Bộ Y tế Chơng trình 33 Trờng Đại học Y Hà Nội Báo cáo tổng kết đề tài nhánh Nghiên cứu số số miễn dịch đối tợng phơi nhiễm có nguy phơi nhiễm Đồng Nai, Huế Hải Phòng Chủ nhiệm đề tài nhánh : PGS.TS Văn Đình Hoa Cơ quan chủ trì : Trờng Đại học Y Hà Nội Thuộc đề tài cấp nhà nớc (ct 33): Nghiên cứu biến đổi mặt di truyền, miễn dịch, sinh hoá, huyết học tồn lu dioxin đối tợng phơi nhiễm có nguy cao Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ quản Cơ quan chủ trì : PGS.TS Nguyễn Văn Tờng : Bộ Y tế : Trờng Đại học Y Hµ Néi 5462-7 13/10/2005 Hµ Néi - 2003 Bé Y tế Chơng trình 33 Trờng Đại học Y Hà Nội Báo cáo tổng kết đề tài nhánh Đề tài cấp nhà nớc Đề tài nhánh: Nghiên cứu số số miễn dịch đối tợng phơi nhiễm có nguy phơi nhiễm Đồng Nai, Huế Hải Phòng Chủ nhiệm đề tài nhánh: PGS.TS Văn Đình Hoa Cơ quan chủ trì : Trờng Đại học Y Hµ Néi Thêi gian thùc hiƯn: 2001 - 2003 KInh phí đợc cấp: 486.000.000 đồng Hà Nội - 2003 Danh sách ngời thực đề tài nhánh Chủ nhiệm đề tài nhánh: PGS.TS Văn Đình Hoa Th ký đề tài nhánh: PGS.TS Trần Thị Chính Những ngời thực chính: PGS.TS Văn Đình Hoa PGS.TS Phan Thị Thu Anh PGS.TS Trần Thị Chính GS Ngun Ngäc Lanh BS Lª Ngäc Anh Víi sù tham gia kü tht cđa: KS Chu ThÞ Tuyết KS Tạ Thị Mến KS Trơng Mộng Trang KTV Phan Mai Hoa KTV Nguyễn Văn Tuất Mục lục Danh sách ngời thực Mục lục Đặt vấn đề Tổng quan tài liệu 2.1 Đối với môi trờng sinh thái 2.2 Đối với sức khoẻ ngời 2.2.1 Đối với số quan thể 2.2.2 Đối với hệ miễn dịch 11 11 3.2 Phơng pháp, kỹ thuật nghiên cứu 12 3.3 Xử lý số liệu 12 Kết nghiên cứu 13 4.1 Số lợng, tỷ lệ tế bào CD3, CD4, CD8 14 4.2 Hàm lợng thành phần bổ thể C3, C4 Đối tợng phơng pháp nghiên cứu 3.1 Đối tợng nghiên cứu 34 4.3 Khả đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chống kháng nguyên virus viêm gan B (HBsAg) 47 4.4 Hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho 51 Bàn luận 52 5.1 Số lợng, tỷ lệ tế bào CD3, CD4, CD8 54 5.2 Hàm lợng thành phần bổ thể C3, C4 56 5.3 Khả đáp ứng tạo kháng thể 57 5.4 Hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho 57 KÕt ln 59 HiƯu qu¶ cđa nghiên cứu 61 Tài liệu tham khảo 62 I đặt vấn đề Cùng với vi sinh vật, chất độc hại công nghiệp chiến tranh ngành công nghiệp dân sinh thải đà làm ô nhiễm trầm trọng môi trờng sinh thái, gây nhiều bệnh tật nguy hiểm, ảnh hởng đến sức khoẻ ngời Trong chất độc hại dioxin tên chung để gọi dibenzo para - dioxin gắn với nguyên tử clo, chát 2,3,7,8, Tetrachorodibenzo-para dioxin (TCDD) chất có độc tính mạnh nhất, đứng sau chất phóng xạ Dioxin chất bền vững, khó bị phân huỷ thải loại, tồn lu lâu môi trờng (khoảng 15 đến 20 năm) thể động vật (khoảng đến năm) Dioxin có thành phần thuốc bảo vệ thực vật, chất thải công nghiệp, khói rác thải xử lý nhiệt, chất tẩm sấy kỹ nghệ gỗ, giấy Do tính độc hại đặc biệt nguy hiểm sinh thái sức khoẻ nên từ 1980 đến nay, hàng năm có hội nghị, hội thảo quốc tế, quốc gia Dioxin Nghiên cứu Dioxin đợc nhiều nớc quan tâm, đặc biệt nớc có công nghiệp phát triển mạnh Đối với sức khoẻ, Dioxin tác động lên tất quan, hệ thống quan thể, gây nên hội chứng suy mòn, giảm trọng lợng, biến loạn cấu trúc mức tế bào, phân tử Hệ thống miễn dịch mô đích nhạy cảm với ®éc tÝnh cđa Dioxin Víi liỊu 0,001 µg dioxin/ kg cân nặng thể quan tế bào miễn dịch thể đà bị suy giảm chức năng, biểu hiện: dễ bị cảm nhiễm bệnh Hầu hết công trình nghiên cứu thực nghiệm tác hại Dioxin hệ miễn dịch đợc công bố 10 năm gần cho thÊy mét sè thay ®ỉi theo chiỊu h−íng bÊt lợi cho khả đề kháng miễn dịch chuột cống, chuột nhắt, chuột lang, khỉ bị nhiễm mạn tính TCDD nớc ta, chiến tranh đà lùi dần khứ, chiến dịch Ranch-Hand Mỹ đà cách 35 năm nhng tồn lu ảnh hởng Dioxin sinh thái sức khoẻ quân dân ta tồn Để cã mét sè th«ng tin khoa häc gióp cho viƯc đánh giá tác hại Dioxin sức khoẻ, với đề mục: di truyền, hoá sinh, huyết học , đợc Ban chủ nhiệm đề tài phân công đề tài: "Nghiên cứu số số Miễn dịch đối tợng phơi nhiễm có nguy phơi nhiễm