.3 19 20 21 22 (1S,2S,6S,9R)-6,10,10-Trimethyl-11-oxatricyclo[7.2.1.01,6]dodecan-2carbaldehyde 4-(4-Methoxyphenyl)-2-butanon (5R,10R)-2-Isopropyliden-10-methyl-spiro[4.5]-6-decen-6carbandehid (2R,8S,8aS)-2-(1,2,6,7,8,8a-Hexahydro-8,8a-dimethyl-2-napthyl)-2propanol (5R,7S,10R)-2-Isopropyliden-10-methyl-6-methylen-spiro[4.5]-7decanol Dihydrokaranon (2R,8R,8aS)-2-(1,2,3,5,6,7,8,8a-Octahydro-8,8a-dimethyl-2-napthyl)2-propenol Karanon 0.9 2.4 1.1 4.4 0.6 6.6 2.7 2.2 12 13 O 1.2.2 Thành phần hóa học thân dó bầu[5] H3CO CH2OH Năm 2007, Nguyễn Thị Thùy Trang cộng trường đại học Khoa học tự nhiên HCM cô lập số hợp chất flavon, lignan chromone thân dó bầu A crassna chưa có trầm 5-hydroxy-7,4'dimethoxyflavone (31), 5-hydroxy-7,3',4'-trimethoxyflavone (32), 5,7-dihydroxy3',4'-dimethoxyflavone (33), dimethoxyphenyl)-2,3-bis luteolin (34), HO HO CH2OH OCH3 4-hydroxy-1,4-bis(4-hydroxy-3,5- hydroxymethyl-1-oxo-butane (35), 7-hydroxy-2-(2- H3CO OCH3 OH phenylethyl)chromone (36), 6,7-dimetoxy-2-(2-phenylethyl)chromone (37), 5,5'35 bis [7-hydroxy-2-(2-phenylethyl)]chromone (38) OCH3 OCH3 H3CO O OH O 31 32 33 34 38 14 15 1.2.3 Thành phần hóa học dó bầu Năm 2008, từ dó bầu A sinensis phân bố Trung Quốc nhóm nghiên HO OH OH HO OH OH cứu M Shimazawa, M Iinuma cộng cô lập bốn hợp chất mangiferin (39), iriflophenone 2-O-α-rhamnoside (40), genkwanin 5-O-βprimeveroside (41), iriflophenone 3,5-C,C-β-diglucoside (42), hợp chất 41 O O cho thấy hoạt tính nhuận tràng thử chuột thí nghiệm.[6] HOH2C OH O OH O 44 43 OH HO O HO OH O HO HO HO OH OH R2 HO O 39 O O HO O R1 MeO HO O O OH HO O HO HO H OH H OH O O O HO HO 41 R1 = OCH3 R2 = OCH3 R3 = H R4= -1Glc6-1Xyl O 49 R1 = OCH3 R2 = OH R3 = OH R4= OH Mặc dù giới có nhiều nghiên cứu trầm hương (agarwood ) dó bầu nay, chưa có nghiên cứu thành phần hóa OH OH 46 48 R1 = OCH3 R2 = OH R3 = H R4= OH R4 HO O 45 R1 = -1Glc R2 = OH R3 = H R4= OCH3 47 R1 = OCH3 R2 = OH R3 = OCH3 R4=-1Glc OH O O 40 OH HO HO HO R3 HO OH OH OH OH H O OH H 42 học hoạt tính chống oxy hóa dó bầu A crassna Pierre phân bố Việt Nam 1.3 PHƯƠNG PHÁP THỬ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ GỐC TỰ DO DPPH• 1.3.1 Khái niệm gốc tự Năm 2009, nhóm nghiên cứu Bo-Yang Yu cộng cô lập Trong thể chúng ta, oxygen giữ vai trò quan trọng, tham gia từ dó bầu A sinensis (Trung Quốc) số hợp chất flavonoid vào hầu hết trình sinh hóa thể hô hấp tế bào, sản sinh benzophenone glycoside[12] aquilarinoside A (43), 7-β-D-glucoside of 5-O- lượng cung cấp cho hoạt động sống thể, đồng thời chúng methylapigenin (44), iriflophenone (45), mangiferin (39), 5-O-xylosylglucoside 7,4- hình thành tiểu phân trung gian gốc tự như: O2•– , Các gốc tự di-O-methylapigenin (46), 5-β-D-glucoside 7,3-di-O-methylluteolin (47), luteolin bền, hoạt tính cao nên dễ dàng phản ứng với đại phân tử protein, (34), genkwanin (48), hydroxygenkwanin (49) lipid, DNA,… gây rối loạn trình sinh hóa thể Khi phân tử bị Phụ lục 15: Khối phổ HR-MS DB5 Phụ lục 16: Phổ 1H-NMR DB5 DMSO HO 4a O 10 10a OH 6' HO HO HO 4' 5' O 2' 3' 1' OH 9a OH 8a O C19H18O11 HO 1' 4a O 10a 9a 8a 10 OH 6' OH HO HO HO 4' 5' O 2' 3' OH OH O OH Phụ lục 17: Phổ 13C-NMR DB5 DMSO HO 4a O 10 10a Phụ lục 18: Phổ DEPT-NMR DB5 DMSO OH 6' HO HO HO 4' 5' O 2' 3' 1' OH 9a OH 8a O HO OH 4a O 10 10a OH 6' HO HO HO 4' 5' O 2' 3' 1' OH 9a OH 8a O OH Phụ lục 19: Khối phổ HR-MS DB6 Phụ lục 20: Phổ 1H-NMR DB6 CD3OD OH 6' 4' HO O 5' HO 12 11 1' 2' 3' 6' 4' OH 13 HO 10 O OH H O OH H O 5' HO H 12 11 H H O 10 O OH H C19H30O8 1' 2' 3' OH 13 H H Phụ lục 21: Phổ 13C-NMR DB6 CD3OD Phụ lục 22: Phổ DEPT-NMR DB6 CD3OD OH 6' 4' HO 4' HO O 5' HO 11 H O OH 13 O 10 H H 10 8 H H O OH O OH H 1' 2' 3' 12 12 11 6' 1' 2' 3' OH O 5' HO OH 13 H H Phụ lục 23: Phổ COSY DB6 CD3OD Phụ lục 24: Phổ HSQC DB6 CD3OD OH 6' 4' HO O 5' HO 12 11 1' 2' 3' O 6' 4' OH 13 HO 10 OH H O OH H 12 11 H 1' 2' 3' H O 5' HO H O 10 O OH H OH 13 H H Phụ lục 26: Khối phổ HR-MS DB7 Phụ lục 25: Phổ HMBC DB6 CD3OD OH HO OH 6' 4' HO 4''' 12 O HO OH 13 H OH 6'' H 4'' HO HO 5'' 3'' 2''' O HO 10 5''' H O OH H 3''' 6''' 1' 2' 3' 11 O 5' HO OH 1''' OH 5' 6' 4' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O C25H30O15 OH Phụ lục 27: Phổ 1H-NMR DB7 CD3OD Phụ lục 28: Phổ 13C-NMR DB7 CD3OD OH HO 4''' OH HO 3''' 4''' 6''' 2''' 5''' HO O HO OH 6'' 4'' HO HO 5'' 3'' 3''' 6''' 5''' OH HO 1''' OH 5' 6' 4' OH HO OH 6'' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O 4'' HO HO 5'' 3'' 2''' O OH 1''' OH 5' 6' 4' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O OH Phụ lục 29: Phổ DEPT-NMR DB7 CD3OD Phụ lục 30: Phổ COSY DB7 CD3OD OH HO 4''' 3''' 6''' OH HO 5''' HO 4''' 6''' 2''' 5''' HO O HO OH 6'' 4'' HO HO 5'' 3'' HO OH OH 6'' 1''' 4'' OH 5' 6' 4' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O OH HO HO 5'' 3'' 2''' O 3''' OH 1''' OH 5' 6' 4' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O OH Phụ lục 31: Phổ HSQC DB7 CD3OD Phụ lục 32: Phổ HMBC DB7 CD3OD OH HO 4''' 3''' 6''' 5''' HO HO OH 6'' 4'' HO HO 5'' 3'' 2''' O OH 1''' OH 5' 6' 4' OH O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O OH HO 4''' 3''' 6''' 2''' 5''' HO O HO OH 6'' 4'' HO HO 5'' 3'' OH 1''' OH 5' 6' 4' O 1'' 2" OH OH 1' 3' 2' O OH Phụ lục 33: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB1 Phụ lục 34: Sắc ký đồ phân tích DB1 dó bầu Phụ lục 35: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB2, DB3 Phụ lục 36: Sắc ký đồ phân tích DB2, DB3 dó bầu Phụ lục 37: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB4 Phụ lục 38: Sắc ký đồ phân tích DB4 dó bầu Phụ lục 39: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB5 Phụ lục 40: Sắc ký đồ phân tích DB5 dó bầu Phụ lục 41: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB6 Phụ lục 42: Sắc ký đồ phân tích DB6 dó bầu Phụ lục 43: Sắc ký đồ chuẩn hợp chất DB7 Phụ lục 44: Sắc ký đồ phân tích DB7 dó bầu [...]... lá dó bầu *f ƒ C : Nồng độ của chuẩn (mg/ml ) ƒ f : hệ số pha loãng ƒ V : thể tích định mức (ml ) ƒ Mm : khối lượng mẫu (g ) ƒ S1 : diện tích peak mẫu ƒ S2 : diện tích peak chuẩn 46 47 Bảng 4.1 Kết quả nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính chống oxi hóa của lá cây 4 KẾT LUẬN Trong đề tài này, bước đầu khảo sát thành phần hóa học của lá cây dó bầu dó bầu Aquilaria crassna Pierre Aquilaria crassna. .. : cao nước thu được khi đun trực tiếp lá khô với nước 20 21 Để có cơ sở đánh giá hoạt tính của những mẫu khảo sát, chúng tôi sử dụng 2.