TẾ BÀO VÀ MÔ HỌC CƠ QUAN TẠO MÁU TỔNG PHÂN TÍCH TẾ BÀO MÁU NGOẠI VI ( BẰNG MÁY) I ĐẠI CƯƠNG Các số tế bào máu phản ánh trực tiếp gián tiếp tình trạng sinh lý số bện lý thể Do có quan hệ mật thiết với tổ chức nên máu có khả cung cấp chứng sớm thay đổi tình trạng sức khỏe tiến triển bệnh lý II CHUẨN BỊ Người thực - 01 điều dưỡng lấy mãu người bệnh - 01 kỹ thuật viên làm xét nghiệm ( làm máy) Phương tiện – hóa chất - Máy đếm tế bào tự động bán tự động kèm máy in - Máy lắc ống máu - bàn sấy( đèn máy sấy tiêu bản) - Cóng( bể) nhuộm tiêu - Giá cắm tiêu - Kính hiển vi quang học - Máy lập công thức bạch cầu - Ống nghiệm có chất chống đông - Giá căm ống xét nghiệm - Lam kính, lam kéo - Bút chì đánh dấu, bút ghi sổ, bút bi vào sổ - bong cồn sát trùng, ga- rô - Kim lấy máu tĩnh mạch - Băng urgo - Dâu soi kính, gạc lau kính - Giấy xét nghiệm - găng tay - Máu chuẩn máy - Dung dịch chạy máy, rửa máy - cồn tuyệt đối cố định tiêu - Dung dịch Giemsa mẹ - Nước trung tính - Túi rác loại Người bệnh Có thể xét nghiệm thời điểm, tốt làm vào buổi sáng, chưa ăn chuẩn bị đặc biệt Phiếu xét nghiệm Giấy định xét nghiệm ( biểu mẫu số 30/BV01) có ghi đầy đủ thông tin người bênh: họ tên, năm sinh, địa chỉ, khoa phòng, số giường, chuẩn đoán, có đánh dấu thông số cần xét nghiệm, ghi rõ ngày tháng năm chữ ký bác sỹ y lệnh Nếu xét nghiệm cấp cứu giấy xét nghiệm có đánh dấu chéo ô cấp cứu III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Lấy bệnh phẩm - Nếu cần xét nghiệm y tá điều dưỡng đưa giấy định xét nghiệm - Lấy 2ml máu tĩnh mạch trực tiếp từ nguwoif bệnh ( theo quy định lấy máu tĩnh mạch) cho vào ống nghiệm chống đông, lắc nhận ống máu người bệnh điều dưỡng lấy sẵn ( mẫu máu phải đạt yêu cầu số lượng chất lượng, điều dưỡng phải ghi nhận vào sổ nhận bệnh phẩm) ống phải ghi đầy đủ thông tin phù hợp với giấy xét nghiệm Tiến hành kỹ thuật - Đánh số thứ tự lên giấy xét nghiệm ống máu người bênh ( số) - Vào số theo thứ tự ghi giấy xét nghiệm - Lắc ống máu ( máu lắc có) - Cho máu vào chạy máy (theo quy định chạy máu đếm tế bào) Số thứ tự máy số với ống máu, In ( ghim) kết vào giấy xét nghiệm - Kéo tiêu nhuộm Giemsa( theo quy trình kéo nhuộm tiêu bản) IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ - Đọc kính hiển vi đối chiếu tiêu với kết chạy máy - Nếu phù hợp, nhân viên xét nghiệm ký, ghi ngày tháng xét nghiệm trả - Nếu không phù hợp phải kiểm tra lại - Nếu khả phải báo cáo bác sỹ khoa người phụ trách V NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ LÝ - Nhầm mẫu bệnh phẩm - Máy chạy không nhầm kết - Mẫu bệnh phẩm lấy không đủ số lượng , bị đông, vỡ, hồng cầu Những trường hợp cần yêu cầu lấy lại mẫu bệnh phẩm - Thay đổi mật độ tế bào không giữ tính nguyên vẹn tế bào - Thời gian từ lấy máu khỏi thành mạch đến làm xét nghiệm tiếng XÉT NGHIỆM TỦY ĐỎ I, ĐỐI TƯỢNG Tủy xương quan tạo máu quan trọng nơi sinh máu chủ yếu người trưởng thành Tủy đồ xét nghiệm thăm dò chức tạo máu gợi ý nguyên nhân gây rối loạn tủy qua phân tích số lượng hình thái tế bào tủy xương II CHỈ ĐỊNH - Khi xét nghiệm tổng phân tích tế