Đang tải... (xem toàn văn)
Xác định tỉ lệ nhiễm và phân bố genotype human papillomavirus (HPV) bằng kĩ thuật PCR elisa trong các mẫu nghiên cứu tại phòng xét nghiệm công ty nam khoa biotek
1 CHƢƠNG MỞ ĐẦU 1.1 Giới thiệu Human Papillomavirus (HPV) tác nhân thường gặp nhiễm trùng lây truyền qua đường tình dục nguyên nhân quan trọng dẫn tới ung thư cổ tử cung (UTCTC), loại ung thư đứng hàng thứ hai loại ung thư nữ giới sau ung thư vú Là tác nhân gây tử vong thứ năm giới nữ giới Hàng năm giới, ước tính có khoảng 529.000 trường hợp mắc UTCTC, tử vong khoảng 275.000 trường hợp 85% tổng số trường hợp bệnh gặp nước phát triển Cùng với tăng nhanh tỷ lệ nhiễm HPV cộng đồng, UTCTC thực trở thành gánh nặng bệnh tật toàn cầu, gây ảnh hưởng nặng nề đến sức khỏe tâm lý nữ giới HPV thuộc họ papillomaviridea với 200 genotype khác vật liệu di truyền xác định khoảng 100 genotype, khoảng 40 genotype HPV xác định niêm mạc đường sinh dục người [15], [31] Tám genotype HPV (HPV-16, -18, -31, -33, -35, -45, -52, -58) thống kê genotype phổ biến nhất, có liên quan tới 90% trường hợp UTCTC toàn giới riêng HPV -16, -18 gặp 70% trường hợp [16],[30] HPV khơng có mối liên quan mật thiết với UTCTC mà cịn có vai trị quan trọng hình thành ung thư hậu môn, âm hộ, âm đạo, dương vật, ung thư phổi số ung thư vùng hầu họng Đồng thời, HPV nguyên nhân nhiều bệnh cảnh lâm sàng da niêm mạc hạt cơm, sùi mào gà sinh dụchậu môn, u nhú quản trẻ sơ sinh Ở Việt Nam, ung thư cổ tử cung loại ung thư sinh dục phổ biến với 53.5% ung thư ác tính nữ giới Theo thống kê Tổ chức Y tế giới năm 2010, UTCTC loại ung thư chiếm tỷ lệ cao nữ lứa tuổi 15 -44, với 6000 ca nhiễm (tỷ lệ: 11,7 100,000 phụ nữ) tử vong 3000 trường hợp năm [40] Điều đặc biệt quan tâm phần lớn trường hợp UTCTC thường phát giai đoạn muộn, trình diễn tiến từ nhiễm vi rút đến ung thư thường trải qua thời gian dài Từ đặt vấn đề chuẩn đoán phát sớm HPV, sàng lọc người có nguy mắc UTCTC nhằm giúp trình tiên lượng điều trị hiệu tổn thương tiền ung thư ung thư giai đoạn sớm Với mong muốn góp phần tìm hiểu phân bố HPV cung cấp thơng tin chuẩn đốn phát sớm điều trị UTCTC phòng chống UTCTC cộng đồng Đồng thời đưa kĩ thuật sinh học phân tử đại cho kết xác phát HPV đến gần với bệnh nhân Đề tài “Xác định tỉ lệ nhiễm phân bố genotype Human papillomavirus (HPV) kĩ thuật PCR-ELISA mẫu nghiên cứu phịng xét nghiệm cơng ty Nam Khoa Biotek ” lựa chọn thực đáp ứng nhu cầu từ thực tế 1.2 Mục đích Nhằm góp phần nhỏ vào hiểu biết chung vấn đề xâm nhiễm HPV phòng chống UTCTC phụ nữ Việt Nam đề tài thực với mục đích chính: Xác định tỉ lệ nhiễm HPV, đặc biệt mẫu xét nghiệm xác định nghi ngờ viêm cổ tử cung Xác định phân bố tỉ lệ genotype phổ biến trường hợp dương tính HPV 1.3 Nội dung nghiên cứu ‒ Thực xét nghiệm sàng lọc nhằm xác định trường hợp dương tính với HPV việc li trích DNA tổng số thực phản ứng PCR khuếch đại trình tự đặc trưng HPV ‒ Điện di kiểm tra kết ‒ Thực PCR khuếch đại vịng trình tự đặc trưng genotype HPV Sử dụng kĩ thuật ELISA với probe phủ sẵn để xác định genotype HPV phổ biến chấp thuận ‒ Thu nhận thông tin xác định tỉ lệ nhiễm chung, phân bố genotype CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm chung Human Papillomavirus (HPV) 2.1.1 Hình thái cấu trúc HPV Hình ảnh thành phần virus qua kính hiển vi điện tử Strauss đồng công bố năm 1979 [38] HPV nhóm vi rút có kích thước nhỏ, họ Papillomavirideae, khơng vỏ, đối xứng xoắn ốc HPV có kích thước khoảng 5055 nm, có DNA dạng vịng, mạch đơi, liên kết với protein giống Histon Vỏ capsid hình thành từ 72 đơn vị capsumere Mỗi đơn vị capsid gồm pentamer protein cấu trúc L1 kết hợp với protein L2 (protein thành phần kháng nguyên sử dụng phản ứng miễn dịch đặc hiệu) L2 