Dioxin Đồng Nai, Huế Hải Phòng" Với mục tiêu sau đây: Xác định số lợng số tế bào miễn dịch: CD3, CD4, CD8, CD19, tû lƯ CD4/CD8, CD4/CD3, CD8/CD3 m¸u đối tợng phơi nhiễm, có nguy cao phơi nhiễm Dioxin khu vực: Biên Hoà (Đồng Nai), Nam Đông (Huế) Hải Phòng Định lợng thành phần bổ thể C3 C4 huyết Đánh giá khả đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chống kháng nguyên viêm gan B sau lần tiêm chủng vacxin Engerix B Xác định lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho II tổng quan Từ lâu, ngời đà biết: hoá chất sử dụng lĩnh vực công, nông, lâm, ng nghiệp nh sinh hoạt nhiều làm ô nhiễm môi trờng sinh thái, ảnh hởng đến sức khoẻ ngời Tác hại chất độc hoá học sức khoẻ đợc đặc biệt ý sau vụ nhiễm độc cấp tính hàng loạt công nhân nhân dân sống xung quanh khu vực nhà máy sản xuất hoá chất bị nổ bị dò rỉ: nhà máy Philipo-Dufa Amsterdam- Hà Lan (1960), nhà máy sản xuất trichlorophenol SevesoItalia (1976), nhà máy sản xuất hexachlophene bang Missouri-Mỹ (1983) Trong hoá chất độc hại dioxin hợp chất dioxin nguy hiểm cả, huỷ diệt nghiêm trọng môi trờng sinh thái mà đặc biệt nguy hiểm gây nhiều bệnh tật làm biến đổi hình thái, chức tế bào, quan thể, để lại hậu cho nhiều hệ Dioxin tên chung để hợp chất hữu chứa số nguyên tố clo có tính độc tơng tự nhau: PCDD (polychloro Dibenzo para Dioxin) gồm 75 đồng phân, có chất có độc tính cao, đặc biệt chất 2,3,7,8 TCDD- thờng gäi lµ dioxin (tetrachlorodibenzo-para-dioxin) PCDF (poly- chlorodibenzo Furan) gåm 135 chÊt, ®ã 10 chÊt rÊt ®éc PCB (polychlorobiphenyl) gåm 209 chÊt, ®ã cã 11 chÊt rÊt ®éc Trong chiến dịch Ranch-Hand, Mỹ đà rải xuống 10% diện tích miền Nam Việt Nam khối lợng lớn hoá chất độc hại, chủ yếu chất: Chất trắng: AW hỗn hợp 2,4 D (2,4 dichlorophenoxy acetic) pichloran (4 amine 3,5,6 trichloro-picolinic acid) ChÊt xanh (A.blue): cacodylic acid (dimethyl arsenic acid) Chất da cam (AO) hỗn hỵp N-butylester cđa 2,4 D (2,4 dichloro phenoxyacetic acid), chÊt 2,3,4 T (2,3,4 trichlorophenoxyacetic acid), đặc biệt có chứa tạp chất có tính siêu độc là: 2,3,7,8 TCDD(dioxin) 2.1 Đối với môi trờng sinh thái Các báo cáo khoa học nhiều tác giả nớc, đặc biệt uỷ ban quốc gia điều tra hậu chất độc hoá học chiiến tranh (uỷ ban 10-80) cho biết: Các chất da cam mà Mỹ rải xuống miền Nam Việt Nam đà phá huỷ nặng nề khu rừng nhiệt đới, khu rừng ngập mặn, thảm thực vật vốn đa dạng phong phó cđa ViƯt Nam Sau chiÕn dÞch Ranch-Hand, nhiỊu khu rừng nguyên sinh bạt ngàn cổ thụ, nhiều gỗ quý, rừng ngập mặn bị chết trụi, nhiều đồi núi thảm thực vật bị trơ trọc, xơ xác hoang vu Hai mơi, ba mơi năm sau chiến tranh kết thúc cha khôi phục đợc Các khu rừng bị tàn phá đà dẫn đến hậu bÃo lụt, hạn hán xẩy liên tục nặng nề cho tỉnh nam vĩ tuyến 17 thập kỷ 80, 90 vừa qua mà trớc thấy Các động vật quý hiếm, có giá trị kinh tế khu rừng nh: voi, bò tót, lợn rừng, khỉ, nai, hơu, gấu bị chết, làm thay đổi cấu loại thú rừng nhiệt đới Năm 1980, Uỷ ban 10-80 cho biết: lợng dioxin mẫu đất, bùn ao hồ, cặn lắng sông, lơng thực, thực phẩm, tổ chức cơ, mỡ, gan, máu, sữa số phủ tạng động vật lấy nam vĩ tuyến 17 cao nhiều so với mẫu phẩm tơng tự lấy phía bắc vĩ tuyến Tỷ lệ mẫu mỡ có chứa dioxin Hà Nội 6,6%, hàm lợng trung bình mẫu dơng tính: 1,7ppt (part per trillon: 1.10-12g), ®ã tû lƯ c¸c mÉu mì lÊy ë nam vÜ tyn 17 cã dioxin 83,3%, hàm lợng trung bình mẫu dơng tính: 17,5 ppt Điều nói lên: dioxin miỊn Nam ViƯt Nam cã ngn gèc tõ c¸c chÊt độc hoá học mà Mỹ đà sử dụng chiến tranh.