B GIO DC V O TO B Y T TRNG I HC Y H NI PHM TH XUN Đánh giá đứt gãy ADN tinh trùng nam giới cặp vợ chồng sảy thai, thai lu KHểA LUN TT NGHIP BC S A KHOA KHểA 2010 - 2016 Ngi hng dn khoa hc: PGS.TS TRN C PHN H NI - 2016 LI CM N Vi tm lũng kớnh trng v bit n sõu sc, tụi xin chõn thnh cm n B mụn Y sinh hc - Di truyn, trng i hc Y H Ni, PGS TS Trn c Phn ó trc tip hng dn tn tỡnh, luụn quan tõm, ng viờn chia s nhng khú khn giỳp tụi quỏ trỡnh nghiờn cu v hc hon thnh khúa lun tt nghip ny Tụi xin gi li cm n sõu sc ti TS on Th Kim Phng, B mụn Y sinh hc - Di truyn trng i hc Y H Ni ó tn tõm, nhit tỡnh dy bo v giỳp tụi rt nhiu quỏ trỡnh hc v nghiờn cu ti Tụi xin chõn thnh cm n thy cụ, cỏc anh ch k thut viờn B mụn Y sinh hc - Di truyn trng i hc Y H Ni ó giỳp v ch bo tn tỡnh cho tụi thi gian hc v nghiờn cu ti b mụn Tụi xin trõn trng cm n Ban giỏm hiu, Phũng o to, Th vin v cỏc phũng ban trng i hc Y H Ni ó giỳp to iu kin tt nht cho tụi hon thnh khúa lun ny Cui cựng tụi xin cm n cỏc thy cụ ó dỡu dt tụi tng bc nm hc ti ngụi trng ny Tụi xin chõn thnh cm n gia ỡnh v bn bố luụn bờn cnh ng h lm ch da vng chc v chia s vi tụi nhng khú khn cuc sng v hc H Ni ngy 20 thỏng nm 2016 Phm Th Xuõn MC LC H NI - 2016 .1 LI CM N Vi tm lũng kớnh trng v bit n sõu sc, tụi xin chõn thnh cm n B mụn Y sinh hc - Di truyn, trng i hc Y H Ni, PGS TS Trn c Phn ó trc tip hng dn tn tỡnh, luụn quan tõm, ng viờn chia s nhng khú khn giỳp tụi quỏ trỡnh nghiờn cu v hc hon thnh khúa lun tt nghip ny Tụi xin gi li cm n sõu sc ti TS on Th Kim Phng, B mụn Y sinh hc - Di truyn trng i hc Y H Ni ó tn tõm, nhit tỡnh dy bo v giỳp tụi rt nhiu quỏ trỡnh hc v nghiờn cu ti .2 Tụi xin chõn thnh cm n thy cụ, cỏc anh ch k thut viờn B mụn Y sinh hc - Di truyn trng i hc Y H Ni ó giỳp v ch bo tn tỡnh cho tụi thi gian hc v nghiờn cu ti b mụn Tụi xin trõn trng cm n Ban giỏm hiu, Phũng o to, Th vin v cỏc phũng ban trng i hc Y H Ni ó giỳp to iu kin tt nht cho tụi hon thnh khúa lun ny Cui cựng tụi xin cm n cỏc thy cụ ó dỡu dt tụi tng bc nm hc ti ngụi trng ny Tụi xin chõn thnh cm n gia ỡnh v bn bố luụn bờn cnh ng h lm ch da vng chc v chia s vi tụi nhng khú khn cuc sng v hc H Ni ngy 20 thỏng nm 2016 Phm Th Xuõn .2 MC LC T VN Chng TNG QUAN TI LIU .3 1.1 Sy thai, thai lu 1.1.1 Khỏi nim v sy thai, thai lu 1.1.2 Nguyờn nhõn Nguyờn nhõn t phớa 1.1.3 Tỡnh hỡnh sy thai, thai lu 1.2 t góy ADN ca tinh trựng 1.2.1 Cu trỳc tinh trựng 1.2.2 Nguyờn nhõn v c ch t góy ADN ca tinh trựng 1.2.3 nh hng ca t góy ADN ca tinh trựng .10 1.3 Cỏc phng phỏp ỏnh giỏ t góy ADN tinh trựng 11 1.3.1 Phng phỏp COMET 11 1.3.2 Phng phỏp kho sỏt cu trỳc chromatin tinh trựng (SCSA) 12 1.3.3 Phng phỏp