VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ …………***………… ĐỖ TIẾN LÂM NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC MỘT SỐ LOÀI THỰC VẬT THUỘC CHI KADSURA VÀ SCHISANDRA HỌ SCHISANDRACEAE Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hóa học hữu Mã số: 62.44.01.14 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI - 2016 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Quyết Tiến Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam TS Phạm Thị Hồng Minh Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Phản biện 1: Phản biện 2: Phản biện 3: Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Học viện họp tại: Học viện Khoa học Công nghệ - Số 18 Hoàng Quốc Việt - Cầu Giấy Hà Nội Vào hồi ngày tháng năm Có thể tìm luận án thư viện Quốc Gia Việt Nam thư viện Học viện Khoa học Công nghệ I GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Đặt vấn đề Ngày nay, việc nghiên cứu hoạt tính sinh học hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên ngày đóng vai trò quan trọng phát triển lĩnh vực Y Dược phục vụ sống người, dược liệu chứa nhiều hoạt chất có hoạt tính sinh học, cấu trúc hóa học đa dạng phong phú Trong nhiều trường hợp, hợp chất tự nhiên có cấu trúc hóa học đặc biệt nằm đánh giá người Để lĩnh vực Y Dược ngày phát triển có nhiều ứng dụng thực tế phục vụ Y, Sinh, Nông nghiệp, … nhà khoa học trọng nhiều đến việc tìm kiếm hoạt chất từ thiên nhiên với định hướng tổng hợp hay chiết xuất hoạt chất khả thi mục đích tạo sản phẩm việc hỗ trợ điều trị nhiều bệnh nan y công tác chăm sóc sức khỏe cộng đồng Đồng thời, kết nghiên cứu góp phần giải thích rõ tác dụng chữa bệnh thuốc cổ truyền dân tộc hay sử dụng dân gian Trên giới, nhiều công trình nghiên cứu hóa học tác dụng sinh học loài thực vật họ Schisandraceae, kết nghiên cứu cho biết nhiều hợp chất phân lập thể phổ hoạt tính rộng như: khả gây độc số dòng tế bào ung thư, kháng HIV, bảo vệ gan,… Các kết mở hướng nghiên cứu khả quan lĩnh vực nghiên cứu dược phẩm hỗ trợ điều trị mầm bệnh bệnh hiểm nghèo Nhằm đóng góp phần hiểu biết thêm thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài thực vật thuộc chi Kadsura Schisandra họ Schisandraceae Việt Nam, thực đề tài với nội dung: “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học số loài thực vật thuộc chi Kadsura Schisandra, họ Schisandraceae Việt Nam” Nhiệm vụ luận án  Phân lập xác định cấu trúc hợp chất từ phận khác loài Na leo (Kadsura heteroclita (Roxb.) Craib), Ngũ vị nam (Kadsura induta A C Smith), Na rừng (Kadsura coccinea (Lem.) A.C Smith), Ngũ vị vảy chồi (Schisandra perulata Gagnep.) Ngũ vị tử nam (Schisandra sphenanthera Rehd et Wils.) thu Việt Nam  Thăm dò hoạt tính gây độc số dòng tế bào ung thư: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) phổi (A-549) hợp chất phân lập Những đóng góp luận án 3.1 Lần nghiên cứu thành phần hóa học loài thuộc chi Kadsura Schisandra (họ Ngũ vị): Na leo (K heteroclita), Ngũ vị nam (K induta), Na rừng (K coccinea), Ngũ vị vảy chồi (S perulata) Ngũ vị tử nam (S sphenanthera) tiến hành Việt Nam, phân lập xác định cấu trúc hóa học 26 hợp chất (tổng số 41 hợp chất, trùng lặp 15 hợp chất) Trong đó, có hợp chất mới: heteroclitalacton N (KHE1) schizanrin O (KIE1) lần phân lập từ thiên nhiên 3.2 Đã nghiên cứu tác dụng gây độc số dòng tế bào ung thư: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) phổi (A-549) 15 hợp chất phân lập Kết cho biết, hợp chất (heteroclitalacton N, schizanrin O) hoạt tính, hầu hết chất lại thể hoạt tính mức trung bình Trong đó, axit nigranoic có tác dụng gây độc mạnh dòng tế bào ung thư buồng trứng với giá trị IC50 = 5,1 ± 1,7 μM 3.2 Thành phần hóa học loài họ Ngũ vị có mặt Việt Nam chủ yếu thuộc hợp chất lignan tritecpenoit khung lanostan đặc trưng cho loài chi Kadsura Schisandra Bố cục luận án Luận án gồm 135 trang có 37 bảng số liệu, 29 hình 15 sơ đồ với 179 tài liệu tham khảo Kết cấu luận án gồm: Mở đầu (01 trang), chương Tổng quan (34 trang), chương Phương pháp thực nghiệm (22 trang), chương Kết thảo luận (61 trang), kết luận (02 trang), danh mục công trình công bố (01 trang), tài liệu tham khảo (14 trang) Ngoài phần phụ lục (68 trang) gồm phổ hợp chất phân lập II NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN MỞ ĐẦU Phần đề cập đến ý nghĩa khoa học, tính thực tiễn, đối tượng nhiệm vụ nghiên cứu luận án Chương TỔNG QUAN Giới thiệu chung thực vật họ Schisandraceae Giới thiệu sơ lược phân bố ứng dụng loài thực vật chi Kadsura Schisandra, Na leo (K heteroclita), Ngũ vị nam (K induta), Na rừng (K coccinea), Ngũ vị vảy chồi (S perulata) Ngũ vị tử nam (S sphenanthera) Những nghiên cứu giới nước hóa học hoạt tính sinh học họ Schisandraceae Chương PHƯƠNG PHÁP VÀ THỰC NGHIỆM 2.1 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1.1 Mẫu thực vật Mẫu thực vật TS Bùi Văn Thanh (Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam) xác định tên khoa học, tiêu lưu Viện Sinh thái Tài nguyên Sinh vật, gồm mẫu thu Tam Đảo, Vĩnh Phúc: thân cành Na leo (K heteroclita (Roxb.) Craib thân cành Na rừng (K coccinea (Lem.) A C Smith); mẫu thu Sa Pa, Lào Cai: Ngũ vị nam (K induta A C Smith) thân Ngũ vị vảy chồi (S perulata Gagnep.); mẫu thu Đăk Glei, Kon Tum: thân cành Ngũ vị tử nam (S sphenanthera Rehd et Wils.) 2.1.2 Phương pháp xử lý chiết mẫu Các mẫu thực vật sau thu thập xử lý chung sau: Mẫu sấy nhiệt độ 60 oC tới khô, đến khối lượng không đổi, sau đem nghiền nhỏ, ngâm chiết lần với metanol (etanol) thiết bị siêu âm nhiệt độ phòng Dịch tổng thu cất kiệt dung môi áp suất giảm (< 50 oC) thu cặn cô metanol (etanol) Cặn cô metanol (etanol) thêm nước chiết với dung môi có độ phân cực tăng dần n-hexan, diclometan etyl axetat, cất loại dung môi thu cặn n-hexan, diclometan, etyl axetat metanol (etanol) tương ứng 2.1.3 Phương pháp phân lập tinh chế hợp chất từ mẫu Việc phân lập, tinh chế phần dịch chiết thực phương pháp: sắc ký lớp mỏng (TLC), sắc ký lớp mỏng điều chế (PTLC), sắc ký cột thường (CC) silica gel với cỡ hạt khác nhau, sắc ký cột pha đảo YMC RP-18 ray phân tử sephadex LH-20 2.1.4 Phương pháp xác định cấu trúc hóa học Cấu trúc hợp chất xác định kết hợp thông số vật lý với phương pháp phổ đại: điểm nóng chảy (mp), độ quay cực ([α]D), sắc ký khí (GC), phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ khối phun mù điện tử (ESI-MS), phổ khối phân giải cao (HR-ESI-MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân: phổ chiều (1H-NMR, 13C-NMR DEPT) phổ chiều (COSY, HSQC, HMBC NOESY) 2.1.5 Phương pháp thử hoạt tính gây độc tế bào Hoạt tính gây độc ba dòng tế bào ung thư người: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) phổi (A-549) thử nghiệm Trường Đại học Dược, Đại học Yonsei, Hàn Quốc phương pháp MTT (3-(4,5dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 2.2 Thân cành Na leo (K heteroclita) Quá trình xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Na leo thực theo sơ đồ 2.1 Sơ đồ 2.1 Xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Na leo 2.3 Lá Ngũ vị nam (K induta) Quá trình xử lý mẫu phân lập hợp chất từ Ngũ vị nam thực theo sơ đồ 2.2 Sơ đồ 2.2 Xử lý mẫu phân lập hợp chất từ Ngũ vị nam 2.4 Thân cành Na rừng (K coccinea) Quá trình xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Na rừng thực theo sơ đồ 2.3a 2.3b Sơ đồ 2.3a Xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Na rừng Sơ đồ 2.3b Xử lý mẫu, phân lập hợp chất từ thân cành Na rừng (tiếp theo) 2.5 Thân Ngũ vị vảy chồi (S perulata) Quá trình xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân Ngũ vị vảy chồi thực theo sơ đồ 2.4 Sơ đồ 2.4 Xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân Ngũ vị vảy chồi 2.6 Thân cành Ngũ vị tử nam (S sphenanthera) Quá trình xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Ngũ vị tử nam theo sơ đồ 2.5 Sơ đồ 2.5 Xử lý mẫu phân lập hợp chất từ thân cành Ngũ vị tử nam 2.7 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập Kết thử nghiệm in vitro hoạt tính gây độc tế bào số hợp chất phân lập từ loài nghiên cứu trình bày mục 3.6 Chương KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 Các hợp chất phân lập từ thân cành Na leo (K heteroclita) Từ cặn dịch chiết n-hexan etyl axetat thân cành Na leo hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm tritecpenoit: heteroclitalacton N (KHE1), axit secococcinic F (KHH2) axit kadsuric (KHH3); lignan: axit dihydroguaiaretic (KHE2), schizanrin F (KHE3) kadsuralignan B (KHE4); steroit: β-sitosterol (KHH1) β-sitosteryl 3O-β-D-glucopyranozit (KHE5) Trong đó, heteroclitalacton N (KHE1) hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất thể hình 3.1 Hình 3.1 Các hợp chất phân lập từ thân cành Na leo (K heteroclita) 3.1.1 Heteroclitalacton N (KHE1) - hợp chất Hợp chất KHE1 phân lập dạng bột vô định hình, không màu, nhiệt độ nóng chảy 204-206 oC Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS cho [M+H]+ (m/z) 551,2857 amu, cho phép xác định công thức phân tử KHE1 C29H43O10 Phổ 1H-NMR KHE1 cho biết tín hiệu proton olefinic H-24 (H 7,21); proton oximetin H-1 (H 4,34), H-15 (H 3,87), H-22 (H 3,76) H-23 (H 5,17); proton metylenoxi H-29 (H 3,40 3,44); nhóm metyl bậc hai H-21 (H 1,12) nhóm metyl H-18 (H 1,12), H-27 (H 1,91) H-30 (H 1,17) Phổ 13C-NMR DEPT KHE1 quan sát thấy có 29 cacbon gồm nhóm cacbonyl (CO) C-3 (δC 177,6) C-26 (δC 177,0), cacbon bậc bốn (trong có cacbon liên kết với oxi C-4 (δC 88,8), C-9 (δC 73,3), C-10 (δC 101,1) C-14 (δC 87,6)), nhóm metin (CH), nhóm metylen (CH2) nhóm metyl (CH3) Những liệu gợi ý KHE1 nortritecpenoit khung schiartan giàu oxi có bảy vòng [154] Các liệu phổ 1H- 13C-NMR KHE1 tương tự hợp chất micrandilacton C, trừ vị trí nhóm hydroxyl C-29 [130,160] Hình 3.1a Phổ 1H-NMR, DEPT heteroclitalacton N (KHE1) Phổ HMBC KHE1 cho biết tương tác H-23 (H 5,17) với C-20 (δC 38,3), C-22 (δC 73,9), C-24 (δC 149,9), C-25 (δC 131,3), C-26 (δC 177,0); H-27 (δH 1,91) với C-24 (δC 149,9), C-25 (δC 131,3), C-26 (δC 177,0) Phổ COSY cho biết tương tác H-20/H-22/H-23/H-24, khẳng định nhóm α,β-lacton chưa bão hòa hydroxyl vị trí C-22 Ngoài ra, H-22 định hướng α suy tương tác H-22 (δH 3,76) H-17 (δH 2,10) phổ NOESY Hình 3.1b Phổ HMBC