bào máu ngoại vi không bình thường mà không xác định nguyên nhân xét nghiệm khác - Người bệnh sốt không rõ nguyên nhân - Chuẩn đoán rối loạn sinh máu, rối loạn sinh tủy, rối loạn tăng sinh tủy - Chuẩn đoán rối loạn miễn dịch , đa u tủy xương - Kiểm tra tình trạng tủy người bệnh bị u lymphp ác tính u tổ chức khác - Theo dõi đáp ứng điều trị - Đánh giá tình trang tủy xương người bệnh cấy ghép tủy - Tình trạng sinh máu tủy bệnh lý khác, nhiễm trùng, bệnh hệ thống, ung thư di căn, sau điều trị tia xạ lao III CHỐNG CHỈ ĐỊNH Tương đối làm thủ thuật - Người bệnh hemophillia - Không làm thủ thuật vị trí có nhiễm trùng IV CHUẨN BỊ Người thực - 01 điều dưỡng lấy mãu người bệnh - 01 kỹ thuật viên khoa phụ làm tiêu bản, chạy máy, vào sổ kết Phương tiện – hóa chất - Máy đếm tế bào tự động bán tự động kèm máy in - Máy lắc ống máu - bàn sấy( đèn máy sấy tiêu bản) - Tủ ấm 37ºC - Cóng( bể) nhuộm tiêu - Giá cắm tiêu - Kính hiển vi quang học - Máy lập công thức bạch cầu - Ống nghiệm có chất chống đông - Giá căm ống xét nghiệm - Lam kính, lam kéo - Bút chì đánh dấu, bút ghi sổ, bút bi vào sổ - Dầu soi kính, gạc lau kính - Giấy xét nghiệm - găng tay - mũ, trang, quần áo bảo hộ lao động - Máu chuẩn máy - máy vi tính,máy in - Giấy mực in - dung dịch chạy máy, rửa máy - Hóa chất làm hồng cầu lưới ( Dung dịch xanh cresyl pha cồn) Nếu dung máy laser có sẵn hồng cầu lưới không cần pha dung dịch xanh cresyl cồn - Cồn tuyệt đối cố định tiêu - Dung dịch Giemsa mẹ - Nước trung tính Bệnh phẩm - Ống đựng máu tủy người bệnh - Tiêu kéo Phiếu xét nghiệm Giấy xét người bệnh có chữ ký bác sỹ y lệnh V CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH - Kiểm tra giấy xét nghiệm đối chiếu với bệnh phẩm - Kiểm tra bệnh phẩm có đảm bảo yêu cầu số lượng chất lượng không - kiểm tra tiêu có đúng, đủ đánh dấu tiêu người bệnh - Chạy máy đếm tế bào máu ngoại vi dịch tủy - làm tiêu hồng lưới máu tủy ( tương tự xét nghiệm huyết đồ) đọc kết hồng cầu lưới máu tuye, ghi kết vào giấy xét nghiệm.( Lưu ý sử dụng máy đếm tế bào có hồng cầu lưới làm bước - Nhuộm giemsa hai tiêu máu hai tiêu tủy, lại để tiêu lưu - Đọc kính hiểm vi quang học , đối chiếu kết chạy máy, ghi đầy đủ thông số cần thiết ý kiến nhận xét kết huyết đồ tủy đồ Có thể đưa kết luận thấy chắn yêu cầu làm thêm xét nghiệm, định hướng chuẩn đoán, bác sỹ ghi ngày tháng năm ký tên VI NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ - So sánh kết máy đưa với lam tủy lam máu, lưu ý số lượng hồng cầu lưới - Đặc điểm mật độ phân bố tế bào tủy xương - tỷ lệ dòng hồng cầu, bạch cầu, mẫu tiểu cầu - Đặc điểm hình thái dòng tế bào máu - Có hay không có: ALIP ( Abnomal localization immatune precursors) tế bào ung thư di căn, sợi xơ - Vào sổ lưu kết máy vi tính - Trả kết quả: xét nghiệm trả vòng 48h, trừ trường hợp đặc biệt( khó chuẩn đoán, càn hội chuẩn, làm thêm số xét nghiệm khác) VII NHỮNG SAI XÓT VÀ XỬ LÝ - Nhầm ống bệnh phẩm - Nhầm tiêu - Thiếu thừa tiêu - Không đủ số lượng, chất lượng bệnh phẩm - Máy chạy kết không nhầm kết - Kính hiển vi chất luượng - Trình độ bác sỹ tay nghề