ỏnh du t góy ADN bng cỏc dUTP (TUNEL) 12 1.3.4 Phng phỏp kho sỏt s phõn tỏn cht nhim sc ca tinh trựng (Halosperm test).13 Chng 15 I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU .15 2.1 i tng nghiờn cu .15 2.2 a im nghiờn cu 15 2.3 Thi gian nghiờn cu 15 2.4 Phng phỏp nghiờn cu 15 2.4.1 Thit k nghiờn cu 15 2.4.2 C mu v cỏch chn c mu 15 2.4.3 Cỏc bin s nghiờn cu 16 2.4.4 Cụng c thu thp thụng tin 16 2.5 Qui trỡnh thc hin Halosperm test 17 2.6 Cỏch ỏnh giỏ kt qu .18 2.7 o c nghiờn cu 19 CHNG 20 KT QU NGHIấN CU 20 3.1 T l t góy ADN tinh trựng 20 3.1.1 T l t góy ADN tinh trựng chung cỏc trng hp sy thai, thai lu .20 3.1.2 T l t góy ADN tinh trựng riờng cỏc nhúm sy thai hoc thai lu 21 3.1.3 T l t góy ADN tinh trựng vi s ln sy thai 22 3.1.4 T l t góy ADN tinh trựng v s ln thai lu 23 3.1.5 T l t góy ADN tinh trựng v tui ca bnh nhõn 24 3.2 Kt qu nghiờn cu v mc t góy ADN 25 3.2.1 Mc t góy ADN tinh trựng v s ln sy thai 25 Nhn xột: .25 3.2.2 Mc t góy ADN tinh trựng v s ln thai lu 26 Chng 27 BN LUN 27 4.1 ỏnh giỏ t l t góy ADN tinh trựng bnh nhõn nam 27 4.1.1 T l t góy ADN tinh trựng 27 4.1.2 T l t góy ADN tinh trựng cỏc trng hp sy thai 29 4.1.3 T l t góy ADN tinh trựng v s ln sy thai 29 4.1.4 T l t góy ADN tinh trựng v thai lu 30 4.1.5 T l t góy ADN tinh trựng v s ln thai lu 31 4.1.6 T l t góy ADN tinh trựng theo tui 32 4.2 Mc t góy ADN tinh trựng cỏc trng hp sy thai, thai lu 33 KT LUN 36 - T l cỏc loi QNS nh, khụng cú QNS v QNS thoỏi húa nhúm sy thai ln v ln tng ng 36 - T l cỏc loi QNS nh, khụng cú QNS v QNS thoỏi húa nhúm thai lu ln v ln tng ng 36 KIN NGH 37 TI LIU THAM KHO DANH MC BIU Biu 3.1 T l t góy ADN tinh trựng cỏc trng hp sy thai, thai lu 20 Biu 3.2 T l t góy ADN tinh trựng riờng tng nhúm sy thai hoc thai lu 21 Biu 3.3 T l t góy ADN tinh trựng vi s ln sy thai 22 Biu 3.4 T l t góy ADN tinh trựng v s ln thai lu 23 Biu 3.5 T l t góy ADN tinh trựng v tui bnh nhõn 24 T VN Trong mi gia ỡnh cỏi luụn l ti sn vụ giỏ trỡ hnh phỳc gia ỡnh v ton xó hi Nhng ngy sy thai, thai lu cng ngy cng ph bin, khụng cũn l xa l v nhn c rt nhiu s quan tõm mi ngi Sy thai l tỡnh trng thai cht t cung trc tun th 22 ca thai kỡ, c tớnh c thai ph thỡ cú mt ngi sy thai Thai cht lu l tỡnh trng thai b cht m cũn lu li t cung quỏ 48 gi (theo Vit Nam), theo WHO thỡ thai cht lu l tt c cỏc trng hp thai cht thi kỡ thai nghộn trc s thai ngoi t cung Sy thai, thai cht lu gõy nờn nhng hu qu nng n cho sc khe ngi m cng nh tỡnh trng ri lon ụng mỏu, nhim khun nu khụng c x trớ kp thi ỳng n Nú cũn tỏc ng sõu sc n tõm lý ca cỏc cp v chng c bit cỏc trng hp him mun Sy thai, thai lu hay cỏc bt thng khỏc thai khụng ch cú nguyờn nhõn