Phan Tt t - Cao hc KI B GIO DC V O TO TRNG AI HOC s PHAM H NễI PHAN TT AT NGHIấN CU KH NNG TN TI CA KHNG NGUYấN Y KHNG TH NHểM MU H ABO TRONG MễI TRNG NGOI c TH PHC í CễNG TC GIM INH SINH HOC HèNH s LUN VN THC s SINH HC H NI B GIO DC V O TO TRNG AI HOC s PHAM H NễI PHAN TT AT NGHIấN CU KH NNG TN TI CA KHNG NGUYấN Y KHNG TH NHểM MU H ABO TRONG MễI TRNG NGOI c TH PHC í CễNG TC GIM INH SINH HOC HèNH s Chuyờn ngnh: Sinh hc thc nghim Mó s: 60 42 01 14 LUN VN THC s SINH HC Ngũi hng dn khoa hc: GS.TSKH T Thỳy Lan H NI, LI CM N Em xin by t lũng bit n sõu sc ti GS.TSKH.T Thỳy Lan ó tn tỡnh hng dn, giỳp tụi sut quỏ trỡnh thc hin ti Em xin by t lũng bit n ti cỏc thy, cụ Ban Giỏm hiu, Ban Ch nhim khoa Sinh - KTNN, Phũng Sau i hc Trng HSP H Ni ó to mi iu kin thi gian tụi hc chng trỡnh thc s Trong sut quỏ trỡnh thc hin ti tụi cng nhn c s giỳp tn tỡnh ca Trung tõm giỏm nh sinh hc phỏp lý - Vin Khoa hc hỡnh s, nhõn õy tụi cng xin gi li cm n Tụi cng xin chõn thnh cm n Tp th cỏn b Phũng K thut hỡnh s Cụng an tnh Vnh Phỳc ó to iu kin thun li v thit b, phng tin tụi cú th hon thnh lun ny Tụi xin chõn thnh cm n gia ỡnh v bn bố nhng ngi ó luụn ng viờn, gúp ý cho tụi thi gian qua H Ni, thng 12 nm 2015 Hc viờn PHAN TT T LI CAM OAN Tụi xin cam oan rng s liu v kt qu nghiờn cu lun ny l trung thc v khụng trựng lp vi cỏc ti khỏc Tụi cng xin cam oan rng mi s giỳp cho vic thc hin lun ny ó c cm n v cỏc thụng tin trớch dn lun ó c ch rừ ngun gc H Ni, thng 12 nm 2015 Hc viờn PHAN TT T MC LC M U N O 11 13 15 17 R 19 21 OH 23 Cl 25 12 27 DANH MUC CHĩ* VIẫT TT Phan Tõt Bat - Cao hoc Kl AD Axit dờoxiribonucleic AB K hiờu hờ nhửm mọu K hiờu hờ nhửm Rh mọu K hiờu hờ nhửm MN mọu 10 K hiờu hờ nhửm Gn mọu 12 K hiờu hờ nhửm GC mọu 14 K hiờu hờ nhửm Hp mọu Hb 16 Hemoglobin 04 Na Na CaC CaS 29 31 33 35 H20 H20 37 39 41 \xM pH 0,1 M a ò 43 PC Hb 18 Polymerase Chain Reaction 20 Hemoglobin 22 Natri hydroxit 24 Natri Clorua 26 28 30 32 34 Canxi Clorua 36 38 40 42 0,lmol/lit Canxi sunfat Nuoc Nuoc Oxy gi Do nong dụ axit Micro mol Anpha Beta DANH MC HèNH DANH MC BNG Bng 1.1 Ngng kt nguyờn v ngng kt t ca cỏc nhúm mỏu h 10 11 12 Bng 3.5 Kt qu xỏc nh thnh phn khỏng th t du yt mỏu thu c t cỏc y ỏn iu kin ngoi tri ụng (thỏng 10, 11, 12) bng 13 phng phỏp Lattes 42 14 Bng 3.6 Kt qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn t du vt mỏu thu c t cỏc v ỏn iu kin ngoi tri ụng (thỏng 10, 11, 15 12) bng phng phỏp hp ph -tỏch 43 16 Bng 3.7 Kt qu xỏc nh thnh phn khỏng th t du vt mỏu kho nghim iu kin nhit 37c v 45c bng phng phỏp Lattes 17 44 18 Bng 3.8 Kt qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn t du vt mỏu kho nghim iu kin nhit 37c v 45c bng phng phỏp hp 19 20 21 Bng 3.11 Kt qu xỏc nh thnh phn khỏng th t du vt mỏu kho nghim iu kin v m khỏc bng phng phỏp Lattes 22 48 23 Bng 3.12 Ket qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn t du vt mỏu kho nghim iu kin v m khỏc bng phng phỏp hp ph 24 - tỏch 50 25 Bng 3.13 So sỏnh kt qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn, khỏng th mu du vt mỏu t cỏc v ỏn cỏc iu kin mụi trng khỏc 53 26 Bng 3.14 So sỏnh kt qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn, khỏng th mu kho nghim c to cỏc iu kin nhit 27 khỏ c .55 28 Bng 3.15 So sỏnh kt qu xỏc nh thnh phn khỏng nguyờn, khỏng th mu kho nghim c to cỏc iu kin m khỏc 57 Phan Tt t - Cao hc KI 29 30 -9 M U Lý chn ti 31 Trong cỏc v ỏn hỡnh s, mỏu l loi du vt thng gp nht vỡ nú l h qu in hỡnh ca s tỏc ng qua li c ch hỡnh thnh du vt ca cỏc hot ng phm ti hỡnh s Du vt mỏu cng l dng du vt vt cht cú vai trũ cung cp nhiu thụng tin rt cú giỏ tr cụng tỏc iu tra, xột x cỏc v ỏn [2, 4,9,10,11,12] Da vo du vt mỏu, cú th a nhng nhn nh, ỏnh giỏ v tớnh cht v ỏn, ng c, i tng, thi gian gõy ỏn v cng c chng c