Đang tải... (xem toàn văn)
Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl Tóm tắt luận án tiến sĩ hóa học nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học cây dấu dầu lá nhẵn tetradium glabrifolium (benth ) hartl
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN HĨA HỌC LÊ THỊ DUN Cơng trình hồn thành tại: Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Lê Lan Anh TS Lờ c Liờm NGHIÊN CứU XáC ĐịNH MộT Số DạNG SELEN TRONG HảI SảN BằNG PHƯƠNG PHáP VON-AMPE HòA TAN Phản biện 1: GS.TS Hồ Viết Quý Phản biện 2: PGS.TS Huỳnh Văn Trung Chun ngành : Hóa Phân tích Mã số Phản biện 3: PGS.TS Tạ Thị Thảo : 62.44.29.01 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Viện họp Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Vào hồi ngày 21 tháng 12 năm 2012 Có thể tìm hiểu luận án tại: HÀ NỘI - 2012 CÁC CÔNG TRÌNH CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN Lê Thị Duyên, Lê Đức Liêm, Nguyễn Thị Thu Hiền (2010), “Tối ưu hóa điều kiện xác định Se(IV) phương pháp von-ampe hòa tan catot xung vi phân điện cực giọt thủy ngân treo”, Tuyển tập Hội nghị khoa học lần thứ 19 trường Đại học Mỏ-Địa Chất, Hà Nội Nguyễn Viết Hùng, Lê Thị Duyên, Vũ Thị Thanh Hồng, Vũ Đức Lợi Lê Lan Anh (2010), “Nghiên cứu quy trình phân tích hàm lượng Asen Selen hải sản”, Tạp chí Phân tích Hóa, Lý Sinh học, Tập 15, số 3, 228-234 Trần Thị Hồng Vân, Nguyễn Viết Hùng, Lê Đức Liêm Lê Thị Duyên (2010), “Xác định hàm lượng vết Selen số hải sản phương pháp Von-Ampe hịa tan catot”, Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Sư Phạm Hà Nội, Vol 55, số 3, 54-63 Lê Lan Anh, Lê Thị Duyên, Lê Đức Liêm Nguyễn Viết Hùng (2011), “Nghiên cứu xác định số dạng Selen: Se6+, Se4+, Selencystin phương pháp Von-Ampe hịa tan”, Tạp chí Phân tích Hóa, Lý Sinh học, Tập 16, số 4, 13-17 Lê Thị Duyên, Lê Lan Anh Lê Đức Liêm (2012), “Định lượng số dạng selen hải sản phương pháp Von-Ampe hịa tan”, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ, Viện Khoa học & Công nghệ Việt Nam, Tập 50(3), 317-325 Lê Thị Duyên, Lê Lan Anh Lê Đức Liêm (2012), “Nghiên cứu phương pháp Von-Ampe hòa tan phân tích dạng selen hữu dimetyl diselenua”, Tạp chí Khoa học Công nghệ, Viện Khoa học & Công nghệ Việt Nam, Tập 50 (Giấy nhận đăng) I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Mở đầu Vai trò quan trọng vết nguyên tố khoa học, công nghệ đời sống biết đến từ lâu Chính vậy, nhiều phương pháp phân tích hàm lượng vết nguyên tố đối tượng khác nghiên cứu, nhiều phương pháp tiêu chuẩn hóa xây dựng Nhưng để nghiên cứu giải thích cách khoa học xác độ độc độc tính; q trình sinh hóa, sinh địa hóa; q trình chuyển hóa tích lũy sinh học … vết nguyên tố, việc xác định hàm lượng tổng vết nguyên tố chưa đủ, mà phải dạng tồn chúng đối tượng nghiên cứu Với độ nhạy, độ xác tính chọn lọc cao phân tích trực tiếp dạng tồn vết nguyên tố, phương pháp Von-Ampe hịa tan trở thành phương pháp phân tích đại lựa chọn để nghiên cứu phân tích trực tiếp dạng nguyên tố mẫu sinh-y-dược học, lương thực thực phẩm, môi trường Mặt khác, selen (Se) nguyên tố hai mặt đời sống, vừa đóng vai trị ngun tố vi lượng vừa độc tố mơi trường có độ độc cao Khoảng nồng độ Se phép có mặt thể người mà không gây độc hại hẹp tùy thuộc vào dạng tồn Se Xuất phát từ lý trên, chọn đề tài luận án “Nghiên cứu xác định số dạng selen hải sản phương pháp Von-Ampe hòa tan” Mục tiêu luận án Nghiên cứu cách hệ thống, xác lập điều kiện từ lấy, bảo quản, xử lý, chiết tách, làm giàu đến ghi đo xác định xác tin cậy số dạng selen mẫu hải sản Nhiệm vụ luận án Nghiên cứu tính chất điện hóa, xác lập điều kiện thơng số máy tối ưu xác định dạng selenit (Se(IV)), selencystin (Se-Cyst), dimetyl diselenua (DMDSe) phương pháp Von-Ampe hòa tan điện cực giọt treo thủy ngân (HMDE) Nghiên cứu điều kiện quy trình lấy, bảo quản xử lý mẫu đảm bảo nguyên trạng toàn vẹn dạng selen mẫu hải sản Nghiên cứu điều kiện tối ưu, chiết tách làm giàu, ghi đo xây dựng quy trình xác định xác tin cậy Se tổng, dạng Se vô Se hữu mẫu hải sản phương pháp Von-Ampe hòa tan sử dụng điện cực HMDE làm điện cực làm việc Đánh giá phương pháp, quy trình áp dụng phân tích Se tổng dạng Se mẫu thật Điểm luận án Đã nghiên cứu thiết lập điều kiện tối ưu, lần Việt Nam, xây dựng thành công phương pháp xác định riêng rẽ dạng Se(IV), Se-Cyst, DMDSe đồng thời xác tin cậy hai dạng Se(IV) Se-Cyst phép ghi đo DPCSV Đã nghiên cứu thành công kỹ thuật chiết tách tối ưu, toàn vẹn định lượng dạng selen từ mẫu hải sản Đã nghiên cứu thiết lập quy trình hồn chỉnh từ lấy, bảo quản, xử lý mẫu, chiết tách xác định ba dạng selen (Se(IV), Se-Cyst, DMDSe) mẫu cá Khoai, tôm Sú Mực phương pháp DPCSV Cấu trúc luận án Luận án gồm 132 trang: Mở đầu (2 trang), nội dung 116 trang, phân bố thành chương: Chương I - Tổng quan (22 trang), chương II - Thực nghiệm (7 trang), chương III - Kết thảo luận (87 trang), kết luận (2 trang), 106 tài liệu tham khảo (12 trang); danh mục công trình liên quan đến luận án (1 trang) II NỘI DUNG LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần mở đầu đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, mục tiêu, nhiệm vụ nghiên cứu luận án, đóng góp luận án phương pháp nghiên cứu CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN Phần tổng quan bao gồm vấn đề: 1.1 Dạng selen tự nhiên tác động chúng sức khỏe người 1.1.1 Dạng selen tự nhiên 1.1.2 Tác động selen sức khỏe người 1.2 Tính chất điện hóa selen 1.3 Các phương pháp phân tích selen 1.3.1 Các phương pháp phân tích tổng selen 1.3.2 Các phương pháp phân tích dạng selen 1.4 Phương pháp Von-Ampe hịa tan phân tích dạng selen 1.4.1 Giới thiệu chung phương pháp Von-Ampe hòa tan 1.4.2 Ứng dụng phương pháp Von-Ampe hịa tan phân tích dạng selen 1.5 Tình hình nghiên cứu dạng selen thủy, hải sản giới 1.6 Những nghiên cứu dạng vết nguyên tố Việt Nam CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Thiết bị, dụng cụ hóa chất 2.1.1 Thiết bị, dụng cụ 2.1.2 Hóa chất 2.2 Nội dung thực nghiệm 2.2.1 Pha dung dịch chuẩn 2.2.2 Chuẩn bị mẫu phân tích 2.2.3 Các bước nghiên cứu để xây dựng quy trình phân tích phương pháp Von-Ampe hòa tan 2.2.4 Xử lý số liệu thực nghiệm CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Trong chương chúng tơi trình bày nội dung chính: 3.1 NGHIÊN CỨU TÍNH CHẤT ĐIỆN HĨA CỦA SELEN TRÊN HMDE Trong phần này, chúng tơi tiến hành nghiên cứu đặc tính Von-Ampe vòng dạng selen: Se(IV), Se-Cyst DMDSe Hình 3.2 Đường CV 700ppb Se-Cyst HCl 0,1M Khoảng quét (+0,1 ÷ -0,8)V, tốc độ quét 50mV/s Hình 3.1 Đường CV 200ppb Se(IV) HCl 0,1M Khoảng quét (+0,1 ÷ -1,0)V, tốc độ quét 50mV/s Hình 3.3 Đường CV 50ppb DMDSe HCl 0,06M + LiClO4 0,2M + CH2Cl2/C2H5OH (1/1) Khoảng quét (+0,1 ÷ –1,0)V, tốc độ quét 50mV/s Từ kết nghiên cứu thu cho thấy, dạng Se(IV), Se-Cyst, DMDSe có hoạt tính điện hóa Trong chiều quét thứ nhất, đường CV Se(IV) xuất pic khử -0,481V, Se-Cyst xuất -0,374V DMDSe -0,288V Nhưng chiều ngược lại không xuất pic ơxy hóa nào, chứng tỏ tất q trình q trình ơxy hóa khử bất thuận nghịch 3.2 NGHIÊN CỨU LỰA CHỌN CÁC ĐIỀU KIỆN GHI ĐO TỐI ƯU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ DẠNG SELEN Trong phần này, tiến hành nghiên cứu điều kiện ghi đo tối ưu như: điện li, nồng độ điện li, thông số máy (thế điện phân làm giàu, thời gian điện phân làm giàu, tốc độ quét thế, biên độ xung, thời gian đặt xung, tốc độ khuấy trộn dung dịch, kích thước giọt thủy ngân, thời gian sục khí N2, thời gian cân bằng) 3.2.1 Se(IV) Se-Cyst pha nước * Nghiên cứu lựa chọn điều kiện ghi đo tối ưu xác định riêng hai dạng Se(IV) Se-Cyst Các kết nghiên cứu thu được trình bày bảng 3.1 Bảng 3.1: Điều kiện tối ưu phân tích Se(IV) Se-Cyst Se(IV) Se-Cyst Các thông số ghi đo 2ppb 25ppb Điện cực làm việc HMDE HMDE Chế độ ghi đo DP DP Kích thước giọt thủy ngân 6 Tốc độ khuấy (vịng/phút) 2000 2000 Thời gian sục khí N2 300s 300s 0,05M÷1M 0,1M÷1M Nền HCl Sử dụng:0,1M Sử dụng: 0,1M -0,2÷-0,3V -0,1÷-0,2V Thế điện phân làm giàu Sử dụng: -0,3V Sử dụng: -0,2V 90s÷150s 90s÷150s Thời gian điện phân làm giàu Sử dụng: 90s Sử dụng: 90s Thời gian cân 15s 15s Biên độ xung 0,05V 0,05V Thời gian đặt xung 0,02s 0,02s Tốc độ quét 0,02V/s 0,02V/s Khoảng quét (-0,2 ÷ -0,7)V (-0,2 ÷ -0,7)V * Nghiên cứu khả xác định đồng thời Se(IV) Se-Cyst mẫu a Điều kiện tối ưu để xác định đồng thời hai dạng Se(IV) Se-Cyst Trên sở điều kiện tối ưu xác định riêng Se(IV) Se-Cyst (bảng 3.1), từ cho thấy: xác định đồng thời hai dạng Se(IV) Se-Cyst phép ghi đo điều kiện đưa bảng 3.2 Bảng 3.2: Các điều kiện tối ưu xác định đồng thời hai dạng Se(IV) Se-Cyst Thời gian điện HMDE 90s÷150s Điện cực làm việc phân làm giàu DP 15s Chế độ ghi đo Thời gian cân 0,05V Biên độ xung Kích thước giọt thủy ngân 2000 0,02s Tốc độ khuấy (vòng/phút) Thời gian đặt xung 300s 0,02V/s Thời gian sục khí N2 Tốc độ quét 0,1M÷1M Khoảng quét (-0,2÷-0,7)V Nền HCl -0,2V Thế điện phân làm giàu b Ghi đo đồng thời hai dạng Se(IV) Se-Cyst * Chuẩn bị 10ml mẫu tự tạo gồm: Se(IV) 2ppb, Se-Cyst 10ppb, HCl 0,1M * Ghi đo mẫu: Tiến hành ghi đo mẫu với điều kiện đưa bảng 3.2, sử dụng phương pháp thêm chuẩn để xác định hàm lượng dạng (thêm lần, lần thêm 2ppb Se(IV) 10ppb Se-Cyst) Kết thể hình 3.4 bảng 3.3 Hình 3.4: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu tự tạo Bảng 3.3: Kết xác định hàm lượng hai dạng Se(IV) Se-Cyst mẫu tự tạo Các dạng Se(IV) Se-Cyst Hàm lượng đưa vào (ppb) 10 Hàm lượng trung bình xác định (ppb) 2,067 10,700 (n=3) Độ lệch tương đối 3,35% 7,00% Từ kết nghiên cứu cho thấy: đường thêm chuẩn Se(IV) Se-Cyst có pic đẹp, cân đối, Ip thể mối quan hệ tuyến tính với nồng độ, hai pic tách xa Do đó, xác định đồng thời hai dạng Se(IV) Se-Cyst phép ghi đo 3.2.2 DMDSe pha hữu DMDSe chất dễ bay hơi, nên trước ghi đo, dung dịch nghiên cứu làm lạnh nhiệt độ 60C Sau trình nghiên cứu, chúng tơi rút điều kiện tối ưu cho