ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ̀ TRƢƠNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHẠM THỊ TÂM NGHIÊN CỨU NẤM PHYTOPHTHORA PALMIVORA GÂY BỆNH THỐI ĐEN QUẢ CA CAO VÀ MỘT SỐ VI SINH VẬT ĐỐI KHÁNG TRONG PHÒNG TRỪ BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2014 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI ̀ TRƢƠNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN PHẠM THỊ TÂM NGHIÊN CỨU NẤM PHYTOPHTHORA PALMIVORA GÂY BỆNH THỐI ĐEN QUẢ CA CAO VÀ MỘT SỐ VI SINH VẬT ĐỐI KHÁNG TRONG PHÒNG TRỪ BỆNH Chuyên ngành : Vi sinh vâ ̣t ho ̣c Mã số : 60420107 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS PHẠM NGỌC DUNG TS PHẠM THẾ HẢI Hà Nội - 2014 ̉ ̀ LƠI CAM ƠN Trong suố t quá trình học tập và thực hiện đề tài, em đã nhâ ̣n đươ ̣c sự giúp đỡ và ủng hộ nhiệt tình của nhiều tập thể và cá nhân Đầu tiên, em xin bày tỏ lòng biế t ơn chân thành và sâu sắ c nhấ t đế n tâ ̣p thể hướng dẫn khoa ho ̣c : TS Phạm Ngọc Dung và TS Phạm Thế Hả i, những người thầ y tâm huyế t , đã tâ ̣n tình hướng dẫn , chỉ bảo và giúp đỡ em quá trình thực hiê ̣n đề tài và hoàn thành luâ ̣n văn này Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắ c đế n Ban lanh đa ̣o , Phòng tổ chức hành chính , ̃ Bô ̣ môn An toàn và Đa da ̣ng sinh ho ̣c , Viê ̣n Môi trường Nông nghiê ̣p đã đồ ng ý và tạo điều kiện cho em về thời gian học tập và thực hiện đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các cán bô ̣ thuô ̣c nhóm Bê ̣nh ̣i ăn quả và công nghệ sinh ho ̣c, Bô ̣ môn Bê ̣nh Cây , Viê ̣n Bảo Vê ̣ Thực Vâ ̣t đã ta ̣o điề u kiê ̣n giúp đỡ quá trinh thực hiê ̣n các thí nghiê ̣m đề tài ̀ Em xin gửi lời cảm ơn tới quý thầ y cô ta ̣i Khoa Sinh ho ̣c , đă ̣c biê ̣t là các thầ y cô ở Bô ̣ môn Vi sinh vâ ̣t ho ̣c, trường Đa ̣i ho ̣c Khoa ho ̣c Tự nhiên đã nhiê ̣t tinh giảng ̀ dạy và truyền đạt cho em những kiến thức bổ ích , phương pháp luâ ̣n và nghiên cứu khoa ho ̣c, làm hành trang quý báu cho sự phát triển công việc của em Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biế t ơn chân thành và sâu sắc nhấ t đến gia đình , người thân, bạn bè và đồng nghiệp đã đô ̣ng viên , giúp đỡ và dành những tình cảm thân thương - đó là nguồ n đô ̣ng lực ma ̣nh mẽ để có thể hoàn thành bản luâ ̣n văn này Hà Nội, ngày tháng năm 2014 HỌC VIÊN Phạm Thị Tâm MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU 52 Chƣơng 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU Error! Bookmark not defined 1.1 Tình hình nghiên cứu nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao Thế giới và Viêṭ Nam Error! Bookmark not defined 1.1.1 Tình hình thiệt hại nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao gây nên Error! Bookmark not defined 1.1.2 Đặc điểm sinh học và sinh thái của nấm Phytophthora palmivoraError! Bookmark not d 1.1.3 Qui luật phát sinh và phát triển của bệnh Error! Bookmark not defined 1.1.4 Một số nghiên cứu về phân lập nấm PhytophthoraError! Bookmark not defined 1.1.5 Một số nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử xác định các loài nấm Phytophthora gây hại trồng Error! Bookmark not defined 1.2 Tình hình nghiên cứu biện pháp phòng trừ sinh học bệnh thối đen quả ca cao Thế giới và Viêṭ Nam Error! Bookmark not defined 1.2.1 Nấm Trichoderma sp đối kháng nấm P palmivoraError! Bookmark not defined 1.2.2 Nghiên cứu về vi khuẩn đối kháng nấm P palmivoraError! Bookmark not defined Chƣơng 2: NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUError! Bookmark no 2.1 Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2 Vật liệu nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Môi trường nuôi cấy Error! Bookmark not defined 2.2.2 Các trang thiết bị và dụng cụ Error! Bookmark not defined 2.2.3 Nguồn vi sinh vật sử dụng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.3 Địa điểm nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.4.1 Phương pháp phân lập, xác định nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao Error! Bookmark not defined 2.4.2 Phương pháp lây bệnh nhân tạo để xác định độc tính gây bệnh của nấm Phytophthora palmivora quả ca cao Error! Bookmark not defined 2.4.3 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái , sinh học, sinh thái của nấ m P palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao Error! Bookmark not defined 2.4.4 Phân lập và tuyển chọn số vi sinh vật đối kháng nấm P palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao điều kiện phòng thí nghiệmError! Bookmark not de 2.4.5 Nghiên cứu đặc điểm sinh học, sinh thái và sinh hóa của số nấm Trichoderma sp có khả đối kháng cao với nấm P palmivoraError! Bookmark not 2.4.6 Nghiên cứu số đặc tính sinh lý, sinh hóa của các chủng vi khuẩn đối kháng với nấm P palmivora Error! Bookmark not defined 2.4.7 Định loài nấm kỹ thuật sinh học phân tử Error! Bookmark not defined 2.4.8 Xác định loài vi khuẩn kỹ thuật sinh học phân tửError! Bookmark not defined 2.4.9 Chỉ tiêu theo dõi chung Error! Bookmark not defined 2.4.10 Phương pháp xử lý số liệu Error! Bookmark not defined ́ ̉ ́ Chƣơng 3: KÊT QUẢ NGHIÊN CƢU VÀ THAO LUẬNError! Bookmark not defined 3.1 Xác định tác nhân gây bệnh thối đen quả ca caoError! Bookmark not defined 3.1.1 Phân lập nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca caoError! Bookmark not defined 3.1.2 Lây bệnh nhân tạo để xác định nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca caoError! Bookmark 3.1.3 Xác định nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca cao kỹ thuật sinh học phân tử Error! Bookmark not defined 3.2 Đặc điểm hình thái nấm P palmivora gây bệnh thối đen quả ca caoError! Bookmark 3.3 Đặc điểm sinh học, sinh thái nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao Error! Bookmark not defined 3.3.1 Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của sợi nấmError! Bookmark not 3.3.2 Ảnh hưởng của nhiệt độ tới sự phát triển của sợi nấmError! Bookmark not defined 3.3.3 Ảnh hưởng của độ pH tới sự phát triển của sợi nấm P palmivora …… ….60 3.3.4 Ảnh hưởng của chế độ chiếu sáng đến nấm P palmivoraError! Bookmark not defined 3.4 Xác định số vi sinh vật có khả đối kháng với nấm P palmivoraError! Bookmar 3.4.1 Phân lập các vi sinh vật đối kháng các vùng trồng ca cao của tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông Error! Bookmark not defined 3.4.2 Xác định khả đối kháng của các vi sinh vật có ích với nấm gây bệnh 62 3.4.3 Nghiên cứu số đặc tính sinh học của các chủng nấm Trichoderma phân lập Error! Bookmark not defined 3.4.4 Định danh nấm Trichoderma kỹ thuật sinh học phân tửError! Bookmark not defin 3.4.5 Nghiên cứu số đặc tính sinh lý, sinh hóa của các chủng vi khuẩn đối kháng với nấm P palmivora 74 3.4.6 Xác định đặc điểm phân loại của các vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora kỹ thuật sinh học phân tử Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 PHỤ LỤC ́ ́ ́ DANH MỤC KÝ HIỆU CAC CHƢ̃ VIÊT TĂT Viết tắt Cụm từ a, b, c, d : Phân lớp sự sai khác giữa các công thức AFLP : Kỹ thuật phân tích đa hình đoạn dài khuếch đại CA : Môi trường cà rốt, agar CMA : Môi trường cà rốt, bột ngô, agar cs : Cộng sự CT : Công thức CV : Độ biến động của thí nghiệm (%) DNA : Axit deoxyribonucleic ĐC : Đối chứng ĐK : Đường kính HQ : Hiệu quả IRRISTAT : Phần mềm thống kê nông nghiệp KH : Ký hiệu PCA : Môi trường khoai tây, cà rốt, agar PCR : Phản ứng chuỗi trùng hợp PDA : Môi trường khoai tây, dextrose, agar RFLP : Kỹ thuật đa hình chiều dài đoạn giới hạn sp : Một loài spp : Nhiều loài VSV : Vi sinh vật ̉ DANH MỤC BANG Trang Bảng 3.1 Ảnh hưởng của vật liệu bẫy đến khả bẫy nấm Bảng 3.2 Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca cao 37 Ảnh hưởng của thuốc Benlat 80WP đến khả phân lập nấm Phytophthora sp gây bệnh thối đen quả ca cao 39 Bảng 3.3 Ảnh hưởng của thuốc Tachigaren 30L đến khả phân lập nấm Phytophthora sp gây thối đen quả ca cao 40 Bảng 3.4 Ảnh hưởng của thuốc kháng sinh RH đến khả phân lập nấm Phytophthora gây thối đen quả ca cao 41 Bảng 3.5 Kết quả lây nhiễm nhân tạo các chủng nấm Phytophthora sp Bảng 3.6 gây bệnh thối đen quả ca cao 43 Kết quả giải trình tự các mẫu Phytophthora phân lập từ ca cao 44 Bảng 3.7 Định danh các loài nấm Phytophthora gây bệnh thối đen quả ca cao dựa tìm kiếm sở dữ liệu 46 Bảng 3.8 Đặc điểm hình thái các loài nấm Phytophthora palmivora phân lập từ ca cao 51 Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm Bảng 3.9 Phytophthora palmivora gây thối đen quả ca cao 54 Bảng 3.10 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của nấm P palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao 56 Bảng 3.11 Ảnh hưởng của độ pH đến sự phát triển của nấm P palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao 57 Bảng 3.12 Ảnh hưởng của độ chiếu sáng đến sự phát triển của nấm Phytophthora palmivora gây thối đen quả ca cao 59 Bảng 3.13 Số chủng Trichoderma spp phân lập từ tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk và Đăk Nông 60 Bảng 3.14 Số chủng vi khuẩn phân lập từ tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk và Đăk Nông có khả đối kháng nấm P palmivora 61 Bảng 3.15 Khả ký sinh của các chủng nấm Trichoderma sp nấm P palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao 63 Bảng 3.16 Khả ức chế nấm P palmivora chất kháng sinh bay của các chủng nấm Trichoderma spp 65 Bảng 3.17 Hiệu quả ức chế của số chủng vi khuẩn phân lập với nấm P palmivora gây thối đen quả ca cao 66 Bảng 3.18 Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng tới sự phát triển của nấm Trichoderma sp (F30711) 69 Bảng 3.19 Ảnh hưởng của nhiệt độ tới sự sinh trưởng, phát triển của nấm Trichoderma sp (F30711) 71 Bảng 3.20 Ảnh hưởng của điều kiện chiếu sáng đến sinh trưởng và phát triển của nấm Trichoderma sp (F30711) 72 Bảng 3.21 Ảnh hưởng của pH đến sự phát triển của nấm Trichoderma sp (F30711) 73 Bảng 3.22 Định tính hoạt độ enzyme của các chủng nấm Trichoderma sp có triển vọng đối kháng cao với nấm P palmivora 73 Bảng 3.23 Giải trình tự và tìm kiếm các chuỗi gần gũi Ngân hàng Gen (GenBank) 75 Bảng 3.24 Khả lên men yếm khí của số chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 76 Bảng 3.25 Khả khử nitrat của số chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 77 Bảng 3.26 Khả đồng hóa nguồn Các bon từ đường Glucose, Sacarose, tinh bột tan và rượu Mannitol của các chủng vi khuẩn có triển vọng 78 Bảng 3.27 Khả chịu mặn của các chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 79 Bảng 3.28 Định tính hoạt độ enzyme của số chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 80 Bảng 3.29 Kết quả xác định loài vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora sinh học phân tử 81 DANH MỤC HÌ NH Trang Hình 1.1 Sơ đồ chu trình số ng của nấ m Phytophthora Hình 1.2 Hình thái học của Phytophthora palmivora Hình 3.1 Cây phả hệ không rễ dựa chuỗi ITS cho thấy mối quan hệ của 20 mẫu Phytophthora phân lập từ ca cao Việt Nam với các loài Phytophthora 47 Hình 3.2 Đặc điểm của bào tử nang 48 Hình 3.3 Bào tử nang hình thành cành bào tử mọc dạng sym 49 Hình 3.4 Bào tử hậu hình thành đỉnh sợi và giữa sợi 49 Hình 3.5 Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm P palmivora 53 Hình 3.6 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của nấm P palmivora 56 Hình 3.7 Ảnh hưởng của độ pH đến sự phát triển của nấm P palmivora 58 Hình 3.8 Ảnh hưởng của độ chiếu sáng đến sự phát triển của nấm P palmivora 58 Hình 3.9 Đồ thị thể hiện tỷ lệ phân lập các chủng nấm Trichoderma spp thu thập từ các mẫu đất tại tỉnh Bình Phước, Đăk Lăk, Đăk Nông 61 Hình 3.10 Đồ thị thể tiện tỷ lệ phân lập các chủng vi khuẩn có triển vọng đối kháng nấm P palmivora 62 Hình 3.11 Hiệu quả ức chế của các chủng nấm Trichoderma spp nấm P palmivora 63 Hình 3.12 Khả ký sinh của các chủng nấm Trichoderma sp đối kháng với nấm P palmivora 64 Hình 3.13 Hiệu quả ức chế nấm P palmivora chất kháng sinh bay của các chủng nấm Trichoderma spp 65 Hình 3.14 Khả ức chế nấm P palmivora chất kháng sinh bay của các chủng nấm Trichoderma spp 66 Hình 3.15 Hiệu quả ức chế của số chủng vi khuẩn phân lập với nấm P palmivora 67 Hình 3.16 Khả đối kháng của các chủng vi khuẩn với nấm P palmivora 67 Hình 3.17 Nấm Trichoderma (F30711) 68 Hình 3.18 Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm Trichoderma 70 Hình 3.19 Ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự phát triển của nấm Trichoderma 71 Hình 3.20 Định tính hoạt độ enzyme cellulase của chủng nấm F30711 74 Hình 3.21 Khả lên men yếm khí của chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 77 Hình 3.22 Khả khử nitrat của chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 77 Hình 3.23 Khả đồng hóa nguồn các bon của chủng vi khuẩn B14.1 78 Hình 3.24 Định tính hoạt độ enzyme cellulase của các chủng vi khuẩn đối kháng nấm P palmivora 80 MỞ ĐẦU Cây ca cao (Theobroma cocoa L) có nguồn gốc từ lưu vực sông Amazon nằm Nam, Trung Mỹ và trồng rộng rãi 500 năm trước Cây ca cao có ưu thế sinh thái tự nhiên tầng thấp những cánh rừng mưa nhiệt đới Cây ca cao trồng nhiều vùng Trung Mỹ, Đông Châu Phi, Tây Châu Phi đến các nước Đông Nam Á Năm 2002, chỉ riêng mức tiêu thụ hạt ca cao thế giới đạt tỷ USD, nhu cầu này tăng thời gian tới và tăng nhanh thị trường Châu Á Tính đến niên vụ 2004 sản lượng ca cao thế giới đạt 3.075 ngàn Cây ca cao hiê ̣n là đối tượng chính các chương trình giữ gìn sinh thái, tạo cảnh quan cho các vùng đất trống, đồi trọc, đem lại hội tốt để cải thiện đời sống, tăng thu nhập cho người nông dân sản xuất nhỏ và nghèo Theo Ross Jaaz, trưởng đại diện của Tổ chức hợp tác phát triển nông nghiệp và trợ giúp quốc tế cho biết, 80% ca cao thế giới sản xuất từ mảnh đất nhỏ 1ha Bệnh thối đen quả ca cao (black pod) nấ m Phytophthora palmivora (P palmivora) gây là bệnh phổ biến và gây hại nghiêm trọng các vùng trồng ca cao thế giới, ảnh hưởng trực tiếp đến suất và chất lượng hạt ca cao Bệnh gây hại không những quả từ giai đoạn còn non cho đến quả chín mà còn hại cả thân, cành và lá Nấm P palmivora gây hại không