[2],[4], [7] 2.2 Đối với sức khoẻ ngời Con ngời bị nhiễm dioxin hai đờng: Nhiễm trực tiếp: tiếp xúc trực tiếp Nhiễm gián tiếp: ăn lơng thực, thực phẩm bị nhiễm dioxin Hầu hết công trình nghiên cứu tác hại dioxin tiến hành động vật thực nghiệm: chuột, thỏ, khỉ, chó Các công trình nghiên cứu, điều tra ngời cha nhiều, thờng giới hạn số vụ thảm hoạ, số công nhân số nhà máy sản xuất hoá chất chứa clo, số nhỏ quân nhân nhân dân có liên quan trực tiếp, gián tiếp với dioxin chiến dịch Ranch-Hand, nhng nghiên cứu lại tiến hành 15, 20, 30 năm sau chiến tranh kết thúc Sau sách "Dioxin and Health" nhà xuất Plemum Press năm 1994 xuất danh mục bệnh dioxin gây ra, có liên quan đến dioxin đợc bổ sung hàng năm Đối với sức khoẻ, dioxin gây nhiễm độc cấp tính mạn tính, tác động lên tất quan, hệ thống quan thể, gây nên hội chứng suy mòn, giảm trọng lợng dẫn đến tử vong, gây biến loạn cấu trúc, chức tế bào, mô Tuỳ theo thời gian bị tác động, nồng độ chất độc môi trờng mà có mức độ tổn thơng khác nhau[2],[3],[18],[32],[35] 2.2.1 Đối với số quan thể §Ĩ phơc vơ cho viƯc ®Ị cËp ®Õn mét sè tác hại dioxin hệ miễn dịch số công trình nghiên cứu thu thập đợc, muốn nêu bệnh lý có liên quan đến chế suy giảm miễn dịch số quan, hệ thống quan dới [2],[3], [35]: - Da niêm mạc: viêm đỏ da, ngứa, bong da mảng, dày da, phù cứng bì, sắc tố nhiễm sắc tố melanin vùng kèm theo rối loạn mọc lông ,biểu trạng thái viêm da tiếp xúc tự miễn - Thần kinh, tâm thần: tuỳ theo nhiễm độc cấp bán cấp mà có rối loạn thần kinh, tâm thần: đau đầu, ngủ, suy nhợc thần kinh, giảm sút trí nhớ, giảm khả thích nghi, giảm phản xạ , nặng bị rối loạn hành vi, động kinh - Nội tiết: giảm hàm lợng hoạt tính số nội tiết tố, rối loạn hệ yên - giáp trạng - thợng thận nh: giảm corticosterone, giảm T3, T4 , bị bệnh: suy giáp trạng, tiểu đờng, thiểu tuyến yên, u xơ tuyến tiền liệt, ung th giáp trạng, u vú - Máu: thiếu máu, u mạch máu mạch bạch huyết, cờng lách, bệnh ác tính dòng bạch cầu - Tiêu hoá: tăng sản tế bào biểu mô, viêm loét dày-ruột, ung th dày,tá tràng, gan thoái hoá mỡ, xơ gan, ung th gan - Tuần hoàn, hô hấp: rối loạn điện tim, nhịp, huyết áp, thiểu động mạch vành Hô hấp: viêm mũi họng, viêm phế quản, sản dị sản biểu mô phế quản, nhiễm độc cấp thờng bị suy hô hấp nặng - Xơng khớp: viêm đa khớp, biến dạng đầu khớp, loÃng xơng - Hệ sinh sản phát triển: thời kỳ phôi thai: dioxin gây rối loạn trình hình thành phát triển quan sinh dục (thiếu, thiểu năng, bất bình thờng, rối loạn giới tính) Đối với nữ giới: rối loạn nội tiết sinh dục gây giảm số lợng nang trứng, rối loạn kinh nguyệt, thời gian rụng trứng , dễ sẩy thai, đẻ non, thai chết lu, quái thai Đối với nam giới: giảm trọng lợng tinh hoàn, túi tinh, giảm số lợng chất lợng tinh trùng, dậy chậm, giảm nam tính 2.2.2 Đối với hệ miễn dịch Đề kháng miễn dịch chế bảo vệ quan trọng thể Khi bị vi sinh vật, chất độc hại xâm nhập, thể vận hành hệ thống đề kháng chung gọi đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu (hay gọi miễn dịch tự nhiên), sau huy động hệ thông đặc thù riêng cho yếu tố gây bệnh gọi đáp ứng miễn dịch đặc hiệu (hay gọi miễn dịch thu đợc) 2.2.2.1 Đáp ứng miễn dịch thể * Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu: Là loại đáp ứng dùng để đối phó chung cho tất yếu gây hại chúng xâm nhập vào thể Hệ thống bao gồm: hệ thống da niêm mạc, số chất hoà tan dịch: lysozym, BPI (bacterial 4.4 Hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho: - Sau có kết đánh giá khả đáp ứng tạo anti HBsAg (sau lần tiêm chủng vacxin), chọn mẫu có đáp ứng tốt mẫu có đáp ứng không tốt để nuôi cấy tế bào lympho, thu dịch xác định IL-10 - Số mẫu nuôi cấy: 74 mÉu, ®ã: + Nhãm chøng : 36 mÉu (20 mẫu đáp ứng tốt, 16 mẫu đáp ứng không tốt) + Nhóm phơi nhiễm: 38 mẫu (28 mẫu đáp ứng tốt, 10 mẫu đáp ứng không tốt) Bảng 45: Hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy đối tợng Mức độ đáp ứng tạo kháng thể sau tiêm vacxin viêm gan B Đáp ứng tốt Nhóm Đáp ứng kh«ng tèt P n X ± SD n X ± SD Nhãm chøng 20 7,995 ± 6,442 16 13,588 ± 6,249 P < 0,05 Nhãm ph¬i nhiƠm 28 7,216 ± 7,228 10 14,240 ± 13,683 P < 0,05 48 7,567 ± 6,850 26 13,838 ± 9,536 P < 0,05 Tæng Nhận xét: Lợng IL-10 dịch nuôi cấy lymphocyte đối tợng đáp ứng tạo kháng thể chống HBsAg ë møc tèt thÊp h¬n cã ý nghÜa (P < 0,05) so với đối tợng đáp ứng tạo kháng thể mức không tốt 51 V bàn luận: Dioxin chất siêu độc sinh thái sức khoẻ Trong chiến dịch Ranch-Hand (1961-1971), Mỹ đà rải xng 10% diƯn tÝch miỊn nam ViƯt Nam mét khèi lợng khổng lồ hoá chất độc hại, cã 44 triƯu lÝt chÊt da cam (A.O), chøa kho¶ng 170 kg chÊt 2,3,7,8 TCDD (dioxin) ®· hủ diƯt nhiỊu khu rừng nguyên sinh, nhiều thảm thực vật nhiệt đới, tiêu diệt nhiều động vật quý động vật có giá trị kinh tế nớc ta Đối với sức khoẻ, năm 1994 nhà xuất Plemum Press đà công bố nhiều công trình nghiên cứu dioxin cn "Dioxin and Health", ủ ban vỊ søc kh cùu chiến binh Mỹ đà công bố danh mục bệnh dioxin liên quan dioxin: ung th tổ chức phần mềm, bệnh trứng cá clo, u lympho ác tính, gai sống chẻ đôi, tiểu đờng, dị tật bẩm sinh Nhiều công trình nghiên cứu đà công bố cho biết: dioxin gây bệnh cấp tính mạn tính cho tất quan thể: da niêm mạc, thần kinh, nội tiết, tiêu hoá, hô hấp, tuần hoàn, tiết niệu, huyết học, miễn dịch [2] [35] Hệ thống miễn dịch thể bao gồm nhiều tế bào quan thuộc tổ chức bạch huyết Cơ thể có khả ngăn chặn, tiêu diệt hạn chế đợc tác hại yếu tố gây bệnh (vi sinh, độc tố độc chất) nhờ hệ thống đề kháng miễn dịch Vì lý mà hệ thống quan tế bào miễn dịch bị tổn thơng, bị suy giảm chức thể dễ bị bệnh Hầu hết công trình nghiên cứu tính độc hại dioxin hệ thống miễn dịch thập kỷ vừa qua tiến hành thực nghiệm động vật: chuột, thỏ, chó, khỉ Các công trình nghiên cứu tác hại dioxin ngời cha nhiều, thờng giới hạn số vụ thảm hoạ nhà máy hoá chất, số công nhân trực tiếp sản xuất chất độc chứa clo số cựu chiến binh có mặt khu vực tham gia chiến dịch Ranch-Hand [2] [18] [37] Kết nghiên cứu tác hại dioxin lên tuyến ức, lách, hạch bạch huyết động vËt thùc nghiƯm cho biÕt: víi liỊu thÊp (d−íi liỊu gây tử vong), tất động vật bị nhiễm TCDD dù thời gian ngắn trung bình, mạn tính bị teo tuyến ức Bốn ngày sau bị nhiễm liều 25àg/1kg thể trọng/ngày: vùng vỏ 52 tuyến ức bị teo sau 6-10 ngày vùng tuỷ bị teo (De Heer 1994 [từ 35]) Kết nghiên cứu tác giả khác: Connell 1978 , Umbreit, Greenlee 1985 [tõ35], Luster 1991 [27], Silverstone 1991 [33], Blaylock De Wall 1992.[từ 35] thu đợc kết tơng tự Lách, hạch bạch huyết động vật bị phơi nhiễm dioxin: teo nhỏ, giảm số lợng trung tâm mầm, tăng lắng đọng hemosiderin: Lundberg 1991 [26], Luster 1991 [27], Silverstone 1991 [33], Christian 1986 [từ 35] Tuyến ức quan trung ơng, nơi trởng thành biệt hoá dòng lympho bào T Lách, hạch bạch huyết quan lympho ngoại vi, nơi phân chia, biệt hoá thành tế bào hiệu lực lympho bào B T sau gặp kháng nguyên Do vậy, lý thuyết dự đoán: trình hình thành phát triển đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào miễn dịch thể dịch động vật bị phơi nhiễm dioxin bị suy giảm, rối loạn Song kết nghiên cứu tác hại dioxin hệ miễn dịch hơn10 năm gần mà thu thập đợc không hoàn toàn nh : Holsapple 1986 [16],White 1986 [tõ 35], Lundberg 1991 [26], Luster 1991 [27], Morris 1993 [29], Karras 1996 [19], Zober 1996 [37], Korkvliet 1995 [20], Matulka 1997 [30] Năm 1998 Colosio CS [9] nhận xét cách tổng quát: thay đổi số thông số miễn dịch yếu tố nhậy cảm để đánh giá độc tính dioxin tác giả chia thành mức độ: Mức 1: thay đổi hàm lợng globulin miễn dịch IgG,IgA,IgM, thành phần bổ thể C3,C4, yếu tố dạng thấp, tự kháng thể loại không đặc hiệu quan, số lợng tế bào CD3,CD4,CD8 Mức 2: thay đổi khả đáp ứng phân bào lymphocyte máu ngoại vi số chất kích thích phân bào Mức 3: thay đổi khả tiết cytokin tế bào miễn dịch Từ kết nghiên cứu thu đợc năm (2001,2002 quý năm 2003) số số miễn dịch đối tợng khu vực: Biên Hoà, Nam Đông, Hải Phòng, có số nhận xét sau đây: 53 5.1 Số lợng, tỷ lệ tế bào CD3, CD4, CD8, CD19: Kết bảng từ số đến số 19 cho thấy: phờng Biên Hoà (Đồng Nai),và xà huyện Nam Đông (Huế), số lợng tế bào CD3, CD4, CD8 đối tợng bị phơi nhiễm thấp đối tợng làm chứng khu vực Tại Biên Hoà: Tân Phong, Trung Dịng lµ ph−êng n»m khu vùc sân bay Biên Hoà, Tân Hạnh Trảng Dài phờng nằm xa sân bay Do mức độ có nguy phơi nhiễm khu vực khác Kết bảng cho thấy: số lợng tế bào CD3, CD4, CD8 đối tợng tơng ứng khu vực xấp xỉ Riêng