phép phân tích DMDSe trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4: Điều kiện tối ưu phân tích DMDSe Điện cực làm việc Chế độ ghi đo Kích thước giọt thủy ngân Tốc độ khuấy (vòng/phút) Thời gian sục khí N2 HCl Nền LiClO4 CH2Cl2+C2H5OH HMDE DP 2000 200s 0,06M 0,2M 1/1 (v/v) -0,08V Thế điện phân làm giàu 60s÷120s Thời gian điện phân làm giàu 15s Thời gian cân 0,05V Biên độ xung 0,02s Thời gian đặt xung 0,01V/s Tốc độ quét (-0,17÷-0,40)V Khoảng quét 3.3 NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT CẢN TRỞ ĐẾN PHÉP GHI ĐO CÁC DẠNG SELEN 3.3.1 Nghiên cứu ảnh hưởng chất cản trở đến phép ghi đo Se(IV) 3.3.1.1 Ảnh hưởng số ion đến phép ghi đo Se(IV) Tiến hành ghi đo đường DPCSV Se(IV) 2ppb không thêm thêm ion Cu(II), Pb(II), Zn(II), Cd(II), As(V) Fe(III) với nồng độ khác theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2, thời gian điện phân 90s Kết nghiên cứu trình bày hình 3.5, 3.6 30 25 Ah Cu(II) 20 I (nA) I (nA) 45 40 35 30 25 20 15 10 Ah Pb(II) Ah Cd(II) Ah Zn(II) 15 Ah As(V) 10 Ah Fe(III) 0 20 40 60 80 100 120 100 200 300 ppb ppb Hình 3.6: Sự phụ thuộc Ip vào nồng độ ion Zn(II), As(V) Hình 3.5: Sự phụ thuộc Ip vào nồng độ ion Cu(II), Pb(II), Cd(II) Fe(III) Khi tỉ lệ nồng độ Cu(II)/Se(IV) tăng dần Ip tăng dần, tới 3,75 lần Ip tăng 18,1%; tỉ lệ nồng độ Pb(II)/Se(IV) tăng dần Ip giảm dần, tới lần Ip giảm xuống 11,97%; tỉ lệ nồng độ Cd(II)/Se(IV) tăng dần Ip giảm dần, tới lần Ip giảm 19,6%; tỉ lệ nồng độ Fe(III)/Se(IV) tăng dần Ip giảm dần, tới 2,5 lần Ip giảm 13,38% tới 50 lần Ip giảm 25,98%; tỉ lệ nồng độ As(V)/Se(IV) tăng dần Ip giảm dần, tới 15 lần Ip giảm xuống 14,4%; tỉ lệ nồng độ Zn(II)/Se(IV) tăng dần Ip giảm dần khơng đáng kể Tóm lại: Các ion ảnh hưởng nhiều đến cường độ dòng pic hòa tan Se(IV) như: Pb(II), Cd(II) Fe(III), ion loại bỏ cách dùng nhựa chelex 100 dạng amoni 3.3.1.2 Ảnh hưởng chất béo tới phép ghi đo Se(IV) Chất béo họ chất gồm nhiều chất, chúng tơi sử dụng axít béo (axít stearic C17H35COOH) đại diện cho loại chất để nghiên cứu Tiến hành ghi đo đường DPCSV Se(IV) 2ppb khơng thêm thêm dung dịch axít stearic/etanol với nồng độ khác theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2, thời gian điện phân 90s Kết nghiên cứu trình bày hình 3.7 Ah axít stearic đến Ip Se(IV) 0ppb 40ppb ax béo 30 25 I (n A ) 20 15 10 0 200 400 600 800 1000 1200 ppb Hình 3.7: Đường DPCSV đồ thị nghiên cứu ảnh hưởng axít stearic đến Ip Se(IV) Từ kết nghiên cứu thu cho thấy, có mặt axít stearic làm biến dạng pic hịa tan Se(IV) (pic khơng nhẵn, khơng cân đối) nồng độ thấp 40ppb (gấp 20 lần nồng độ Se(IV)), đồng thời làm giảm cường độ dòng 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Ah Cd(II) Ah Fe(III) I (nA) I (nA) pic xuống 10,55% Khi nồng độ axít stearic gấp 250 lần cường độ dịng pic giảm 18,36% gấp 500 lần giảm 32,42% Như vậy, có mặt chất béo hải sản ảnh hưởng đến phép ghi đo xác định dạng Se(IV), cần phải loại bỏ Để loại chất béo khỏi dịch chiết trước ghi đo DPCSV, dùng dung môi n-hexan 3.3.2 Nghiên cứu ảnh hưởng chất cản trở đến phép ghi đo Se-Cyst 3.3.2.1 Ảnh hưởng số ion tới phép ghi đo Se-Cyst Tiến hành ghi đo đường DPCSV Se-Cyst 25ppb không thêm thêm ion Cu(II), Pb(II), Zn(II), Cd(II), As(V) Fe(III) với nồng độ khác theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2, thời gian điện phân 90s Kết nghiên cứu trình bày hình 3.8, 3.9 Ah Zn(II) Ah As(V) 200 400 600 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 Ah Cu(II) Ah Pb(II) ppb 200 400 600 800 1000 ppb Hình 3.8: Sự phụ thuộc Ip vào nồng độ ion Cd(II), Fe(III), Zn(II), As(V) Hình 3.9 Sự phụ thuộc Ip vào nồng độ ion Cu(II), Pb(II) Khi tỉ lệ nồng độ Cd(II)/Se-Cyst tăng tới 12 lần Ip giảm 10,2%, tới 20 lần Ip giảm 12,3%; tỉ lệ nồng độ Fe(III)/Se-Cyst tăng tới lần Ip giảm 16,3%, đến 16 lần Ip giảm 28,3%; tỉ lệ nồng độ Zn(II)/Se-Cyst tăng dần Ip thay đổi khơng đáng kể; tỉ lệ nồng độ As(V)/Se-Cyst tăng tới 16 lần Ip giảm 10,53%; tỉ lệ nồng độ Cu(II)/Se-Cyst tăng tới 12 lần Ip tăng 15,1%, tới 16 lần Ip tăng 19,65%; tỉ lệ nồng độ Pb(II)/Se-Cyst tăng tới 28 lần Ip tăng lên 10,95%, tới 36 lần Ip tăng lên 16,95% Tóm lại: Qua kết nghiên cứu cho thấy, nhìn chung ion khơng ảnh hưởng ảnh hưởng đến phép ghi đo Se-Cyst 3.3.2.2 Ảnh hưởng chất béo tới phép ghi đo Se-Cyst Tiến hành ghi đo đường DPCSV Se-Cyst 25ppb khơng thêm thêm dung dịch axít stearic/etanol với nồng độ khác theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2, thời gian điện phân 90s Kết nghiên cứu trình bày hình 3.10 I(n A ) A h axít stearic đến Ip Se-Cyst 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 ppb Hình 3.10: Sự phụ thuộc Ip vào nồng độ axít stearic Từ kết nghiên cứu cho thấy, tăng nồng độ axít stearic Ip SeCyst giảm dần khơng đáng kể Khi nồng độ axít stearic gấp 400 lần nồng độ Se-Cyst chiều cao pic giảm 8,52% Tuy nhiên, axít stearic làm biến dạng pic hòa tan Se-Cyst (pic không cân đối) nồng