chỉ các phận khí sinh của mà còn có khả tồn tại đất và hạn chế sự sinh trưởng của trồng lại các diện tích trồng ca cao trước bị bệnh Ước tính thiệt hại loại bệnh này gây lớn từ 10% (thập niên 80) tăng lên 30% (thập niên 90) và có thể lên đến 90 - 100%, phụ thuộc vào vị trí địa lý, giống trồng trọt, chủng gây bệnh và điều kiện môi trường vùng Ở Việt Nam, mặc dù ban đầu việc trồng ca cao không chú trọng gần có sự hình thành các vùng sản xuất ca cao hàng hoá tập trung, nhiều loài dịch hại quan trọng phát triển nhanh và gây hại nặng, làm giảm suất, chất lượng quả ca cao Bệnh thối đen quả là bệnh chính gây hại ca cao Việt Nam Nấm P palmivora gây hại còn có thể gây hại phận (lá, thân, hoa), qua các giai đoạn từ vườn ươm cho đến thu hoạch Vì vây, việc nghiên cứu cách hệ thống nấm P palmivora gây bệnh cho ca cao là hết sức cần thiết để đưa đối sách phòng trừ bệnh Để phòng trừ bệnh, chủ yếu các biện pháp hóa học sử dụng Tuy nhiên, sử dụng nhiều thuốc hóa học gây nên những hiệu quả tiêu cực ô nhiễm môi trường, tạo tính kháng thuốc của sâu bệnh, ảnh hưởng đến sức khỏe của người và vật nuôi Do đó, việc tìm biện pháp an toàn hiệu quả phòng trừ bệnh hại nói chung và bệnh thố i đen quả ca cao nói riêng là những vấn đề cấp thiết hiện mà Việt Nam gia nhập WTO, đòi hỏi sản phẩm nông nghiệp phải an toàn, không có dư lượng thuốc hóa học để đảm bảo cho nhu cầu nội tiêu và xuất Trong các biện pháp phòng trừ nghiên cứu để dần thay thế biện pháp hóa học biện pháp sinh học là hướng các nhà khoa học của nhiều nước thế giới Việt Nam quan tâm Biện pháp sinh học, là việc sử dụng các vi sinh vật (VSV) có ích, các loài thảo mộc, các hợp chất hữu là tác nhân sinh học, không những phòng trừ bệnh hại trồng mà còn sử dụng để tăng cường độ màu mỡ cho đất, kích thích trồng sinh trưởng phát triển và hấp thụ dinh dưỡng, tăng cường hệ sinh thái bền vững hệ thống nông nghiệp Vì vậy, xuất phát từ nhu cầu thực tiễn và để đáp ứng phần của sản xuất, chúng thực hiện đề tài “Nghiên cứu nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen ca cao số vi sinh vật đối kháng phòng trừ bệnh” Đề tài nhằm hướng tới hai mục tiêu chính: (i) xác đinh đặc điểm các chủng nấm Phytophthora palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao Việt Nam, và (ii) tuyển chọn số vi sinh vật đối kháng có khả phòng trừ nấm Phytophthora palmivora TÀI LIỆU THAM KHẢO ́ TIÊNG VIỆT Bộ Nông nghiệp và phát triển nông thôn (1999), Đầu tư dự án phát triển giống ca cao (giai đoạn 1999 - 2000), Số 5685 QĐ/BNN - XDCB, ngày 30/12/1999 Nguyễn Minh Châu (2009), “Sử dụng nấm Trichoderma để phòng trừ sâu bệnh cho vườn ăn quả”, Báo cáo Viện ăn Miền Nam năm 2009, tr.2 Hồng Châu (2009), Ứng dụng chế phẩm Trichoderma, Kết quả nghiên cứu khoa học năm 2009 Đại học Cần Thơ, tr - Phạm Ngọc Dung, Ngô Vĩnh Viễn, Nguyễn Văn Tuất, Nguyễn Thị Ly, Trần Ngọc Khánh, Hồ Gấm, Nguyễn Quang Tuấn (2008), “Một số kết quả phòng trừ bệnh chết nhanh gây hại hồ tiêu tại Đăk Nông”, Tạp chí Bảo vệ thực vật, số 3, tr 17-23 Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Nguyễn Văn Tuất (2009), “Phân tích chuỗi Internal Transcribed Spacer (ITS) của nấm Phytophthora tropical gây bệnh chết nhanh hồ tiêu tại Việt Nam”, Tạp chí Nông nghiệp và phát triển nông thôn, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, số 4, tr 17–21 Phạm Ngọc Dung, Hà Viết Cường, Lê Đình Thao, Hà Giang, Trần Thị Như Hoa, Nguyễn Hồng Tuyên, Nguyễn Thúy Hạnh (2012), “Nghiên cứu sử dụng nấm đối kháng Trichoderma asperellum phòng trừ nấm Phytophthora spp gây bệnh cao su”, Tạp chí bảo vệ thực vật, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, số 12, tr 10-12 Trần Kim Loang, Vũ Văn Tố, Hà Thị Mão (2001), Điều tra xác định thành phần sâu bệnh hại ca cao tỉnh Đăk Lăk, Kết quả nghiên cứu khoa học năm 2000 – 2001, Buôn Ma Thuột, tr 144 - 155 Trần Kim Loang, Đào Thị Lan Hoa, Lê Đăng Khoa, Hà Thị Mão, Lê Đình Đôn, Tạ Thanh Nam, Ngô Thị Xuân Thịnh (2006), “Nghiên cứu bệnh nấm Phytophthora số công nghiệp và ăn quả”, Báo cáo trọng điểm cấp Bộ 2001 - 2005, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn 9 Trần Kim Loang, Lê Đình Đôn, Tạ Thanh Nam, Ngô Thị Xuân Thịnh, Nguyễn Thị Tiến Sĩ, Trần Thị Xê (2008), “Phòng trừ bệnh nấm Phytophthora hồ tiêu chế phẩm sinh học Trichoderma (Tricho-VTN) tại Tây Nguyên”, Kết nghiên cứu khoa học năm 2008, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, tr 307-315 10 Phạm Hồng Đức Phước (2003), Kỹ thuật trồng ca cao Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh, tr 50-58 11 Trần Thị Thuần, Nguyễn Thị Ly, Phạm Ngọc Dung (2004), “Nghiên cứu và sử dụng nấm đối kháng Trichoderma để phòng trừ nhóm nấm tồn tại đất gây hại trồng”, Tạp chí bảo vệ thực vật, số 4, tr 15-17 12 Nguyễn Công Thuật (1996), Phòng trừ tổng hợp sâu bệnh hại trồng, nghiên cứu và ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội, tr 102 13 Nguyễn Văn Tuất và Lê Văn Thuyết (2001), Sản xuất chế biến và sử dụng thuốc bảo vệ thực vật thảo mộc và sinh học, Nxb Nông nghiệp, tr.56 14 Nguyễn Văn Uyển (1999), Hướng dẫn kỹ thuật trồng ca cao, Nxb Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr.110 15 Nguyễn Văn Uyển, Nguyễn Tài Sum (1996), Cây ca cao giới và triển vọng Việt Nam, Nxb Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr.183 16 Nguyễn Văn Viên, Nguyễn Thị Tú, Bùi Văn Công (2012), “Nghiên cứu sản xuất và sử dụng chế phẩm nấm đối kháng Trichoderma viride phòng trừ số bệnh nấm hại vùng rễ khoai tây, lạc, đậu tương”, Tạp chí Khoa học và phát triển, Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, tập 10, số 1, tr 95-102 17 Ngô Vĩnh Viễn, Phạm Ngọc Dung, Nguyễn Thị Ly, Lê Thu Hiền (2007), “Phương pháp phân lập nấm Phytophthora từ đất, rễ và phận bị bệnh”, Tuyển tập kết Khoa học và Công nghệ nông nghiệp 2006 - 2007, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Nxb Nông nghiệp, tr.236-240 TIẾNG ANH 18 Aravind, R., Kumar, A., Eapen, S.J., Ramana, K.V (2009), Endophytic bacterial flora in root and stem tissues of black pepper (Piper nigrum L.) genotype: isolation, identification and evaluation against Phytophthora capsici, Indian Institute of Spices Research, Calicut, Kerala, India, http://www.ncbi.nlm.gov/pubmed, pp 3-5 19 Aryantha, I.P., Cross, R ADN Guest, D.I (2000), “Suppression of Phytophthora cinnamomi in potting mixes amended with uncomposted and composted animal manures”, Phytopathology, 90, pp 775–782 20 Baker, K F., and Cook, R J (1974), Biological Control of Plant Pathogens W H Freeman & Company, San Francisco, pp 200-205 21 Bekele F., End M J and Eskes A B.