m bo khỏch quan, ỳng phỏp lut, x lý ỳng ngi, ỳng ti Song iu kin mụi trng a dng hin trng cỏc v ỏn thng tỏc ng rt ln n cht lng ca cỏc du vt sinh hc núi chung, du vt mỏu núi riờng S phõn hy cỏc du vt mỏu cú th nhiu yu t gõy nh nhit , m, vi sinh vt, v tui ca du vt Thc t, cụng tỏc giỏm nh sinh hc cỏc v ỏn hỡnh s, cỏc du vt mỏu c a n phũng thớ nghim vi s khụng ng u c v cht lng ln s lng Cỏc phũng giỏm nh sinh hc thng xuyờn phi gii quyt nhng mu khú, cht lng thp thu thp c t nhng du vt hin trng sau tn ti mụi trng khc nghit thi gian di Du vt mỏu c thu lm hin trng thng dng du vt khụ, ó b phõn hy ớt hay nhiu, b nhim Cht lng ca du vt mỏu nh hng rt ln n s tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th i vi nhng mu mỏu cht lng kộm, b thi ra, phõn hy hay ln cỏc cht c ch thng gõy cho giỏm nh viờn khụng ớt nhng khú khn cỏc cụng on ca quy trỡnh giỏm nh nhúm mỏu Vỡ vy, vic phỏt hin sm du vt, thu, bo qun ỳng k thut l yu t quan trng, mang tớnh quyt nh n kt qu giỏm nh, cng nh la chn phng phỏp giỏm nh cho hiu qu nht[9,12] 32 v mt lý lun, trờn th gii, ó cú s lng nht nh nhng cụng trỡnh nghiờn cu v cht lng ca mt s du yt sinh yt nhng cha- cú nghiờn cu no Phan Tt t - Cao hc KI c th v cht lng du vt mỏu phc v iu tra hỡnh s iu kin Vit Nam Vit Nam, ó cú nghiờn cu v yu t tỏc ng ca mụi trng lờn cht lng v s lng ADN tỏch chit c t du vt mỏu, nhng cha cú ti nghiờn cu ỏnh giỏ yu t tỏc ng ca mụi trng lờn s tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th t du vt mỏu Trờn thc t, cụng tỏc phỏt hin, thu lm, bo qun, giỏm nh du vt sinh hc núi chung v du vt mỏu núi riờng cũn nhiu thiu sút, nht l cp huyn v tnh 33 Vic nghiờn cu ỏnh giỏ kh nng tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th ca h thng nhúm mỏu ABO iu kin ngoi c th dng mỏu khụ l cỏch tt nht ci tin cỏc k thut, cụng on cụng tỏc khỏm nghim hin trng, ỏnh giỏ, thu thp v bo qun du vt mỏu, cng nh giỏm nh du vt mỏu ti phũng thớ nghim, c bit l phũng thớ nghim ca cỏc Phũng K thut hỡnh s thuc Cụng an cỏc tnh, thnh ph trc thuc Trung ng Nú giỳp cho cụng tỏc iu tra, khỏm nghim hin trng v giỏm nh t hiu qu cao 34 Vỡ vy, cn phi c nghiờn cu k cú th rỳt nhng kt lun mang tớnh cht khoa hc, chớnh xỏc Vỡ lý ny, chỳng tụi chn ti: Nghiờn cu kh nng tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th nhúm mỏu h ABO iu kin mụi trng ngoi c th phc v cụng tỏc giỏm nh sinh hc hỡnh s Chỳng tụi hy vng, kt qu nghiờn cu s phc v hiu qu cụng tỏc giỏm nh sinh hc hỡnh s quỏ trỡnh iu tra, x lý ti phm Mc tiu nghin cu - Phõn tớch v ỏnh giỏ c s tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th thuc nhúm 94 T l ngi cú cỏc nhúm mỏu khỏc phõn b khụng u Kt qu nghiờn cu trờn ngi Vit Nam cho thy, i vi ngi Kinh, nhúm mỏu o cú t l cao nht, sau ú l cỏc nhúm B -> ATt ->AB Phan t -Cũn Caoi hcvi KI ngi Dao, ngi Mụng thỡ t l ú l nhúm o -> A -> B-ằ AB v i vi ngi ấờ thỡ trỡnh t l nhúm B -> A -> o -> AB [1,3,5,7,8] 95 Bng 1.2 T l phõn b nhúm mỏu h ABO mt s dõn tc ngi ca Vit Nam 124 125 126 n tc Dõ 127 Nh úm A (%) 133 134 135 21,14 Kin h 140 141 29,2 139 ấ 145 146 147 30,06 Da 128 Nhúm 129 B (%) 136 28,34 142 31,9 148 21,21 151 152 153 26,6 154 28,1 157 158 159 33,7 160 13,6 Dỡu Sỏn ng Mụ 130 Nhúm 131 (%) 137 45,08 143 23,6 149 41,71 155 37,31 161 48,0 132 N húm AB (%) 44 5,3 42 9 138 5, 144 150 6, 156 7, 162 4, 163 96 1.2 C S KHOA HC CA GIM NH DU VT MU 1.2.1 Khỏi niờm vố du vt mỏu 97 Du vt mỏu l lng mỏu c tỡm thy hin trng, trờn cụng c, phng tin gõy ỏn, trờn qun, ỏo, dựng, thõn th ca nn nhõn hay ca th phm, v l hu qu ca cỏc hnh vi ó xy cỏc v vic liờn quan ti phỏp lut, c thu v giỏm nh theo qui nh ca phỏp lut [5,9] 98 Qua thng kờ, du vt mỏu chim ti 60% tng s cỏc loi du vt sinh vt hỡnh thnh v tn ti liờn quan n v vic hỡnh s cn iu tra khỏm phỏ Du vt mỏu cú mu khỏ c