t ngi m m cú th nguyờn nhõn t phớa ngi nam gii Vic tỡm nguyờn nhõn gõy ri lon vt cht di truyn ca tinh trựng ngy cng khụng quỏ khú khn, nú ó giỳp ớch rt nhiu cho vic iu tr vụ sinh, iu tr cỏc bt thng phụi thai t góy ADN ca tinh trựng l mt nhng ri lon vt cht di truyn dn ti gim chc nng v cht lng ca tinh trựng ú nú l nguyờn nhõn gim kh nng th tinh hoc thai thai kộm phỏt trin, d tt bm sinh, thai cht lu hay nguy c sy thai cao S t góy ADN ca tinh trựng cng nh hng n t l th tinh v cht lng phụi thai, lm gim t l thnh cụng ca cỏc bin phỏp h tr sinh sn Cõu hi t l: mc t góy ADN tinh trựng cú liờn quan gỡ n vic sy thai, thai lu tr li cõu hi trờn, chỳng tụi tin hnh nghiờn cu ti ỏnh giỏ s t góy ADN ca tinh trựng nam gii cỏc cp v chng sy thai, thai lu nhm mc tiờu sau: Xỏc nh t l t góy ADN tinh trựng cỏc trng hp sy thai, thai lu ỏnh giỏ mc t góy ADN ca tinh trựng cỏc trng hp sy thai, thai lu Chng TNG QUAN TI LIU 1.1 Sy thai, thai lu 1.1.1 Khỏi nim v sy thai, thai lu - Thai cht lu: cỏc khỏi nim v thai cht lu cha thng nht gia cỏc nc + Vit Nam: Thai cht lu l tt c cỏc trng hp thai b cht m cũn lu li t cung trờn 48 gi + Theo WHO: thai cht lu bao gm tt c cỏc trng hp thai cht lu quỏ trỡnh thai nghộn trc s thai ngoi + Chun oỏn thai cht lu da vo hot ng ca tim thai Thut ng trng trng hay thai khụng cú phụi dựng mụ t tỳi thai m khụng thy cu trỳc ca thai Chun oỏn thai lu d dng tui thai tng i ln Tuy nhiờn giai on sm ca thai kỡ, phụi thai rt nh nờn ụi chun oỏn thai lu rt khú Theo American College of Obstetricians and Gynaecologist, 2009 giai on sm ca thai kỡ, chun oỏn thai lu : Khụng cú hot ng tim thai chiu di u mụng CRL >6mm Khụng thy hỡnh nh phụi thai hoc tỳi noón hong ng kớnh tỳi thai (GS) >20mm Trờn thc t chun oỏn thai ngng tin trin hoc trng trng hai ln siờu õm hai thi im cỏch tun khụng thy phụi thai v tim thai - Sy thai l hin tng thai b tng bung t cung trc tui thai cú th sng c, tui ú c tớnh t 22 tun vụ kinh hay trng lng thai < 500 gram Cú loi sy thai: + Sy thai sm l sy thai trc 12 tun loi ny chim 15% + Sy thai mun l sy thai tớnh t tun 12 tr i v trc tun 28 Ngy khỏi nim sy thai cũn ang c xem xột li vỡ bi tui thai sng v phỏt trin ph thuc vo kh nng nuụi dng thai thai i 1.1.2 Nguyờn nhõn Nguyờn nhõn t phớa - Ri lon NST: l nguyờn nhõn ch yu ca thai di thỏng tui b cht Ri lon NST cú th l di truyn t b, m hoc cú th t bin quỏ trỡnh to noón, to tinh trựng, th tinh v phỏt trin phụi T l ri lon NST tng lờn rừ rng theo tui m, c bit l m trờn 40 tui Trc tui m l phng phỏp sng lc u tiờn phỏt hin cỏc thai cú bt thng NST Theo nghiờn cu ca Ronald thỡ 25% thai cht lu cú bt thng NST ú ph bin nht l Turner 45,X (23%), trisomy 21 (23%) Theo