heteroclitalacton N (KHE1) Tương tác phổ HMBC H-1 (δH 4,34) với C-2 (δC 37,2), C-3 (δC 177,6), C-10 (δC 101,1), C-4 (δC 88,8), C-5 (δC 54,9), C-19 (δC 47,2); H-29 (δH 3,40 3,44) với C-4 (δC 88,8) C-5 (δC 54,9); H-30 (δH 1,17) với C-4 (δC 88,8) C-5 (δC 54,9) khẳng định diện cầu epoxy C-1 C-4, hai nhóm metyl hydroxymetylen C-4 Các tương quan phổ NOESY H-1 (δH 4,34) H-30 (δH 1,17), H-5 (δH 2,66) H-29 (δH 3,40 3,44) khẳng định H-5 H-29 định hướng α, H-1 H-30 định hướng β Hơn nữa, tương tác phổ HMBC KHE1 H-15 (δH 3,87) với C-8 (δC 56,6), C-14 (δC 87,6), C-16 (δC 35,9), C-17 (δC 54,7) khẳng định nhóm hydroxyl C-15 Nhóm hydroxyl định hướng α xác định tương tác H-8 (δH 1,70) H-15 (δH 3,87) 10 13 14 15 16 46,4 87,6 77,3 35,9 17 54,7 18 18,2 19 47,2 20 21 22 23 24 25 26 27 29 30 38,3 18,2 73,9 83,6 149,9 131,3 177,0 10,6 69,8 19,0 3,87 (d; 3,5) 1,98 (dt; 4,0; 13,0) 1,74 (m) 2,10 (m) 1,12 (s) 2,20 (d; 15,0) 1,85 (d; 5,0) 1,60 (m) 1,12 (d; 6,0) 3,76 (dd; 1,5; 6,5) 5,17 (br s) 7,21(br s) 1,91 (s) 3,40 3,44 (d; 11,5) 1,17 (s) C C CH 13, 14, 17 CH2 15, 17 CH CH3 CH2 CH CH3 CH CH CH C C CH3 CH2 CH3 46,3 87,6 77,2 36,0 3,73 (d; 3,5) 1,88 (m) 1,58 (o) 13, 20 54,7 1,94 (m) 13 18,2 1,00 (s) 9, 10 47,0 2,03 (d; 15,9) 1,75 (d; 15,9) 17, 21, 22 38,3 1,98 (m) 20 18,2 0,98 (d; 4,5) 17, 20, 21, 23, 24 73,8 3,63 (dd; 2,0; 6,8) 22, 24, 25 83,6 5,04 (d; 1,8) 23, 25, 26, 27 149,9 7,08 (d; 1,8) 131,3 177,0 24, 25, 26 10,6 1,78 (s) 4, 5, 30 30,0 1,19 (s) 23,5 1.04 (s) #δH #δC micrandilacton C (1H: 400 MHz, 13C: 100 MHz, pyridin-d5) [160] 3.2 Các hợp chất phân lập từ Ngũ vị nam (K induta) Từ cặn dịch chiết n-hexan etyl axetat Ngũ vị nam hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học gồm lignan: schizanrin O (KIE1), schizanrin F (KIH2); (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxilignan (KIE3) rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4metylendioxiphenyl)tetrahydrofuran (KIE2), tritecpenoit: axit schizandronic (KIE4) axit lancifoic A (KIE5), flavonoit: luteolin 7-O-β-Dglucopyranozit (KIE6), phytosterol: β-sitosterol (KIH1), β-sitosteryl 3-Oβ-D-glucopyranozit (KIE7) Trong đó, schizanrin O (KIE1) hợp chất Cấu trúc hóa học hợp chất thể hình 3.7 Hình 3.7 Các hợp chất phân lập từ Ngũ vị nam (K induta) 3.2.1 Schizanrin O (KIE1) - hợp chất Hợp chất KIE1 phân lập dạng bột vô định hình, không màu Phổ khối phân giải cao HR-ESI-MS KIE1 cho [M+Na]+ (m/z) 631,2172 amu, ứng với công thức phân tử C33H36O11 Phổ 1H-NMR KIE1 cho biết có tín 11 hiệu proton thơm H 7,32 (t, J= 8,0 Hz), H 7,46 (d, J= 8,0 Hz) H 7,51 (t, J= 8,0 Hz) nhóm benzoyl, proton thơm singlet δH 6.53 (s) 6,85 (s), proton metinoxi δH 5,77 (s) 5,88 (s), proton metylendioxi δH 5,63 (d, J= 1,5 Hz) 5,77 (d, J= 1,5 Hz), proton metoxi δH 3,32; 3,61; 3,86 3,95 liệt kê bảng 3.7 Phổ 13C-NMR DEPT cho biết hợp chất KIE1 có nhóm cacbonyl, 12 cacbon bậc bốn (trong có cacbon bậc gắn với oxi C-1 (δC 151,4), C-2 (δC 141,1), C-3 (δC 151,9), C-7 (δC 74,0), C-12 (δC 148,8), C-13 (δC 135,5) C-14 (δC 140,5)), 10 nhóm metin, nhóm metylen, nhóm metoxi nhóm metyl Những liệu gợi ý KIE1 hợp chất dibenzocyclooctadien lignan Các liệu phổ 1Hvà 13C-NMR KIE1 tương tự hợp chất schizanrin F, trừ vị trí nhóm este C-9 [162] Hình 3.7a Phổ 1H-NMR, DEPT schizanrin O (KIE1) Phổ HMBC KIE1 cho biết có tương tác xa H-4 (δH 6,85) với C-2 (δC 141,1), C-3 (δC 151,9), C-5 (δC 129,6), C-6 (δC 85,2) C-16 (δC 121,8); H-11 (δC 6,53) với C-9 (δC 83,4), C-10 (δC 132,9), C-12 (δC 148,8), C-13 (δC 135,5) C-15 (δC 120,2) khẳng định diện vòng biphenyl Hình 3.7b Phổ HMBC schizanrin O (KIE1) 12 Ngoài ra, tương tác proton nhóm metoxi (δH 3,61; 3,86; 3,95 3,32) với C-1 (δC 151,4), C-2 (δC 141,1), C-3 (δC 151,9) C-14 (δC 140,5), khẳng định nhóm metoxi C-1, C-2, C-3 C-14 Các tương tác xa phổ HMBC proton metylen (δH 5,63 5,77) với C-12 (δC 148,8) C-13 (δC 135,5) khẳng định nhóm metylen gắn với C-12 C-13 thông qua oxi Các tương tác xa phổ HMBC H-6 (δH 5,88) với C-7" (δC 164,7); H-9 (δH 5,77) với C-1' (δC 172,3) khẳng định nhóm benzoyl propanoyl C-6 C-9 Hình 3.7c Phổ COSY tương tác NOESY schizanrin O (KIE1) Phổ COSY cho biết tương tác H-9/H-8/8-CH3, H-2'/H-3' H-2"/H3"/H-4", cấu hình nhóm S Tương quan phổ NOESY H-4 (δH 6,85) với H-6 (δH 5,88); H-9 (δH 5,77) với H-11 (δH 6,53) H-8 (δH 2,32) khẳng định cấu dạng xoắn-thuyền-ghế (TBC) vòng cyclooctadien định hướng cho proton H-6α, H-8β H-9β [166] Cấu hình nhóm metyl C-7 xác định tương quan phổ NOESY 7-CH3 (δH 1,39) H-8 (δH 2,32) Phân tích liệu phổ cho biết hợp chất KIE1 làm sáng tỏ cấu trúc đặt tên schizanrin O, hợp chất mới, lần phân lập tự nhiên Cấu trúc hóa học tương tác HMBC, COSY schizanrin O (KIE1) 13 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ NMR KIE1 (1H: 500 MHz, 13C: 125 MHz, CDCl3) TT KIE1 [162] H→C (HMBC) #δC #δH (mult., J Hz) δC δH (mult., J Hz) 151,4 151,3 141,1 141,1 151,9 151,9 110,3 6,85 (s) 2, 5, 6, 16 110,2 6,82 (s) 129,6 129,6 85,2 5,88 (s) 4,5,7, 8,16,17 85,1 5,86 (s) 74,0 73,9 43,2 2,32 (d; 7,0) 7, 10, 17 43,1 2,29 (m) 83,4 5,77 (s) 7,8,10,11,15,1’ 83,3 5,75 (s) 10 132,9 