trng nờn d phỏt hin khỏm nghim hin trng cng nh giỏm nh cỏc vt nghi dớnh mỏu, nhng õy cng l loi du vt rt d b bin i tn ti mụi trng ngoi c th Trc ht l s thay i v mu -sc ca du yt nh quỏ Phan Tt t - Cao hc KI trỡnh khụ, du vt chuyn t mu ti thnh mu sm sau ú l mu nõu hoc mu nõu; nu mỏu b thi m cao thỡ s cú mu en Tuy nhiờn, hin trng cng cú th cú mt s cht cú mu sc, hỡnh dng tng t yt mỏu nh sn chng r, vt r st, nha cõy Vỡ vy, a s trng hp cn s dng kớt th nh hng du vt mỏu loi tr nhng du vt khụng phi l mỏu [2,5,9,10,11,12] 99 Vic ỏnh giỏ du vt ti hin trng cng nh quỏ trỡnh giỏm nh cú ý ngha quan trng, cú th thu c nhng thụng tin cú giỏ tr vic iu tra v ỏn s lng, s phõn b, trng thỏi (mu sc, hỡnh dng, cht lng ) ca du vt ti hin trng, trờn phng tin gõy ỏn, trờn dựng, thõn th nn nhõn (hoc ca th phm) phn ỏnh din bin c bn ca v vic hỡnh s nh hnh ng ca th phm, phn ng ca nn nhõn, thi im hỡnh thnh du vt, trỡnh t hỡnh thnh du vt, cụng c gõy du vt xỏc nh mc tn thng ca nn nhõn (v c th phm) Tựy thuc vo c ch tỏc ng, v trớ b tn thng v ng nng ca mỏu chy ra, mỏu xut hin v tn ti hin trng di nhiu dng khỏc nh: du vt mỏu phun, du vt mỏu nh git, du vt mỏu qut, du vt mỏu thm hay mỏu ng thnh vng Vic giỏm nh nh hng du vt mỏu l bc bt buc quy trỡnh giỏm nh du vt mỏu ó c phờ duyt [9,11] 1.2.2 Phng phỏp phỏt hin, ghi nhn, thu lm, bo qun du vt mỏu ti hin trng 100 Mun phỏt hin du vt mỏu nhanh chúng v cú hiu qu, cỏn b khỏm nghim phi tựy tng hin trng c th ng dng thớch hp phng phỏp v chin thut khỏm nghim, cn trung vo nhng v trớ ngúc ngỏch, kớn ỏo hin trng nh gm bn, gm gh, k ngún tay, ngún chõn ca t thi v trng hp cn thit phi dựng húa cht c hiu phun trc tip vo cỏc y trớ nghi cú du yt 101 thu lm v bo qun du vt mỏu cú hiu qu cn da vo tỡnh trng, s lng ca du vt nh: khụ, t, nhiu, ớt; da vo c im, kớch thc ca vt mang vt 102 Phan Tt t - Cao hc KI i vi du vt mỏu khụ: Nu du vt nm trờn nhng vt mang nh, nh, phng phỏp tt nht l thu du vt cựng vt mang vt, gúi vo giy sch cú kh rng phự hp, ghi chỳ thụng tin cn thit bờn ngoi Nu vt nm trờn cỏc vt mang ln, dựng dao mng cy, co ly du vt, gúi vo giy sch, phong bỡ hoc hp giy sau ú ghi chỳ bờn ngoi Hoc dựng bụng, vi sch thm nc ct sau ú lau nh nhiu ln thu du vt, khụ t nhiờn v tin hnh bo qun tng t nh trờn 103 i vi du vt mỏu cũn lng v t: Nu du vt dng lng, lng nhiu dựng xi lanh bom hỳt t 5-10 cc cho vo l thy tinh sch, ghi chỳ bờn ngoi v bo qun t lnh Trng hp du vt t nhng tn ti vi lng ớt, dựng bụng hoc vi sch thm vt sau ú khụ iu kin t nhiờn, bo qun bao gúi giy sch ghi chỳ bờn ngoi Cỏc du vt v trớ khỏc cn phi thu lm, bo qun riờng r, ghi chỳ cn thn, y [9,11] 1.2.3 C s khoa hc ca giỏm nh du v mỏu 104 Giỏm nh du vt mỏu iu tra hỡnh s truy tỡm th phm ó c ng dng t nhng nm u th k XX (Uhlenhuth 1900 - 1901) bng vic phõn bit gia mỏu ngi v mỏu ng vt cỏc v ỏn git ngi, v sau, cựng vi vic phỏt hin h thng nhúm mỏu ABO (Landsteiner v cng s 1901) v cỏc h thng nhúm mỏu khỏc thỡ vic s dng du vt mỏu phc v cho cụng tỏc iu tra ngy cng c m rng 105 Mi thnh phn cú huyt v t bo mỏu u cú y trớ quan trng, cha ng cỏc thụng tin cn thit v mt cỏ th m khụng ging (tớnh cỏ bit) õy l mu cht truy nguyờn cỏ th thụng qua du yt mỏu Tuy nhiờn, ỏp ng yờu cu ny ũi hi mt quỏ trỡnh lõu di ca phỏt trin khoa hc v cụng ngh Mi giai on phỏt trin ca ngnh huyt hc v giỏm nh sinh hc phỏp lý thỡ cỏc ch s khai thỏc c t du vt mỏu u cú nhng giỏ tr nht nh [9,10] 106 Mt s c bn v yu t thnh phn mỏu l c s giỏm nh Phan Tt t - Cao hc KI Hemoglobin (Hb) bờn hng cu hay cũn gi l huyt sc t Mi phõn t sinh hc phỏp lý: - Hemoglobin cú chui polypeptit gn vi mt dn cht phyrin cú cha ion Fe nờn mỏu cú mu (phn Hem) kt hp vi mt protein l globin Trong mụi trng axit Hem phn ng vi NaCl to cloruaHem gi l Hemin Hemin hay Clohydrat hematin l mt tinh th hỡnh lng tr mu gi l tinh th Teichman õy l phn ng c trng tỡm du vt mỏu giỏm nh sinh hc phỏp lý - Trờn mng hng cu, cho n ngi ta xỏc nh hng chc loi khỏng nguyờn khỏc Mi mt h thng khỏng nguyờn hng cu, h thng enzyme hay protein huyt thỡ mi cỏ th ngi ch thuc mt s cỏc h thng ú, chng hn: cỏ th cú h thng nhúm mỏu l A - M - PGM - 1, cỏ th l B - N -PGM - 1, Nu t hp tt c cỏc h thng nhúm mỏu khỏc li thỡ s a c ch s c thự cho cỏ th ú 107 Cỏc khỏng nguyờn nhúm mỏu l cỏc protein trờn mng hng cu m quỏ trỡnh tng hp proten ny c mó húa bi cỏc gen nm trờn nhim sc th Cỏc khỏng nguyờn thuc h ABO mt locus gen nm trờn nhim sc th s kim soỏt vi ba alen l A, B, o Trong ú A, B tri so vi o Cỏc kiu gen h ABO gm: AA, AO, BB, BO, AB v 00 Nhng kiu gen ny to nờn bn kiu hỡnh (nhúm mỏu) l A, B, o v AB Vic di truyn nhúm mỏu tuõn theo nh lut Mendel Trong giỏm nh sinh hc phỏp lý vic xỏc nh nhúm mỏu cú ý ngha quan trng vic xỏc nh phõn loi du vt ti hin trng 108 - Trong huyt ca h nhúm mỏu ABO cú mt cỏc khỏng th tng ng vi cỏc khỏng nguyờn vng mt trờn hng cu Cỏc loi khỏng th chng A, B hay H l cỏc khỏng th t nhiờn cú c im l cỏc IgM, thng gõy ngng kt v khụng lm v hng cu nu hng cu c pha loóng nu gp khỏng nguyờn b khỏng, vớ d: ngi nhúm mỏu A cú khỏng th khỏng B s lm ngng kt hng cu mu nhúm B, ngi nhúm mỏu B cú khỏng th khỏng A s lm ngng kt hng cu mu nhúm A Vic xỏc nh c - mỏu ca du vt l c thnh phn khỏng th cú du vt giỳp ta xỏc nh c nhúm Phan Tt t - Cao hc KI s phõn loi du vt ti hin trng 1.3 1.3.1 TèNH HèNH NGHIấN cu Vẩ DU VT MU Tỡnh hỡnh nghin cu ngoi nc 109 u th k XX nh cỏc phỏt minh ca cỏc nh khoa hc ngi ta ó bit s dng du vt mỏu cụng tỏc iu tra hỡnh s Nm 1899, nh khoa hc Nga Tristovich phỏt hin protein l mỏu, tip theo l phng phỏp phõn bit mỏu ngi v mỏu vt ca nh khoa hc c Paul Ulengut Nhng phi ti nm 1900, Karl Landsteiner mi xỏc nh c cỏc khỏng nguyờn v khỏng th t nhiờn mỏu ca mt s ngi Karl landsteiner ó phõn thnh nhúm mỏu, t tờn l Nhúm A, nhúm B v nhúm o Nm 1902 Decastello v Sturli ó xỏc nh thờm nhúm mỏu th v gi l nhúm AB Sau ny cỏc nh khoa hc khỏc cng cú nhng nghiờn cu sõu hn v nhúm mỏu ny v cú s t tờn khỏc l nhúm I, II, II v IV nhng cho ti tờn nhúm mỏu Karl landsteiner t c s dng ph bin nht vỡ tờn Phan Tt t - Cao hc KI 110 - gi ny da trờn loi khỏng nguyờn trờn b mt hng cu Sau ny phỏt hin khỏng nguyờn H, tin thõn ca khỏng nguyờn A v B, tn ti trờn hng cu cựng vi khỏng nguyờn A, B nhng theo t l ngc v c bit cú nhiu trờn hng cu nhúm mỏu o nờn h nhúm mỏu ABO cũn c gi l h nhúm mỏu ABH, tờn gi ny ch yu s dng lnh vc dch hc, cũn y hc s dng tờn gi l nhúm mỏu ABO Sau phỏt hin h thng nhúm mỏu ABO, cỏc nh khoa hc ó trung nghiờn cu v ti ó xỏc nh 256 khỏng nguyờn ca 23 h thng nhúm khỏng nguyờn hng cu mỏu ngi: nhúm Rh, nhúm MN v hng trm nhúm khỏng nguyờn huyt ngi Gn, Gc, Hp Tuy vy ch cú nhúm ABO v nhúm Rh l cú vai trũ quan trng thc tin cuc sng v y hc, cỏc nhúm mỏu khỏc ch cú ý ngha nghiờn cu dch hc hoc di truyn y hc, nhõn chng hc Nhúm mỏu ABO khụng ch cú vai trũ quan trng cụng vic truyn mỏu cu cha bnh nhõn m ó sm c s dng cụng vic iu tra ti phm hỡnh s v mt thi gian khỏ di ó l cụng c hu hiu ca cỏc c quan t phỏp vic iu tra cỏc v ỏn hỡnh s cng nh gii quyt cỏc v ỏn tranh chp tr em 111 Sau Karl Landsteiner [7,8] phỏt hin h nhúm mỏu ABO, ngoi vic nghiờn cu xỏc nh cỏc h thng nhúm mỏu khỏc, cỏc nh khoa hc cũn trung nghiờn cu xõy dng cỏc phng phỏp xỏc nh cỏc h thng nhúm mỏu, ch yu l nhúm mỏu ABO, Rh s dng y hc v khoa hc hỡnh s Hai phng phỏp xỏc nh nhúm mỏu ca cỏc mu mỏu ti l phng phỏp Best Vincent (s dng khỏng th xỏc nh khỏng nguyờn) v phng phỏp Simonin (s dng khỏng nguyờn xỏc nh khỏng th) l phng phỏp hon chnh nht c s dng trờn ton th gii t trc ti Nm 1915 bỏc s Leon Lattess ó xut phng phỏp xỏc nh nhúm mỏu ABO ca cỏc mu mỏu khụ [9] Theo L.Lattes