kỹ thuật viên yếu - Chọc không ổ tủy nên tủy nghèo kết giống máu ngoại vi - Tất khắc phục đào tạo nâng cao trình độ tay nghề thực hành kỹ thuật, trình độ đọc chuẩn đoán cho bác sỹ kỹ thuật viên, sử dụng trang thiết bị, máy móc đảm bảo chất lượng MÁU LÁNG ( PHƯƠNG PHÁP THỦ CÔNG) I.NGUYÊN LÝ Máu toàn phần sau lấy khỏi thể, chống đông pha loãng theo tỷ lệ định, cho vào ống thủy tinh có chia vạch, để đứng thăng sau thời gian máu lắng phân lớp, thành phần hữu hình lắng xuống dưới, lớp huyết tương Chiều cao cột huyết tương thể tốc độ lắng máu, Kết đánh giá sau 1h 2h Tốc độ máu lắng có giá trị theo dõi diễn biến tiên lượng bệnh Tốc độ lắng máu liên quan chặt chẽ với yếu tố huyết tương hồng cầu chênh lệch tỷ trọng hồng cầu huyết tương, kích thước hồng cầu, độ nhớt huyết tương, trạng thái ngưng tập hồng cầu Tốc độ máu lắng tăng phụ nữ có thai hay thời kỳ kinh nguyệt, người thiếu máu , thay đổi fibrinogen gammaglobulin , nhiễm trùng, lao, thấp khớp cấp, bệnh thận, gan, u lympho, u tủy Tốc độ lắng máu giảm bệnh đa hồng cầu, rối loạn protein, viên gan virut, dị ứng II CHUẨN BỊ Người thực - 01 điều dưỡng lấy mãu người bệnh - 01 kỹ thuật viên làm kỹ thuật Phương tiện – hóa chất - Dụng cụ lấy máu tĩnh mạch ( Bông cồn sát trung, ga-rô, bơm kim tiêm, băng urgo) - Ống xét nghiệm có sẵn chất chống đông - Giá cắm ống xét nghiệm - Nút cao su, bong gạc - Que(ống) máu lắng (pachekod westergreen) - Giá lên máu lắng - Ống nghiệm nhỏ - Đồng hồ hẹn - Dung dịch natri citrate 3,8% - Sổ ghi kết quả, bút đánh số, bút bi ghi kết Người bệnh Nên làm vào buổi sáng , người bệnh chưa ăn Phiếu xét nghiệm Giấy định xét nghiệm ( biểu mẫu số 30/BV01) có ghi đầy đủ thông tin người bênh: họ tên, năm sinh, địa chỉ, khoa phòng, số giường, chuẩn đoán, có đánh dấu thông số cần xét nghiệm, ghi rõ ngày tháng năm chữ ký bác sỹ y lệnh III CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH Lấy bệnh phẩm - Nếu cần xét nghiệm y tá điều dưỡng đưa giấy định xét nghiệm - Lấy 2ml máu tĩnh mạch trực tiếp từ người bệnh ( theo quy định lấy máu tĩnh mạch) cho vào ống nghiệm chống đông, lắc nhận ống máu người bệnh điều dưỡng lấy sẵn ( mẫu máu phải đạt yêu cầu số lượng chất lượng, điều dưỡng phải ghi nhận vào sổ nhận bệnh phẩm) ống phải ghi đầy đủ thông tin phù hợp với giấy xét nghiệm Tiến hành kỹ thuật - Đánh số thứ tự lên giấy xét nghiệm ống máu người bênh ( số) - Vào số theo thứ tự ghi giấy xét nghiệm - Lắc ống máu ( máu lắc có) - Tráng que máu lắng dung dịch natri citrate Lấy 0,4ml (pp Westergreen) đến vạch P(pp Pachenkob) lần đến vạch k ( pp Pachenkiob) máu người bệnh Rồi cho vào ống dã có dung dịch natri citrar Lắc nhẹ nhàng Mao dẫn máu pha loãng( tỷ lệ 1/5) vào que Westergreen đến vạch que pachenkob đến vạch K, lau máu bám quanh que máu lắng, Cắm que đứng thẳng lên giá - Vào sổ thứ tự ống máu người bệnh thứ tự que máu lắng giá cho tương ứng - Đặt chuông đồng hồ hẹ sau 1h – 2h IV NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ - Đọc kết sau 1h – 2h ghi vào sổ kết - Vào giấy xét nghiệm kết máu lắng - Ghi ngày tháng năm ký tên - Trả kết