độ cao 2000ppb (gấp 80 lần nồng độ Se-Cyst) làm giảm độ lặp lại phép ghi đo Như vậy, có mặt chất béo hải sản ảnh hưởng đến phép ghi đo xác định dạng Se-Cyst, cần phải loại bỏ 3.3.3 Nghiên cứu ảnh hưởng chất cản trở tới phép ghi đo DMDSe Tiến hành ghi đo đường DPCSV DMDSe 5ppb không thêm thêm lượng axít stearic/etanol khác theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.4 với thời gian điện phân 60s Kết thể hình 3.11 Ah axít stearic đến Ip DMDSe -150n ppb Ax béo -125n 120 100 I (nA) I (A ) -100n 140 -75.0n 80 60 40 -50.0n 20 -25.0n 2000 4000 6000 8000 10000 12000 ppb -200m -250m -300m -350m U (V) Hình 3.11: Đường DPCSV đồ thị nghiên cứu ảnh hưởng axít stearic đến Ip DMDSe Từ kết thu cho thấy, tăng nồng độ axít stearic cường độ dịng Ip DMDSe giảm dần khơng đáng kể Khi nồng độ axít stearic gấp 2000 lần nồng độ DMDSe Ip giảm 8,46% Mặt khác, có mặt axít stearic không làm biến dạng pic DMDSe nồng độ lớn Có thể nói, chất béo ảnh hưởng không đáng kể đến phép ghi đo DMDSe 3.4 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN 3.4.1 Xây dựng đường chuẩn Se(IV) Tiến hành xây dựng đường chuẩn Se(IV) hai vùng nồng độ (0,08 ÷ 1) ppb (0,8 ÷ 10) ppb điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2 với thời gian điện phân cho hai vùng 150s 90s Kết ghi đo trình bày bảng 3.5, 3.6 hình 3.12, 3.13 Bảng 3.5: Kết ghi đo xây dựng đường chuẩn Se(IV) vùng nồng độ (0,08 ÷ 1) ppb Stt 0,08 0,15 0,30 0,60 0,80 1,00 Se(IV) (ppb) 1,64 2,44 4,47 9,64 12,20 14,90 Ip (nA) y = 14.774x + 0.3338 R2 = 0.9976 16 14 I (nA) 12 10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 [Se (IV)] (ppb) Hình 3.12 : Đường DPCSV đường chuẩn Se(IV) vùng nồng độ (0,08 ÷ 1) ppb 1.2 160 y = 3.2338x - 1.8626 R2 = 0.9969 140 120 I(n A ) 100 80 60 40 20 0 10 20 [Se -Cys t] 30 40 50 (ppb) Hình 3.15: Đường DPCSV đường chuẩn Se-Cyst vùng nồng độ (5 ÷ 45) ppb 3.4.3 Xây dựng đường chuẩn DMDSe Tiến hành xây dựng đường chuẩn DMDSe vùng nồng độ (2 ÷ 22) ppb điều kiện tối ưu đưa bảng 3.4, thời gian điện phân 60s Kết trình bày bảng 3.9 hình 3.16 Bảng 3.9: Kết ghi đo xây dựng đường chuẩn DMDSe vùng nồng độ (2 ÷ 22) ppb Stt 12 17 22 DMDSe (ppb) 68,7 155 237 306 368 Ip (nA) 400 y = 14.992x + 47.036 R2 = 0.9951 350 300 I (nA) 250 200 150 100 50 0 10 15 20 25 [DM DSe ] (ppb) Hình 3.16: Đường DPCSV đường chuẩn DMDSe vùng nồng độ: (2 ÷ 22) ppb Từ kết thu cho thấy, hai vùng nồng độ (0,08 ÷ 1) ppb (0,8 ÷ 10) ppb Se(IV); (0,5 ÷ 8) ppb (5 ÷ 45) ppb Se-Cyst vùng nồng độ (2 ÷ 22) ppb DMDSe có phụ thuộc tuyến tính Ip nồng độ dạng chất nghiên cứu với hệ số tương quan R2 > 0,99 3.5 ĐÁNH GIÁ ĐỘ LẶP LẠI, GIỚI HẠN PHÁT HIỆN VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG CỦA PHƯƠNG PHÁP 3.5.1 Độ lặp lại Để đánh giá độ lặp lại phép ghi đo, tiến hành ghi đo lặp lại 10 đường Von - Ampe hòa tan Se(IV) 2ppb, Se-Cyst 25ppb DMDSe 5ppb khoảng thời gian ngắn Điều kiện ghi đo tiến hành điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2 (đối với Se(IV), Se-Cyst) bảng 3.4 (đối với DMDSe), thời gian điện phân cho ba dạng selen 90s Kết nghiên cứu trình bày hình 3.17, 3.18 bảng 3.9 10 Se(IV) Se-Cyst -25.0n I (A ) -20.0n -15.0n -10.0n -5.00n -200m -300m -400m -500m -600m -700m U (V) Hình 3.17: Đường DPCSVcủa Se(IV), Se-Cyst nghiên cứu độ lặp lại phép ghi đo -1 n -1 n I (A) -1 0 n -7 n -5 0 n -2 n -2 0 m -2 m -3 0 m U -3 m (V ) Hình 3.18: Đường DPCSV DMDSe nghiên cứu độ lặp lại phép ghi đo Bảng 3.9: Kết nghiên cứu đánh giá độ lặp lại phép ghi đo Ipic (nA) STT Se(IV) Se-Cyst DMDSe 25,9 76,6 141 25,8 76,4 145 26,0 76,8 141 25,9 76,5 143 25,7 76,6 144 25,8 76,9 140 25,8 76,3 142 26,0 76,5 140 25,8 76,8 140 25,6 76,1 140 10 X 25,83 76,55 141,6 S 0,125 0,246 1,838 Số liệu tính SX tốn 0,0396 0,0777 0,5811 V 0,484% 0,321% 1,298% Từ kết nghiên cứu thu cho thấy: ba phép ghi đo Se(IV), Se-Cyst DMDSe có độ lệch chuẩn (S), độ lệch chuẩn trung bình (S X ), hệ số biến động (V) nhỏ Hai phép ghi đo Se(IV), Se-Cyst có hệ số biến động V nhỏ 1%, với DMDSe lớn mức 1,298%, chứng tỏ phép ghi đo có độ lặp lại tốt 11 3.5.2 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) tính theo quy tắc 3σ Chúng tơi sử dụng ln kết thí nghiệm nghiên cứu độ lặp lại mục 3.5.1 để tính tốn LOD LOQ cho dạng selen LODSe(IV) = 0,029 (ppb) LOQSe(IV) = 0,097 (ppb) LODSe-Cyst = 0,241 (ppb) LOQSe-Cyst = 0,803 (ppb) LODDMDSe = 0,195 (ppb) LOQ DMDSe = 0,649 (ppb) Kết luận: Phương pháp Von-Ampe hịa tan catơt xung vi phân với điện cực giọt treo thủy ngân làm điện cực làm việc có độ nhạy khơng cao phương pháp HPLC-ICP-MS tương đương so với phương pháp HPLC-ICP-AES, HPLC-HG-AAS …, có độ lặp lại tốt, áp dụng tốt cho phân tích định lượng dạng selen có hoạt tính điện hóa 3.6 ĐỊNH LƯỢNG SELEN TỔNG VÀ MỘT SỐ DẠNG SELEN TRONG HẢI SẢN 3.6.1 Định lượng selen tổng mẫu hải sản 3.6.1.1 Xây dựng quy trình phân tích mẫu Để xây dựng quy trình phân tích mẫu, chúng tơi tiến hành nghiên cứu điều kiện