đối tợng có nguy phơi nhiễm cao sinh trớc 1975 có số lợng thấp đối tợng sinh sau 1975, phải mức độ tồn lu dioxin môi trờng có giảm thời gian phơi nhiễm đối tợng sinh sau 1975 Tại Nam Đông (Huế): Số lợng tế bào CD3, CD4, CD8 đối tợng sinh trớc 1975 thấp đối tợng sinh sau 1975 nhóm chứng phơi nhiễm, đặc biệt đối tợng thuộc nhóm chứng khác biệt có ý nghĩa thống kê (P < 0,05) (Bảng 12) Tại địa điểm thành phố Hải Phòng: số lợng tế bào CD3, CD4, CD8 khác quy luật, tổng hợp chung lại kết CD3 CD4 nhóm có nguy c¬ ph¬i nhiƠm cao h¬n nhãm chøng cïng sinh sèng Hải Phòng, khác biệt ý nghĩa thống kê, CD8 xấp xỉ Điều đáng ý là: số lợng tế bào CD3,CD4, CD8 đối tợng Hải Phòng (cả chứng phơi nhiễm) cao đối tợng tơng ứng Biên Hoà Nam Đông (Bảng 19) Phải đối tợng có nguy phơi nhiễm Hải Phòng đà khỏi vùng nóng,vùng bị rải chÊt ®éc da cam ë chiÕn tr−êng MiỊn Nam 25-30 năm nay, chất độc hoá học chiến dịch Ranch-Hand không tiếp tục gây nhiễm cho họ, với thời gian chất độc da cam có thể bị thải dần, nên không tác hại Tổng hợp nam nữ cuả khu vực nghiên cứu: Biên Hoà Nam Đông số lợng tế bào CD3, CD4, CD8, CD19 đối tợng phơi nhiễm có xu hớng thấp đối tợng chứng, đặc biệt Nam Đông số CD3, CD4 khác biệt cã ý nghÜa so víi nhãm chøng 54 (P < 0,05) Kết tơng đối phù hợp với kết nghiên cứu thực nghiệm đa số tác giả [8, 11, 12, 13, 14, 18,21,22, 27, 28,29, 33] nh kết nghiên cứu công nhân vụ thảm hoạ, cựu chiến binh chiến đấu khu vực bị rải chất độc da cam, nhân dân sinh sống vùng ô nhiễm chất O.A Mỹ rải [1,2,3,5,6,32,35] Trái lại, năm 1999 E Michalek CS [28] công bố kết nghiªn cøu ë mét sè cùu chiÕn binh Mü tham gia rải hoá chất Việt Nam chiến dịch Ranch-Hand: Không có khác biệt đáng kể chức miễn dịch so với cựu chiến binh không tiếp xúc Cần lu ý: cựu chiến binh Mỹ đà nớc khoảng 30 năm, họ lại không bị chất độc da cam tác dụng trực tiếp lên thể, thời gian chịu tác hại không lâu nh đội nhân dân Việt Nam Theo kết nghiên cứu Lê Cao Đài, Hoàng Trọng Quỳnh [4] [7]: hàm lợng trung bình dioxin mô mỡ đối tợng sống miền nam Việt Nam (một nớc có công nghiệp cha phát triển) lại cao gần lần (17,5ppt) so với dân chúng sống nớc công nghiệp phát triển nh Mỹ,Canada, Nhật, Hàn Quốc (chỉ có từ đến ppt) Biểu chủ yếu suy giảm miễn dịch qua trung gian tế bào là: giảm số lợng chung dới nhóm dòng lympho bào T, giảm chức tế bào T Giảm số lợng tế bào CD3,CD4,CD8 bị phơi nhiễm dioxin do: tuyến ức bị nhiễm độc, bị ức chế Do đó, trình tăng sinh, biệt hoá, di chuyển tế bào tuyến ức bị rối loạn [35] TCDD cản trở trình biệt hoá mà hạn chế tơng tác Th vớí tế bào B Kerkvliet Lawren [21] [23] cho rằng: TCDD gây độc cho hệ miễn dịch Tuy nhiên kết thu đợc Hải Phòng thông số này, nhãm ph¬i nhiƠm cã xu h−íng cao h¬n nhãm chøng nhng ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Điều giải thích phải theo năm tháng cựu chiến binh đà chiến trờng Miền Nam Việt Nam nơi bị giải chất độc da cam - đà lâu (trên 25 năm) họ sống vùng không bị rải chất độc nh Biên Hoà, Nam Đông Điều đợc thể kết Bảng 19, số CD3, CD4, CD8 Hải Phòng cao hẳn Biên Hoà Nam Đông hai nhóm chứng phơi nhiễm 55 5.2 Hàm lợng thành phần bổ thể C3, C4: Kết bảng 20 - 38: Hàm lợng thành phần bổ thể C3 C4 đối tợng phơi nhiễm Biên Hoà Nam Đông thấp đối tợng chứng sinh sống khu vực Hàm lợng bổ thể C3, C4 đối tợng thuộc phờng Tân Phong + Trung Dũng phờng Tân Hạnh + Trảng Dài xấp xỉ (Bảng 25) Huế: Hàm lợng C3, C4 đối tợng sinh trớc 1975 thấp đối tợng sinh sau 1975 (Bảng 31) Trái lại, Hải Phòng đối tợng có nguy phơi nhiễm lại có hàm lợng C3 C4 cao đối tợng làm chứng sống địa phơng Riêng Hải Phòng, kết khác với kết số tác giả đà công bố [1],[18],[24],[25],[36] Giảm hàm lợng bổ thể đối tợng bị nhiễm độc nói chung phơi nhiễm TCDD nói riêng do: quan sản xuất bổ thể bị nhiễm độc Theo Lin W.Q [24], bổ thể giảm đối tợng tăng dị hoá bổ thể bị nhiễm TCDD Riêng Hải Phòng đặc biệt (hàm lợng C3, C4 cuả nhóm có nguy phơi nhiễm cao nhóm chứng, nhóm cao nhóm tơng ứng Biên Hoà