139,9 11 101,7 6,53 (s) 9,10,12,13,14,15 101,6 6,49 (s) 12 148,8 148,7 13 135,5 135,4 14 140,5 140,5 15 120,2 120,1 16 121,8 121,8 7-CH3 28,8 1,40 (s) 6,7,8 28,7 1,37 (s) 8-CH3 17,1 1,31 (d; 7,0) 7,8,9 17,0 1,29 (d; 7,0) -OCH2O- 100,8 5,63 (d;1,5) 12,13 100,8 5,61 (d; 1,5) 5,77 (d; 1,5) 5,76 (d; 1,5) 1-OCH3 60,5 3,61 (s) 60,4 3,60 (s) 2-OCH3 60,4 3,86 (s) 60,4 3,85 (s) 3-OCH3 56,0 3,95 (s) 55,9 3,93 (s) 14-OCH3 58,6 3,32 (s) 14 58,6 3,30 (s) 1″ 129,3 129,3 2″, 6″ 129,4 7,46 (d; 8,0) 6″, 4″,2″ 129,4 7,44 (d; 7,0) 3″, 5″ 127,9 7,32 (t; 8,0) 7″, 5″,3″ 127,8 7,30 (t; 8,0) 4″ 132,8 7,51 (t; 8,0) 2″,3″,5″,6″ 132,6 7,52 (t; 8,0) 7″ 164,7 164,6 1′ 172,3 168,8 2′ 26,8 1,77 (dq; 7,5; 17,5) 1′,3′ 20,4 1,58 (s) 1,90 (dq; 7,5; 17,5) 3′ 8,4 0,86 (t; 7,5) 1′ #δH #δC axit schizanrin F (1H: 300 MHz, 13C: 75 MHz, CDCl3) [162] 3.3 Các hợp chất phân lập từ thân cành Na rừng (K coccinea) Từ cặn dịch chiết n-hexan etyl axetat thân cành Na rừng (K coccinea) hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm tritecpenoit: axit secococcinic G (KcE1), axit secococcinic F (KcE2); axit mangiferonic (KcE3), axit nigranoic (KcE4), axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) axit lancifoic A (KcE7); glycerit: 2,3dihydroxypropyl 28-hydroxyoctacosanoat (KcE6); steroit: β-sitosterol (KcH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (KcE8) Cấu trúc hóa học hợp chất thể hình 3.13 Trong đó, axit 24(E)-3,4-seco-9βHlanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) hợp chất tritecpen khung lanostan, lần phân lập từ loài họ Schisandrcaeae 14 Hình 3.13 Các hợp chất phân lập từ thân cành Na rừng (K coccinea) 3.3.5 Axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) Hợp chất KcE5 phân lập từ cặn etyl axetat thân cành Na rừng có dạng tinh thể hình kim, không màu Trên phổ KcE5 có diện 3,4-seco vòng A thể qua tín hiệu đặc trưng cacbon: nhóm COOH C-3 (δC 177,4), nối đôi dạng >C=CH2 δH 4,87 4,83 (br s, H-28), ứng với C-28 (δC 111,7) C-4 (δC 149,8) Ngoài ra, phổ 1H- 13C-NMR cho biết phân tử có nối đôi dạng >C=CH- δH 5,28 (br s, H-7) ứng với C-7 (δC 117,7), C-8 (δC 146,5) δH 6,82 (t; J= 6,5 Hz; H-24) ứng với C-24 (δC 144,0), C-25 (δC 126,9); proton nhóm metyl, có tín hiệu dạng singlet δH 0,76 (s, H-18); 0,86 (s, H-19); 1,03 (s, H-30); 1,83 (s, H-27); 1,80 (s, H-29), nhóm metyl dạng doublet δH 0,92 (d, J= 6,5 Hz, H-21), ứng với C-21 (δC 18,0) Phổ 1H-, 13C-NMR hợp chất KcE5 tương tự so với hợp chất KcE2 hay KHH2, nhiên khác cacbon vị trí C-26 Trên phổ 1H 13CNMR KcE5 tín hiệu nhóm metyl thay vào phổ 13C-NMR xuất thêm tín hiệu nhóm cacboxyl (-COOH) δC 170,8 ppm Phân tích liệu phổ thực nghiệm KcE5 kết hợp so sánh với liệu phổ axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic tài liệu tham khảo, khẳng định hợp chất KcE5 axit 24(E)-3,4-seco9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic [174] Hợp chất phát từ loài Abies koreana [174], hợp chất có cấu hình axit 24(Z)-3,4-seco-9βHlanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic với tên gọi kadpolysperin I phát từ loài Kadsura polysperma Trung Quốc [96] 15 Cấu trúc hóa học tương tác HMBC axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) Bảng 3.16 Dữ liệu phổ NMR KcE5 (1H: 500MHz, 13C: 125MHz, CDCl3+CD3OD) TT KcE5 [174] #δH (mult., J Hz) δC δH (mult., J Hz) #δC 28,8 1,73 1,58 (m) 29,7 2,04 1,92 (m) 29,5 2,26 2,26 (m) 30,0 2,58 (dt; 11,0 5,5) 177,4 177,0 149,8 150,4 45,2 2,10 (m) 45,6 2,26 (d; 7,0) 29,0 2,30 1,90 (m) 30,0 2,39 2,01 (m) 117,7 5,28 (br s) 118,3 5,32 (d; 3) 146,5 147,1 38,6 2,58 (m) 39,2 2,65 (m) 10 36,2 36,7 11 18,4 1,62 1,52 (m) 18,9 1,68 1,55 (m) 12 33,9 1,83 1,48 (m) 34,2 1,82 1,65 (m) 13 43,6 44,0 14 51,4 51,8 15 33,8 1,52 1,46 (m) 34,4 1,52 1,48 (m) 16 28,1 1,99 1,26 (m) 28,5 1,94 1,26 (m) 17 52,8 1,53 (m) 53,3 1,50 (m) 18 21,5 0,76 (s) 21,9 0,78 (s) 19 23,9 0,86 (s) 24,4 0,93 (s) 20 35,9 1,42 (m) 36,3 1,44 (m) 21 18,0 0,92 (d; 6,5) 18,4 0,94 (d; 6,5) 22 34,6 1,53 1,20 (m) 35,2 1,60 1,19 (m) 23 25,7 2,26 1,99 (m) 26,0 2,29 2,17 (m) 24 144,0 6,82 (t; 7,0; 6,5) 142,5 7,22 (m) 25 126,9 129,0 26 170,8 170,7 27 12,0 1,83 (s) 12,9 2,11(s) 28 111,7 4,87 4,83 (br s) 112,1 5,01 (s) 29 25,7 1,80 (s) 26,1 1,86 (s) 30 27,3 1,03 (s) 27,6 1,07 (s) #δH, #δC axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (1H: 500 MHz, 13C: 125 MHz, pyridin-d5)[174] 16 3.4 Các hợp chất phân lập từ thân Ngũ vị vảy chồi (S perulata) Từ cặn dịch chiết n-hexan etyl axetat thân Ngũ vị vảy chồi hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm lignan: axit mesodihydroguaiaretic (SpE5), (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′metylendioxi7,7′-epoxilignan (SpE7), rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4metylendioxiphenyl) tetrahydrofuran (SpE6); flavonoit: (2R,3S)-3,5,7,3’,4’pentahydroxy-flavan (SpE8); glycerit: 2,3-dihydroxypropyl hexacosanoat (SpH3) 2,3-dihydroxypropyl 28-hydroxyoctacosanoat (SpH4); steroit: β-sitosterol (SpH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SpE2) Cấu trúc hóa học hợp chất thể hình 3.14 Trong đó, axit mesodihydroguaiaretic