(2003), Proceeding of the international workshop on cocoa Breeding for improved production systems, pp 192-198 22 Blair J.E., Coffey, M.D., Park, S-Y., Geiser, D.M and Kang, S (2008), “A multilocus phylogeny for Phytophthora utilizing markers derived from complete pathogen genomes”, Fungal Genetics and Biology, 45, pp 266-277 23 Broadley, R.H (1992), Protect your avocados and cocoa, Brisbane, Australia, Queensland Department of Primary Industries 24 Burgess, L.W., Knight, T.E., Tesoriero, L and Phan Thuy Hien (2008), Diagnostic manual for plant diseases in Viet Nam, Australian Centre for International Agricultural Research, pp 198-210 25 Chambers, S.M., and Scott, E.S (1995), “Invitro antagonism of Phytophthora cinnamomi and Phytophthora citricola by isolates of Trichoderma spp And Gliocladium virens”, Journal of Phytopathology, 143, pp 471 - 477 26 Cohen,Y and Coffey, M.D.(1986), “Systemic fungicides and the control of Oomycetes”, Annual Review of Phytopathology, 24, pp 311 - 338 27 Cook, R J., and Baker, K F (1983), “The Nature and Practice of Biological Control of Plant Pathogens”, American Phytopathological Society, St Paul, MN, pp 445-460 28 Cooke D E L and Duncan J M (1977), “Phylogenetic analysis of Phytophthora species based on the ITS1 and ITS2 sequences of ribosomal DNA”, Mycological Research, 101, pp 667-677 29 Diby, P., Saju, K.A., Jisha, P.J., Sarma, Y.R., Kumar, A and Anandajai, M (2003), “Mycolytic enzymes produced by Pseudomonas fluorescens and Trichoderma spp against Phytophthora capsici, the foot rot pathogen of black pepper (Piper nigrum Linn.)”, Soil Biology and Biochemistry, pp 196-212 30 Drenth, A and Guest, D.I (2004), Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia, Australian Centre for International Agricultural Research Canberra, pp 135-142 31 Drenth, A and Sendall, B (2004), “Isolation of Phytophthora from infected Plant tisue and soil, and Principles of Species Identification”, Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia, Australian Centre for International Agricultural Research Canberra, pp 94–102 32 Duncan, J., and Cooke, D (2002), Identifying, diagnosing and detecting Phytophthora by molecular methods, Mycologist, Vol.16, Part 2, pp 59-66 33 El-Tarabily, K.A., Sykes, M.L, Kurtboke, I.D., Hardy, G.E.S., Barbosa, A.M and Dekker, R.F.H (1996), “Synergystic effects of a cellulose–producing micromonospora and an antibiotic-producing Streptomyces violascens on the suppression of Phytophthora cinnamomi root rot of Banksia grandis”, Canadian Journal of Botany, 74, pp 618–624 34 Erwin, D.C and Riberrio O.K (1996), “Phytophthora diseases worldwide”, St Paul, Minnessota, USA, American Phytopathological Society Press, p 562 35 Freeman, G.H (1994), Present nursery and establishment methods for cocoa in Western Nigeria, Ann Rep W Afr Cocoa Res Inst (Nigeria), pp 13-14 36 Fulton, R.H (1989), “The cocoa disease trilogy: black pod, Monilia pod rot and witch broom”, Plant disease, 73, pp 601–603 37 Galindo, J.J (1992), “Prospects for biological control of cacao”, In: Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australasia, Rome, FAO Plant Production and Protection, p 112 38 George, S.W and Milholland, R.D (1986), “Growth of Phytophthora fragariae on various clarified natural media and selected antibiotic”, Plant disease, 70, pp 1100–1104 39 Ivors, K.L., Hayden, K.J., Bonants, P.J.M., Rizzo, D.M., Garbelotto, M (2004), “AFLP and phylogenetic analyses of North American and European populations of Phytophthora ramorum”, Mycological Research, 108, pp 78–392 40 Jackson, G.V.H and Newhook, F.J (1978), “Sources of Phytophthora palmivora inoculum in Solomon Island cocoa plantations”, Trans.Br.Mycol.Soc, 71, pp 239 - 249 41 Heller, W.E and Theilerhedtrich, R (1994), “Antagonism of Chaetomium globosum, Gliocladium virens and Trichoderma viride to four soil-borne Phytophthora species”, Journal of Phytopathology 