TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA SINH HỌC ỨNG DỤNG BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ NGÀNH: D620301 ẢNH HƯỞNG CỦA DỊCH CHIẾT BẠCH HOA XÀ LÊN VI KHUẨN Aeromonas hydrophila Edwardsiella ictaluri GÂY BỆNH TRÊN CÁ Sinh viên thực Quách Thị Thanh Tâm MSSV: 1153040068 Lớp: NTTS K6 Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA SINH HỌC ỨNG DỤNG BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ NGÀNH: D620301 ẢNH HƯỞNG CỦA DỊCH CHIẾT BẠCH HOA XÀ LÊN VI KHUẨN Aeromonas hydrophila Edwardsiella ictaluri GÂY BỆNH TRÊN CÁ Cán hướng dẫn Sinh viên thực Th.S NGUYỄN LÊ HOÀNG YẾN Quách Thị Thanh Tâm MSSV: 1153040068 Lớp: NTTS K6 Cần Thơ, 2015 XÁC NHẬN CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Khóa luận: “Ảnh hưởng dịch chiết Bạch hoa xà lên vi khuẩn Aeromonas hydrophila Edwardsiella ictaluri gây bệnh cá” Sinh viên thực hiện: QUÁCH THỊ THANH TÂM Lớp: Đại học Nuôi trồng thủy sản K6 Khóa luận hoàn thành theo yêu cầu cán hướng dẫn chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng bảo vệ Khoá luận tốt nghiệp ngày 21 tháng năm 2015 Cán hướng dẫn Cần Thơ, ngày….tháng… năm 2015 Sinh viên thực ThS NGUYỄN LÊ HOÀNG YẾN QUÁCH THỊ THANH TÂM LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết khóa luận hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết nghiên cứu chưa dùng cho khóa luận cấp khác Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2015 Sinh viên thực QUÁCH THỊ THANH TÂM i LỜI CẢM ƠN Lời em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Khoa Sinh học ứng dụng tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức quý báo suốt thời gian em học tập trường Đặc biệt em xin cảm ơn sâu sắc đến Cô Nguyễn Lê Hoàng Yến bảo hướng dẫn tận tình cho em kiến thức lý thuyết, kỹ cách làm đề tài, cách giải vấn đề, đặt câu hỏi … Không thế, suốt trình nghiên cứu đề tài phát sinh không khó khăn nhờ nhận giúp đỡ, động viên cha mẹ tạo điều kiện tốt cho học tập chỗ dựa tinh thần vững cho vượt qua khó khăn để hoàn thành đề tài tốt nghiệp Toàn thể bạn lớp đại học Nuôi trồng thủy sản khóa đồng hành chia sẻ suốt thời gian qua Trong thời gian làm luận văn tốt nghiệp, dù cố gắng tìm tòi, học hỏi kiến thức kinh nghiệm thân hạn chế nên không tránh khỏi thiếu sót Em mong nhận thông cảm ý kiến đóng góp quý thầy cô, để đề tài em hoàn chỉnh Lời cuối cùng, em xin gửi lời kính chúc đến quý thầy cô Quý thầy cô Khoa Sinh học ứng dụng Trường Đại học Tây Đô Đặc biệt Cô Nguyễn Lê Hoàng Yến dồi sức khỏe thành công sống tiếp tục cống hiến cho nghiệp giáo dục Em xin chân thành cảm ơn! ii TÓM TẮT Thí nghiệm tiến hành xác định tính kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Aeromonas hydrophila Edwardsiella ictaluri mật độ vi khuẩn 103, 106, 109 (CFU/ml), với lần lặp lại Sau thời gian tiến hành thí nghiệm, kết xác định được: Trong phương pháp chiết xuất Bạch hoa xà phương pháp ngâm cồn 70oC ngày cho kết kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila cao nhất, cụ thể là: tỷ lệ dịch chiết 3:1 với mật độ 109 cfu/ml đường kính vòng khuẩn đạt (19,8 ± 1,0 mm) Trong phương pháp chiết xuất phương pháp ngâm Bạch hoa xà cồn 70oC thời gian ngày cho kết kháng Edwardsiella ictaluri cao nhất, cụ thể là: tỷ lệ dịch chiết 3:1 với mật độ 109 cfu/ml đường kính vòng khuẩn đạt (22,7 ± 0,5 mm) Đường kính vòng tròn kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri cao so với vi khuẩn Aeromonas hydrophila phương pháp chiết xuất, tỷ lệ dịch chiết mật độ vi khuẩn Qua kết thí nghiệm cho thấy sử dụng thảo dược Bạch hoa xà ức chế loại vi khuẩn Aeromonas hydrophila Edwardsiella ictaluri nghiên cứu khác Từ khóa: Aeromonas hydrophila, dịch chiết Bạch hoa xà, Edwardsiella ictaluri, kháng khuẩn iii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN ii TÓM TẮT iii DANH SÁCH BẢNG vi DANH SÁCH HÌNH vii CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan vi khuẩn 2.1.1 Vi khuẩn Aeromonas hydrophila 2.1.2 Vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 2.2 Tình hình nghiên cứu bệnh vi khuẩn Aeromonas hydrophila; Edwardsiella ictaluri 2.2.1 Trên giới 2.2.3 Trong nước 2.3 Bạch hoa xà 2.3.1 Đặc điểm chung Bạch hoa xà 2.3.2 Thành phần hóa học Bạch hoa xà 2.4 Tình hình sử dụng thảo dược nuôi trồng thủy sản 2.4.1 Thế giới 2.4.2 Trong nước CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHÊN CỨU 11 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 11 3.2 Vật