mỏu khụ, hng cu b phỏ hy, yy khụng th tỏch xỏc nh khỏng nguyờn hng cu bng phn ng ngng kt t bo v ụng ó phng phỏp xỏc nh khỏng th mu mỏu t ú xỏc nh nhúm mỏu Nm 1960, Kind ss Absortion v Elution ó cụng b phng phỏp xỏc nh khỏng nguyờn yt mỏu Phan Tt t - Cao hc KI - khụ, gi l phng phỏp hp ph - tỏch (Absortion-Elution) Hai phng phỏp Lattes v hp ph - tỏch cú hn ch l kt qu ph thuc cht lng, s lng du vt v ph thuc khỏ nhiu vo k thut nhng l hai phng phỏp cú tin cy cao, ó v ang c s dng vic xỏc nh nhúm mỏu ca du vt mỏu khụ Tựy theo tng v vic c th m cỏc phng phỏp ny cng cú tỏc dng nht nh nh hng iu tra hoc xột x ti phm T ú n mt s nc trờn th gii ang trỡ c hai lnh vc giỏm nh cỏc du vt sinh hc cú ngun gc t ngi bng c hai phng phỏp huyt hc v giỏm nh gen [6,9] 112 Ngoi cỏc phng phỏp nờu trờn cũn cú rt nhiu cỏc phng phỏp khỏc xỏc nh nhúm mỏu h thng ABO nhng hoc l k thut phc tp, khú thc hin, hoc l tin cy khụng cao vy ớt c s dng thc tin 113 Trong nhng nm gn õy ó cú mt s nghiờn cu cp n du vt mỏu hỡnh s Tuy nhiờn, hu ht ch cp n nghiờn cu nh lng AND 114 Mt s nghiờn cu trc õy v s tỏc ng ca nhõn t mụi trng lờn cht lng ca du vt mỏu s dng k thut RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) hay k thut a hỡnh chiu di on ct gii hn 115 Cụng trỡnh nghiờn cu: s tỏc ng ca yu t mụi trng v vt mang lờn phõn t ADN cú s dng vo cỏc mu vt chng t cỏc v ỏn thnh ph New York, c tin hnh vo nm 1989 bi Lorah McNally, Robert C.Shaler, Michael Baird, Ivan Balazs, Lawrence Kobilinsky v Peter 116 De Forest [9] Nghiờn cu i vo phõn tớch cỏc tỏc ng ca mụi trng v yt mang lờn cht lng ca ADN tỏch chit c t cỏc yt chng ca cỏc v ỏn Cht lng ca ADN tỏch chit c t cỏc v ỏn thc t, xỏc nh bng vic o kớch thc cỏc bng vch xut hin trờn bn gel ca in di agarose Thụng tin nhn c giỳp d oỏn mc phự hp ca ADN cỏc mu vt chng s dng cho phng phỏp phõn tớch a hỡnh chiu di cỏc on ct gii hn (RFLP) Cỏc mu vt chng c la chn theo cht liu ca vt mang (du vt mỏu co, tỳi nha, vi tng hp, vi bụng chộo, vi tri thm) v Phan Tt t - Cao hc KI - cht lng cm quan ca du vt (b bn bi t cỏt, bi, hoc b nhim) v c kớch c ca du vt (to, nh) Kt qu cho bit ADN tỏch chit t cỏc mu vt chng nhng iu kin mụi trng cha c bit trc sau ú c lm khụ trờn cỏc vt mang khỏc cú cht lng v trng lng phõn t cho vic phõn tớch RFLP hay khụng? õy l mt nghiờn cu khỏ y v cỏc yu t thng tỏc ng ờn cht lng ca du vt mỏu s dng k thut RFLP, l mt k thut ó c v cú nhiu nhc im so vi phng phỏp STR c dựng ph bin hin k thut du võn tay di truyn 117 Mt nghiờn cu khỏc cng c tin hnh cựng vo nm 1989 ú l nghiờn cu ỏnh giỏ ADN tỏch chit c t cỏc du vt mỏu ngi sau c x lý vi tia cc tớm, ngun nhit, m v nhim bn t cỏt (Journal of Forensic Sciences) bi nhúm cỏc nh khoa hc: Lorah McNally, Robert c Shaler, Michael Baird Ivan Balazs, Ph.Peter De Forest, D Crim v Lawrence Kobilinsky Nghiờn cu ny phõn tớch cỏc tỏc ng ca cỏc iu kin mụi trng thng gp lờn kh nng thu nhn ADN thụng qua k thut RFLP t nhng mu kho nghim Cỏc iu kin mụi trng c to bng cỏch s dng cỏc du vt mỏu ó c lm khụ sau ú a vo mụi trng cú m tng ng l: 0, 33, 67, v 98 %, s dng ngun nhit 37c v tia Phan Tt t - Cao hc KI 118 - cc tớm vi tng khong thi gian, ti a l ngy Kt qu nghiờn cu cho thy di iu kin nghiờn cu, cht lng v s lng ca ADN khụng lm hng kiu gen thu c theo phng phỏp RFLP Cỏc yu t tỏc ng ch lm cho ch th RFLP tr nờn yu hn 119 Nghiờn cu s tỏc ng ca nhit v pH lờn du yt mỏu c thc hin bi Kannika Sutthapodjanarux, Nathinee Panvisavas v Nopadol Chaikum thuc i hc Mahidol, Bangkok, Thỏi Lan nm 2009 Trong nghiờn cu ny, s tỏc ng ca nhit v pH lờn vic phõn tớch ADN v phỏt hin du yt mỏu bng ngun sỏng so le Kt qu nghiờn cu ch rng, vic s dng ngun sỏng so le phỏt hin du vt mỏu trờn hai b mt khỏc khụng b tỏc ng bi nhit v pH ca du vt Dung dch cú tớnh kim v acid m c cú tỏc ng