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC LÁ CÂY DÓ BẦU A CRASSNA quercetin làm chất đối chứng dương vì đây là chất có hoạt tính ức chế gốc tự do Khảo sát thành phần hóa học trong lá cây dó bầu A crassna Pierre thu hái ở DPPH mạnh, được sử dụng làm chất chuẩn trong các tài liệu tham khảo... chất DB7 ( 25 mg ) (6R,9S)- roseoside và DB7 iriflophenon 3,5-C-β-diglucoside trong lá cây dó bầu A Khảo sát thành phần hóa học trong cao ethyl acetate và butanol của lá cây dó bầu A crassna Pierre thu được bảy hợp chất DB1-DB7, sơ đồ quá trình cô lập được miêu tả trong sơ đồ 3.2 crassna Pierre 3.5.1 Xử lý mẫu Lá dó bầu khô được cân một lượng xác định (khoảng 1 g ) đun trong methanol trong hai giờ (ba... chế và x là nồng độ ) KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 2.1 Hoạt tính chống oxy hóa của các cao chiết từ lá cây dó bầu Khảo sát khả năng chống oxy hóa của lá cây dó bầu Aquilaria crassna Pierre bằng phương pháp thử nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH trên các cao chiết methanol, hexane, ethyl acetate, butanol, ethanol và cao nước từ lá cây dó bầu Kết quả thu được trình bày ở bảng 2.1 ƒ Với những mẫu có hoạt tính... chúng tôi tiến hành khảo sát thành phần hóa học, hoạt tính chống oxy hóa của các cao chiết và chất tinh khiết thu được trong lá cây dó bầu Aquilaria crassna Pierre thu hái ở Lộc Ninh – Bình Phước Hàm lượng các chất cô lập trong lá cây dó bầu cũng được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép đầu dò UV-VIS • Phương pháp xác định IC50 ¾ Tiến hành khảo sát hoạt tính của mẫu ở nhiều nồng độ... Lợi (1995 ), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, NXB Khoa học và kỹ thuật, Hà Nội [4] Lã Đình Mỡi (2001 ), Tài nguyên thực vật cây tinh dầu ở Việt Nam – Tập 1, NXB Nông nghiệp, Hà Nội [5] Nguyễn Thị Thùy Trang (2007 ), Khảo sát thành phần hóa học thân cây dó bầu Aquilaria crassna Pierre., Luận văn Thạc sĩ khoa Hóa học, Trường đại học Khoa học tự nhiên, TP Hồ Chí Minh TIẾNG ANH [6] H Hara, Y Ise, N... 0.04 5.74 ƒ Ethyl acetate ( ChemSol ) ƒ Chloroform ( ChemSol ) Lá dó bầu khô Nhận xét Kết quả hàm lượng các hợp chất trong lá cây dó bầu cho thấy hàm lượng DB5 ( mangiferin ) trong lá cây dó bầu rất cao lên đến 17.16 mg/g ( tương đương 1.7% trong lá khô) chứng minh đây là hợp chất chính trong lá Điều này hứa hẹn khả năng sử dụng lá cây dó bầu như nguồn nguyên liệu chiết xuất mangiferin cung cấp cho ngành... 3,5-C,C-β-diglucoside) OH 34 Bảng 2.8 Số liệu phổ 1H (500 MHz ) và 35 13 C-NMR (125 MHz ) của DB7 trong methanol-d4 so với iriflophenon 3,5-C,C-β-diglucopyranoside 2.3 Hoạt tính chống oxy hóa của các chất cô lập được từ lá cây dó bầu A crassna Pierre Khả năng chống oxy hóa của các chất DB1-DB7 cô lập được từ lá cây dó Iriflophenon 3,5-Cβ-diglucopyranoside DB7 Carbon δH δC δC 1 - 132.9 132.7 2, 6 - 159.0... nghiệm hoạt tính ức chế gốc tự do DPPH của bảy hợp chất cô 3.80 (2H, m ) 3.85 (2H, m ) lập từ lá cây dó bầu A crassna cho thấy hợp chất DB5 ( mangiferin ) có hoạt tính rất mạnh với IC50 5.14 µM so với chất đối chứng dương quercetin IC50 6.52 µM 36 37 2.4 Hàm lượng các chất trong lá dó bầu Aquilaria crassna 3 THỰC NGHIỆM Hàm lượng các hợp chất cô lập từ lá dó bầu DB1-DB7 được xác định bằng phương pháp... HPLC-UV Kết quả phân tích được trình bày ở bảng 2.10 3.1 ĐIỀU KIỆN THỰC NGHIỆM Quá trình nghiên cứu thành phần hóa học, thử nghiệm hoạt tính chống oxy hóa và xác định hàm lượng các chất được thực hiện trong điều kiện như sau ™ Dung môi- hóa chất Bảng 2.10 Hàm lượng các chất DB1-DB7 trong lá cây dó bầu Aquilaria crassna ƒ Acetonitril ( Merck, HPLC ) ƒ Butanol (Trung Quốc ) Hàm lượng ( mg/g) ƒ Ethanol ( Merck,