Đồng Nai (bảng 38), đối tợng đà khỏi vùng ô nhiễm dioxin đà lâu, tình trạng sức khoẻ khác đối tợng mà không khai thác đợc, lÏ: bỉ thĨ gi¶m cã thĨ kÐm s¶n xt tiêu thụ nhiều trình bệnh lý Bổ thể nhiều loại tế bào sản xuất: nuôi cấy bạch cầu đơn nhân đại thực bào in vitro, tế bào sản xuất đợc hầu hết thành phần bổ thể Gan quan có khả sản xuất thành phần bổ thể, trừ thành phần C1 tế bào biểu mô đờng tiêu hoá tiết niệu sản xuất Thành phần C3 tham gia vào đờng hoạt hoá bổ thể (classical pathway alternative pathway) Thành phần C4 tham gia đờng classical Bổ thể yếu tố miễn dịch không đặc hiệu, chức chủ yếu chúng là: dung giải tế bào mang kháng nguyên, hình thành phản ứng viêm, xử lý phức hợp miễn dịch Nh hàm lợng bổ thể huyết phụ thuộc chủ yếu vào quan tham gia sản xuất chúng tình trạng tiêu thụ diễn thể 56 5.3 Khả đáp ứng tạo kháng thể: Kết bảng 39 - 44 cho thấy: - Tỷ lệ ngời có HBSAg(+) anti HBSAg(+) đối tợng nghiên cứu là: 18,9%, 19,7% (Bảng 39), tơng tự với kết nghiên cứu cộng đồng dân c nhiều tác giả nớc đà công bố - Khả đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chống kháng nguyên viêm gan (HBSAg) sau trình tiêm chủng: Tại Biên Hoà Đồng Nai, khả đáp ứng tốt (hàm lợng anti HBsAg 10 mUI/ml) đối tợng bị phơi nhiễm thấp đáng kể so với đối tợng làm chứng sinh sống khu vùc: 65,9% so víi 94,4%; 67,8% so víi 84,4% Kết phù hợp với kết nghiên cứu số tác giả n−íc: [6, 13, 16, 18, 19, 20, 26, 29, 37] Tại Hải Phòng: khác với khu vực trên, khả đáp ứng tốt nhóm có nguy phơi nhiễm cao đối tợng làm chứng (75% so với 60%), khác biệt ý nghĩa thống kê Phải chăng, tình trạng sức khoẻ, bệnh lý kinh diễn tiềm tàng cá thể nhóm đối tợng có khác ? Khả đáp ứng tạo kháng thể thể phụ thuộc nhiều yếu tố: trạng thái sức khoẻ dinh dỡng, phản ứng tính thể, toàn vẹn hệ thống miễn dịch, đặc biệt số lợng chức tế bào B, hỗ trợ tế bào Th Hiệu lực bảo vệ vacxin phụ thuộc vào tình trạng thể nhận loại vacxin Vacxin EngerixB Bỉ mà sử dụng vacxin tái tổ hợp chất lợng cao Sau tiêm chủng mũi, kháng thể chống HBSAg đợc định lợng kỹ thuật ELISA với kít nhập ngoại, kết thu đợc khách quan 5.4 Hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho: Kết Bảng 45 cho thấy: IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho đối tợng đáp ứng tạo kháng thể đặc hiệu chèng HBsAg ë møc tèt (≥ 10 UI/ml) vµ møc không tốt ( < 10 UI/ml): 57 Nếu riêng rẽ nhóm đáp ứng tạo kháng thể chống HBsAg mức tốt mức không tốt hàm lợng IL-10 nhóm đáp ứng mức tốt thấp hẳn nhóm đáp ứng mức không tốt (P < 0,05) Để đánh giá chức tế bào lympho T, thử nghiệm cổ điển nh test bì, chuyển dạng non sau kích thích chất phân bào định lợng sản phẩm lympho T tiết sau đợc hoạt hoá thông số có giá trị Dòng lympho bào Th0 đợc chia thành phân nhóm: Th1 Th2 Th1 chịu trách nhiệm miễn dịch qua trung gian tế bào, Th2 chịu trách nhiệm hỗ trợ miễn dịch thể dịch Trong cytokin Th2 tiết có IL-10- cytokin có vai trò ức chế miễn dịch tế bào khác Kết thu đợc: IL-10 nhóm đáp ứng tạo kháng thể không tốt cao hẳn nhóm đáp ứng tốt kể đối tợng chứng đối tợng phơi nhiễm (13,8 so với 7,57), P < 0,05 Điều chứng tỏ IL-10 có vai trò ức chế trình tạo kháng thể thể 58 VI kết luận: Sau năm triển khai nghiên cú khu vực: Biên Hoà (Đồng Nai), Nam Đông (Huế) Hải Phòng: - 710 đối tợng đợc kiểm tra HBSAg anti HBSAg - 410 đối tợng đợc xác định số lợng, tỷ lệ tế bào CD3, CD4, CD8, CD19, bao gåm: 232 ph¬i nhiƠm, 178 chøng - 399 đối tợng tiến hành định lợng thành phần bỉ thĨ C3,C4 hut thanh, bao gåm 224 ph¬i nhiễm, 175 chứng - 316 đối tợng đợc tiêm chủng vacxin phòng bệnh viêm gan định lợng kháng thể chống kháng nguyên viêm gan (HBsAg), bao gồm 179 phơi nhiễm, 137 chứng - 74 đối tợng đợc xác định hàm lợng IL-10 dịch nuôi cấy tế bào lympho Chóng t«i rót mét sè kÕt ln sau đây: 6.1 Số lợng tế bào CD3, CD4, CD8, CD19: - Tại Biên Hoà Nam Đông: Các thông số nhóm phơi nhiễm (nhóm có nguy ph¬i nhiƠm cao) thÊp h¬n nhãm chøng (nhãm cã nguy phơi nhiễm thấp), nhiên có Nam Đông CD3, CD4 thấp có ý nghĩa (P < 0,05) - Tại Hải Phòng: CD3 CD4 nhóm cã nguy c¬ ph¬i nhiƠm cao h¬n nhãm chøng nh−ng khác biệt (P>0,05) - So sánh khu vực: hai nhóm chứng nhóm phơi nhiễm, khu vực Hải Phòng (vùng chứng) thông số hầu hết có giá trị cao hẳn khu vực Biên Hoà Nam Đông (vùng có nguy phơi nhiễm) 59 6.2 Hàm lợng thành phần bổ thể C3, C4: - Tại Biên Hoà Nam Đông: Hàm lợng C3, C4 nói chung không khác biệt nhóm phơi nhiễm nhóm chứng (trừ C3 Biên Hoà) - Tại Hải Phòng: Các thông số nhóm có nguy phơi nhiễm lại cao nhóm chøng cã ý nghÜa thèng kª (P < 0,05) 6.3 Khả đáp ứng tạo kháng thể: - Tại Biên Hoà Nam Đông: Đáp ứng mức tốt ( 10 UI/ml) cđa nhãm cã nguy c¬ ph¬i nhiƠm thÊp h¬n nhãm Ýt cã nguy c¬ ph¬i nhiƠm víi (P < 0,05) - Tại Hải Phòng: Đáp ứng mức tèt cđa nhãm cã nguy c¬ ph¬i nhiƠm cao h¬n nhóm chứng, nhiên cha có khác biệt (P > 0,05) 6.4 IL-10: Lợng IL-10 dịch nuôi cấy lymphocyte đối tợng đáp ứng tạo kháng thĨ chèng HBsAg ë møc tèt thÊp h¬n cã ý nghĩa (P < 0,05) so với đối tợng đáp ứng tạo kháng thể mức không tốt Nh vậy, Biên Hoà Đồng Nai: thay đổi số CD3,CD4,CD8, thành phần bổ thể C3,C4, khả đáp ứng tạo kháng thể chiều hớng nh (nhãm cã nguy c¬ ph¬i nhiƠm thÊp h¬n nhãm Ýt có nguy phơi nhiễm), ngợc với đối tợng Hải Phòng (nhóm có nguy phơi nhiễm cao nhóm chứng) 60 VII Hiệu nghiên cứu 7.1 Hiệu đào tạo: Không 7.2 Hiệu khác: - Xét nghiệm phát kháng nguyên virus viêm gan B HBsAg cho tất đối tợng nghiên cứu: 710 ngời - Tiêm phòng vacxin viêm gan B cho đối tợng có HBsAg (-): 316 ngời tiêm đủ lần 61 tài liệu tham khảo Vị TriƯu An, Phan Thu Anh, Ngun Ngäc Lanh, Phan ThÞ Phi Phi (1993): Contribution to the study of immun-status change in army veterans exposed to dioxin in South Vietnam 2th Int Symposium on dioxin, Nov 15-18-Hanoi Hoàng Đình Cầu, Trần Mạnh Hùng, Lê Thái Hằng CS (2000): Chiến lợc tổng thể giải hậu viƯc dïng c¸c chÊt ho¸ häc ë ViƯt Nam chiến tranh Đông Dơng lần thứ hai UB.10-80, kỷ yếu công trình VN, V, phần thứ Hoàng Đình Cầu, Trần Mạnh Hùng, Phùng Chí Dũng, Christoppher CS (2000): A L−íi - Thõa Thiªn H, mét vïng nghiên cứu giải hậu chất diệt cỏ, phát quang sử dụng chiến tranh Đông Dơng lần thứ hai UB.10-80, kỷ yếu công trình VN V, phần thứ hai Lê Cao Đài CS (1992): Kết phân tích 2,3,7,8, TCDD 149 mô mỡ ngời miền Bắc miền Nam VN- Y häc VN sè 4, 4-10 Phan ThÞ Phi Phi, Đỗ Hoà Bình, Trần Thị Chính CS (1994): Late effects on cell-mediated immunity in dioxin exposed veterans Dioxin 1994, 14th int symposium on chlorinated dioxin PCB and related compounds, Nov 21-25, Kyoto-Japan Phan Thị Phi Phi, Trần Thị ChÝnh, NguyÔn Thanh Thuý (1995): Autoantibodies and bone- marrow dirived cells in chronic dioxin exposed veterans Dioxin 95, 15th int symposium chlorinated dioxin PCB and related compounds, Aug 21-25, Edmonto Alberta- Canada Hoµng Träng Quúnh (1984): Preliminary observations on Adipose tissue dioxin levels in 55human samples from the North and South of Vietnam 62 Badesha JS et al (1995): Immunotoxic effects of prolonged dietary exposure of male rats to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin Eur J Pharmaco.Dec 7, 293 Colosio C et al (1998): Immunotoxicology in occupational and enviromental medicine: prospective, objective Med Lav, May-Jun, 89 limitations, and research 10 Dooley RK, Holsapple MP (1998): Elucidation of cellular targets responsible for TCDD-induced suppression of antibody resposes: I The role of the B lymphocyte Immunopharmacology, Nov-Dec,16 11 Fan F et al (1996): Effects of TCDD on humoral and cell-mediated immunity in Sprague-Dawley rats Toxicology,Jan 8, 106 (1-3) 12 Funseth E et al (1991): Effects of 2,3,7,8 TCDD on blood and spleen NK cell activity in th mouse 11th int symposium on dioxin and related compounds 13 Gehrs BC et al (1997): Alterations in the developing immune system of the F344 rat after perinatal exposure to to 2,3,7,8 TCDD: II.Effects on the pup and the adult Toxicology, Oct 19, 122 14 Hanson CD, Smialowicz RJ.