protein L1 capsomer (Pentamer protein L1) DNA hai chuỗi, hình Hình 2.1 Hạt vi rút HPVs Cả hai protein cấu trúc vi rút tự mã hóa: Protein capsid (L1) có kích thước khoảng 55kd chiếm khoảng 80% tổng số protein vi rút Protein capsid phụ (L2) có kích thước khoảng 70kd [15] 2.1.2 Đặc điểm cấu trúc chức gen HPV 2.1.2.1 Đặc điểm cấu trúc HPV có vật liệu di truyền DNA, mạch đôi không hồn chỉnh, tồn dạng siêu xoắn hình vịng (circular ds-DNA) Bộ gen vi rút chiếm khoảng 12% trọng lượng hạt vi rút, có chiều dài khoảng 7800 đến 8000 cặp base (bp) guanosine cytosine chiếm 42% DNA vi rút liên kết với histone tế bào chủ tạo thành cấu trúc phức hợp giống chromatin (Chromatin-like complex) Cấu trúc gen nhóm Papillomavirus nói chung tương tự lồi vật chủ tất khung đọc mở ORF (Open Reading Frame) vi rút chuỗi DNA Điều có nghĩa tất gen vi rút nằm mạch DNA trình phiên mã xảy mạch Bộ gen HPV có 10 khung đọc mở ORF chia làm hai loại khung đọc mở sớm khung đọc mở muộn tùy theo vị trí ORF gen Hình 2.2 Cấu trúc gen Papillomavirus HPV 16 Bộ gen HPV chia làm ba vùng quan trọng [28]: Vùng điều hòa thượng nguồn URR (Upstream Regulatory Region) hay gọi vùng điều hòa dài LCR (Long Control Region), chứa DNA khơng mã hóa, có chức điều hịa trình chép DNA trình phiên mã Đây vùng biến động nhất, chiếm khoảng 10% chiều dài gen, tương đương 800 đến 1000 bp tùy theo genotype khác Sự điều hòa biểu gene cần cho tồn virus phiên mã hoạt động chu trình tan xảy chủ yếu vùng Trình tự vùng URR bao gồm: o Trình tự tăng cường: nơi gắn nhân tố phiên mã AP-1, NF1, otc 1, TEF1, TEF2, YY1… o Promoter cho trình phiên mã tổng hợp RNA (P97 HPV16 P105 HPV18) Promoter bao gồm cấu trúc TATA vùng khởi đầu phiên mã o Điểm khởi đầu chép ORI, tiểu phần kích hoạt số chuỗi gen câm (Silencing gene)… Vùng gen sớm (Early region): Gồm gen, ký hiệu E1, E2, E4, E5, E6, E7 khung đọc mở ORF Sản phẩm vùng gen protein chức cần cho trình nhân lên khả gây bệnh virus Các gene E6 E7 xem nguyên nhân dẫn đến tính ác tính tế bào ung thư cổ tử cung nhiễm HPV Vùng gen muộn (Late region): Gồm gen tổng hợp protein L1 L2, protein cấu trúc capsid vi rút Đây vùng gen mã hóa muộn hơn, nên vùng chứa gen L1 gen L2 gọi vùng chép muộn Hình 2.3 Cấu trúc gen HPV dạng mạch thẳng 2.1.2.2 Chức gen sản phẩm gen HPV Chức gen E1 HPV vi rút sử dụng hoàn toàn thành phần tế bào chủ để chép DNA Gen E1 hai vùng gen bảo tồn HPV (cùng với L1) mã hóa protein chức có vai trị cần thiết cho q trình chép DNA plasmid Gen E1 gắn vào vị trí khởi đầu trình nhân lên (ori), thực trình chia tách DNA (helicase) giúp chuỗi gen vi rút duỗi trình chép Hoạt động tháo xoắn gen E1 không phụ thuộc ATP Tại thể sống, gen E1 E2 đóng vai trị quan trọng điều chỉnh q trình nhân lên vi rút Gen E2 cịn có khả gắn với chuỗi DNA đặc hiệu (vị trí gắn E2 - E2BSs) protein E1 Tuy nhiên, hai chức E2 gen E1 điều chỉnh Trong q trình chép vi rút, có nhiều thành phần tế bào phụ thuộc gen E1 DNA polymerase, chaperone protein, histone H1 yếu tố chép A gen E1 có khả trực tiếp thúc đẩy thành phần Chức gen E2 Khung đọc mở E2 mã hóa từ 2-3 protein khác nhau, tất yếu tố phiên mã Chúng có ảnh hưởng khác đến biểu gene virus thực điều hòa gene cách tạo dimer vị trí thích hợp Trong nhiều trường hợp, protein E2 có khả ức chế phiên mã protein E6 E7 Protein E2 HPV-16 HPV-18 có chức yếu tố hoạt hóa phiên mã tế bào sừng cổ tử cung người Sự gene E2 thường thấy sinh thiết ung thư cổ tử cung dòng tế bào loại ung thư này, cho thấy đoạn gene E2 tạo thuận lợi cho chuyển sang trạng thái ác tính Khơng đột biến khung đọc mở E2 mà đột biến vùng DNA gắn E2 vùng URR dẫn đến tăng cường hoạt động gây ung thư HPV-16 Trong trình phát triển ung thư, đứt gãy E2 tượng xảy muộn tổn thương tiền ác tính khơng có