phân tích mẫu tối ưu Nghiên cứu điều kiện vơ hóa mẫu Qua tham khảo tài liệu đồng thời dựa nghiên cứu thực nghiệm, chúng tơi tiến hành vơ hóa mẫu theo quy trình sau: Cân xác khoảng 0,01g mẫu hải sản khô đông (đã xử lý theo mục 2.2.2) cho vào bình Kendan, thêm vào 2ml hỗn hợp axít (HNO3 + HClO4) đậm đặc tỉ lệ (1:1), thêm tiếp 5ml axít H2SO4 đặc, lắc đặt vào miệng bình phễu thủy tinh nhỏ Đun nóng hỗn hợp nhiệt độ 2500C bếp điều nhiệt mẫu khơng màu (khoảng 3÷4h), sau đổ hỗn hợp cốc thủy tinh chịu nhiệt cạn hết axít dư đến thu muối trắng ẩm Sản phẩm thu tiếp tục xử lý để khử Se(VI) Se(IV) Nghiên cứu điều kiện khử Se(VI) Se(IV) Chúng chọn phương pháp khử Se(VI) Se(IV) cách đun cách thủy axít HCl Để tìm điều kiện tối ưu cho trình khử, chúng tơi tiến hành nghiên cứu chọn nồng độ HCl thời gian khử tối ưu Kết thu bảng 3.10 bảng 3.11 Bảng 3.10 Kết nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ HCl đến hiệu suất khử Se(VI) Se(IV) CHCl 1M 2M 3M 4M 5M 6M 7M 8M Hiệu suất khử (%) 46,2 55,1 67,5 77,0 89,5 96,0 92,0 90,5 Từ kết nghiên cứu cho thấy, nồng độ HCl tốt cho trình khử 6M 12 Bảng 3.11 Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian khử đến hiệu suất khử Se(VI) Se(IV) Thời gian khử (phút) 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Hiệu suất khử (%) 100 72,0 75,5 83,2 88,7 94,5 102,5 98,0 96,4 93,3 89,0 Kết nghiên cứu cho thấy, thời gian tối ưu để khử Se(VI) Se(IV) 50÷90 phút Tuy nhiên, để hiệu suất khử cao nhất, chọn thời gian khử 60 phút Sau nghiên cứu, khảo sát, đưa quy trình phân tích hàm lượng Se tổng mẫu hải sản tóm tắt theo sơ đồ hình 3.19 0,01 gam mẫu 3-4h 2ml (HNO3 + HClO4) (1:1) 5ml H2SO4 2500C Mẫu vơ hóa Cơ cạn Muối trắng ẩm 60ph HCl 6M 90-1000C Se(IV) Ghi đo DPCSV Hình 3.19: Quy trình xác định Se tổng mẫu hải sản 3.6.1.2 Đánh giá phương pháp Để đánh giá độ xác phương pháp, chúng tơi sử dụng mẫu chuẩn Quốc Tế DORM-2 (Dogfish muscle certified reference material for trace metals) để tiến hành định lượng Se tổng theo quy trình Tuy nhiên, hàm lượng Se mẫu chuẩn nhỏ nên lấy lượng mẫu ban đầu nhiều so với quy trình (0,05g) Kết phân tích hình 3.20 bảng 3.12 Se c = +/- 0.682 µg /L 0.051 µg /L (7.48 %) -30.0n -25.0n I (A) -20.0n -15.0n -10.0n -5.00n -6.8e-007 -2.00e-6 -1.00e-6 1.00e-6 2.00e-6 c (g/L) Hình 3.20: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định Se tổng mẫu chuẩn DORM-2 13 Bảng 3.12: Kết phân tích hàm lượng Se tổng mẫu chuẩn DORM-2 Hàm lượng selen tổng Độ Mẫu Giá trị Sai số so Kết phân tích (mg/kg) thu hồi chuẩn chứng với giá trị Rev (%) Lần Lần Lần TB (mg/kg) chứng 1,400 ± 0,090 DORM-2 1,364 1,342 1,312 1,339 ±0,102 ±0,096 ±0,126 ±0,108 4,36% 91,64 Từ kết nghiên cứu thu cho thấy, sai số kết xác định theo phương pháp nghiên cứu giá trị chứng khơng đáng kể Do kết luận: Phương pháp DPCSV mà chúng tơi nghiên cứu có độ xác cao 3.6.1.3 Áp dụng phân tích hàm lượng selen tổng mẫu hải sản Áp dụng quy trình nghiên cứu xây dựng (hình 3.19) vào phân tích hàm lượng Se tổng mẫu hải sản Kết thu hình 3.21 đến 3.25 bảng 3.13 * Mẫu Ngao Hình 3.21: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu Ngao * Mẫu cá Khoai Hình 3.22: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu cá Khoai Mẫu tơm Sú Hình 3.23: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu tôm Sú 14 * Mẫu Mực Hình 3.24: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu Mực * Mẫu cá Thu Hình 3.25: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn mẫu cá Thu Tổng hợp kết thu thể bảng 3.13 Bảng 3.13: Kết xác định hàm lượng Se tổng mẫu hải sản Mẫu (µg/g) Cá Ngao Tôm Sú Mực Cá Thu Số lần ghi đo Khoai 105,39 52,78 15,46 41,80 86,86 Lần 106,30 51,68 14,90 42,17 86,57 Lần 105,65 50,98 15,12 43,13 85,98 Lần Giá trị trung bình 105,78 51,81 15,16 42,37 86,47 Rev (%) 109,24 97,22 96,26 91,96 93,08 3.6.1.4 Kết ghi đo quang phổ hấp thụ nguyên tử lò graphit (GFAAS) số mẫu hải sản Bên cạnh việc xác định hàm lượng selen tổng hải sản phương pháp DPCSV, chúng tơi cịn xác định hàm lượng selen tổng số mẫu đại diện phương pháp GFAAS Kết ghi đo tổng kết so sánh bảng 3.15 Bảng 3.15: So sánh kết nghiên cứu thu theo hai phương pháp: DPCSV GFAAS Mẫu (µg/g) Ngao Tơm Sú Cá Thu Phương pháp 105,78 15,16 86,47 DPCSV 117,93 15,67 89,16 GFAAS 11,49% 3,36% 3,11% Sai số tương đối hai phương pháp 15 Kết nghiên cứu hai phương pháp DPCSV GFAAS sai lệch khơng đáng kể Cùng với kết phân tích mẫu chuẩn, chứng tỏ phương pháp DPCSV xây dựng có độ tin cậy độ xác cao, cho phép xác định nhạy lượng vết selen mẫu sinh học Qua kết nghiên cứu cho thấy, hàm lượng selen mẫu Ngao lớn nhất, tiếp đến cá Thu, cá Khoai, Mực nhỏ tôm Sú Các kết chứng tỏ động vật sống đáy tích lũy selen lớn so với động vật sống tầng cao 3.6.2 Định lượng số dạng selen mẫu hải sản 3.6.2.1 Xây dựng sơ đồ chiết tách xác định số dạng selen mẫu hải sản a Chọn dung môi chiết dạng selen mẫu hải sản Để chiết dạng selen hải sản, qua tham khảo