VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: XÂY DựNG THƯờNG QUY ĐịNH LƯợNG CHOLINE TRONG SảN PHẩM DINH DƯỡNG CÔNG THứC CHO TRẻ EM BằNG SắC KÝ ION Giảng viên hướng dẫn : ThS.Lê Hồng Dũng Sinh viên thực hiên : Nguyễn Thị Hà My Lớp : 11 - 01 HÀ NỘI-2015 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC - KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: XÂY DựNG THƯờNG QUY ĐịNH LƯợNG CHOLINE TRONG SảN PHẩM DINH DƯỡNG CÔNG THứC CHO TRẻ EM BằNG SắC KÝ ION Giảng viên hướng dẫn : ThS.Lê Hồng Dũng Sinh viên thực hiên : Nguyễn Thị Hà My Lớp : 11 - 01 HÀ NỘI-2015 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Lời cảm ơn Được phân công khoa công nghệ sinh học Viện đại học Mở Hà Nội Và đồng ý giáo viên hướng dẫn ThS Lê Hồng Dũng, tham gia thực đề tài: “Xây dựng thường quy định lượng choline sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ em sắc ký ion.” Tơi xin tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến ThS Lê Hồng Dũng(trưởng phịng Labo Hố, Viện Dinh Dưỡng Quốc Gia) tận tình hướng dẫn tơi suốt q trình thực hồn thành khố luận Tơi xin chân thành cảm ơn q Thầy, Cô khoa Công nghệ sinh học ( Viện Đại Học Mở Hà Nội) tận tình truyền đạt kiến thức năm học tập Với vốn kiến thức tiếp thu q trình học khơng tảng cho q trình nghiên cứu khóa luận mà cịn hành trang q báu để tơi bước vào đời cách vững tự tin Tơi xin cảm ơn bảo tận tình tập thể cơ, chú, anh, chị phịng Labo hố cho phép tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành tốt khố luận Mặc dù có nhiều cố gắng để thực đề tài cách hoàn chỉnh Song buổi đầu làm quen với công tác nghiên cứu khoa học hạn chế mặt kiến thức kinh nghiệm nên khơng thể tránh khỏi sai sót Rất mong góp ý q thầy bạn Hà Nội, tháng 05 năm 2015 Sinh viên Nguyễn Thị Hà My Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My MỤC LỤC PHẦN TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệu choline: 1.2 Nguồn gốc choline: 1.3 Chức choline: 1.4 Nhu cầu khuyến nghị choline: 1.5 Vai trò choline thể: 1.6 Hậu thiếu choline: 1.7 Một số thực phẩm cung cấp choline: 1.8 Phương pháp phân tích choline: 10 PHẦN 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .12 2.1 Cách tiếp cận đề tài: 12 PHẦN III: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 15 3.1 Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích tối ưu để định lượng choline loại sản phẩm dinh dưỡng công thức: .15 3.2 Đánh giá yếu tố ảnh hưởng: 15 3.2.1 Thay đổi thông số liên quan đến trình chiết để xác định yếu tố ảnh hưởng: 15 3.2.1.2 Khảo sát thời gian chiết mẫu: giờ, giờ, giờ: .18 3.2.1.3 Khảo sát nồng độ HCl: 0,5N, 1N, 2N: .20 3.2.2 Ảnh hưởng thời gian chiết mẫu đến độ thu hồi choline, thời gian bảo quản dịch chiết đến đáp ứng peak sắc ký: 22 3.2.3 Thay đổi pha động khoảng: 6,4mM đến 8,0mM: 24 3.3 Thẩm định thông số quy trình phân tích theo quy định tiêu chuẩn AOAC: 25 3.3.1 Tính chọn lọc: 25 3.3.2 Đường chuẩn khoảng tuyến tính: .26 3.3.