vòng 24h V NHỮNG SAI XÓT VÀ XỬ LÝ - bệnh phẩm lấy khồn đủ số lượng đông dây vỡ hồng cầu - Lấy máu để lâu làm xét nghiệm - Ống máu lắng bẩn, ướt sứt mẻ - Tỷ lệ pha loãng không xác - Lắc trộn màu không - Cho bọt khí ống máu lắng - Ống máu lắng không thẳng đứng - Đọc kết không thời gian không cách thức quy định ĐẾM HỒNG CẦU LƯỚI BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦ CÔNG NGUYÊN TẮC Hồng cầu lưới giai đoạn trung gian hồng cầu có nhân hồng cầu trưởng thành, đặc trưng ARN lại bào tương Người ta nhận biết đặc điểm nhờ thuốc nhuộm làm kết tủa ARN hồng cầu DỤNG CỤ, HÓA CHẤT - Máu tĩnh mạch chống đông ADTA khô - Ống nghiệm khô có nút - Lam kính, lam kéo khô - Pipette Pasteur - Xanh cresyl baoc hòa - Tủ ấm - Kính hiển vi quang học KỸ THUẬT - Cho vào ống nghiệm giọt máu xét nghiệm giọt xanh cresyl bão hòa, lắc đều, đậy nút, ủ 37ºC 20p - Lắc đều, làm tiêu máu đàn, để khô tự nhiên - Đọc kết kính hiển vii với vật kính đầu Tính tỷ lệ phần trăm hồng cầu lưới 1000 hồng cầu trưởng thành NGUYÊN NHÂN SAI SÓT THƯỜNG GẶP - Lắc không - Thuốc nhuộm chất lượng cặn - Đọc nhầm thể vùi bạch cầu XÉT NGHIỆM TÌM TẾ BÀO HAGRAVES NGUYÊN LÝ Kháng thể tự nhiên huyết kết hợp với kháng nguyên tương ứng màng nhân tế bào, tác động bổ thể, làm tổn thương màng nhân, tạo thành khối nhất, Bạch cầu đoạn trung tính thực bào phức hợp tạo tế bào Hagravves DỤNG CỤ, HÓA CHẤT - Bơm tiêm 3ml - Ống nghiệm 5ml - Mây lắc ống nghiệm - Bi nhựa - Bộ dụng cụ làm tiêu máu đàn - Bộ dụng cụ hóa chất nhuộm Gieemsa QUY TRÌNH KỸ THUẬT - 3ml máu tĩnh mạch chống đông Heparin - Để lắng 60p - Bơm nhẹ nhàng nửa phần huyết tương lắng ống nghiệm khô sạch( ống 1) Phần lắng khối hồng cầu huyết tương bơm ống nghiệm khác trộn chia thành hai phần: nửa để nguyên( ống 2) nửa đem lắc bi 2500v/p 15 phút - Hòa lẫn ống 1, ống 2, ống 3, lắc trộn nhẹ nhàng , ủ 37ºC 60p 4.KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM TẾ BÀO DỊCH NÃO TỦY I.NGUYÊN LÝ ,Bình thường dịch não tủy suốt, có tế bào, Số lượng thành phần tế bào dịch não tủy tăng lên số bệnh, Khi xét nghiệm tế bào dịch não tủy có giá trị chuẩn đoán DỤNG CỤ, HÓA CHẤT - kính hiển vi quang học - Lam kính khô, - Dung dịch Giemsa QUY TRÌNH KỸ THUẬT Lắc nhẹ bệnh phẩm, cho vào ống nghiệm mối ống 1-2ml - Đếm số lượng bạch cầu, Bằng máy đếm tế bào tự động - Phân loại bạch cầu : ly tâm ống nghiệm thứ với tốc độ 200 vòng 30p, đổ nước trên, lấy cặn làm tiêu giọt dày, đường kính khoảng 2cm, Để khô, cố định cồn tuyệt đối, để khô nhuộm gieemsa 1/12 10p, rửa nước thường( ý không dội trực tiếp vào phần bệnh phấn tránh bị bong) Để khô đọc kết vật kính dầu, đếm 100 tế bào để phân loại NHẬN XÉT KẾT QUẢ - Bình thường dịch não tủy có tế bào - Tăng : có -10 bạch cầu/1ml - Tăng vừa: 10 bạch cầu/1ml - Tăng cao: 100 bạch cầu/1ml CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG - Nhằm bệnh phẩm, nhầm giấy xét nghiệm - Nước não tủy sau chọc không gửi xét nghiệm - Không lắc bệnh phẩm trước đếm số lượng - Làm tiêu không kỹ thuật: dày mỏng , rửa mạnh làm bong bệnh phẩm, nhuộm đậm nhạt nên không nhận định tế bào 10