tài liệu để phù hợp với điện li xác định phương pháp Von-Ampe hòa tan thuận lợi cho việc chiết tách loại bỏ protein chất béo, chúng tơi chọn dung dịch axít HCl 0,5M để ngâm chiết mẫu b Chiết tách xác định dạng DMDSe pha hữu Để tiến hành nghiên cứu điều kiện chiết tách tối ưu, chuẩn bị 50ml dung dịch mẫu pha chuẩn gồm: Se(IV) 1µg/l, Se-Cyst 20µg/l, DMDSe 2µg/l, axit béo 20000µg/l HCl 0,5M Sử dụng dung môi diclometan (CH2Cl2) để chiết tách làm giàu dạng DMDSe từ dung dịch mẫu pha chuẩn Nghiên cứu ảnh hưởng số lần chiết thể tích dung mơi chiết diclometan Lấy thể tích khác CH2Cl2 để chiết tách dạng DMDSe mẫu pha chuẩn tiến hành chiết nhiều lần Các kết thu bảng 3.16 Bảng 3.16 : Kết nghiên cứu ảnh hưởng số lần chiết thể tích dung mơi chiết CH2Cl2 đến hiệu suất chiết DMDSe % DMDSe tìm thấy (TB) Thể tích diclometan (ml) Chiết lần (n=3) Chiết lần (n=3) 3,5 83,50 16,41 5,5 98,76 Khơng tìm thấy 10 99,14 Khơng tìm thấy Từ kết nghiên cứu cho thấy, với 5,5ml CH2Cl2 hiệu suất chiết đạt 98% lần chiết Ở lần chiết thứ hai khơng tìm thấy DMDSe, nồng độ DMDSe cịn lại dịch chiết mẫu làm giàu vào pha hữu nhỏ giới hạn phát Do đó, chúng tơi chọn thể tích CH2Cl2 để chiết lấy dạng DMDSe 5,5ml tiến hành chiết lần Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian lắc chiết Để nghiên cứu ảnh hưởng thời gian lắc chiết đến hiệu suất chiết, sử dụng 5,5ml diclometan để chiết tách dạng DMDSe 50ml mẫu pha chuẩn thay đổi thời gian lắc chiết (5, 10, 15, 20 phút) Các kết nghiên cứu thu được trình bày bảng 3.17 Bảng 3.17: Kết nghiên cứu ảnh hưởng thời gian lắc chiết đến hiệu suất chiết DMDSe Thời gian lắc chiết phút (n=3) 10 phút (n=3) 15 phút (n=3) 20 phút (n=3) % DMDSe 36,89 64,13 98,45 99,22 tìm thấy (TB) 16 Từ kết nghiên cứu cho thấy, từ 15 phút trở hiệu suất chiết đạt 98% Tuy nhiên, phân tích mẫu cần rút ngắn thời gian phân tích, chúng tơi chọn thời gian lắc chiết 15 phút c Chiết loại chất béo để xác định dạng Se-Cyst Se(IV) pha nước Chúng tiến hành nghiên cứu điều kiện tối ưu để chiết loại chất béo n-hexan dựa mẫu pha chuẩn chuẩn bị phần b Nghiên cứu số lần chiết thể tích dung mơi chiết n-hexan tối ưu Trước sử dụng n-hexan để loại bỏ chất béo, tiến hành chiết tách dạng DMDSe vào pha hữu 5,5ml diclometan Sau đó, thêm thể tích n-hexan khác vào dịch chiết pha nước mẫu pha chuẩn tiến hành chiết nhiều lần Các kết thu được trình bày bảng 3.18 Từ kết nghiên cứu cho thấy, dùng 5ml n-hexan phải chiết lần, cịn dùng 10ml n-hexan phải chiết 3-4 lần hiệu suất thu hồi Se-Cyst Se(IV) đạt > 90% Để rút ngắn số lần chiết, chúng tơi chọn thể tích nhexan để chiết loại bỏ chất béo 10ml số lần chiết lần Bảng 3.18: Kết nghiên cứu ảnh hưởng số lần chiết thể tích dung mơi chiết n-hexan đến độ thu hồi hai dạng Se-Cyst Se(IV) Chiết 10ml nChiết 5ml n-hexan hexan Dạng Số lần Hàm lượng Độ thu Độ thu Hàm lượng chiết selen tìm thấy hồi hồi tìm thấy (µg/l) (%) (%) (µg/l) 19,421 97,11 20,238 101,19 Se-Cyst lần 0,000 0,00 0,000 0,00 Se(IV) 20,513 102,57 20,319 101,60 Se-Cyst lần 0,000 0,00 0,335 33,50 Se(IV) 20,486 102,43 Se-Cyst 20,941 104,71 lần 0,000 0,00 Se(IV) 1,155 115,50 20,212 101,06 Se-Cyst 19,606 98,03 lần 0,126 12,60 Se(IV) 1,103 110,30 19,904 99,52 17,316 86,58 Se-Cyst lần 0,640 64,00 1,014 101,40 Se(IV) 21,671 108,36 14,738 73,69 Se-Cyst lần 0,850 85,00 0,873 87,30 Se(IV) Se-Cyst 20,800 104,00 lần Se(IV) 0,901 90,10 16,283 81,42 Se-Cyst lần 1,097 109,70 Se(IV) 15,270 76,35 Se-Cyst lần 1,012 101,20 Se(IV) d Chiết loại protein để xác định dạng Se-Cyst Se(IV) pha nước Trong mẫu pha chuẩn protein nên chúng tơi tiến hành nghiên cứu điều kiện chiết loại protein tối ưu mẫu thật (chọn mẫu tôm Sú để nghiên cứu) Để loại bỏ protein, dùng dung môi diclometan 17 Nghiên cứu ảnh hưởng số lần chiết thể tích dung mơi chiết diclometan Sau chiết loại bỏ chất béo n-hexan, tiếp tục thêm vào dịch chiết pha nước (≈50ml) thể tích khác diclometan tiến hành chiết nhiều lần Sau lần chiết, đo DPCSV xác định dạng Se-Cyst (có hàm lượng lớn mẫu hải sản) Các kết thu được trình bày bảng 3.19 Bảng 3.19: Kết xác định hàm lượng Se-Cyst mẫu tôm Sú sau chiết loại protein Hàm lượng dạng Se-Cyst xác định sau chiết loại protein (µg/l) Số lần chiết Chiết 5ml CH2Cl2 Chiết 10ml CH2Cl2 11,357 12,019 lần 7,572 lần 13,394 8,559 lần Từ kết nghiên cứu cho thấy, dùng 5ml CH2Cl2 để chiết loại protein tiến hành chiết lần thu hàm lượng Se-Cyst mẫu tôm Sú cao Tuy nhiên, để khẳng định sau lần chiết CH2Cl2 hàm lượng hai dạng Se(IV) Se-Cyst không đáng kể, nghiên cứu 50ml mẫu pha chuẩn chuẩn bị phần b Sau chiết lần n-hexan (mỗi lần 10ml) để loại bỏ axít béo, tiếp tục chiết lần CH2Cl2 (mỗi lần 5ml) Sau lần chiết CH2Cl2 loại bỏ pha hữu cơ, lấy 10ml dịch chiết pha nước tiến hành ghi đo DPCSV theo điều kiện tối ưu đưa bảng 3.2 để xác định hai dạng selen pha nước Kết nghiên cứu thu bảng 3.20 Bảng 3.20: Kết nghiên cứu ảnh hưởng số lần chiết 5ml diclometan đến độ thu hồi dạng selen