hợp chất khung diarylbutan, tiền chất để sinh tổng hợp hợp chất lignan khung khác Hình 3.14 Các hợp chất phân lập từ thân Ngũ vị vảy chồi (S perulata) 3.4.1 Axit meso-dihydroguaiaretic (SpE5) Hợp chất SpE5 thu dạng vô định hình, không màu, từ dịch etyl axetat, nóng chảy 87-89 0C Phổ khối phân giải cao FT-ICR/HRMS SpE5 cho [M+H]+ (m/z) 331,19095 amu, ứng với công thức phân tử C20H26O4 Trên phổ 1H NMR xuất nhóm 1,3,4-phenyl, nhóm metoxi δC/H 55,9/3,85 (3-OCH3 3’-OCH3); nhóm metyl với tín hiệu doublet δC/H 16,2/0,845 (H-9 H-9’) nhóm metin xuất dạng multiplet δC/H 38,9/1,77 (H-8 H-8’) Bốn benzylic proton xuất dạng doublet-doublet δC/H 39,2/2,30-2,75 (H-7a, H-7b, H-7’a H-7’b) tương tác vicinal geminal, proton lại xuất vùng trường thấp thuộc vòng thơm benzen khoảng cộng hưởng 6,06→6,83 ppm Hợp chất SpE5 không hoạt động quang học [α]D25= (c=0,75; CHCl3) Phân tích liệu phổ thực nghiệm SpE5 kết hợp so sánh với liệu phổ axit meso-dihydroguaiaretic tài liệu tham khảo, hợp chất SpE5 xác định axit meso-dihydroguaiaretic hay meso-4,4’-dihidroxy-3,3’dimetoxilignan [175,176] 17 Cấu trúc hóa học, tương tác HMBC axit meso-dihydroguaiaretic (SpE5) Bảng 3.18 Dữ liệu phổ NMR SpE5 (1H: 500 MHz, 13C: 125 MHz, CDCl3) TT SpE5 [175] δH (mult., J Hz) δH (mult., J Hz) δC δC 1/1’ 133,8 133,5 2/2’ 111,5 6,61 (d; 2,0) 111,2 6,50 (d; 1,7) 3/3’ 146,3 146,2 4/4’ 143,6 143,4 5/5’ 114,0 6,83/6,82/6,81 113,8 6,77 (d; 7,9) 6/6’ 121,7 6,66/6,96; 6,65/6,64 121,5 6,58 (d; 8,0) 7/7’ 39,2 2,30/2,28; 2,28/2,26 41,0 2,55-2,32 (m) 8/8’ 38,9 1,77 (m) 37,4 1,72 (m) 9/9’ 16,2 0,85 (d; 6,5) 13,8 0,80 (d; 6,7) 3/3’-OCH3 55,9 3,85 (s) 55,7 3,78 (s) #δH, #δC axit meso-dihydroguaiaretic (1H: 250 MHz, 13C: 62,9 MHz, CDCl3)[175] 3.5 Các hợp chất phân lập từ thân cành Ngũ vị tử nam (S sphenanthera) Từ cặn dịch chiết n-hexan etyl axetat thân cành Ngũ vị tử nam hợp chất phân lập xác định cấu trúc hóa học, gồm lignan: (+)-gomisin M2 (SsH3); (±)-gomisin M1 (SsH4); gomisin N (SsH5); tritecpenoit: axit kadsuric (SsE2); glycerit: 1-linoleoylglycerol (SsH2); steroit: β-sitosterol (SsH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SsE1) Cấu trúc hóa học hợp chất thể hình 3.15 Trong đó, gomisin N (SsH5) đặc trưng cho dibenzocyclooctadien lignan phân lập từ loài Hình 3.15 Các hợp chất phân lập từ thân cành Ngũ vị tử nam (S sphenanthera) 18 3.5.3 Gomisin N (SsH5) Hợp chất SsH5 thu từ dịch n-hexan loài Schisandra sphenanthera có dạng tinh thể hình kim, không màu, điểm nóng chảy 105-107 0C Phổ 1H-, 13 C-NMR DEPT cho biết tín hiệu 28 hidro 23 cacbon, ứng với proton thơm H-4 (δH 6,55) H-11 (δH 6,48); nhóm metylen C-6 (δC 39,1) C-9 (δC 35,5); nhóm metin C-7 (δC 33,5) C-8 (δC 40,7); nhóm metyl H-17 (δH 0,96), C-17 (δC 21,5) H-18 (δH 0,73), C-18 (δC 12,8); nhóm metoxi (1-OCH3, 2-OCH3, 3-OCH3, 14-OCH3) δH 3,55; 3,82; 3,88; 3,89 δC 60,5; 59,6; 55,9; 61,0 tương ứng; nhóm metylendioxi H-19 (δH 5,94) C-19 (δC 100,7) Đây hợp chất dibenzocyclooctadien lignan Phổ HMBC SsH5 cho thấy tương tác H-11 (δH 6,48) với C-9 (δC 35,5), C-12 (δC 148,6), C-13 (δC 134,5) C-15 (δC 121,3); H-4 (δH 6,55) với C-2 (δC 140,0), C-3 (δC 151,5), C-6 (δC 39,1) C-16 (δC 123,3) Tương tác proton nhóm metoxi δH 3,55 với C-1 (δC 151,6), δH 3,82 với C-2 (δC 140,0), δH 3,88 với C-3 (δC 151,5) δH 3,89 với C-14 (δC 141,1), cho thấy nhóm metoxi vị trí C-1, C-2, C-3 C-14 tương ứng Tương tác H-19 (δH 5,94) với C-12 (δC 148,6) C-13 (δC 134,5) cho thấy nhóm metylendioxi vị trí C-12 C-13 Phân tích liệu phổ thực nghiệm SsH5 kết hợp so sánh với liệu phổ gomisin N tài liệu tham khảo, cho phép khẳng định hợp chất SsH5 gomisin N [179] Cấu trúc hóa học tương tác HMBC gomisin N (SsH5) Bảng 3.21 Dữ liệu phổ NMR SsH3 (1H: 500 MHz, 13C: 125 MHz, CDCl3) SsH5 [179] TT δH (mult., J Hz) #δH (mult., J Hz) δC #δC 151,6 147,6 140,0 140,1 151,5 151,6 6,55 (s) 110,6 110,7 6,55 (s) 134,1 134,0 2,52 (dd; 2,0 13,0) 35,5 35,6 2,57 (m) 2,57 (dd; 7,0 13,0) 1,88 (m) 40,7 40,7 1,83 (m) 19 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 1-OCH3 2-OCH3 3-OCH3 14-OCH3 1,79 (m) 2,02 (d; 13,0) 2,23 (dd; 10,5 13,0) 6,48 (s) 0,73 (d; 7,5) 0,96 (d; 7,5) 5,94 (m) 3,55 (s) 3,82 (s) 3,88 (s) 3,89 (s) 33,5 39,1 33,6 39,2 137,8 102,9 148,6 134,5 141,1 123,3 121,3 12,8 21,5 100,7 60,5 61,0 55,9 59,6 137,7 102,9 148,6 134,6 141,1 123,3 121,4 12,9 21,5 100,7 60,5 61,0 55,9 59,6 1,83 (m) 2,03 (dd; 1,0 13,5) 2,27 (dd; 8,0 13,5) 6,47 (s) 0,73 (d; 7,0) 0,97 (d; 7,0) 5,93 (s) 3,55 (s) 3,82 (s) 3,93 (s) 3,93 (s) #δH, #δC gomisin N (1H: 100 MHz, 13C: 15,4 MHz, CDCl3)[179] Tóm tắt kết phân lập xác định cấu trúc hợp chất loài nghiên cứu: Bảng 3.24 Các hợp chất phân lập từ loài nghiên cứu Tên hợp chất Lớp chất Heteroclitalacton N Axit secococcinic F Tritecpenoit Tritecpenoit Axit secococcinic G Axit kadsuric Tritecpenoit Tritecpenoit Axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta 4(28),7,24-trien-3,26-dioic Axit lancifoic A Tritecpenoit Loài phân lập KL Tính (mg) K heteroclita 8,2 M K heteroclita 820 L K coccinea 10,2 K coccinea 14,3 K heteroclita 700 L S sphenanthera 37 K coccinea 