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ): .28 3.3.4 Độ lặp lại (SD) hệ số biến thiên (CV%): .29 3.3.5 Độ thu hồi: .32 3.4 Áp dụng quy trình dự kiến để chiết chạy thử HPLC với mẫu thử: 33 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .35 4.1 Kết luận: .35 4.2 Các tác động kết nghiên cứu: 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT • AOAC: Assciation of Analytical chemist- Hiệp hội nhà hố phân tích • HPLC: High Performance Liquid Chromatography_Sắc ký lỏng hiệu cao • LOD: Limit of Detection_Giới hạn phát • LOQ: Limit of Quantification_Giới hạn định lượng • QCVN: Quy chuẩn Vệt Nam • VSATTP: Vệ sinh an tồn thực phẩm Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Giới thiệu choline Hình Trao đổi chất choline Hình Sắc ký đồ khảo sát nhiệt độ 600C 17 Hình Sắc ký đồ khảo sát nhiệt độ 700C 17 Hình Sắc ký đồ khảo sát nhiệt độ 800C 18 Hình Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết mẫu .19 Hình Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết mẫu .19 Hình Sắc ký đồ khảo sát thời gian chiết mẫu .20 Hình Sắc ký đồ khảo sát nồng độ HCl 0,5N 21 Hình 10 Sắc ký đồ khảo sát nồng độ HCl 1N 21 Hình 11 Sắc ký đồ khảo sát nồng độ HCl 2N 22 Hình 12 Sắc ký đồ mẫu sữa 23 Hình 13 Sắc ký đồ mẫu sữa 23 Hình 14 Sắc ký đồ mẫu khoảng pha động 6,4mM 24 Hình 15 Sắc ký đồ mẫu khoảng pha động 8,0mM 25 Hình 16 Sắc ký đồ mẫu sữa khơng có choline .25 Hình 17 Sắc ký đồ mẫu sữa có choline 26 Hình 18 Hình biểu diễn phụ thuộc nồng độ từ 1ppm đến 100ppm vào diện tích peak 27 Hình 19 Sắc ký đồ mẫu sữa 30 Hình 20 Sắc ký đồ mẫu sữa 30 Hình 21 Sắc ký đồ mẫu sữa 10 31 Hình 22 Biểu đồ mẫu QC Chart 32 Hình 23 Sắc ký đồ mẫu sữa Grow Plus + 34 Hình 24 Sắc ký đồ mẫu sữa Dutch Lady .34 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Nhu cầu khuyến nghị choline Bảng Một số thực phẩm cung cấp choline 10 Bảng Chương trình chạy sắc ký Choline 13 Bảng Khảo sát nhiệt độ chiết mẫu khoảng nhiệt độ 600C, 700C, 800C 16 Bảng Khảo sát thời gian chiết mẫu: giờ, giờ, 18 Bảng Khảo sát nồng độ HCl: 0,5N, 1N, 2N 20 Bảng Ảnh hưởng thời gian chiết mẫu đến độ thu hồi choline, thời gian bảo quản dịch chiết đến đáp ứng peak sắc ký 22 Bảng Thay đổi pha động khoảng: 6,4mM đến 8,0mM 24 Bảng 9: Sự phụ thuộc nồng độ diện tích peak tương ứng .27 Bảng 10 Giá trị trung bình SD mẫu trắng 28 Bảng 11: Độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% 10 mẫu sữa .29 Bảng 12 Hàm lượng choline mẫu QC Chart 31 Bảng 13 Độ thu hồi phương pháp xác định choline .33 Bảng 14 Khảo sát mẫu sữa khác thị trường 33 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My MỞ ĐẦU Hầu hết bậc cha mẹ nắm rõ “cơ hội vàng” phát triển trí não bé năm đầu đời biết được, IQ bé cịn định từ thai kỳ Sự thiếu hụt dinh dưỡng giai đoạn dẫn tới nguy bé sinh non, nhẹ cân, chậm phát triển nhận thức, IQ thấp mắc bệnh mãn tính tuổi trưởng thành Vì thế, trẻ cần cung cấp chế độ dinh dưỡng đầy đủ từ giai đoạn quan trọng để có phát triển tốt Một chất dinh dưỡng cần thiết cho bà bầu để đảm bảo sức khoẻ cho mẹ phát triển tối ưu thai nhi choline Một số nghiên cứu rằng, mẹ nhận đủ choline mang bầu giúp cải thiện khả ghi nhớ học tập bé , ngồi ra, đủ choline bà bầu giúp bảo vệ bé sơ sinh khỏi dị tật ống thần kinh (giống đủ axit folic) Do đó, choline