n vic phõn tớch ADN Tuy nhiờn, cỏc kt qu phõn tớch ADN cú th c thu nhn c t cỏc du vt mỏu ó c x lý bng NaOH 0.1M v nhit thp hn 250c 120 Nghiờn cu s tỏc ng n s t góy ADN v s c ch lờn phn ng PCR ca cỏc mu giỏm nh hỡnh s ca Bruce McCord, Kerry Opel, Maribel Funes, Silvia Zoppis, v Lee Meadows Jantz thc hin thỏng 11/2011 ti i hc quc t Florida v i hc Tennessee Knoxville Mc ớch ca nghiờn cu ny l phõn tớch c ch ca s c ch PCR, s t góy v cỏc tỏc ng ca mụi trng lờn s t góy ca phõn t ADN Nhng tỏc ng ny ó c bit n l lm nghốo s khuch i v b mt alen (alen dropout) Tuy nhiờn cú rt ớt nghiờn cu lnh vc k thut hỡnh s v cỏc nhõn t c ch lm nghốo sn phm PCR v c ch ca s t góy thng cú mt mu vt chng ca cỏc v ỏn hỡnh s Nghiờn cu ó a kt lun rng: cỏc yu t mụi trng gõy h hi ti ADN mu mụ xy nhanh n mc ADN gn nh khụng th thu hi c Quỏ trỡnh cỏc phõn t ADN khuụn cỏc mu b b góy thnh cỏc phõn on rt nh din thi gian cha n tun S tỏc ng ca quỏ trỡnh oxi húa l rt nh S kt hp ca realtime PCR v s dng ng cong bin tớnh ADN l mt cụng c hu hiu phỏt hin s c ch PCR v cho phộp phõn loi cỏc nhõn t c ch Chiu Phan Tt t - Cao hc KI - di ca ADN mch khuụn v nng cỏc cht c ch cho thy cỏc nhõn t c ch PCR cú th tỏc ng n cỏc phn ng cú Taq polymerase qua ú lm gim tng lng sn phm ADN Cỏc nhõn t c ch PCR tỏc ng u tiờn lờn cỏc alen cú di ln nht, ri mi n cỏc alen cú di nh hn 1.3.2 Tỡnh hỡnh nghin cu nc 121 Nhng nm qua, tớnh c thự cao nờn nc rt him cú nhng ti nghiờn cu v cht lng ca du yt mỏu phc y giỏm nh hỡnh s 122 Mi õy, cụng trỡnh nghiờn cu lý lun v vai trũ ca du vt mỏu: Lun ỏn tin s ca Lờ Quc Huy [5], Hc vin Cnh sỏt nhõn dõn cú tờn Nghiờn cu du vt sinh vt hot ng iu tra ti phm c tin hnh nm 2012 ti ó b sung, hon thin h thng lý lun c bn v du vt sinh vt núi chung v du vt mỏu hot ng iu tra ti phm Tuy nhiờn õy l cụng trỡnh nghiờn cu mang tớnh lý lun, c bit hot ng iu tra qua cỏc cụng tỏc: phỏt hin, ghi nhn, thu lm, bo qun, ỏnh giỏ, giỏm nh du vt sinh hc núi chung e ti cha i sõu v cỏc k thut sinh hc ỏnh giỏ v cỏc du vt sinh vt v du vt mỏu phc v giỏm nh sinh hc hỡnh s 123 Nm 2006, Cụng trỡnh nghiờn cu Bo tn Ex-situ vt liu sng v xõy dng c s d liu cho cỏc tng th an ninh c tin hnh bi ThS Trn Minh ụn v cỏc cng s [2], Vin K thut húa sinh v ti liu nghip v, Tng cc K thut, B Cụng an ti cú s dng i tng nghiờn cu 124 l khong trờn 200 mu mỏu thu hin trng cỏc y ỏn hỡnh s hoc cỏc i tng phm ti Cỏc mu mỏu c bo qun trờn cỏc yt mang khỏc v lu gi ti nhit õm sõu Cỏc mu bo qun c theo dừi ỏnh giỏ nh k hng nm bng k thut phõn tớch gen: tỏch ADN, thc hin phn ng PCR s dng mi ca locus a hỡnh STR (h AmpF/ STR Profiler Plus) v in di phõn tớch sn phm PCR Qua kt qu in Phan Tt t - Cao hc KI - di cú th ỏnh giỏ c s tn ti ca ADN trờn mu sinh phm lu gi Tin hnh ly xỏc xut mu s mu bo qun ca tng nm Kt qu phõn tớch trờn (thc hin nm 2006) i chiu vi kiu gen ó phõn tớch ban u (cỏc nm 2002, 2003, 2004, 2005) cho thy tt c cỏc mu mỏu lu bo tn m bo phc v cho giỏm nh gen (vn phõn tớch c kiu gen) õy ch l mt phn nhỏnh ca ti, nờn cha i sõu nghiờn cu c c th mt s iu kin v vt lý, húa sinh nh hng n cht lng ADN Cha ỏnh giỏ c th v cht lng ca kiu gen thu c, mi ch dng li vic ỏnh giỏ l cú phõn tớch c kiu gen hay l khụng, m cha a c s nh lng ADN tng s sau tỏch chit, cht lng ca h s kiu gen thu c phõn tớch th hin bng s alen cũn, mt, t l nhiu 125 Trc yờu cu thc tin v nghiờn cu s tn ti ca khỏng nguyờn, khỏng th du vt mỏu khụ, ú ti Nghiờn cu kh nng tn ti ca khỏng nguyờn v khỏng th nhúm mỏu h ABO iu kin mụi trng ngoi c th phc v cụng tỏc giỏm nh sinh hc hỡnh s nhm a cỏc ỏnh giỏ tng i chi tit v s tn ti ca khỏng nguyờn, khỏng th mt s iu kin c th, phự hp vi iu kin phũng thớ nghim sinh hc ca Phũng K thut hỡnh s thuc Cụng an cỏc tnh, thnh ph trc thuc trung ng v ỏp ng yờu cu cụng tỏc iu tra, khỏm