tượng Ngồi chức hoạt hóa phiên mã, E2 tương tác với E1 làm tăng cường chép DNA virus Các protein làm cho E2 dễ dàng gắn với điểm khởi đầu chép Chức gen E1^E4 Giống protein khác HPV, protein điều hòa E1^E4 sản phẩm tạo từ mRNA kết nối vòng mở dịch chuyển gen E1 E4, có chức giúp cho q trình trưởng thành phóng thích vi rút khỏi tế bào mà không làm tan tế bào chủ Chức gen E5 Gen E5 mã hóa cho sản phẩm protein E5, protein chuỗi đôi kỵ nước, kích thước nhỏ nằm phần màng Golgi lưới nguyên sinh chất tế bào, cần thiết cho trình xâm nhập tồn vi rút tế bào chủ Protein E5 yếu tố tác động giai đoạn đầu trình xâm nhiễm, tạo phức hợp với thụ thể yếu tố kích thích tăng trưởng biệt hóa tế bào đồng thời giúp cho virus lẩn trốn đáp ứng miễn dịch chủ thể Mặt khác, protein E5 cịn có vai trị việc ngăn chặn chết theo chương trình (apoptosis) tế bào có sai hỏng vi rút gây Khả E5 gây nên biến đổi tế bào gen E5 có khả hoạt hóa receptor yếu tố phát triển ức chế ATPase không bào Chức gen E6 Gen E6 mã hóa cho protein E6, protein gồm khoảng 150 acid amin hình thành cấu trúc Cys-X-X-Cys gắn với kẽm (Zn) điều hịa, mã hóa cho khung đọc mở ORF chuỗi gen HPV protein gây ung thư HPV Ba chức gen E6 ba chức nguy hiểm tế bào vật chủ: Protein E6 HPV nhóm “nguy cao” liên kết khơng liên kết với protein E7 gây kích thích tế bào chủ phân chia mạnh mẽ phân chia mãi, gây tế bào hóa tế bào Protein E6 có khả gây sản cách ức chế chu kỳ nghỉ vòng tế bào phá hủy DNA gây thúc đẩy tiến triển tế bào Khả gây ung thư E6 điều hòa khả hoạt động giá đỡ điều hòa tương tác protein với protein Một số tương tác protein mà mã hóa chuỗi E6 gồm: p53, protein liên quan đến E6 (E6AP), protein gắn với E6 (E6BP), c-myc, p300/CBP, paxillin, protein PDZ, yếu tố điều hòa interferon đồng phần Bcl-2 (Bak) Tương tác với p53 thông qua liên kết E6 với E6AP liên kết ligand, tạo thoái triển p53 (yếu tố giải mã ức chế ung thư, có vai trị điều hịa hoạt động ức chế tổng hợp DNA thơng qua chu kỳ nghỉ vịng tế bào) Bình thường, có tín hiệu phá hủy tế bào có nhân lên sai DNA, gen ức chế ung thư p53 hoạt hóa chuyển vịng tế bào sang chu kỳ nghỉ gây chết tế bào theo chương trình (apotosis) thơng qua hoạt động giải mã gen Hơn nữa, E6 cịn có khả gắn kết với protein PDZ dẫn đến thoái triển protein PDZ, protein bảo tồn trình tiến hóa, cần thiết cho phát triển, kết dính, tăng sinh, biết hóa trì chu kỳ sống tế bào Liên kết với gen ras q trình hóa tế bào kích thích phát triển NIH 3T3, đồng thời hoạt hóa promoter E2 Adenovirus Chức gen E7 Protein E7 mã hóa từ E7 gồm 98 acid amin, nhỏ protein E6 có vai trị khơng phần quan trọng chế gây ung thư tế bào chủ Hoạt động chức E7 chế gây ung thư (1) protein E7 có vùng bảo tồn đầu tận N có domain gắn Kẽm đầu C giúp liên kết chặt chẽ với E6, hỗ trợ chế gây hóa tế bào; (2) E7 chứa motif gắn protein pocket (LXCXE) giúp E7 gắn kết với gen ức chế khối u (như pRb) gắn với protein pocket khác p107 p130 làm giải phóng số lượng lớn yếu tố phiên mã E2F tự do, kích thích q trình phiên mã, kéo dài tuổi thọ tế bào Protein E7 HPV nhóm “nguy cao” nhóm “nguy thấp” có khả gắn kết với protein pocket Tuy nhiên, ưu tiên gắn kết protein E7 với protein pocket khác hai nhóm HPV Ái lực liên kết type “nguy cao” cao gấp 10 lần so với type “nguy thấp” Chức gen L1 L2 L1 L2 hai vùng gen cấu trúc cịn gọi vùng gen mã hóa muộn cho protein vỏ capsid phụ Trên kính hiển vi điện tử, vỏ capsid HPV chứa 72 capsomere có cấu trúc vòng bảy cạnh hàng rào dạng lưới icosahedral T=7 với kích thước đường kính khoảng 55nm Gen L1 vùng bảo tồn vi rút dùng để phát phân loại Papillomavirus Thành phần vỏ capsid vi rút gồm protein vỏ capsid L1, capsid phụ L2 Khi gen L1 bộc lộ, hình thành hạt giả vi rút phân tử giống vi rút (Virus