chất dinh dưỡng khơng thể thiếu mang thai, giúp hoàn thiện tế bào não thai nhi Một lợi ích khác bà bầu nhận đủ choline giúp mẹ giảm nguy ung thư vú giảm hàm lượng homocysteine (một loại amino axit nhiều homocysteine máu có liên quan tới tăng nguy bệnh tim, ung thư, giảm nhận thức) Ngoài ra, choline giúp mẹ bầu giảm căng thẳng, mệt mỏi thai kỳ Những nghiên cứu khác rằng, choline giúp cải thiện trí nhớ cho bà bầu Hàm lượng choline ngày 450mg cho phụ nữ mang thai 550mg cho phụ nữ sau sinh.[35] Choline không cần thiết cho bà mẹ mang thai cho bú mà chất dinh dưỡng quan trọng tất người Nó Uỷ ban Thực phẩm Dinh dưỡng Viện Y khoa (Mỹ) công nhận chất dinh dưỡng cần thiết vào năm 1998, cần bổ sung bữa ăn hàng ngày.[11] Chính choline chất dinh dưỡng thiết yếu nên tiến hành nghiên cứu đề tài: “Xây dựng thường quy định lượng choline sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ em sắc ký ion” với mục tiêu sau: Mục tiêu chung: Xây dựng thường quy định lượng choline sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ em sắc ký ion Mục tiêu cụ thể: gồm có ba mục tiêu: Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Khảo sát chọn lựa quy trình chiết phân tích sắc ký phù hợp để xác định hàm lượng choline sản phẩm dinh dưỡng công thức Thẩm định thơng số phân tích theo tiêu chuẩn AOAC Xác định hàm lượng choline số sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ em thịtrường Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Hình 15 Sắc ký đồ mẫu khoảng pha động 8,0mM 3.3 Thẩm định thơng số quy trình phân tích theo quy định tiêu chuẩn AOAC: 3.3.1 Tính chọn lọc: Để khảo sát tính chon lọc choline, chúng tơi tiến hành phân tích loại sữa: loại có choline loại khơng có choline Kết trình bày hình sau: Hình 16 Sắc ký đồ mẫu sữa khơng có choline 25 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Hình 17 Sắc ký đồ mẫu sữa có choline Nhận xét: Trên sắc đồ thu được, thời điểm ứng với thời gian lưu choline mẫu, sắc đồ mẫu sữa khơng có choline khơng xuất peak choline, cịn mẫu sữa có choline xuất thêm peak choline Như vậy, choline không làm ảnh hưởng đến mẫu Vậy phương pháp có tính chọn lọc cao 3.3.2 Đường chuẩn khoảng tuyến tính: Chúng tơi tiến hành khảo sát phụ thuộc diện tích peak sắc ký vào nồng độ choline để lập đường chuẩn Từ dung dịch chuẩn gốc 200ppm chúng tơi pha lỗng 2; 4;5; 10; 20 lần dung môi methanosulfunic acid MSA 8,0mM thành dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ khác Tiến hành bơm vào hệ thống HPLC theo điều kiện tối ưu hoá Kết khảo sát thông số biểu diễn phụ thuộc nồng độ choline diện peak tương ứng thể bảng 26 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My STT Nồng độ (ppm) Diện tích peak 1 28093 141631 10 278331 20 585838 50 1454893 100 2867468 Bảng 9: Sự phụ thuộc nồng độ diện tích peak tương ứng Từ kết thu bảng biểu diễn phụ thuộc nồng độ choline diện tích peak tương ứng 3500000 y = 28768x R² = 0.999 3000000 2500000 2000000 1500000 1000000 500000 0 20 40 60 80 100 120 Hình 18 Hình biểu diễn phụ thuộc nồng độ từ 1ppm đến 100ppm vào diện tích peak Nhận xét: Trong khoảng nồng độ từ 1ppm đến 100ppm, tín hiệu choline phụ thuộc tuyến tính với nồng độ dung dịch choline tương ứng Để đánh giá mức độ tương quan tuyến tính đường chuẩn, chúng tơi đánh giá độ tuyến tính đường chuẩn, kết cho thấy giá trị R2=0,999 chứng tỏ áp dụng phương trình tuyến tính bậc để xác định hàm lượng choline mẫu phân tích Vậy khoảng tuyến tính choline phân tích HPLC với detector từ 1(ppm) đến 100(ppm) 27 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My 3.3.