nghim hin trng v giỏm nh nhúm mỏu t du vt mỏu t hiu qu cao hn na 126 2.1 2.1.1 Chng I TNG V PHNG PHP NGHIấN cu VT LIU NGHIấN cu CHN Phan TtV tCCH - Cao hc KI MU Cỏch chon mu 127 * 128 - Cỏc du vt mỏu c chn kho sỏt ly t hai ngun chớnh: 30 mu mỏu t hin trng cỏc y ỏn git ngi, c ý gõy thng tớch, cp ti sn, tai nn giao thụng Du yt mỏu cú thi gian tn ti hin trng khỏc c phõn lm nhúm vi khong cỏch v mt thi gian l ngy, 10 ngy v tun Cỏc mu vt c gi n trng cu giỏm nh ti Phũng K thut hỡnh s Cụng an tnh Vnh Phỳc Cỏc du vt mỏu c chn c thu thp trờn mt loi vt mang l vi cotton - 48 mu mỏu ti c thm vo vt mang l cỏc mnh vi bng cht liu cotton sch, vụ khun v c b trớ cỏc iu kin nhõn to v nhit , m, theo cỏc mc thi gian l 10 phỳt, ngy, 10 ngy v tun 2.1.2 Cỏc vt liu s dng giỏm nh nh hng, xỏc nh protein c hiu v nhúm mỏu 129 * Húa cht: - Kớt th nh hng du vt mỏu Phenolpthalein (Vin Khoa hc hỡnh s - B Cụng an sn xut) - Khỏng huyt khỏng protein ngi (Vin Khoa hc hỡnh s - B Cụng an sn xut) - Anti A v Anti B - Dung dch NaCl 0,9% - Silicagel - Dung dch bóo hũa: CaCl2.6H20 v CuS04.5 H20 * Thit b: Mỏy ly tõm (Mikro 200 - Hittich/c), Kớnh hin vi sinh hc v 130 m 131 T õm * Dng c: Pipet cỏc loi, nhit k, m k, plate 96 ging, u cụn- cỏc loi, l thy, tinh, Phan Tt t - Cao hc KI bỡnh un sụi, phu, a thy tinh, a perti, phin kớnh, lam kớnh, kộo, panh, gng tay cao su 132 2.1.3 Thi gian v a im thc hiờn 133 ti nghiờn cu c thc hin ti Phũng K thut hỡnh s - Cụng an tnh Vnh Phỳc t thỏng 4-2015 n thỏng 12-2015 134 2.2 PHNG PHP NGHIấN cu 2.2.1 B trớ thớ nghim 135 i tng nghiờn cu ca ti l cỏc du vt mỏu t thu c t hai ngun, th nht l t cỏc v ỏn hỡnh s, th hai l cỏc du vt kho nghim c to phũng thớ nghim 136 i vi cỏc du vt mỏu thu t hin trng cỏc v ỏn, khụng phõn tớch c bit lp tng yu t mụi trng tỏc ng nờn c phõn thnh nhúm chớnh l: 1/ Du vt mỏu thu c nh v 2/ Du vt mỏu thu c ngoi tri vi mc thi gian ngy, 10 ngy v tun Ngoi ra, cỏc du vt mỏu thu c hin trng ngoi tri cũn c phõn thnh nhúm tng ng vi hai nm ca khớ hu Min bc Vit Nam l: Mựa hố (tng ng vi cỏc thỏng thỏng 4,5,6) v ụng (thỏng 10, 11, 12) nm 2015 Cỏc du vt mỏu c la chn lm nghiờn cu khụng b tỏc ng trc tip t nhng hot ng ca ngi nh b git ty, chựi xúa, s dng húa cht, 164 Bng 2.1 B trớ thớ nghim i vi mu thu t hin trng v ỏn 165 iu kin 166 S lng mu 167 Ký hiu mu phõn tớch 169.t theo 170 gi Phan Tt - Caomc hc KI thi an 173 174 175 > 172 ngy ngy tun 178 179 177 Trong nh 180 10 0 182 Ngoi tri 183 184 185 10 hố 0 187 Ngoi tri 188 189 190 10 ụng 0 192 Cng: 193 194 195 30 0 168 mụi trng - 171 176 181 MAI ,MA2, 186 MAI ,MA12, 191 MA21,MA22, MAI MA20 MA30 196 197 137 138 Vi cỏc mu mỏu kho nghim', cỏc du vt mỏu c to bng cỏch s dng cỏc mu mỏu ti, cha b ụng (khụng s dng cht chng ụng) l mỏu ngi, c nh vi lng khong lml lờn vt mang l nhng mnh vi coton khụ, sch sau ú a vo cỏc iu kin gi nh v nhit , m 139 - Cỏc mu kho nghim c x lý nhit bng cỏch t m vi cỏc mc nhit c iu chnh 37c, 45c vi cỏc mc thi gian l 3, 10 ngy, tun Riờng nhit 100c thỡ thi gian 10 phỳt 140 Bng 2.2 B trớ thớ nghim i vi mu kho nghim cỏc iu kin nhit khỏc 198 iu kin Nhit 199 S lng mu phõn tớch theo mc thi Phan Tt t gian - Cao hc KI 202 203 204 10 10 phỳt ngy ngy tun 37c 208 209 210 211 213 45c 214 215 216 217 219 100c 220 222 223 225 Cng: 226 221 227 228 16 229 16 231 141 142 Ký hiu mu - 205 > 207 200 212 KN(A,B,AB,0 218 KN(A,B,AB,0 224 KN(A,B,AB,0 )1,2 )3,4 )5,6 230 [...]