pha nước Dạng Se(IV) Dạng Se-Cyst Hàm lượng Hàm lượng Số lần chiết Độ thu hồi Độ thu hồi tìm thấy tìm thấy (%) (%) (µg/l) (µg/l) 19,742 98,71 0,958 95,80 lần 19,105 95,53 0,898 89,80 lần Qua kết nghiên cứu cho thấy, sau lần chiết CH2Cl2 (mỗi lần 5ml) độ thu hồi Se-Cyst Se(IV) đạt 95,53% 89,80%, chứng tỏ hàm lượng dạng khơng đáng kể Do đó, chúng tơi chọn điều kiện chiết loại protein pha nước áp dụng cho mẫu hải sản 5ml CH2Cl2 tiến hành chiết lần e Nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ngâm chiết mẫu Để nghiên cứu ảnh hưởng thời gian ngâm chiết mẫu, chọn mẫu cá Khoai để nghiên cứu dựa hàm lượng Se-Cyst xác định được-là dạng có hàm lượng lớn mẫu hải sản để đạt độ xác cao 18 Bảng 3.21: Kết xác định hàm lượng Se-Cyst mẫu cá Khoai theo thời gian ngâm chiết mẫu Thời gian ngâm chiết mẫu 12h 24h 30h 17,134 21,465 Hàm lượng Se-Cyst tìm thấy (µg/l) 21,045 Từ kết nghiên cứu cho thấy, với thời gian ngâm chiết mẫu 24h đến 30h hàm lượng Se-Cyst thu ổn định Nếu ngâm chiết mẫu lâu lượng axit béo protein bị chiết nhiều gây khó khăn cho việc ghi đo mẫu Do đó, thời gian phù hợp để ngâm chiết mẫu chọn 24h Từ kết nghiên cứu, kết hợp với tham khảo từ tài liệu, đề xuất sơ đồ chiết tách xác định số dạng selen hải sản phương pháp Von-Ampe hịa tan (hình 3.26): 1g Mẫu khơ 60C 24h 50ml HCl 0,5M Máy li tâm 2000 (vòng/phút) Gạn lấy phần dung dịch Dịch chiết Lọc (0,45 µm) Dịch chiết 5,5 ml CH2Cl2 lắc 15 phút Pha nước 10ml n-hexan (3 lần) Pha hữu lắc phút DPCSV Xác định DMDSe Dịch chiết pha nước 5ml CH2Cl2 (2 lần) LiClO4/EtOH HCl làm lạnh 60C lắc phút Dịch chiết Pha nước Se-cyst DPCSV Se(IV) Hình 3.26: Sơ đồ chiết tách xác định số dạng Se mẫu hải sản 3.6.2.2 Áp dụng phân tích mẫu thật Cân xác 1g mẫu khơ đơng, thêm vào 50ml HCl 0,5M ngâm chiết nhiệt độ khoảng 60C Sau 24h lấy mẫu đổ vào ống ly tâm 50ml, ly tâm 20 phút với tốc độ 2000 vòng/phút Gạn lấy phần dung dịch lọc qua màng lọc cỡ 0,45µm, thu dịch chiết Thêm vào dịch chiết 5,5ml diclometan, lắc 15 phút để yên ngăn mát tủ lạnh, chờ phân lớp Tách riêng pha hữu (pha CH2Cl2) pha nước Tiếp tục xử lý pha sau: - Pha hữu Lấy 5ml dịch chiết pha hữu cơ, thêm vào 0,3ml HCl 2M, 1ml LiClO4 2M/EtOH định mức etanol đến 10ml Làm lạnh hỗn hợp đến nhiệt độ khoảng 60C Sử dụng điều kiện ghi đo tối ưu đưa bảng 3.4, tiến hành định lượng phương pháp thêm chuẩn Để nghiên cứu độ thu hồi dạng DMDSe, chuẩn bị mẫu tương tự thêm vào mẫu ban đầu 50µl DMDSe 1000µg/l, 50ml dung dịch HCl ngâm chiết mẫu, nồng độ DMDSe thêm vào 1,0µg/l Tiến hành chiết tách định lượng tương tự mẫu thật Kết nghiên cứu thu sử dụng để tính tốn độ thu hồi 19 - Pha nước Lấy toàn dịch chiết pha nước, thêm vào 10ml n-hexan lắc phút (làm lần) để loại bỏ chất béo Tách bỏ pha n-hexan, thu lấy dịch chiết pha nước, tiếp tục thêm vào 5ml CH2Cl2 lắc phút (2 lần) để loại bỏ protein Tách bỏ pha CH2Cl2, thu dịch chiết pha nước Hút 1ml dịch chiết pha nước cho vào bình định mức 10ml, thêm vào 1ml HCl 1M định mức nước cất siêu tới vạch Sử dụng điều kiện ghi đo tối ưu đưa bảng 3.2, tiến hành định lượng phương pháp thêm chuẩn Để nghiên cứu độ thu hồi dạng Se-Cyst, chuẩn bị mẫu tương tự thêm vào mẫu ban đầu 100µl Se-Cyst 100.000µg/l, 50ml dung dịch HCl ngâm chiết mẫu, nồng độ Se-Cyst thêm vào 200µg/l Tiến hành chiết tách định lượng tương tự mẫu thật Kết nghiên cứu thu sử dụng để tính tốn độ thu hồi Các kết phân tích mẫu thể hình 3.27 đến 3.35 * Mẫu cá Khoai - Pha hữu D M D S e c = + / - 3 0 µ g / L µ g / L ( % ) -6 0 n -5 0 n I (A) -4 0 n -3 0 n -2 0 n -1 0 n e - 0 - 0 e - -62 0 e - 0 e - 64 0 e - 66 0 e - c ( g /L ) Hình 3.27: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng DMDSe mẫu cá Khoai Tiến hành chiết lặp lại với 5,5ml diclometan lần ghi đo DPCSV xác định dạng DMDSe (hình 3.28) Kết nghiên cứu cho thấy, tăng thời gian điện phân làm giàu khơng xuất pic DMDSe Hình 3.28: Đường DPCSV xác định dạng DMDSe mẫu cá Khoai (chiết lần 2) 20 - Pha nước Se-cyst c = 21.045 µg/L +/1.034 µg/L (4.91%) -50.0n -40.0n I (A) -30.0n -20.0n -2.1e-005 -10.0n -2.00e-5 -1.00e-5 1.00e-52.00e-53.00e-5 c (g/L) Hình 3.29: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng Se-Cyst mẫu cá Khoai Kết nghiên cứu thu cho thấy, mẫu cá Khoai, béo so với mẫu hải sản khác nên phải chiết lần n-hexan để loại bỏ chất béo Kết thể hình 3.29 Trên đường DPCSV, pic Se-Cyst cho rõ cịn pic Se(IV) có cường độ nhỏ bên cạnh pic Se-Cyst Do đó, chúng tơi tiến hành ghi đo riêng Se(IV) với điện phân đặt âm (-0,3V) so với ghi đo chung (-0,2V) để quan sát phổ rõ đẹp Kết thu hình 3.30 Hình 3.30: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng Se(IV) mẫu cá Khoai * Mẫu tôm Sú - Pha hữu Hình 3.31: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng DMDSe mẫu tôm Sú Tiến hành chiết lặp lại với 5,5ml diclometan ghi đo DPCSV xác định dạng DMDSe Kết thu tương tự trường hợp mẫu cá Khoai, tăng thời gian điện phân làm giàu không xuất pic DMDSe 