liệu, dụng cụ hóa chất 11 3.2.1 Vật liệu nghiên cứu 11 3.2.2 Dụng cụ 11 3.2.3 Hóa chất 11 iv 3.3 Phương pháp nghiên cứu 12 3.3.1 Sơ đồ tổng quát bước tiến trình thực 12 3.3.2 Phương pháp chiết xuất Bạch hoa xà 12 3.3.3 Xác định khả kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà 13 3.4 Các bước tiến hành xác định vòng kháng khuẩn 13 3.5 Phương pháp xử lý số liệu 14 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 4.1 Tính kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà chiết xuất phương pháp đun với nước cất 98oC 15 4.1.1 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Aeromonas hydrophila 15 4.1.2 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 16 4.2 Tính kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà phương pháp ngâm với cồn 70o ngâm ngày 17 4.2.1 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Aeromonas hydrophila 17 4.2.2 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 19 4.3 Tính kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà phương pháp ngâm với cồn 70o ngâm ngày 20 4.3.1 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Aeromonas hydrophila 20 4.3.2 Tính kháng khuẩn vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 22 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 25 5.1 Kết luận 25 5.2 Đề xuất 25 TÀI LIỆU THAM KHẢO 26 PHỤ LỤC A A PHỤ LỤC B A PHỤ LỤC C A PHỤ LỤC D A v DANH SÁCH BẢNG Bảng 3.1: Theo dõi tính kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Aeromonas hydrophila; Edwardsiella ictaluri bằng phương pháp khác 13 Bảng 3.2: E coli and other enteric gram - negative rods (Nguồn: microbelibrary.org) 14 Bảng 4.1: Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Aeromonas hydrophila 15 Bảng 4.2 Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 16 Bảng 4.3 Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Aeromonas hydrophila 18 Bảng 4.4: Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 19 Bảng 4.5 Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Aeromonas hydrophila 21 Bảng 4.6: Kết đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch hoa xà vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 22 vi DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1: Vi khuẩn Aeromonas hydrophila (nguồn: tự chụp) Hình 2.2: Vi khuẩn Edwardsiella ictaluri (nguồn: tự chụp) Hình 2.3: Bạch hoa xà (nguồn: hocvienquany.vn) Hình 3.1: Sơ đồ tổng quát bước tiến trình thực 12 Hình 4.1: Kết vòng kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila dịch chiết Bạch hoa xà phương pháp đun với nước cất 98oC 16 Hình 4.2: Kết vòng kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri dịch chiết Bạch hoa xà phương pháp đun với nước cất 98oC 17 Hình 4.3: Kết vòng kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila dịch chiết Bạch hoa phương pháp ngâm cồn 70o ngày 19 Hình 4.4: Kết vòng kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri dịch chiết Bạch hoa phương pháp ngâm cồn 70o ngày 20 Hình 4.5: Kết vòng kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila dịch chiết Bạch hoa phương pháp ngâm cồn 70o ngày 22 Hình 4.6: vòng kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri dịch chiết Bạch hoa phương pháp ngâm cồn 70o ngày 23 vii D4 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp đun với nước cất với 98oC vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với tỷ lệ vi khuẩn 1:1 D D5 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp đun với nước cất với 98oC vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với tỷ lệ vi khuẩn 2:1 E D6 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp đun với nước cất với 98oC vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với tỷ lệ vi khuẩn 3:1 F D7 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 103 G D8 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 106 H D9 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 109 I D10 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 1:1 J D11 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 2:1 K D12 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 3:1 L D13 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 103 M D14 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 106 N D15 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với mật độ vi khuẩn 109 O D16 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 1:1 P D17 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 2:1 Q D18 Kết phân tích đường kính vòng kháng khuẩn dịch chiết Bạch Hoa xà phương pháp ngâm với cồn 700 ngày vi khuẩn Edwardsiella ictaluri với với tỷ lệ vi khuẩn 3:1 R [...]