tỏc gi Bauld R., nghiờn cu 153 trng hp thai lu thỡ cú 7,2% thai lu cú bt thng NST, t l bt thng tng theo tui m Tỏc gi thy rng nhúm tui m di 35 tui thỡ t l bt thng NST thp (5,1%- 7,8%), ú t l ny nhúm tui m trờn 35 cao hn hn (11%), c bit nhng b m trờn 40 tui thỡ t l thai lu cú bt thng NST cao gp nhiu ln (40%) - Thai d dng: nóo ỳng thy, vụ s, phự rau thai Thai d dng cht lu chim khong 8,9% thai cht lu t cung - Bt ng nhúm mỏu giu m v yu t Rh: Nu m cú nhúm Rh , ngi b cú nhúm Rh+ mang thai ln u, thai nhi cú Rh+ c th m s phỏt sinh khỏng th khỏng Rh gõy hin tng tng k gia m v Hu qu gõy nờn thai cht lu tn sut cao nhng ln mang thai tip theo vỡ mc khỏng th chng Rh ca m cao dn - Thai gi thỏng, a thai Nguyờn nhõn t phớa m , , 29 4.1.2 T l t góy ADN tinh trựng cỏc trng hp sy thai t góy ADN tinh trựng cú l mt nguyờn nhõn dn n sy thai ngi v cỏc trng hp sy thai,t l t góy ADN tinh trựng cao nht nhúm DFI >30% chim t l l 42% v tng ng vi nhúm DFI 15-30% l 40,6% v thp nht nhúm DFI 2 ln nhúm ta thy cú s khỏc bit rừ rt v t l t góy ADN tinh trựng Khi so sỏnh nhúm ta thy t l t góy ADN tinh trựng DFI 2 ln khụng cú trng hp no cú DFI2 ln 100% cỏc trng hp bnh nhõn thuc nhúm t góy trung bỡnh v cao T l t góy ADN tinh trựng bt thng cú s khỏc bit rừ rt cỏc trng hp sy thai ln so vi sy thai ln v nhúm sy thai ln vi cỏc trng hp sy thai >2 ln Nh vy t l t góy ADN tinh trựng liờn quan rừ rt n s ln sy thai cỏc trng hp sy thai ln cú th vic sy thai,thai lu ngoi cỏc yu t ca v hay s t góy ADN tinh trựng cũn chu tỏc ng ca mt 30 s yu t khỏc nh mụi trng lm vic cú phúng x, th thai cỏc trng hp ngi chng b m hay ung ru lm cht lng tinh trựng ca chng kộm nờn cú t l cao cỏc trng hp cú sy thai vi DFI 15% Mt nghiờn cu khỏc ca Brahem S ó ch rng so sỏnh t l t góy ADN tinh trựng ca 31 bnh nhõn m v chng cú tin s sy thai v 20 ngi n ụng cú kh nng sinh sn bỡnh thng thy t l t góy ADN tinh trựng tng lờn ỏng k nhúm cú tin s sy thai tỏi phỏt l 32,22% so vi nhúm chng l 10,2% Tng t nh th mt nghiờn cu ca Wang Y.J lm xột nghim tinh dch 85 ngi n ụng v cú tin s sy thai liờn tip vi 20 ngi chng cú tin s thai sn ca v bỡnh thng ó a kt lun rng nhúm nhng ngi chng cú v cú tin s sy thai liờn tip DFI trung bỡnh (34,9914,62%) khỏc bit mt cỏch rừ rt vi nhng ngi nam giwos cú v cú tin s thai sn bỡnh thng (10,084,8%) 4.1.4 T l t góy ADN tinh trựng v thai lu Trong 152 trng hp cú tin s sy thai,thai lu cú 109 trng hp cú tin su thai lu ú DFI30% cú 43 trng hp tng ng vi 39,4% 31 Cng ging nh trng hp sy thai nhúm thai lu t l t góy ADN tinh trựng trung ch yu vo nhúm t góy trung bỡnh v cao nờn cú th kt lun t gy ADN tinh trựng l mt nhng nguyờn nhõn gõy thai cht lu Theo nghiờn cu