21 - Pha nước Se-cyst c = 13.394 µg/L +/1.383 µg/L (10.33%) -30.0n I (A) -20.0n -10.0n -1.3e-005 -1.00e-5 1.00e-5 2.00e-5 c (g/L) Hình 3.32: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng Se-Cyst mẫu tôm Sú Đối với dạng Se(IV), giống trường hợp cá Khoai, phải ghi đo riêng rẽ với điện phân đặt âm (-0,3V) so với ghi đo chung (-0,2V) Kết thu thể hình 3.33 Hình 3.33: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng Se(IV) mẫu tôm Sú * Mẫu Mực - Pha hữu Hình 3.34: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng DMDSe mẫu Mực Tiến hành chiết lặp lại với 5,5ml diclometan ghi đo DPCSV xác định dạng DMDSe Kết cho tương tự trường hợp mẫu cá Khoai tôm Sú, tăng thời gian điện phân làm giàu không xuất pic DMDSe, hàm lượng DMDSe dịch chiết mẫu cịn ít, nên làm giàu vào pha hữu hàm lượng nhỏ giới hạn phát 22 - Pha nước Se-cyst c = 31.567 +/2.308 µg/L µg/L (7.31%) -1 n -8 0 n I (A) -6 0 n -4 0 n -2 0 n - e - 0 - 0 e -5 -2 0 e - - 0 e - 0 e -5 c ( g /L ) Hình 3.35: Đường DPCSV đồ thị thêm chuẩn xác định dạng Se-Cyst mẫu Mực Từ kết nghiên cứu thu cho thấy: Trên đường DPCSV xuất pic Se-Cyst, khơng có tín hiệu pic Se(IV) Tổng hợp kết định lượng số dạng selen mẫu hải sản trình bày bảng 3.22 Bảng 3.22: Kết xác định hàm lượng số dạng selen mẫu hải sản phương pháp Von-Ampe hòa tan Dạng Selen Se(IV) Se-Cyst DMDSe Hàm lượng selen tổng Hàm Hàm Hàm Rev Rev Mẫu (pp DPCSV) lượng TB lượng TB lượng TB (%) (%) (µg/g) (µg/g) (µg/g) (µg/g) 0,143 10,596 92,33 0,042 88,26 51.81 Cá Khoai 0,166 6,269 85,44 0,028 82,79 15,16 Tôm Sú 0,000 15,494 91,37 0,051 81,42 42,37 Mực Từ kết nghiên cứu thu cho thấy, mẫu phân tích, hàm lượng dạng Se-Cyst lớn sau đến Se(IV) dạng DMDSe Hàm lượng dạng Se-Cyst DMDSe mẫu mực lớn nhất, tiếp đến cá Khoai nhỏ tơm Sú Trong đó, hàm lượng selen tổng cá Khoai lại lớn đến Mực nhỏ tôm Sú Tuy nhiên, mẫu Mực, hàm lượng selen tổng lớn lại khơng tìm thấy dạng Se(IV) mẫu Tóm lại : Phương pháp Von-Ampe hịa tan xác định số dạng selen có hoạt tính điện hóa như: Se(IV), Se-Cyst, DMDSe hải sản So với số phương pháp khác HPLC-ICP-MS, HPLC-HG-AFS phương pháp DPCSV khơng lợi không xác định đồng thời nhiều dạng selen bao gồm dạng hoạt động điện hóa (Se(IV), Se-Cyst) khơng hoạt động điện hóa (Se(VI), SeMet, SeEt, TMSe, selencystein v.v ) với giới hạn phát thấp cỡ ng/l Tuy nhiên, phương pháp DPCSV với giai ghi đoạn tiền xử lý kỹ thuật chiết lỏng-lỏng làm giàu dạng DMDSe vào pha hữu dùng dung mơi CH2Cl2, xác định dạng DMDSe mà phương pháp không xác định Để xác định dạng DMDSe số dạng selen dễ bay khác cần phải kết hợp sử dụng phương pháp GC-MS 23 KẾT LUẬN Đã nghiên cứu cách hệ thống, thiết lập điều kiện tối ưu (nền, nồng độ điện li, thông số máy) để xác định riêng rẽ dạng : selenit (Se(IV)), selencystin (Se-Cyst), dimetyl diselenua (DMDSe) đồng thời xác tin cậy hai dạng Se(IV) Se-Cyst phép ghi đo Von-Ampe hòa tan catot xung vi phân (DPCSV), đặc biệt dạng selen hữu chưa nghiên cứu Việt Nam Đã nghiên cứu, thiết lập điều kiện tối ưu xây dựng quy trình xác định xác hàm lượng selen tổng hải sản phương pháp DPCSV Độ tin cậy, độ xác quy trình đánh giá thơng qua việc phân tích mẫu chuẩn Quốc Tế DORM-2 Kết phân tích thu cho thấy giá trị tìm thấy giá trị chứng khác khơng đáng kể (4,36%) với độ thu hồi 91,64% Đã tiến hành đánh giá tính khoa học độ tin cậy phương pháp phân tích nghiên cứu thơng qua việc đánh giá độ lặp lại theo độ lệch chuẩn S hệ số biến động V 10 phép ghi đo lặp lại Tiến hành đánh giá độ xác giới hạn phát LOD, giới hạn định lượng LOQ theo qui tắc 3σ Những kết tính tốn thu cho thấy: - Cả độ lệch chuẩn (S) hệ số biến động (V) phương pháp nhỏ: SSe(IV) = 0,125; SSe-Cyst = 0,246; SDMDSe = 1,838 VSe(IV) = 0,484%; VSe-Cyst = 0,321%; VDMDSe = 1,298% - Cả giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ dạng nghiên cứu thấp: LODSe(IV) = 0,029 (ppb); LODSe-Cyst = 0,241 (ppb); LODDMDSe= 0,195 (ppb) LOQSe(IV) = 0,097 (ppb); LOQSe-Cyst = 0,803 (ppb); LOQDMDSe = 0,649 (ppb) - Khoảng tuyến tính hai vùng nồng độ 10-9M, 10-8M dạng Se(IV), Se-Cyst vùng 10-8M dạng DMDSe Đã nghiên cứu, thiết lập quy trình hồn chỉnh từ lấy mẫu, bảo quản mẫu, xử lý mẫu đến chiết, tách tối ưu dạng selen từ mẫu hải sản để bảo đảm toàn vẹn định lượng dạng selen mẫu Đã nghiên cứu thành công, đề xuất sơ đồ chiết tách xác định số dạng selen vô cơ, selen hữu mẫu hải sản có hoạt tính điện hóa phương pháp Von-Ampe hòa tan Đã áp dụng quy trình nghiên cứu thiết lập vào việc xác định hàm lượng selen tổng mẫu hải sản (Ngao, cá Khoai, tôm Sú, Mực, cá Thu) so sánh kết thu với phương pháp AAS không lửa Kết phân tích thu từ hai phương pháp phù hợp Đã áp dụng sơ đồ nghiên cứu xây dựng vào việc phân tích dạng selen (Se(IV), Se-Cyst, DMDSe) từ mẫu cá Khoai, tơm Sú Mực Những kết phân tích thu cho thấy hàm lượng dạng Se-Cyst lớn nhất, tiếp đến dạng Se(IV) nhỏ dạng DMDSe mẫu cá Khoai tôm Sú, khơng tìm thấy dạng Se(IV) mẫu Mực 24