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ): LOD LOQ xác định theo công thức: LOD=Xm+3xSD LOQ=Xm+10xSD Trong đó: Xm: Giá trị trung bình 10 mẫu trắng (ppm) SD: Độ lệch chuẩn hàm lượng 10 mẫu trắng Giá trị LOD tính tốn phải thoả mãn điều kiện sau: (*) - LODXmin Xmin: Nồng độ đầu đường chuẩn [ 1ppm,(3.3.2)] Để xác định giới hạn phát giới hạn định lượng phương pháp, tiến hành phân tích mẫu thuốc thử trắng quy trình Kết thu thể bảng 10 sau: STT Mẫu blank Diện tích peak Nồng độ (ppm) Blank 22231 0.796 Blank 21900 0.784 Blank 24793 0.888 Blank 21064 0.754 Blank 21431 0.767 Trung bình (Xm) 0,798 SD 0,053 Bảng 10 Giá trị trung bình SD mẫu trắng Như vậy, giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp là: LOD=Xm+ 3xSD= 0,798+ 3x0,053= 0,957 (ppm) LOQ=Xm+ 10xSD= 0,798+10x0,053= 1,328 (ppm) Giá trị LOD LOQ tính tốn thoả mãn điều kiện (*) Vậy phương pháp xác định choline HPLC có giới hạn phát 0,957 (ppm) giới hạn định lượng 1,328 (ppm) 28 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My 3.3.4 Độ lặp lại (SD) hệ số biến thiên (CV%): Độ lặp lại (SD) diễn tả độ xác quy trình phân tích điều kiện thí nghiệm Một phương pháp phân tích tốt ngồi việc có sai số nhỏ cịn u cầu có độ lặp lại cao Theo lý thuyết thống kê, đại lượng đặc trưng cho độ lặp lại độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% (RSD) tính theo cơng thức sau: SD=ට ∑(௫೔ି௫̅ )మ ௡ିଵ Trong đó: CV%=RSD%= ௌ஽ ௫̅ x 100 n: số lần thí nghiệm xi: giá trị tính lần thử nghệm thứ “i” ‫ ̅ݔ‬: giá trị trung bình lần thử nghiệm Để thực xác định độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV%, tiến hành phân tích 10 mẫu lặp lại phương pháp Độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% biểu thị bảng 11 đây: STT 10 Mẫu Hàm lượng choline mẫu sữa(mg/100ml) Mẫu sữa 5,45 Mẫu sữa 5,94 Mẫu sữa 5,45 Mẫu sữa 5,09 Mẫu sữa 6,10 Mẫu sữa 4,54 Mẫu sữa 5,75 Mẫu sữa 5,50 Mẫu sữa 5,77 Mẫu sữa 10 4,89 Trung bình (x) 5,45 SD 0,49 CV% 8,92 Bảng 11: Độ lệch chuẩn SD hệ số biến thiên CV% 10 mẫu sữa Nhận xét: Độ lặp lại phân tích 10 mẫu choline 8,92% Như độ lặp lại đạt yêu cầu tiêu chuẩn AOAC 29 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Hình 19 Sắc ký đồ mẫu sữa Hình 20 Sắc ký đồ mẫu sữa 30 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Hình 21 Sắc ký đồ mẫu sữa 10 Dưới đây, tiến hành phân tích lặp lại số mẫu QC, xây dựng đồ thị choline chuẩn sau: QC CHART_ CHOLINE: STT Hàm lượng choline (mg/kg) Ngày phân tích 10 11 12 13 1082,5 1161,2 1060,7 1161,5 1057,0 1109,0 1081,3 1077,2 1076,9 1108,9 1021,1 1101,0 1127,0 06/05/2015 Người phân tích 10/05/2015 Nguyễn Thị Hà My 12/05/2015 15/05/2015 Bảng 12 