141, p 390–394 42 Jollès và Muzzarelli (1999), Chitin and chitinases, Basel, Boston, Berlin, Birkhauser Switzerland, pp.38 - 68 43 Keane, P.J (1992), Disease of pest and cocoa: an overview In: Keane, P.J and Putter, C.A., ed., Cocoa pest and disease management in Southeast Asia and Australasia, Rome, Italya, Food and Agriculture Organization of the United Nations, FAO Plant Production and Protection Paper No.112 44 Konam, J.K and Guest, D.I (2004), “Role of Flying beetles (Coleoptera: Scolytidae and Nitidulae) Phytophthora pod rot of cocoa in Papua New Guinea”, Australia Plant Pathology, in press, 40, pp 30-34 45 Kong, P., Hong, C.X., Tooley, P.W., Ivors, K., Garbelotto, M and Richardson, P.A (2004), “Rapid identification of Phytophthora ramorum using PCRSSCP analysis of ribosomal and ITS-1”, The Society for Applied Microbiology, USA, 38, pp 433-439 46 Larkin, R.P., Ristaino, J.B and Campbell, C.L (1995), “Detection and quantification of Phytophthora capsici in soil”, Phytopathology, 85, pp 1057–1063 47 Lee, B.S and Lum, K.Y (2004), Phytophthora Diseases in Malaysia, Malaysian Agricultural Research and Development Institute, GPO Box 12301, 50774 Kuala Lumpur, Malaysia 48 Masago, H., Yoshikawa, M., Fukada, M., and Nakanishi, N (1977), “Selective inhibition of Pythium spp On a medium for direct isolation of Phytophthora spp from soil and plants”, Phytopathology, 67, pp 425–428 49 McMahon, P ADN Purwantara, A (2004), Phytophthora on Cocoa In: “Diversity and Management of Phytophthora in Southeast Asia”, Australian Centre for International Agricultural Research Canberra, pp 104–113 50 Medeiros, A.G (1976), Sporulation of Phytophthora palmivora (Butl.) Butl In relation to epidemiology and chemical control of black pod disease, PhD thesis, University of California, Riverside, California, USA Cited in Pereira (1992) 51 Papavizas, G.C and Bower, J.H (1981), “Comparative fungitoxicity of captafol and metalaxyl to Phytophthora capsici”, Phytopathology, 71, pp 123 - 128 52 Purwantara, A (1987), Penyebab penyakit Phytophthora pada tanaman kakao di Jawa In: Proceedings of the Indonesia Plant Pathology Society Conference 1987, Surabaya, pp 283 - 290 53 Purwantara, A (2003), Eoidemiology and control of Phytophthora diseases of cocoa in Java, Indonesia, Paper presented at International Congress of Plant Pathology, at Christchurch, New Zealand, pp 280-281 54 Tan, K.S.R (2000), Effect of fertilizer on the susceptibility of durian and papaya towards Phytophthora palmivora, BSc (Honours) thesis, School of Botany, The University of Melbour, Australia, pp 25-27 55 Tran, H., Ficke, A., Asiimwe, T., Hofte, M and Raaijmakers, J.M (2007), “Role of cyclic lopopeptide massetolide A in biological control of Phytophthora infestans and in colonization of tomato plants by Pseudomonas fluoresens”, New Phytopathology, 175, pp 731-742 56 You, M.P., Sivasithampara, K and Kurboke, D.J (1996), “Actinomycetes in organic mulch used in avocado plantation and their ability to suppress Phytophthora cinnamomi”, Journal of Spice and medicinal Crops, 3, pp 51– 53 57 Weller, D.M (2007), “Pseudomonas biocontrol agents of soilborne pathogens: looking back over 30 years”, Phytopathology, 97, pp 250-256 58 Wen-Chuan Chung, Rey-Shung Wu, Chia-Ping Hsu, Hung-Chang Huang and Jenn-Wen Huang (2011), “Application of antagonistic rhizobacteria for control of Fusarium seedling blight and basal rot of lily”, Australasian Plant Pathology, Vol 40, 3, pp 269-276