Đang tải... (xem toàn văn)
Môi trường sau khi hấp khử trùng nấu để nguội thấy không đông hoặc ở dạng sệtdo:Đo pH chưa chính xác Hóa chất có vấn đề ( xuất hiện cặn, kết tủa dưới bình MS Do quá trình thao tác nhiễm tạp chất Đo lượng thành phần các chất trong môi trường không chuẩn xác
NỘI DUNG PROTOCORM-LIKE BODY INDUCTION AND SUBSEQUENT PLANT REGENERATION FROM ROOT TIP CULTURES OF DORITAENOPSIS Introduction Doritaenopsis is a hybrid between Doritis and Phalaenopsis Doritaenopsis Introduction Several micropropagation methods such as: Shoot tips Leaf segments Nodal Flower stalk cuttings Introduction • Orchid roots have a well developed metabolic capacity, their ability to form buds is relatively limited under natural conditions • In this study, we attempted in vitro root tip culture in Doritaenopsis Materials and methods Plant materials : Roots of 3-month old in vitro plantlets were used as the source of explants the latter of which were obtained from in vitro culture of flower stalk sections Root tip culture Root tips (< 0.5 cm) were dissected from plantlets and were cultured on half strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different concentration TDZ, BA or zeatin, 20% coconut water, 10 mg/l adenine sulfate, and solidified with 2.3g/l Gelrite The pH of medium was adjusted to 5.5, and all media were autoclaved for 20 at 115o C Zeatin was added by filter sterilization to the autoclaved medium Cultures were incubated at 25oC under cool-white florescent lamps at an intensity of 30 mmol/m2 per s photosyn-thetic photon flux (PPF) 16 h/day Materials and methods Plantlet regeneration and transplantation of plantlets Culture in a modified Hyponex medium supplemented with 30 g/l potato homogenate, 2g/l pepton, 0,5 g/l activated charcoal, 20 g/l sucrose, and 5,5 g/l plant agar The pH was adjusted to 5.5 before autoclaving The cultures were maintained at 25o C and a 16-h light:8-h dark photoperiod The plantlets were subcultured every weeks to fresh medium Plantlets (5-6cm length) were transplanted to pots and grown in the green- house under conditions of high humidity (60/70%) at a day/night temperature 25/15o C photoperiod and 16-h light:8-h dark Results The root tip explants cultured on a half Murashige and Skoog medium (MS) supplemented with medium different cytokinins become swollen after weeks of culture Fig Induction of PLBs and plant regeneration from root tips of Doritaenopsis (A) PLB development on root tip after weeks of culture on 1/2 MS medium with 2.3 mM TDZ PLBs developed after (B) and (C) weeks of culture (D) Developing PLBs on modified Hyponex medium (E) PLBs with expanding sheath leaves (F) A rooted plantlet On a half MS medium supplemented with 2.3 mM TDZ 71.1% of root tips survived and 47.2% of them developed to PLBs Fig Survival rate and frequency of PLB developing root tips of Doritaenopsis on MS medium supplemented with different concentrations of BA, TDZ, or zeatin Observations made on serial longitudinal and cross sections of root tips revealed the occurrence of two differential developmental pathways during PLB regeneration : Root meristems were involved in the direct development of PLBs And callus mediated PLB induction from cortical cells Fig Histological observations during PLB regeneration from root tips of Doritaenopsis Plantlets grew further after another two subcultures The regenerated plantlets about - cm in height with a pair of leaves and three to four roots were then potted to sphagnum moss and acclimatized in greenhouse These plants grew well and developed into normal plants after 12 weeks of transplantation Fig (A) Actively growing plantlets on Hyponex medium weeks after culture (B) Acclimated plants growing in greenhouse Discussion The study of orchid root morphogenesis has not received as much attention as the development of aerial plant organs Root tips of orchids species have been considered generally recalcitrant to form PLB or callus in vitro, such is the case, for example, with Epidendrum, Oncidium, and Cattleya plants Among the three cytokinins used in this study, TDZ was efficient in induction of PLBs Discussion Although extensive research has been carried out on PLB induction from in vitro cultures in orchids, there are few structural details known on the development of PLBs or their cellular origin Using root tip culture plants can be regenerated on a large scale, and the mother plant can also be conserved since using root tips as the explant does not destroy mother plants The number of roots available through the year, and ease of using them as explants makes roots an ideal explant for in vitro propagation of Doritaenopsis KẾT QUẢ THỰC HÀNH THU ĐƯỢC NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT MỘT SỐ KỸ THUẬT CƠ BẢN Môi trường sau hấp khử trùng nấu để nguội thấy không đông dạng sệt Nguyên nhân : Đo pH chưa xác Hóa chất có vấn đề ( xuất cặn, kết tủa bình MS Do trình thao tác nhiễm tạp chất Đo lượng thành phần chất môi trường không chuẩn xác NUÔI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG - KỸ THUẬT TÁCH ĐỈNH SINH TRƯỞNG & PHÔI TÁCH ĐỈNH SINH TRƯỞNG Từ mẫu chồi ban đầu sau phân tách kính hiển vi thu khối đỉnh sinh trường màu xanh có kích thước nhỏ 1-3 mm Hình 2.1: Mẫu lan mẫu đỉnh sinh trưởng lan Sau tách lớp vỏ bên ngoài, thu phôi lúa màu xanh đen (phần mầm) Hình 2.2 :cấu tạo hạt lúa mẫu phôi hạt lúa CẢM ỨNG CALLUS - Trường hợp 1: Mẫu cấy cảm ứng callus theo mong muốn thực xác từ khâu chuẩn bị nguyên liệu đến khâu xử lí mẫu cấy mẫu Các vết thương mẫu tiếp xúc đồng với môi trường Hình 3.1: Mẫu cảm ứng callus CẢM ỨNG CALLUS - Trường hợp 2: Mẫu cấy phát sinh chồi (đoạn thân bên trái) Do cắt trúng mẫu thân có mắc chồi nên cấy vào bình, mắc chồi tiếp xúc với môi trường phát triển thành chồi - Trường hợp 3: Mẫu cấy tượng (Hình 3.2 : 3 Hình 3.2 : mẫu thân phát sinh chồi (trường hợp 2) mẫu không Do cấy ta đặt mẫu thân vào môi trường tượng (trường hợp 3) đồng đều, vết thương thân không tiếp xúc đoạn thân bên phải) với môi trường CẢM ỨNG CALLUS Từ kết ta thấy mẫu có khả cảm ứng callus tốt mẫu thân Do lợi bề mặt mỏng lớn tạo nhiều vết thương diện tích tiếp xúc bề mặt với môi trường lớn nên vết thương tiếp xúc với môi trường tối ưu 4 NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO • Dưới tác dụng NAA KIN cho thấy tế bào callus có tăng sinh sinh khối • Việc nuôi cấy môi trường lỏng lắc tạo điều kiện cho tăng sinh cuả tế bào • Việc chọn nguồn callus cứng rời rạc đảm bảo cho tế bào callus không bị ảnh hưởng trình lắc tế bào không bị dính vào cản trở việc tiếp xúc với A B chất dinh dưỡng Hình 4.1 Tế bào callus sau cấy(A) tế bào tăng sinh sau 14 ngày(B) NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO Bảng 4.1 Số liệu khối lượng tể bào sau lọc (m ướt) khối lượng tế bào sau sấy ( m khô) Giấy M ướt M khô I 0.79 0.55 0.062 II 0.78 0.58 0.064 III 0.79 0.6 0.069 THE END [...]... Việc nuôi cấy trong môi trường lỏng lắc đã tạo điều kiện cho sự tăng sinh cuả tế bào • Việc chọn nguồn callus cứng và rời rạc đảm bảo cho tế bào callus không bị ảnh hưởng của quá trình lắc và tế bào không bị dính vào nhau cản trở việc tiếp xúc với A B chất dinh dưỡng Hình 4.1 Tế bào callus sau khi cấy( A) và tế bào tăng sinh sau 14 ngày(B) 4 NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO Bảng 4.1 Số liệu khối lượng tể bào. .. thân bên phải) được với môi trường 3 CẢM ỨNG CALLUS Từ các kết quả trên ta thấy mẫu lá có khả năng cảm ứng callus tốt hơn mẫu thân Do lợi thế về bề mặt lá mỏng và lớn có thể tạo được nhiều vết thương hơn và diện tích tiếp xúc bề mặt với môi trường lớn nên các vết thương tiếp xúc với môi trường sẽ tối ưu hơn 4 NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO • Dưới tác dụng của NAA và KIN cho thấy tế bào callus có sự tăng... Doritaenopsis KẾT QUẢ THỰC HÀNH THU ĐƯỢC NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT 1 MỘT SỐ KỸ THUẬT CƠ BẢN Môi trường sau khi hấp khử trùng nấu để nguội thấy không đông hoặc ở dạng sệt Nguyên nhân : Đo pH chưa chính xác Hóa chất có vấn đề ( xuất hiện cặn, kết tủa dưới bình MS Do quá trình thao tác nhiễm tạp chất Đo lượng thành phần các chất trong môi trường không chuẩn xác 2 NUÔI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG -... callus 3 CẢM ỨNG CALLUS - Trường hợp 2: Mẫu cấy phát sinh chồi (đoạn thân bên trái) Do cắt trúng mẫu thân có những mắc chồi nên khi cấy vào bình, mắc chồi tiếp xúc với môi trường phát triển thành chồi - Trường hợp 3: Mẫu cấy không có hiện tượng gì (Hình 3.2 : 3 2 3 Hình 3.2 : mẫu thân phát sinh chồi (trường hợp 2) và mẫu không Do khi cấy ta đặt mẫu thân vào môi trường không có hiện tượng gì (trường hợp... 1-3 mm Hình 2.1: Mẫu lan và mẫu đỉnh sinh trưởng lan Sau khi tách lớp vỏ bên ngoài, thu được phôi lúa màu xanh đen (phần mầm) Hình 2.2 :cấu tạo hạt lúa và mẫu phôi của hạt lúa 3 CẢM ỨNG CALLUS - Trường hợp 1: Mẫu cấy cảm ứng callus theo mong muốn do thực hiện chính xác từ khâu chuẩn bị nguyên liệu đến khâu xử lí mẫu và cấy mẫu Các vết thương của mẫu tiếp xúc đồng nhất với môi trường Hình 3.1: Mẫu lá... việc tiếp xúc với A B chất dinh dưỡng Hình 4.1 Tế bào callus sau khi cấy( A) và tế bào tăng sinh sau 14 ngày(B) 4 NUÔI CẤY HUYỀN PHÙ TẾ BÀO Bảng 4.1 Số liệu khối lượng tể bào sau khi lọc (m ướt) và khối lượng tế bào sau khi đi sấy ( m khô) Giấy M ướt M khô I 0.79 0.55 0.062 II 0.78 0.58 0.064 III 0.79 0.6 0.069 THE END