Hàm lượng choline mẫu QC Chart 31 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My 1250 1200 1150 1100 1050 1000 950 10 20 30 40 50 Hình 22 Biểu đồ mẫu QC Chart 3.3.5 Độ thu hồi: Để khẳng định tính hiệu phương pháp chiết cần đánh giá độ thu hồi dựa kỹ thuật thêm chuẩn Độ thu hồi tính tốn dựa thí nghiệm thêm chuẩn vào mẫu biết trước hàm lượng Tiến hành phân tích nồng độ khác ( 10ppm, 50ppm, 100ppm) Thí nghiệm tiến hành với điều kiện hoá chất, thuốc thử thiết bị để đánh giá độ xác phương pháp việc xác định hàm lượng choline mẫu Độ thu hồi phương pháp tính theo cơng thức sau: R%= ஼ ᇲ ଵ଴଴ ஼ Trong đó: C: Hàm lượng chuẩn thêm vào (ppm) C’: Hàm lượng choline tính (ppm) 32 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My STT Mẫu sữa C (ppm) C’ (ppm) R% Sữa tươi Mộc Châu + TC 01 135 131,490 97,4 Sữa tươi Mộc Châu + TC 02 135 145,53 107,8 Sữa tươi Mộc Châu+ TC 03 135 138,105 102,3 Sữa tươi Mộc Châu+ TC 04 135 140,535 104,1 Sữa tươi Mộc Châu+ TC 05 135 134,865 99,9 Bảng 13 Độ thu hồi phương pháp xác định choline Nhận xét:Từ kết bảng 13 cho thấy độ thu hồi choline mức thêm chuẩn 135(ppm) từ 97,4% đến 107,8% Như vậy, độ thu hồi đạt yêu cầu AOAC 3.4 Áp dụng quy trình dự kiến để chiết chạy thử HPLC với mẫu thử: Chúng chọn mẫu sữa khác thị trường để phân tích quy trình quy trình dự kiến ( 2.4.2) Kết thu thể bảng 14 đây: STT Mẫu sữa Hàm lượng choline ghi Hàm lượng choline tính nhãn (mg/100g) mẫu sữa ( mg/100g) Dielac Alpha 110 110 Gold Nutri IQ 123 62 59,8 Nutri IQ 456 75 74,5 Grow Plus + Không có choline Khơng có choline Dutch Lady 84 85,1 Bảng 14 Khảo sát mẫu sữa khác thị trường 33 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My Hình 23 Sắc ký đồ mẫu sữa Grow Plus + Hình 24 Sắc ký đồ mẫu sữa Dutch Lady 34 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận: Đã nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích định lượng choline sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ em sắc ký ion Phương pháp thẩm định cho kết tin cậy độ xác với thơng số sau: - Đã khảo sát lựa chọn thơng số tối ưu cho q trình sắc ký: cộtICPacTMCation M/D: 3,9 x150mm (của hãng Waters, Mỹ), pha động dung môi methanosulfonic acid MSA 8,0 mM, chế độ chạy chế độ Isocratic (chế độ đẳng dòng) - Đã khảo sát, đánh giá độ tin cậy phương pháp thơng qua đại lượng: khoảng tuyến tính từ 1(ppm) đến 100(ppm); giới hạn phát 0,957(ppm); giới hạn định lượng 1,328(ppm); hệ số biến thiên CV% 8,92%; độ thu hồi - Đã đánh giá mức độ bền vững choline, thời gian chiết mẫu thời gian bảo quản dịch chiết không làm ảnh hưởng đến độ thu hồi choline mẫu 4.2 Các tác động kết nghiên cứu: - Bồi dưỡng, đào tạo cán khoa học công nghệ: Nâng cao lực nghiên cứu lĩnh vực khoa học thực phẩm cho cán - Đối với lĩnh vực khoa học có liên quan:VSATTP Áp dụng kết nghiên cứu để đánh giá giám sát hàm lượng choline loại sản phẩm dinh dưỡng cho trẻ em thị trường phục vụ quản lí nhà nước chất lượng an toàn vệ sinh thực phẩm Kết nghiên cứu tiếp tục mở rộng để phân tích xác định hàm lượng choline đối tượng thực phẩm khác, phục vụ nghiên cứu dinh dưỡng phát triển khoa học thực