10,2 H Tritecpenoit K induta K coccinea Axit nigranoic Tritecpenoit K coccinea Axit schizandronic Tritecpenoit K induta Axit mangiferonic Tritecpenoit K coccinea Schizanrin O Lignan K induta Kadsuralignan B Lignan K heteroclita Schizanrin F Lignan K heteroclita K induta (±)-gomisin M1 Lignan S sphenanthera Gomisin N Lignan S sphenanthera (+)-gomisin M2 Lignan S sphenanthera (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxiLignan K induta 3′,4′metilendioxi-7,7′-epoxilignan S perulata Rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)Lignan K induta bis(3,4-metilendioxiphenyl) S perulata tetrahydrofuran Axit dihydroguaiaretic Lignan K heteroclita 100 20,5 12,6 120 11,6 8,8 8,8 500 79,7 61 215,7 63,7 71,6 L L M L L L L L H H 20 Axit meso-dihydroguaiaretic Luteolin 7-O-β-D-glucopyranozit (2R,3S)-3,5,7,3’,4’pentahydroxyflavan 2,3-Dihydroxypropyl 28hydroxyoctacosanoat 2,3-dihydroxypropyl hexacosanoat 1-Linoleoylglycerol β-sitosterol Daucosterol M: Hợp chất Lignan Flavonoit Flavonoit Glycerit (Chất béo) Glycerit Glycerit S perulata K induta S perulata K coccinea S perulata S perulata S sphenanthera K heteroclita Steroit K induta (Phytosterol) K coccinea S perulata S sphenanthera K heteroclita Steroit K induta (Phytosterol) K coccinea S perulata S sphenanthera L: Phân lập từ loài 9,7 117 23 H L H 18,2 52,8 96 57 1500 300 50 66 110 15 8,2 12,3 48,3 49 H H H H: Phân lập từ họ Thành phần hóa học loài thực vật họ Schisandraceae nghiên cứu, chủ yếu hợp chất lignan tritecpenoit Một số hợp chất phân lập giống loài chi: axit secococcinic F phân lập từ loài K heteroclita K coccinea, schizanrin F phân lập từ loài K heteroclita K induta,…và loài khác chi: axit kadsuric phân lập từ loài K heteroclita S sphenanthera, rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4metilendioxiphenyl)tetrahydrofuran (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi3′,4′metilendioxi-7,7′-epoxilignan phân lập từ loài K induta S perulata,… cho thấy mối liên quan thành phần hóa học loài họ Schisandraceae Các hợp chất lignan phân lập từ loài nghiên cứu chủ yếu thuộc khung dibenzocyclooctadien lignan (6/10 hợp chất), có hợp chất khung tetrahydrofuran hợp chất khung diarylbutan Điều hoàn toàn phù hợp với thành phần hóa học lignan họ Schisandraceae, tài liệu công bố Các hợp chất tritecpenoit phân lập từ loài nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học hợp chất khung 3,4-seco-lanostan (4/9 hợp chất), hợp chất khung cycloartan (4/9 hợp chất) hợp chất schinortritecpenoit, phù hợp với thành phần hóa học hợp chất tritecpenoit họ Schisandraceae, tài liệu công bố Điều đặc biệt, hợp chất schinortritecpenoit phân bố loài thuộc chi Kadsura Các hợp chất lanostan cycloartan phân lập chủ yếu có cấu hình E (4/6 hợp chất), đó, hợp chất thuộc khung chủ yếu có cấu hình Z tài liệu công bố trước Loài K coccinea có tích lũy cao tritecpenoit 21 Trong hợp chất lignan tritecpenoit thu hợp chất lignan khung diarylbutan tiền chất để sinh tổng hợp hợp chất lignan khung khác Các hợp chất lanostan cyloartan tritecpenoit chất với khung pentacyclic để sinh tổng hợp hợp chất tritecpenoit có cấu trúc phân tử phức tạp 3.6 Hoạt tính gây độc tế bào số hợp chất phân lập Bảng 3.25 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào in vitro hợp chất dòng tế bào ung thư người OVCAR, HT-29 A-549 IC50 (μM) TT Hợp chất OVCAR HT-29 A-549 Heteroclitalacton N > 100 > 100 > 100 Axit secococcinic F 19,6 ± 2,0 33,3 ± 1,4 48,6 ± 2,6 Axit kadsuric > 100 32,2 ± 1,2 54,8 ± 2,9 Axit schizandronic 19,6 ± 2,1 33,3 ± 3,2 48,6 ± 2,3 Axit lancifoic A 34,8 ± 1,5 32,9 ± 0,8 82,6 ± 3,7 Axit mangiferonic > 100 71,5 ± 2,1 > 100 Axit nigranoic 5,1 ± 1,7 72,7 ± 2,3 > 100 Kadsuralignan B > 100 > 100 > 100 Axit dihydroguaiaretic 21,6 ± 3,1 16,2 ± 1,7 36,4 ± 5,6 10 (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi> 100 32,0 ± 4,1 66,2 ± 4,5 3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxylignan 11 Rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4- 73,6 ± 3,7 48,7 ± 2,3 56,4 ± 3,6 metylendioxiphenyl)tetrahydrofuran 12 Axit meso-dihydroguaiaretic 21,6 ± 2,5 16,2 ± 1,5 36,4 ± 3,3 13 (+)-gomisin M2 25,1 ± 1,4 14,5 ± 1,5 44,5 ± 3,1 14 (±)-gomisin M1 40,8 ± 3,1 28,5 ± 2,6 39,5 ± 2,8 15 Gomisin N 29,7 ± 2,2 34,5 ± 2,7 50,9 ± 1,3 8,4 ± 0,9 3,1 ± 0,3 7,2 ± 0,5 Mitoxantron Hoạt tính gây độc tế bào 15 hợp chất (có hợp chất bị nhiễm khuẩn: schizanrin O, schizanrin F, (2R,3S)-3,5,7,3’,4’-pentahydroxy-flavan luteolin 7-O-β-D-glucopyranozit) bảng 3.25, cho thấy: Đối với hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư buồng trứng (OVCAR), số 15 hợp chất có kết thử, có hợp chất: heteroclitalacton N, axit kadsuric, axit mangiferonic, kadsuralignan B (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxylignan hoạt tính với giá trị IC50 > 100 μM; hợp chất thể hoạt tính gây độc tế bào yếu: (±)-gomisin M1 rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl)tetrahydrofuran với giá trị 40 μM < IC50 < 100 μM; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào trung bình: axit lancifoic