like particles, VLPs), thành phần khó phân biệt với vi rút thực đóng vai trò định sản xuất vi rút, sản xuất vắc xin Nếu L2 bộc lộ với L1, góp phần tạo VLPs, L2 khơng cần thiết cho việc hình thành vỏ capsid L1 L2 bộc lộ đặc hiệu hầu hết lớp tế bào sừng (nơi giải phóng vi rút hình thành) Mặc dù L2 khơng đặc biệt cần thiết cho việc hình thành vỏ capsid có vai trò quan trọng chu kỳ sống q trình xâm nhập vi rút L2 có khả tạo gắn kết receptor bề mặt tế bào với actin với PML, cần thiết cho giai đoạn đầu trình xâm nhiễm 2.2 Phân loại HPV 2.2.1 Lịch sử phân loại Ban đầu, Papillomavirus xếp nhóm với Polyomavirus thuộc họ Papovaviridae Tên họ Papovaviridae đặt theo hai chữ đầu vi rút phân loại họ vi rút này: rabbit papillomavirus, mouse polyomavirus simian vacuolating virus (SV40) [28] Đặc điểm chung vi rút họ Papovaviridae có kích thước nhỏ, khơng vỏ bọc, capsid hai mươi mặt DNA gồm hai chuỗi tồn dạng siêu xoắn hình vịng Tuy nhiên, so sánh kích thước, Papillomavirus (khoảng 55nm) có kích thước lớn so với Polyomavirus (khoảng 45nm) Dựa khác biệt này, họ Papovaviridae chia làm hai nhóm Polyomavirus (bao gồm Polyomavirus SV40) Papillomavirus [28] Hơn nữa, nghiên cứu sinh học chức sinh học phân tử cho thấy khác biệt rõ ràng đặc điểm di truyền tính chất sinh vật học hai nhóm vi rút, từ cho phép phân loại Papillomavirus cách hồn chỉnh tách hồn tồn riêng biệt khỏi nhóm Polyomavirus Như vậy, tất Papillomavirus nhóm nhất, thuộc họ Papillomaviridae [28], [30], [35] 2.2.2 Phân loại HPV 10 Phân loại theo tương đồng trình tự nucleotide gen E6, E7, L1 Theo Hội phân loại vi rút học quốc tế (International Committee on the Taxonomy of Viruses), họ Papillomavirideae gồm 15 loại khác (Ký hiệu: Alpha-, Beta-, Gamma-, Delta-, Epsilon-, Zeta-, Theta-, Iota-, Kappa-, Lambda-, Mu-, Nu-, Xi-, Omikron-, Pi-papillomavirus) [19] HPV papillomavirus họ Papillomavirideae gây bệnh người vi rút có nhiều genotype Gần 200 genotype biết đến, xác định khoảng 100 genotype bao gồm khoảng 40 type có khả lây truyên qua đường sinh dục Mỗi genotype gồm phân type khác (subtype) phân type chia thành biến thể (variant) gọi chủng vi rút [30], [31], [34] Việc xác định genotype HPV không dựa vào huyết với loại vi rút khác (vi rút gây viêm gan, HIV …) mà dựa mức độ giống thành phần nucleotide mức độ tương đồng thành phần acid amin chuỗi gen E6, E7 L1 đó, type HPV thường gọi genotype [19] Khi genotype HPV có 10% gen vùng E6, E7, L1 khác với genotype biết trước xác định genotype Một subtype genotype xác định phân nhóm gen chúng khác 2-10% so với phân nhóm khác genotype biết Nếu subtype có vùng mã hóa khác 1-2% khác 5% vùng khơng mã hóa gọi biến thể [19] 47 Hình 4.6 Kết thực ELISA để xác định genotype HPV ngày 14/8/2014 Mẫu sau phản ứng PCR đƣợc thực phản ứng lai với probe đặc hiệu đƣợc phủ plate, mẫu thực với plate A B Plate A có giếng tƣơng tự genotype HPV xác định A (6), B (11), C (16), D (18), E (31), F (33), G (35), H (39) Plate B tƣơng ứng genotype A (45), B (51), C (52), D (56), E (58), F (59), G (68), H (6/11) Kết hình cho thấy mẫu A1 nhiễm genotype 58, mẫu A3 không cho kết màu nhƣng giếng chứng (+) có xuất màu chứng tỏ genotype mẫu nằm danh mục xét nghiệm thực đƣợc, mẫu A5 cho kết màu giếng D plate B cho kết genotype HPV-56 48 Hình 4.7 Kết ELISA cho mẫu xác định dƣơng tính HPV ngày 11/9/2014 Mẫu B33 cho phản ứng với HPV-18, B38 Ngoại type khơng có phản ứng màu, B37 B39 xuất đa nhiễm lần lƣợt B37: HPV-11, HPV16; B39: HPV-6, HPV-11, HPV-45 Hình 4.8 Kết thực ELISA cho mẫu dƣơng tính HPV ngày 7/10/2014 Mẫu C27 cho phản ứng với HPV-58, C28 nhiễm HPV-11, C29 nhiễm HPV-11 C30 C31 không cho phản ứng màu với genotype giếng lai, mẫu Ngoại type C32 cho phản ứng với HPV-11 Bảng 4.2 Phân