ca Mehdi Benchaib M.B nguy c sy thai tng gp ln cỏc trng hp sy thai, thai lu c th tinh nhõn to IVF hoc ICSI Theo nghiờn cu ca Zini A v nguy c sy thai, thai lu t nhiờn sau tin hnh IVF v ICSI nhúm tỏc gi nhn thy rng t l cao t góy ADN tinh trựng l yu t d oỏn sy thai, thai lu Nh vy t góy ADN tinh trựng khụng nhng l nguyờn nhõn gõy thai lu cỏc trng hp th thai t nhiờn m cỏc phng phỏp h tr sinh sn 4.1.5 T l t góy ADN tinh trựng v s ln thai lu T l t góy ADN tinh trựng khụng nh hng n s ln thai lu Trong 152 bnh nhõn nghiờn cu cú 109 trng hp cú tin s thai lu ú 58 bnh nhõn thai lu ln, 32 trng hp thai lu ln v 19 trng hp thai lu >2 ln nhng khụng cú s khỏc bit rừ rt gia t l t góy ADN tinh trựng gia nhúm bnh nhõn vi kt qu c th nh sau: - nhúm thai lu ln DFI 30% ln lt l 17,3%, 37,9% v 44,8% - nhúm thai lu ln DFI 30% ln lt l 18,8%, 50% v 31,2% - nhúm thai lu >2 ln DFI 30% ln lt l 26,4%, 36,8% v 36,8% Theo nghiờn cu ca chỳng tụi thỡ t l t góy ADN tinh trựng khụng cú nh hng rừ rt lờn s ln thai lu ca bnh nhõn 32 4.1.6 T l t góy ADN tinh trựng theo tui Tng s 152 nam gii cỏc cp v chng cú tin s sy thai, thai lu c nghiờn cu ú thp nht l 25 tui v cao nht l 52 tui ú nhúm cú tui 25-35 l cao nht chim 82 trng hp v nhúm cú tui>45 l thp nht cú 29 trng hp Nh vy tt c cỏc trng hp nghiờn cu u thuc nhúm tui trung niờn v niờn m ú nhúm niờn l chim ch yu DFI trung bỡnh ca c nhúm ln lt l: nhúm bnh nhõn 25-35 tui DFI trung bỡnh l 28,3 17,4% nhúm bờnh nhõn t 35-45 tui DFI trung bỡnh l 30,7 19,1% v nhúm bnh nhõn >45 tui DFI trung bỡnh l 34,8 17,8% Ta thy DFI trung bỡnh ca cỏc bnh nhõn tng rừ rt theo tng nhúm tui Khụng nhng th ta cú t l DFI nhúm cng cú s khỏc bit Trong nhúm bnh nhõn 25-35 tui, 35-45 tui v >45 tui thỡ t l % nhng bnh nhõn cú DFI 30% tng dn theo nhúm Nh vy ta cú th kt lun t l t góy ADN tinh trựng tng dn theo tui ca bnh nhõn Kt qu nghiờn cu ca chỳng tụi phự hp vi kt qu nghiờn cu ca Moskovtsev Theo kt qu nghiờn cu ca Moskovtsev so vi nhúm tui 45 cú t l tinh trựng b t góy DFI tng gp ụi (15,2% so vi 32,0%) T l DFI ca cỏc nhúm tui 30-35, 35-40 v 40-45 ln lt l 19,4%, 20,1% v 26,4% Trong mt nghiờn cu khỏc trờn 132 lm ICSI vi tui cha >40 tui ó thy s phõn mnh ca ADN tinh trựng nh hng ỏng k n s phỏt trin phụi sau cy 33 Nh vy t l t góy ADN tinh trựng ph thuc vo cỏ th tng bnh nhõn v cng chu nhng tỏc ng t bờn ngoi nh hỳt thuc lỏ, tia phúng x hay n ung cú cht c hi Nú c tớch ly v tng dn lờn theo tui õy l mt yu t quan trng t sc khe sinh sn Nhiu tỏc gi a khuyn cỏo ngi nam gii nờn cú tui trc 50 nhng theo nghiờn cu ca chỳng tụi t l t góy ADN tinh trựng tng lờn rừ rt tui >45 nờn t sc khe sinh sn nhng ngi nam gii trng thnh nờn cú tui