A, axit dihydroguaiaretic, gomisin N, (+)-gomisin M2 axit meso-dihydroguaiaretic với giá trị 20 μM < IC50 < 40 μM; hợp chất có hoạt tính tương đối mạnh: axit secococcinic F axit schizandronic với giá trị 10 μM < IC50 < 20 μM Đặc biệt, hợp chất axit nigranoic có hoạt tính kháng tế 22 bào ung thư buồng trứng (OVCAR) mạnh với giá trị IC50= 5,1 ± 1,7 μM, nhỏ nồng độ chất đối chứng mitoxantron với giá trị IC50 = 8,4 ± 0,9 μM Đối với hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư đại tràng (HT-29) 15 chất thử cho thấy: có hợp chất heteroclitalacton N kadsuralignan B hoạt tính; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư yếu: axit nigranoic rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl) tetrahydrofuran với giá trị 40 μM< IC50 < 100 μM; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư trung bình: axit secococcinic F, axit kadsuric, axit schizandronic, axit lancifoic A, axit secococcinic F, gomisin N, (±)-gomisin M1 (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxylignan với giá trị 20 μM < IC50 < 40 μM; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư mạnh: axit dihydroguaiaretic, (+)-gomisin M2 axit meso-dihydroguaiaretic với giá trị μM < IC50 < 20 μM Trong số 15 hợp chất, hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư đại tràng vượt trội chất đối chứng mitoxantron với giá trị IC50 = 3,1 ± 0,3 μM Đối với hoạt tính gây độc dòng tế bào ung thư phổi (A-549) 15 hợp chất thử cho kết quả, cho thấy có hợp chất hoạt tính: heteroclitalacton N, axit nigranoic, axit mangiferonic kadsuralignan B; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư yếu: axit secococcinic F, axit kadsuric, axit schizandronic, axit lancifoic A, gomisin N, (+)-gomisin M2, (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxylignan rel(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl)tetrahydrofuran, với giá trị 40 μM < IC50 < 100 μM; hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư trung bình: axit dihydroguaiaretic, (±)-gomisin M1 axit mesodihydroguaiaretic với giá trị 20 μM < IC50 < 40 μM Không có hợp chất cho kết gây độc dòng tế bào ung thư thư phổi (A-549) mạnh vượt so với chất đối chứng mitoxantron với giá trị IC50 = 7,2 ± 0,5 μM Như vậy, kết thử hoạt tính gây độc ba dòng ung thư người: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) phổi (A-549) cho thấy có hợp chất axit nigranoic với giá trị IC50 = 5,1 ± 1,7 μM, có tác dụng chống ung thư buồng trứng mạnh vượt trội so với chất đối chứng mitoxantron 23 KẾT LUẬN Luận án nghiên cứu thành phần hóa học loài thực vật thuộc chi họ Schisandraeae, gồm loài chi Kadsura: Na rừng (Kadsura coccinea), Na leo (Kadsura heteroclita), ngũ vị nam (Kadsura induta) loài chi Schisandra: Ngũ vị tử nam (Schisandra sphenanthrea), Ngũ vị vảy chồi (Schisandra perulata) Kết hợp phương pháp sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột, sắc ký điều chế với chất hấp phụ pha thường, pha đảo, sephadex, … phân lập 41 hợp chất (trùng lặp 15 hợp chất lại 26 hợp chất), có hợp chất mới, lần phân lập từ thiên nhiên Từ thân cành Na leo (K heteroclita) phân lập xác định cấu trúc hợp chất gồm hợp chất tritecpenoit: heteroclitalacton N (KHE1), axit secococcinic F (KHH2) axit kadsuric (KHH3); hợp chất lignan: kadsuralignan B (KHE4), axit dihydroguaiaretic (KHE2) schizanrin F (KHE3); hợp chất steroit: β-sitosterol (KHH1) β-sitosteryl 3-O-β-Dglucopyranozit (KHE5) Trong heteroclitalacton N (KHE1) hợp chất mới, lần phân lập từ thiên nhiên Từ Ngũ vị nam (Kadsura induta) phân lập xác định cấu trúc hợp chất gồm hợp chất lignan: schizanrin O (KIE1), schizanrin F (KIH2); rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl) tetrahydrofuran (KIE2) (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′-metylendioxi7,7′-epoxilignan (KIE3); hợp chất tritecpenoit: axit schizandronic (KIE4), axit lancifoic A (KIE5); hợp chất flavonoit: luteolin 7-O-β-D-glucopyranozit (KIE6); hợp chất phytosterol: β-sitosterol (KIH1), β-sitosteryl 3-O-β-Dglucopyranozit (KIE7) Trong đó, schizanrin O hợp chất mới, lần phân lập từ thiên nhiên Từ thân cành Na rừng (Kadsura coccinea) phân lập xác định cấu trúc hợp chất gồm hợp chất tritecpenoit: axit secococcinic G (KcE1), axit secococcinic F (KcE2); axit mangiferonic (KcE3), axit nigranoic (KcE4), axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) axit lancifoic A (KcE7); hợp chất glycerit: 2,3-dihydroxypropyl 28hydroxyoctacosanoat (KcE6); hợp chất steroit: β-sitosterol (KcH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (KcE8) 24 Từ thân Ngũ vị vảy chồi (Schisandra perulata) phân lập chất gồm hợp chất lignan: axit meso-dihydroguaiaretic (SpE5); rel-(8R,8'R)dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl) tetrahydrofuran (SpE6); (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′-metylendioxi-7,7′-epoxilignan (SpE7); hợp chất flavonoit: (2R,3S)-3,5,7,3’,4’-pentahydroxy-flavan (SpE8); hợp chất glycerit: 2,3-dihydroxypropyl hexacosanoat (SpH3); 2,3-dihydroxypropyl 28-hydroxyoctacosanoat (SpH4); hợp chất steroit: β-sitosterol (SpH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SpE2) Từ thân cành Ngũ vị tử nam (Schisandra sphenanthrea) phân lập xác định cấu trúc hợp chất gồm hợp chất lignan: (+)-gomisin M2 (SsH3); (±)-gomisin M1 (SsH4); gomisin N (SsH5); hợp chất tritecpenoit: axit kadsuric (SsE2); hợp chất glycerit: 1-linoleoylglycerol (SsH2); hợp chất steroit: β-sitosterol (SsH1) β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SsE1) Kết thử hoạt tính gây độc số dòng tế bào ung thư: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) phổi (A-549) số chất phân lập được, cho biết hợp chất (heteroclitalacton N, schizanrin O) hoạt tính, hầu hết chất lại thể hoạt tính mức trung bình Trong đó, axit nigranoic có tác dụng gây độc mạnh dòng tế bào ung thư buồng trứng với giá trị IC50 = 5,1 ± 1,7 μM [...]... từ loài 9,7 117 23 H L H 18,2 52,8 96 57 1500 300 50 66 110 15 8,2 12,3 48,3 49 H H H H: Phân lập đầu tiên từ họ Thành phần hóa học chính của 5 loài thực vật họ Schisandraceae được nghiên cứu, chủ yếu là các hợp chất lignan và tritecpenoit Một số hợp chất phân lập được giống nhau ở 2 loài cùng chi: axit secococcinic F phân lập được từ loài K heteroclita và K coccinea, schizanrin F được phân lập từ loài. .. (HT-29) và phổi (A-549) cho thấy chỉ có hợp chất axit nigranoic với giá trị IC50 = 5,1 ± 1,7 μM, có tác dụng chống ung thư buồng trứng mạnh vượt trội so với chất đối chứng mitoxantron 23 KẾT LUẬN 1 Luận án đã nghiên cứu thành phần hóa học của 5 loài thực vật thuộc 2 chi trong họ Schisandraeae, gồm 3 loài chi Kadsura: Na rừng (Kadsura coccinea), Na leo (Kadsura heteroclita), ngũ vị nam (Kadsura induta) và. .. lập được từ các loài nghiên cứu chủ yếu thuộc khung dibenzocyclooctadien lignan (6/10 hợp chất), ngoài ra còn có 2 hợp chất khung tetrahydrofuran và 2 hợp chất khung diarylbutan Điều này hoàn toàn phù hợp với thành phần hóa học chính của các lignan trong họ Schisandraceae, trong các tài liệu đã công bố Các hợp chất tritecpenoit phân lập được từ 5 loài nghiên cứu cho thấy thành phần hóa học chính là các... lập từ loài K heteroclita và K induta, và 2 loài khác chi: axit kadsuric được phân lập từ loài K heteroclita và S sphenanthera, rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4metilendioxiphenyl)tetrahydrofuran và (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi3′,4′metilendioxi-7,7′-epoxilignan được phân lập từ loài K induta và S perulata,… cho thấy mối liên quan về thành phần hóa học của các loài trong họ Schisandraceae Các hợp chất... cycloartan (4/9 hợp chất) và 1 hợp chất schinortritecpenoit, phù hợp với thành phần hóa học chính của các hợp chất tritecpenoit trong họ Schisandraceae, trong các tài liệu đã công bố Điều đặc biệt, hợp chất schinortritecpenoit rất ít phân bố trong các loài thuộc chi Kadsura Các hợp chất lanostan và cycloartan đã phân lập được chủ yếu có cấu hình E (4/6 hợp chất), trong khi đó, các hợp chất thuộc các khung này... β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SsE1) 7 Kết quả thử hoạt tính gây độc trên một số dòng tế bào ung thư: buồng trứng (OVCAR), đại tràng (HT-29) và phổi (A-549) của một số chất sạch phân lập được, cho biết 2 hợp chất mới (heteroclitalacton N, schizanrin O) không thể hiện hoạt tính, hầu hết các chất còn lại đều thể hiện hoạt tính ở mức khá và trung bình Trong đó, axit nigranoic có tác dụng gây độc... tử nam (S sphenanthera) Từ cặn dịch chi t n-hexan và etyl axetat thân cành cây Ngũ vị tử nam 7 hợp chất đã được phân lập và xác định cấu trúc hóa học, gồm 3 lignan: (+)-gomisin M2 (SsH3); (±)-gomisin M1 (SsH4); gomisin N (SsH5); 1 tritecpenoit: axit kadsuric (SsE2); 1 glycerit: 1-linoleoylglycerol (SsH2); và 2 steroit: β-sitosterol (SsH1) và β-sitosteryl 3-O-β-D-glucopyranozit (SsE1) Cấu trúc hóa học. .. 1.04 (s) #δH và #δC của micrandilacton C (1H: 400 MHz, 13C: 100 MHz, pyridin-d5) [160] 3.2 Các hợp chất phân lập được từ lá cây Ngũ vị nam (K induta) Từ cặn dịch chi t n-hexan và etyl axetat lá cây Ngũ vị nam 9 hợp chất đã được phân lập và xác định cấu trúc hóa học gồm 4 lignan: schizanrin O (KIE1), schizanrin F (KIH2); (7S,8R,8’R,7’R)-3,4-dimetoxi-3′,4′metylendioxi-7,7′-epoxilignan (KIE3) và rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4metylendioxiphenyl)tetrahydrofuran... phát hiện từ loài Kadsura polysperma ở Trung Quốc [96] 15 Cấu trúc hóa học và các tương tác HMBC chính của axit 24(E)-3,4-seco-9βH-lanosta-4(28),7,24-trien-3,26-dioic (KcE5) Bảng 3.16 Dữ liệu phổ NMR của KcE5 (1H: 500MHz, 13C: 125MHz, CDCl3+CD3OD) TT KcE5 [174] #δH (mult., J Hz) δC δH (mult., J Hz) #δC 1 28,8 1,73 và 1,58 (m) 29,7 2,04 và 1,92 (m) 2 29,5 2,26 và 2,26 (m) 30,0 2,58 (dt; 11,0 và 5,5) 3... N và kadsuralignan B không có hoạt tính; 2 hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư yếu: axit nigranoic và rel-(8R,8'R)-dimetyl-(7S,7'R)-bis(3,4-metylendioxiphenyl) tetrahydrofuran với giá trị 40 μM< IC50 < 100 μM; 8 hợp chất có hoạt tính gây độc tế bào ung thư trung bình: axit secococcinic F, axit kadsuric, axit schizandronic, axit lancifoic A, axit secococcinic F, gomisin N, (±)-gomisin M1 và