bố genotype HPV mẫu nghiên cứu TT Nhóm Genotype Số chủng % Nhóm "nguy cao" HPV-16 18 15.52 HPV-18 3.45 HPV-33 3.45 HPV-35 0.86 HPV-45 1.72 HPV-51 0.86 HPV-52 1.72 HPV-56 0.86 49 HPV-58 23 19.82 10 HPV-68 1.72 58 50 HPV-6 31 26.72 HPV-11 27 23.28 58 50 Tổng số 11 Nhóm "nguy thấp" 12 Tổng số HPV "nguy thấp" 50 % HPV "nguy cao" 35 Số chủng đƣợc phát 50 % 30 25 20 15 10 11 68 58 56 52 51 45 35 33 18 16 Genotype HPV (n=12) Hình 4.9 Phân bố genotype mẫu nghiên cứu Từ 135 mẫu cho kết Dương tính HPV, thực xác định genotype phát 12 genotype phổ biến chấp nhận FDA 100 mẫu, 35 chưa xác định type, 116 chủng nhận dạng Các chủng HPV xác định bao gồm: 58 chủng genotype nhóm “nguy cao” chiếm 50% (58/116) 58 chủng genotype nhóm “nguy thấp” chiếm 50% (58/116) Trong 116 chủng genotype nhận dạng được, chủng HPV-6 chiếm tỉ lệ cao 26.72% (31/116), HPV-11 với tỉ lệ 23.28% (27/116) HPV-58 50 genotype chiếm cao nhóm nguy cao với 19.82% (23/116), HPV-16 HPV-18 hai genotype liên quan đến 70% trường hợp UTCTC ghi nhận chiếm tỉ lệ 15.52% (18/116) 3.45% (4/116), HPV-33 cho tỉ lệ 3.45% HPV-18 Các genotype cịn lại chiếm tỉ lệ khơng đáng kể Nhận xét: Kết ghi nhận báo cáo có khác biệt so với nghiên cứu tác giả: Vũ Thị Nhung (2006) ghi nhận type 18,58,16 type thường gặp [3], nghi nhận nghiên cứu tác giả Hồ Văn Phúc, Trần Thị Lợi (2010) cho kết type 18, 16, 58 type phổ biến [2], cơng trình nghiên cứu bệnh viện MEDLATIC [32] cho kết genotype 18,16, 58 Trên giới, cơng trình cộng gộp De sanjose et al (2007) khu vực Đông Nam Á type 16, 18, 58 type xuất nhiều [16], nghiên cứu tác giả Munoz cộng (2003) cho kết tương tự [30], I Dutra [26] type 16 type chiếm nhiều Việt Nam Tìm hiểu thêm cơng trình nghiên cứu nước Nghiên cứu Phạm Thị Hoàng Anh [9] thực 922 phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh 994 phụ nữ Hà Nội năm 2003 cho kết quả: type HPV có tỷ lệ cao type 16, 58, 18 Nghiên cứu Lê Trung Thọ [4] thực 1500 phụ nữ sống Quận Hoàng Mai Đông Anh – Hà Nội từ tháng 4/2007 đến hết tháng 6/2008 cho kết quả: type HPV có tỷ lệ cao type 18, 58, 16 Sự khác biệt kết bắt nguồn từ nhiều yếu tố: địa điểm, quần thể chọn, kĩ thuật sử dụng, trình độ kĩ thuật viên…Trong thực tế việc định sàng lọc HPV phụ thuộc khách quan vào chuẩn đoán định bác sĩ chuyên khoa, phần nhiều trường hợp xâm nhiễm HPV có triệu chứng nhẹ phổ thơng mụn cơm, mụn cóc sinh dục (thường triệu chứng dương tính với HPV-6, HPV-11) định điều trị thuốc mà không yêu cầu xét nghiệm HPV Một phần kĩ thuật chi phí kinh tế, sở y tế vừa nhỏ, bệnh viện từ tuyến tỉnh trở xuống, trường hợp định kiểm tra genotype HPV thường trường hợp cho triệu chứng quan trọng nghi ngờ diễn biến UTCTC, điều có 51 thể bỏ qua lượng trường hợp xâm nhiễm genotype “nguy thấp” dẫn đến khác biệt kết nghiên cứu Tuy nhiên, nhìn tổng thể cơng trình nghiên cứu độc lập qua nhiều năm cho thấy genotype nhóm nguy cao phổ biến Việt Nam điển hình HPV58, HPV-16 HPV-18 Sự phân bố genotype với tỉ lệ cao ổn định phần khẳng định genotype “nguy cao” đặc trưng cộng đồng Việt Nam Điều đặc biệt đáng lo ngại HPV-16, 18 liên quan đến 70% trường hợp UTCTC phát hiện, xuất genotype đặc biệt nguy hiểm với vấn đề tầm sốt UTCTC cịn hạn chế nước ta nguyên nhân dẫn đến UTCTC nước ta cao Điều ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe tâm lí nữ giới Việc xác định phân bố genotype HPV cung cấp kiến thức định cho việc chuẩn đoán, điểu trị vấn đề phòng chống UTCTC nữ giới Góp phần định vào kế hoạch chăm sóc sức khỏe chương trình tiêm chủng quốc gia mở rộng nước ta 4.4 Tình trạng đơn nhiễm đồng nhiễm HPV 4.4.1 Tỉ lệ đơn nhiễm đa nhiễm HPV Bảng 4.3 Tỉ lệ đơn nhiễm đa nhiễm genotype HPV Đồng nhiễm Số mẫu Tỉ lệ Đơn nhiễm 87 64.44% Đa nhiễm type 10 7.41% Đa