phẩm - Đối với kinh tế- xã hội: Quy trình xây dựng Viện Dinh Dưỡng áp dụng nghiên cứu dinh dưỡng khoa học thực phẩm Viện, giảm chi phí gửi mẫu phân tích bên ngồi, nâng cao lực kiểm nghiệm cho cán nghiên cứu Viện 35 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt: Bộ y tế (2012) Quy chuẩn quốc gia sản phẩm dinh dưỡng cơng thức với mục đích ăn bổ sung cho trẻ từ đến 36 tháng tuổi QCVN 11-3/2012 Bộ y tế (2012) Quy chuẩn quốc gia sản phẩm dinh dưỡng cơng thức với mục đích y tế đặc biệt cho trẻ đến 12 tháng tuổi QCVN 11-2/2012 Bộ y tế (2012) Quy chuẩn quốc gia sản phẩm dinh dưỡng công thức cho trẻ đến 12 tháng tuổi QCVN 11-1/2012 Tài liệu Tiếng Anh: Jane Higdon, "Choline", Micronutrient Information Center, Linus Pauling Institute,Oregon State University 5.Jump up to:a b c d e f g Zeisel SH; da Costa KA (November 2009) "Choline: an essential nutrient for public health" Nutrition Reviews 67 (11): 615–23 6.Jump up^ "Choline, PDRHealth 7.Jump up^ "Choline" (An interview with Steven Zeisel, Editor-in-Chief of the Journal of Nutritional Biochemistry), Radio National Health Report with Norman Swan, Monday 17 April 2000 8.Jump up^ "[1]" Dietary Reference Intakes for Thiamin, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B12, Pantothenic Acid, Biotin, and Choline (1998), Institute of Medicine Jump up to:a b Zeisel, Steven H (2012) "A Brief History of Choline" Annals of Nutrition and Metabolism 61 (3): 254–258 10 Jump up^ Boldyrev, A A (14 April 2012) "Carnosine: New concept for the function of an old molecule" Biochemistry (Moscow) 77 (4): 313–326 11 Andrew P Abbott, Glen Capper, David L Davies, Raymond K Rasheed, Vasuki Tambyrajah (2003) "Novel solvent properties of choline chloride/urea mixtures" Chemical Communications (1): 70–71 36 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My 12 "The influence of lecithin on plasma choline concentrations in triathletes and adolescent runners during exercise" European journal of applied physiology and occupational physiology 67 (1): 87–91 13 Klatskin, Gerald, Willard A Krehl, and Harold O Conn (1954) "The effect of alcohol on the choline requirement I Changes in the rat's liver following prolonged ingestion of alcohol" The Journal of experimental medicine 100 (6): 605–614 14 Bidulescu A, Chambless LE, Siega-Riz AM, Zeisel SH, Heiss G (2009) "Repeatability and measurement error in the assessment of choline and betaine dietary intake: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) study" Nutrition Journal (1): 14 15 "Micronutrient Information Center: Choline" Linus Pauling Institute 16 Jump up^ Shaw GM, Carmichael SL, Yang W, Selvin S, Schaffer DM (July 2004) "Periconceptional dietary intake of choline and betaine and neural tube defects in offspring" American Journal of Epidemiology 160 (2): 102–9 17 Jump up^ Xu X; Gammon MD; Zeisel SH et al (November 2009) "High intakes of choline and betaine reduce breast cancer mortality in a population-based study" The FASEB Journal23 (11): 4022–8 18 Jump up^ Xu X; Gammon MD; Zeisel SH et al (June 2008) "Choline metabolism and risk