... về nghiên cứu sự tồn tại của kháng nguyên, kháng thể ở dấu vết máu khô, do đó đề tài Nghiên cứu khả năng tồn tại của kháng nguyên và kháng thể nhóm máu hệ ABO trong điều kiện môi trường ngoài cơ thể phục vụ công tác giám định sinh học hình sự nhằm đưa ra các đánh giá tương đối chi tiết về sự tồn tại của kháng nguyên, kháng thể trong một số điều kiện cụ thể, phù họp với điều kiện phòng thí nghiệm sinh. .. hồng cầu nhóm máu o nên hệ nhóm máu ABO còn được gọi là hệ nhóm máu ABH, tên gọi này chủ yếu sử dụng trong lĩnh vực miễn dịch học, còn trong y học vẫn sử dụng tên gọi là nhóm máu ABO Sau khi phát hiện hệ thống nhóm máu ABO, các nhà khoa học đã tập trung nghiên cứu và tới nay đã xác định 256 kháng nguyên của 23 hệ thống nhóm kháng nguyên hồng cầu máu người: nhóm Rh, nhóm MN và hàng trăm nhóm kháng nguyên. .. trong quy trình giám định sinh học 37 Ngoài ra, để đánh giá chất lượng máu còn kết họp 4 công đoạn của quy trình giám định 5 Những đóng góp của đè tài - - nguyên và kháng Là nghiên cứu đầu tiên tại Việt Nam về khả năng tồn tại của kháng Phan Tất Đạt - Cao học KI thể nhóm máu hệ ABO trong mẫu máu khô 38 Kết quả nghiên cứu có thể áp dụng vào việc cải tiến kỹ thuật, công đoạn trong khám nghiệm hiện trường, .. .máu ABO trong các dấu yết máu thụ được tại hiện trường vụ án và các mẫu khảo Phan Tất Đạt - Cao học KI Xác định được mốc thời gian tồn tại của kháng nguyên và kháng thể trong các điều nghiệm - kiện môi trường khác nhau tuỳ thuộc vào điều kiện khí hậu theo mùa, theo phương pháp thu thập, bảo quản 3 Nhiệm vụ nghiền cứu 35 Thông qua đánh giá sự tồn tại của kháng nguyên, kháng thể nhóm máu hệ ABO để khảo... bộ máu ừong cơ thể tần tại trong hệ thống mạch máu và một phần nhỏ trong tỉm Phan Tất Đạt - Cao học KI - 46 44 45 46 Hình 1.2 Phân bố máu trong cơ thể Trong cơ thể con người, máu thực hiện các nhiệm vụ khác nhau Máu có thể vận chuyển các chất từ nơi này đến nơi khác, đảm bảo sự lưu thông các chất trong cơ thể Máu còn có chức năng bảo vệ cơ thể, điều hoà thân nhiệt và đảm bảo hằng tính củâ nội môi Ngoài. .. trong việc điều tra các vụ án hình sự cũng như giải quyết các vụ án tranh chấp trẻ em 111 Sau khi Karl Landsteiner [7,8] phát hiện hệ nhóm máu ABO, ngoài việc nghiên cứu để xác định các hệ thống nhóm máu khác, các nhà khoa học còn tập trung nghiên cứu xây dựng các phương pháp xác định các hệ thống nhóm máu, chủ yếu là nhóm máu ABO, Rh để sử dụng trong y học và khoa học hình sự Hai phương pháp xác định. .. kiểu gen trong hệ ABO gồm: AA, AO, BB, BO, AB và 00 Những kiểu gen này tạo nên bốn kiểu hình (nhóm máu) là A, B, o và AB Việc di truyền nhóm máu tuân theo định luật Mendel Trong giám định sinh học pháp lý việc xác định nhóm máu có ý nghĩa quan trọng trong việc xác định phân loại dấu vết tại hiện trường 108 - Trong huyết thanh của hệ nhóm máu ABO có mặt các kháng thể tương ứng với các kháng nguyên vắng... có nhóm ABO và nhóm Rh là có vai trò quan trọng trong thực tiễn cuộc sống và y học, các nhóm máu khác chỉ có ý nghĩa trong nghiên cứu miễn dịch học hoặc di truyền y học, nhân chủng học Nhóm máu ABO không chỉ có vai trò quan trọng trong công việc truyền máu cứu chữa bệnh nhân mà đã sớm được sử dụng trong công việc điều tra tội phạm hình sự và một thời gian khá dài đã là công cụ hữu hiệu của các cơ quan... tương Huyết tương lỏng và chiếm tỷ lệ cao hơn [1,3,7,8] 44 45 Hình 1.1 Các tế bào hồng cầu và limpho bào 41 42 Tổng số máu trong cơ thể khoảng 4-5 lít Khối lượng máu có thể thay đổi tuỳ thuộc vào trạng thái chức năng của cơ thể Trong trạng thái sinh lý, máu được lưu thông tuần hoàn trong cơ thể, trong đó có 50 % thể tích máu được lưu thông trong hệ thống mạch máu và 50 % thể tích máu còn lại được dự trữ... biệt máu người và máu vật của nhà khoa học Đức Paul Ulengut Nhưng phải tới năm 1900, Karl Landsteiner mới xác định được các kháng nguyên và kháng thể tự nhiên trong máu của một số người Karl landsteiner đã phân thành 3 nhóm máu, đặt tên là Nhóm A, nhóm B và nhóm o Năm 1902 Decastello và Sturli đã xác định thêm nhóm máu thứ 4 và gọi là nhóm AB Sau này các nhà khoa học khác cũng có những nghiên cứu sâu