nhiễm type 2.22% Không xác định đƣợc type 35 25.93% Tổng 135 100 % 52 Đơn nhiễm 25.93 % Đồng nhiễm type Đồng nhiễm type 2.22 % 7.41 % 64.44 % Không định type Hình 4.10 Tỉ lệ đơn nhiễm đa nhiễm genotype HPV Trong tổng số 135 mẫu cho kết Dương tính, phát 64.44% mẫu đơn nhiễm (87/135), đa nhiễm genotype có 7.41% (10/135), đặc biệt có xuất trường hợp đồng nhiễm genotype với tỉ lệ 2.22% (3/135) 35 mẫu chưa xác định genotype nằm 15 genotype phát kĩ thuật với tỉ lệ 25.93% (35/135) 4.4.2 Tình trạng đơn nhiễm đa nhiễm genotype HPV Bảng 4.4 Tình trạng đơn nhiễm đa nhiễm HPV Tình trạng đơn nhiễm đa nhiễm genotype HPV N % Loại đơn nhiễm 87 64.44 Đơn nhiễm genotype "nguy cao" 57 42.22 Đơn nhiễm genotype "nguy thấp" 30 22.22 13 9.63 Đa nhiễm genotype "nguy cao" 2.22 Đa nhiễm genotype "nguy cao + nguy thấp" 6.67 Đa nhiễm genotype "nguy thấp" 0.74 35 135 25.93 100 Loại đa nhiễm Chưa xác định type Tổng 53 Đơn nhiễm genotype "nguy cao" Đơn nhiễm genotype "nguy thấp" 42.22% Đa nhiễm genotype "nguy cao" Đa nhiễm genotype "nguy cao + nguy thấp" Đa nhiễm genotype "nguy thấp" Chưa xác định type 25.93% 0.74% 6.67% 2.22% 22.22% Hình 4.11 Tình trạng đơn nhiễm đa nhiễm genotype HPV Từ 135 trường hợp nhiễm HPV, có 87 trường hợp đơn nhiễm genotype (64.44%), 13 trường hợp nhiễm đa nhiễm genotype (≥ genotype) ( 9.63%) 35 trường hợp chưa xác định type kĩ thuật (25.93%) Trường hợp đơn nhiễm genotype “nguy cao” chiếm tỉ lệ cao 42.22%, đa nhiễm genotype “ nguy cao + nguy thấp” phổ biến trường hợp đa nhiễm chiếm 6.67% (9/13 trường hợp đa nhiễm) Đa nhiễm “nguy thấp” chiếm tỉ lệ thấp 0.74% (1/135) Nhận xét: Trong trường hợp nhiễm HPV, trường hợp đơn nhiễm chiếm tỉ lệ cao (64.44%), đa nhiễm genotype chiếm tỉ lệ không đáng kể (7.41%), đặc biệt có trường hợp đa nhiễm genotype Trong trường hợp, đơn nhiễm genotype “nguy cao” nhóm cao nhóm khảo sát (42.22%) Đa nhiễm “nguy thấp” chiếm tỉ lệ nhỏ Trong nghiên cứu có khác biệt so với báo cáo trước tổ chức Y tế giới tỉ lệ nhiễm đa type Việt Nam lên đến 41.6% [40] Sự đa nhiễm type gây biến đổi phức tạp phát triển HPV, gây 54 tình trạng khó điều trị, nhiễm dai dẵng HPV Dù cần có nhiều cơng trình thực tế để khẳng định tình nhiễm đa nhiễm nước ta nay, kết khảo sát cho thấy tín hiệu tích cực có biến từ đa nhiễm sang đơn nhiễm, điều đặc biệt có ý nghĩa chăm sóc sức khỏe nữ giới, phản ánh ý thức bảo vệ sức khỏe cá nhân ngày nâng cao Tuy nhiên phải nhìn nhận tình trạng đơn nhiễm chủ yếu genotype “nguy cao” Vấn đề đa nhiễm cộng với vấn đề tầm soát UTCTC hạn chế Việt Nam yếu tố quan trọng dẫn đến trường hợp bị UTCTC phát triển mạnh cộng đồng Trong nội dung đề tài có 35 mẫu khơng thực xác định genotype nằm genotype phát kĩ thuật Đây genotype phổ biến có ảnh hưởng lâm sàn chuẩn đốn điều trị 55 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Tỉ lệ nhiễm HPV mẫu xét nghiệm thực phòng xét nghiệm Nam Khoa Biotek 33.8% Nhóm tuổi có tỉ lệ nhiễm cao 30 tuổi (42.52%) Tỉ lệ nhiễm genotype “nguy cao” 50%, genotype “nguy thấp” 50% 35 trường hợp không xác định genotype nằm type kĩ thuật Phát 12 15 genotype xác định, phân bố genotype phổ biến HPV-6 với tỉ lệ 26.73%, HPV-11 với tỉ lệ 23.28% HPV-58, HPV16, HPV-18 chiếm tỉ lệ 19.82%, 15.52% 3.45% Trong mẫu dương tính, tỉ lệ nhiễm đơn type chiếm cao 64.44%, nhiễm type chiếm 7.41%, đa nhiễm type chiếm 2.22% Trong trường hợp nhiễm, đơn nhiễm “nguy cao” chiếm tỉ lệ cao 42.22%, đa nhiễm genotype “ nguy thấp” chiếm tỉ lệ thấp 0.74% 5.2 Kiến nghị Do thời gian thực đề tài hạn chế, đề tài chưa mở rộng nhiều đối tượng khu vực lớn, hạn chế Thành phố Hồ Chí Minh lân cận Để cho kết tổng quan chung cộng đồng phụ nữ Việt Nam, cần thực chương trình khảo sát qui mô Cần mở rộng thu thập thơng tin liên quan, mở