of breast cancer in a population-based study" The FASEB Journal 22 (6): 2045–52 19 Jump up^ Cho E, Holmes M, Hankinson SE, Willett WC (December 2007) "Nutrients involved in one-carbon metabolism and risk of breast cancer among premenopausal women" Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention 16 (12): 2787–90 20 Jump up^ Cho E, Holmes MD, Hankinson SE, Willett WC (February 2010) "Choline and betaine intake and risk of breast cancer among post-menopausal women" British Journal of Cancer 102 (3): 489–94 21 Jump up^ Detopoulou P, Panagiotakos DB, Antonopoulou S, Pitsavos C, Stefanadis C (February 2008) "Dietary choline and betaine intakes in relation to 37 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My concentrations of inflammatory markers in healthy adults: the ATTICA study" The American Journal of Clinical Nutrition87 (2): 424–30 22 Jump up^ Das S, Gupta K, Gupta A, Gaur SN (March 2005) "Comparison of the efficacy of inhaled budesonide and oral choline in patients with allergic rhinitis" Saudi Medical Journal 26 (3): 421–4 23 Holmes-McNarry MQ, Cheng WL, Mar MH, Fussell S, Zeisel SH Choline and choline esters in human and rat milk in infant formulas Am J Clin Nutr 1996; 64:572– 24 Choline status in newborns, infants, children, breast-feeding women, breast-fed infants, and human breast milk Journal of Nutritional Biochemsitry 16 (2005) 489– 499 25 James AR Hormone Regulation of Choline Uptake and Incorporation in Mouse mammary Gland Explants Exp Biol Med (Maywood) 2004 Apr;229(4):323–6 26 Chiao-Kang et al Uptake of choline by rat mammary-gland epithelial cells Biochem J (1988) 254, 33–38 27 Drane DL, Logemann JA A critical evaluation of the evidence on the association between type of infant feeding and cognitive development Paediatric and Perinatal Epidemiology 2000, 14, 349–356 28 MARK LAIKHTMAN and JEFREY S ROHRER (1999) Determination of Choline in Infant Formula by Ion Chromatography JOURNAL OF AOAC INTERNATION VOL 82, NO 5, 1157- 1162 29 Pa° l I Holm, Per Magne Ueland, Gry Kvalheim, and Ernst A Lien (2003) Determination of Choline, Betaine, and Dimethylglycine in Plasma by a HighThroughput Method Based on Normal-PhaseChromatography–Tandem Mass Spectrometry Clinical Chemistry 49:2, p286–294 30 Lillian Chen, Kassandra Oates, Brian De Borba, and Jeffrey Rohrer (2012) Determination of Choline in Infant Formula and Other Food Samples by IC Thermo Scientific Application update 189 38 Khóa luận Tốt nghiệp 2015 Nguyễn Thị Hà My 31 AOAC Official Method 999.14 (2012) Choline in Infant Formula and Milk Enzymatic Colorimetric Method First Action 1999 32 AOAC Official Method 2012.18 (2012) Choline in Infant Formulaand Adult/Pediatric Nutritional Formula UHPLC-MS/MS First Action 2012 33 AOAC Official Method 2012.20 (2012) Choline in Infant Formula and Adult Nutritionals Ion Chromatography and Suppressed Conductivity First Action 2012 34 AOAC Official methods of Analysis (2012) Appendix F: Guidelines for standard method performance requirements 35 Steven H Zeisel (2010) Choline Advance in nutrition Vol 1: 46-48 39