(1994): Evaluation of the effect of lowlevel 2,3,7.8 TCDD exposure on cell mediated immunity Toxicology, Mar 11, 88 15 Halperin W et al (1998): Immunological markers among workers exposed to 2,3,7,8 TCDD Occup Environ Med, Nov, 55 16 Holsapple MP et al (1991): A review of 2,3,7,8, TCDD changes in immunocompetence Toxicology 69 17 Immunodiagnostic Studies A manual of laboratory and diagnostic tests 5th edition Copyright 1998 Lippincoot Williams & Wilkins 18 Jennings AM et al (1988): Immunological abnormalities 17 years after accidental exposure to 2,3,7,8 TCDD Br J Ind Med, Oct, 45 63 19 Karras JG et al (1996): 2,3,7,8 TCDD elevates basal B-cell intracellular calcium concentration and suppresses surface Ig-but not CD40-induced antibody secretion Toxicol Apll Pharmacol, Apr, 137 20 Kerkvliet NI et al (1990): Imfluence of the Ah locus on the humoral immunotoxicity of 2,3,7,8 TCDD: Evidence for Ah-receptor-dependent and Ah-receptor-independent mechanisms of immunosuppression Toxicol Appl Pharmacol, Aug, 105 21 Kerkvliet NI et al (1996): Inhibition of TC-1 cytokine production, effector cytotoxic T lymphocyte development and alloantibody production by 2,3,7,8 TCDD J Immunol, Sep 15 22 Lang DS et al (1994): Lack of direct immunosuppressive effects of 2,3,7,8 TCDD on humal peripheral blood lymphocyte subsets in vitro Arch Toxicol ,68 23 Lawrence BP, Kerkvliet NI (1998): Role of altered arachidonic acid metabolism in 2,3,7,8 TCDD-induced immune suppression in C57BL/6 mice Toxicol Sci, Mar,42 24 Lin WQ, White KL (1993): Production of complement component C3 in vivo following 2,3,7,8 TCDD J Toxicol Environ Health, Jun,39 25 Lin WQ, White KL (1993): Mouse Hepa 1c1c7 hepatoma cells produce complement component C3; 2,3,7.8 TCDD fails to modulate this capacity J Toxicol Environ Health, May, 39 26 Lundberg K et al (1991): TCDD effects on B cell development chick embryos and on specific immune responses in mice 11th int symposium on dioxin and related compounds,40 27 Luster MI et al (1991): Inhibition of lymphocytes and thymocyte maturation in mice by TCDD 11th int symp.on dioxin and related compounds,41 28 Michalek JE, Ketchum NS, Check IJ (1999): Serum dioxin and immunologic response in veterans of operation Ranch Hand Am J Epidemiol, Jun 1,149 64 29 Morris DL et al (1992): Enhanced suppression of humoral immunity in DBA/2 mice following subchronic exposure to 2,3,7,8 TCDD Toxicol Appl Pharmacol, Jan,112 30 Matulka RA et al (1997): Characterization of the role played by antigen challenge in the suppression of in vivo humoral immunity by 2,3,7,8 TCDD Arch Toxicol,72 31 Moos AB, Kerkvliet NI (1995): Inhibition of tumor necrosis factor activity fails to restore TCDD-induced suppression of the antibody response to sheep red blood cells.Toxicol Lett, Nov 15, 81 32 Schecter A.(1992): Dioxin and dibenzofuran levels in blood and adipose tissue of Vietnamese from various locations in Vietnam in proximity to agent orange spray Chemosphere vol.5 Nos 7-10 33 Silverstone ASE et al (1991): Tcdd effects on lymphocyte stem cells 11th int symposium on dioxin and related compounds 34 Takenaka H et al (1995): Enhanced human IgE production results from exposure to the aromatic hydrocarbons from diesel exhaust: direct effects on B-cell IgE production J Allergy Clin Immunol Jan 95 35 Toxicological profile for chlorinated dibenzo - p - dioxins (update Dec 1998) Research Triangle Institute under Contract no 205-93-0606 US Department of Health and Human Services - Public Health Service (page: 19-187) Agency for Toxic substances and disease registry 36 White KL et al (1986): Modulation of serum complement levels following exposure to TCDD Toxicol Appl Pharmacol, Jun 30, 84 37 Zober MA et al (1992): Morbidity study of extruder personnel with potential exposure to brominated dioxins and furans Results of blood monitoring and immunological tests BrJ Ind Med, Aug., 49 65