rộng tìm hiểu mối liên hệ tỉ lệ nhiễm HPV với yếu tố khác như: tiền sử sản khoa, bệnh truyền nhiễm qua đường máu, tình trạng hút thuốc, khu vực, trình độ tri thức Kĩ thuật PCR-ELISA phù hợp với điều kiện thiết bị trình độ xét nghiệm sở y tế vừa nhỏ, cần thiết áp dụng cho bệnh viện tuyến tỉnh trở xuống nhằm đảm bảo vấn đề chăm sóc sức khỏe đảm bảo mang lại nhiều giá trị kinh tế cho người khám chữa bệnh Trong kĩ thuật số trường hợp chưa xác định genotype dù genotype không mang nhiều ý 56 nghĩa lâm sàng, cần cải tiến kĩ thuật gia tăng genotype xác định để cơng tác thống kê hồn chỉnh 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Trọng Hiếu (2004) Tần xuất nhiễm HPV phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh Thời Y Dượcc học 4(9): 195 – 199 Trần Thị Lợi cộng (2010): “Tỷ lệ nhiễm Human Papillomavirus yếu tố liên quan phụ nữ từ 18 đến 69 tuổi thành phố Hồ Chí Minh Y Học thành phố Hồ Chí Minh, tập 14”, 1: 311 – 320 Vũ Thị Nhung (2006): “Khảo sát tình hình nhiễm type HPV (Human Papillomavirus) phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh kỹ thuật sinh học phân tử Y Học thành phố Hồ Chí Minh, phụ chuyên đề ung bướu, tập 10”, số 4: 402 – 407 Lê Trung Thọ, Trần Văn Hợp (2009): “Nghiên cứu tỉ lệ nhiễm HPV cộng đồng phụ nữ Hà Nội – Tìm hiểu số yếu tố lien quan Y Học thành phố Hồ Chí Minh, tập 13”, 1: 185 – 189 Tạ Thành Văn (2010) PCR số kỹ thuật Y sinh học phân tử Sinh học phân tử Nhà xuất Y học Trang 28-95 Phạm Hùng Vân (2009) PCR real-time PCR: Các vấn đề áp dụng thường gặp Sinh học phân tử Nhà xuất Y học Trang 9-35 Nguyễn Vượng (2006) Human Papillomavirus Tạp chí Y học Việt Nam – 22 Anco M., Berhard K., Wim Q., Leen-J.D (2005) Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections Journal of Clinical Virology 32:43–51 Anh P T H., Hieu N.T., Franceschi S., et al (2003) Human papillomavirus infection among women in South and North Vietnam International Journal of Cancer 104(2): 213-220 10 Bao Y.P., Smith J.S., Qiao Y.L., ACCPAB members (2008) Human papillomavirus type distribution in women from Asia: a meta-analysis International Journal of Gynecologycal cancer 18(1):71-9 58 11 Bernard H.U., Burk R.D., de Villiers E.M, et al (2010) Classification of papillomaviruses (PVs) based on 189 PV types and proposal of taxonomic amendments Virology 40:70–79 12 Boccardo E, Lepique AP Villa LL (2010) The role of inflammation in HPV carcinogenesis Carcinogenesis 31(11): 1905-12 13 Bruni, L., M Diaz, de Sanjosé S., et al (2010) Cervical Human Papillomavirus Prevalence in Continents: Meta‐Analysis of Million Women with Normal Cytological Findings The Journal of Infectious Diseases 202(12): 1789-1799 14 Buitrago-Pérez A (2009) Molecular Signature of HPV-Induced Carcinogenesis: pRb, p53 and Gene Expression Profiling Current genomics 10(1): 26-34 15 Burd EM (2003) Human papillomavirus and cervical cancer Clinical Microbiology Review 16(1):1-17 16 Clifford G., Franceschi S., Diaz M., Munoz N., Villa L.L (2006) Chapter 3: HPV type-distribution in women with and without cervical neoplastic diseases Vaccine 24S3: 26-34 17 Clifford G.M., Gallus S., Herrero R., Muñoz N., et al (2005) Worldwide distribution of human papillomavirus types in cytologically normal women in the International Agency for research on Cancer HPV prevalence surveys: a pooled analysis Lancet 366: 991-998 18 De Sanjose´ S., Diaz M., Castellsague´ X., Clifford G., Bruni L., Munoz N., Bosch FX (2007) Worldwide prevalence and genotype distribution of cervical human papillomavirus DNA in women with normal cytology: A meta-analysis Lancet Infectious Disease 7:453-459 19 De Villiers E.M., Fauquet C., Broker T.R., Bernard H.U., zur Hausen H (2004) Classification