... xà trên vi khuẩn Aeromonas hydrophila và vi khuẩn Edwardsiella sp bằng 3 phương pháp khác nhau Dựa vào đường kính vòng tròn kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila và vi khuẩn Edwardsiella ictaluri của dịch chiết Bạch hoa xà cho kết quả dịch chiết Bạch hoa xà kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri cao hơn so với vi khuẩn Aeromonas hydrophila trong cùng 1 phương pháp, tỷ lệ dịch chiết và mật độ vi khuẩn Qua... khuẩn gây ra Như vậy, đường kính kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà ở tỷ lệ 3:1 với mật độ vi khuẩn Edwardsiella ictaluri 109 cfu/ml là 22,7 mm cao hơn so với tác dụng lên vi khuẩn Aeromonas hydrophila (19,8 mm) Hình 4.6: quả vòng kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri của dịch chiết Bạch hoa bằng phương pháp ngâm cồn 70o trong 6 ngày 4.3.3 So sánh khả năng kháng vi khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên. .. Norfloxacin và thảo dược Diệp hạ châu đỏ trong vi c điều trị vi khuẩn Aeromonas hydrophila Hình 4.1: Kết quả vòng kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila của dịch chiết Bạch hoa xà bằng phương pháp đun với nước cất ở 98oC 4.1.2 Tính kháng khuẩn đối với vi khuẩn Edwardsiella ictaluri Đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Edwardsiella ictaluri thấp nhất ở tỷ lệ 1:1 là 9,9 mm và cao... khuẩn còn lại kính vòng kháng khuẩn của vi khuẩn dao động từ (9,9 - 14,6 mm) Qua đó cho thấy đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Edwardsiella ictaluri tỷ lệ thuận với tỷ lệ Bạch hoa xà : Dung môi và mật độ vi khuẩn được thể hiện qua bảng 4.2 Bảng 4.2: Kết quả đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Edwardsiella ictaluri Tỷ lệ BHX : dung môi... kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà bằng phương pháp ngâm với cồn 70o ngâm trong 3 ngày 4.2.1 Tính kháng khuẩn đối với vi khuẩn Aeromonas hydrophila Qua bảng 4.3 cho thấy, đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Aeromonas hydrophila thấp nhất tỷ lệ 1:1 (11,8 mm) và cao nhất ở tỷ lệ 3:1 (15,9 mm) ở các mật độ vi khuẩn khác nhau Kết quả vòng kháng khuẩn của dịch chiết. .. kính vòng tròn kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri luôn cao hơn so với vi khuẩn Aeromonas hydrophila trong cùng phương pháp chiết xuất, tỷ lệ dịch chiết và mật độ vi khuẩn 5.2 Đề xuất Nên có các thử nghiệm phân tích thêm về thành phần hóa học của cây Bạch hoa xà để hiểu rõ hơn về cơ chế kháng khuẩn Tiến hành thử nghiệm trên cá, dùng dịch chiết thảo dược để thử... kháng khuẩn của bạch hoa xà trên các vi khuẩn Aeromonas hydrophila; Edwardsiella ictaluri nhằm đáp ứng nhu cầu ứng dụng thực tế trong ương nuôi cá 1.3 Nội dung Xác định tính kháng khuẩn Aeromonas hydrophila; Edwardsiella ictaluri bằng dịch chiết Bạch hoa xà 1 CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan về vi khuẩn Vi khuẩn là một nhóm sinh vật đơn bào, có kích thước rất nhỏ (kích thước hiển vi) và thường... 4.3 Tính kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà bằng phương pháp ngâm với cồn 70o ngâm trong 6 ngày 4.3.1 Tính kháng khuẩn đối với vi khuẩn Aeromonas hydrophila Qua bảng 4.5, đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Aeromonas hydrophila thấp nhất tỷ lệ 1:1 (13,4 - 15,6 mm) và cao nhất ở tỷ lệ 3:1 (16,9 - 19,8 mm) với các mật độ vi khuẩn khác nhau Ở mật độ vi khuẩn 106, 109... vòng kháng vi khuẩn Aeromonas hydrophila của dịch chiết Bạch hoa bằng phương pháp ngâm cồn 70o trong 6 ngày 4.3.2 Tính kháng khuẩn đối với vi khuẩn Edwardsiella sp Đường kính vòng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà trên vi khuẩn Edwardsiella sp ở các mật độ vi khuẩn 103, 106, 109 cfu/ml cho kết quả thấp nhất tỷ lệ 1:1 (14,6 - 18,7 mm) và cao nhất ở tỷ lệ 3:1 (17,5 - 22,7 mm) Ở mật độ vi khuẩn 103,... Chứng tỏ khả năng kháng khuẩn của dịch chiết Bạch hoa xà tương đương dịch chiết lá Ổi nhưng thấp hơn so với Diệp hạ châu Hình 4.2: Kết quả vòng kháng vi khuẩn Edwardsiella ictaluri của dịch chiết Bạch hoa xà bằng phương pháp đun với nước cất ở 98oC Với cùng một phương pháp tách chiết Bạch hoa xà ở 3 tỷ lệ khác nhau cho kết quả vòng kháng khuẩn có sự khác nhau, dịch chiết Bạch hoa xà ở tỷ lệ 3:1 cho kết