of papillomaviruses Virology 324:17-27 59 20 Domingo E.J., Noviani R., Quinn M.A., et al (2008) Epidemiology and Prevention of Cervical Cancer in Indonesia, Malaysia, the Philippines, Thailand and Vietnam Vaccine.26S M71–M79 21 Franceschi S., Herrero R., Clifford C.M., et al (2006) Variations in the agespecific curves of human papillomavirus prevalence in women worldwide International Journal of Cancer 119(11): 2677-2684 22 Genital HPV Infection-CDC Fact Sheet Centers for Disease Control and Prevention Web site Available at: www.cdc.gov/STD/HPV/STDFactHPV.htm Accessed March 16, 2010 23 Hebner C.M., Laimins L (2006) Human papillomaviruses: basic mechanisms of pathogenesis and oncogenicity Reviews in medical virology 16(2): 83-97 24 Hernandez B Y., T V Nguyen (2008) Cervical human papillomavirus infection among female sex workers in southern Vietnam Infectious Agents and Cancer 3(1): 25 Hybrid Capture High-Risk HPV DNA Test Gaithersburg, MD: Digene; 2007 26 I Dutra, I Foroni, A.R Couto, M Lima and J Bruges-Armas (2012) Human Papillomavirus Worldwide Distribution in Women Without Cervical Cancer, Human Papillomavirus and Related Diseases-From Bench to Bedside-Research aspects, Dr Davy Vanden Broeck (Ed.), ISBN: 978-953307-855-7 InTech, Available from: http://www.intechopen.com/books/human-papillomavirus-and-relateddiseases-from-bench-to-bedsideresearch-aspects/human-papillomavirusworldwide distribution-in-women-without-cervical-cancer 27 Iftner T., Villa L.L (2003) Chapter 12: Human Papillomavirus Technologies Journal of the National Cancer Institute Monographs 31: 80 – 88 60 28 Lowy D.R., Howley P.M., (2004), Papillomaviruses, Field Virology, 2, pp 2231-2257 29 Molijn A, Kleter B, Quint W, et al.Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections J Clin Virol 2005;32(suppl 1):S43–S51 30 Munoz N., Bosch F.X., de Sanjose´ S., et al (2003) Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer New England Journal of Medecine 348:518-527 31 Munoz N., Castellsagué X., de González A.B., Gissmann L (2006) Chapter 1: HPV in the etiology of human cancer Vaccine 24S3:1-10 32 Quyen NH, Khuong LD and LuatNN STUDY ON HPV PREVALANCE IN PATIENTS AT MEDLATEC GENERAL HOSPITAL BY REAL-TEME PCR AND DOT BLOT HYBRIDIZATION, MEDLATEC General Hospital, 2012 33 Scheurer ME, Tortolero-Luna G, Adler-Storthz K, Human papillomavirus infection: biology, epidemiology, and prevention, Int J Gynecol Cancer 2005 Sep-Oct;15(5):727-46 34 Schiffman M, Castle PE, Jeronimo J, et al Human papillomavirus and cervical cancer Lancet 2007; 370:890–907 35 Schiffman M, Clifford G, Buonaguro FM (2009) Classification of weakly carcinogenic human papillomavirus types: addressing the limits of epidemiology at the borderline Infectious Agent Cancer.1; 4: 36 Schwarz E., Freese U.K., zur Hausen H.,et al (1985) Structure and transcription of human papillomavirus sequences in cervical carcinoma cells Nature 314(6006):111-4 37 Smith J., Melendy A., Rashida K Rana, M., Jeanne M Pimenta (2008) Age-Specific Prevalence of Infection with Human Papillomavirus in Females: A Global Review Journal of Adolescent Health 43: 5–25 61 38 Strauss RJ, Fazio VW Bowen's disease of the anal and perianal area A report and analysis of twelve cases Am J Surg 1979 Feb; 137(2):231-4 39 Villa LL, Denny L Chapter 7: Methods for detection of HPV infection and its clinical utility International Journal of Gynecology & Obstetrics 2006;94(suppl 1):S71–S80 40 WHO (2010) Human Papillomavirus and Related Cancers Available at: http://apps.who.int/hpvcentre/statistic/dynamic/ico/country_pdf 41 WHO (2005) World Health Survey, Vietnam http://www.who.int/healthinfo/survey/whsvnm-vietnam.pdf Available at: