oa häc t ù nhiª n ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN Khoa Sinh Học ®¹ i hä c kh Đề tài: Nghiên cứu khả chống ung thư hoạt chất phân lập từ Vông nem (Erythrina orientalis (l.) Murr., Fabaceae) Hậu phác (Magnolia officinalis rehd Et wils, Magnoliaceae) Học viên: Nguyễn Thị Ngọc Ánh K19 – Sinh học Thực nghiệm Cán hướng dẫn: TS Hoàng Thị Mỹ Nhung NỘI DUNG Giới thiệu đề tài Đối tượng phương pháp Kết thảo luận Kết luận kiến nghị Giới thiệu đề tài Ung thư điều trị ung thư Ung thư nguyên nhân gây tử vong hàng đầu nước phát triển thứ hai nước phát triển Các chất có nguồn gốc từ thiên nhiên có xu hướng được ưu tiên sử dụng Honokiol Magnolol Cây Hậu phác Magnolia officinalis Rehd Et wils • Đột quỵ • Sốt thương hàn • Các chứng liên quan đến thần kinh Honokiol Magnolol • Chống stress • Tiềm ức chế ung thư • Đau cấp tính • Các chứng liên quan đến dày Derrone Cây vông nem Erythrina orientalis L., Fabaceae • An thần • Hạ huyết áp • Kháng khuẩn Derrone • Kháng khuẩn • Kháng nấm • Có độc tính với tế bào ung thư Derrone Derrone có cấu trúc tương tự chất ức chế enzyme Aurora kinase công bố Aurora kinase • Aurora kinase biểu mức số loại ung thư • Đóng vai trò quan trọng trình phân chia NST ổn định nhân tế bào Mô hình nuôi cấy 2D 3D 2D • Thao tác đồng thời nhiều dòng, nhiều chất • Có khả tự động hóa cao • Chi phí rẻ 3D • Mô cấu trúc in vivo • Mô trình động học in vivo • Kiểm tra tương tác thuốc với khối u Mục đích Kiểm tra ảnh hưởng ba chất Honokiol, Magnolol Derrone mô hình 2D số dòng tế bào ung thư Kiểm tra ảnh hưởng Honokiol mô hình 3D khối cầu đa bào MCF7 Bước đầu nghiên cứu ảnh hưởng Honokiol lên hệ thống vi sợi tác động ba chất lên hoạt động enzyme Aurora kinase tế bào ung thư Kiểm tra độc tính mô hình 2D KPL4 HCT116 HeLa MCF7 Đồ thị biểu diễn đường cong đáp ứng liều dòng tế bào ung thư với H, M, D Taxol Tổng hợp giá trị IC50 mô hình 2D KPL4 Chất HCT116 IC50 ĐCSH ĐCSH R (µg/mL) H 8,3 0,91 14,8 0,96 D 17,8 0,93 Taxol 8,9 0,93 M H 20µg/mL ĐCDM H 20µg/mL D 20µg/mL HeLa IC50 IC50 (µg/mL) (µg/mL) ĐCSH ĐCDM ĐCDM RĐCDM 0,93 0,2 0,97 0,4 0,95 MCF7 R2 IC50 R2 (µg/mL) 31,63 0,94 17,8 0,93 4,3 0,99 5,6 0,97 HH 50µg/mL M 20µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL ngày H 20µg/mL Sự tăng trưởng khối spheroid MCF7 ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL ĐCSH ĐCSH D 20µg/mL ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM 13 ngày 17 ngày 21 ngày Tác động H lên trình tạo spheroid MCF7 ngày ĐCSH ngày H 20µg/mL H 5µg/ml H 10µg/ml ngày Tác động H lên tăng trưởng spheroid MCF7 ngày H 20µg/mL ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml ngày 17 ngày 20µg/mL ĐồDthị biểu diễn tăng trưởngthể tích khối spheroid MCF7 mẫu ĐCSH mẫu ủ H NĐ 10 µg/ml 20 µg/ml Tác động H lên tăng trưởng spheroid MCF7 13 ngày ĐCSH ngày H 20µg/mL ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml ngày 17 ngày H NĐ 10ug/ml H NĐ 20ug/ml D 20µg/mL 15 H 20µg/mL Tác động H lên vi sợi actin ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml ngày ĐCSH 17 ngày H 10µg/ml Các tế bào HeLa ủ H 10µg/ml có dạng dài, nối với vi sợi actin Actin Nhân ngày H 20µg/mL Tác động H lên vi sợi actin ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml ngày 17 ngày • Tế bào HeLa ủ H 10µg/ml không trì cấu trúc actin dạng lưới sợi tế bào chất • Một sốD tế bào chết bị teo nhỏ lại với đám actin biến đổi cấu 20µg/mL trúc hoàn toàn Actin Kiểm tra tác động lên H3PS10 ĐCSH: Sự phosphoryl hóa Histon H3 diễn bình thường Honokiol ĐCSH Magnolol Kiểm tra tác động lên H3PS10 ĐCSH ĐCSH: Sự phosphoryl hóa Histon H3 diễn bình thường Derrone Derrone: Biểu rõ rệt ức chế H3PS10 Kết luận kiến nghị Kết luận kiến nghị Kết luận Honokiol có độc tính với HCT 116, Hela, MCF7 KPL4 với số IC50 tương ứng 2; 31,63; 17,8 8,3 µg/mL; Magnolol có độc tính với dòng HCT116 KPL4 với số IC50 tương ứng 0,2 14,8 µg/mL; Derrone có độc tính với dòng KPL4 với số IC50 17,8 µg/mL (R2 >0,9) Honokiol ngăn cản trình tạo khối spheroid tế bào MCF7 nồng độ 10µg/mL ức chế tăng trưởng khối nồng độ 10 20 µg/mL Honokiol tác động đến xếp, phân bố hệ thống vi sợi actin, làm tổ chức actin bị rối loạn, không tồn dạng mạng lưới sợi mà co cụm thành đám màng tế bào tế bào chất Derrone có khả ức chế hoạt tính Aurora kinaza Kết luận kiến nghị Hướng nghiên cứu Nghiên cứu thêm chế tác động Honokiol, Magnolol Derrone lên tế bào Tiếp tục kiểm tra tác động Honokiol, Magnolol Derrone lên mô hình 2D, 3D dòng tế bào ung thư khác xem xét thử nghiệm mô hình in vivo Và xin chân thành cảm ơn: PGS.TS Trần Công Yên PGS.TS Nguyễn Thị Quỳ TS Hoàng Thị Mỹ Nhung ThS Bùi Thị Vân Khánh TS Phương Thiện Thương Các thầy cô giáo Khoa Sinh học – ĐH Khoa học Tự nhiên – ĐHQGHN Cùng bạn lớp K51B – CNSH, anh chị, bạn em môn Tế bào – Mô – Phôi Lý sinh đặc biệt Nhóm Ung thư thực nghiệm nhiệt tình giúp đỡ hoàn thiện đề tài !!! [...]...Đối tượng và phương pháp 2 Đối tượng Các dòng tế bào ung thư: Các chất: • HCT116 – ung thư ruột kết • Honokiol (H) • HeLa – ung thư cổ tử cung • Magnolol (M) • MCF7 – ung thư vú • Derrone (D) • KPL4 – ung thư vú • Taxol 2 Phương pháp MTS 2 Rã đông và nuôi cấy Phương pháp MTS 2 Phương pháp MTS Rã đông và nuôi cấy Tra tế bào và ủ thuốc Mẫu C1 C2 C3 C4 C5 (µg/mL) (µg/mL)... khả năng gây chết 50% tế bào 2 Tạo khối spheroid 2 Tạo dung dịch huyền phù Tạo khối spheroid 2 Tạo khối spheroid Tạo dung dịch huyền phù Tạo giọt treo 2 Tạo khối spheroid Tạo dung dịch huyền phù Tạo giọt treo Kiểm tra hình thành khối 2 Tạo khối spheroid Tạo dung dịch huyền phù Tạo giọt treo Kiểm tra hình thành khối Hạ giọt treo và theo dõi Agarose 1% 2 Tạo đường cong sinh trưởng của spheroid Tạo dung... treo và theo dõi Tạo đường cong sinh trưởng 2 Tác động của H lên quá trình tạo spheroid MCF7 H (5 và 10 µg/ml) Tạo dung dịch huyền phù Tạo giọt treo Kiểm tra hình thành khối Kiểm tra sự hình thành khối Hạ giọt treo và theo dõi Kiểm tra sự phát triển khối 2 Tác động của H lên sự tăng trưởng spheroid MCF7 Tạo dung dịch huyền phù Tạo giọt treo Kiểm tra hình thành khối H (10 và 20 µg/ml) Hạ giọt treo và. .. Kiểm tra sự sinh trưởng của khối 2 Nhuộm huỳnh quang miễn dịch Nuôi cấy tế bào trên coverglass H 10 và 20 µg/ml H, M, D 10 µg/ml Nhuộm tubulin Nhuộm actin Nhuộm H3PS10 Nhuộm nhân Nhuộm nhân Quan sát và phân tích hình ảnh hiển vi Kết quả 3 Kiểm tra độc tính trên mô hình 2D KPL4 HCT116 HeLa MCF7 Đồ thị biểu diễn đường cong đáp ứng liều của các dòng tế bào ung thư với H, M, D và Taxol 3 Tổng hợp giá... đông và nuôi cấy Tra tế bào và ủ thuốc Ủ MTS/PMS Mẫu C1 C2 C3 C4 C5 (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) H, M, D 5 10 20 40 50 Taxol 0,003 0,03 0,3 3 30 2 Phương pháp MTS Rã đông và nuôi cấy Tra tế bào và ủ thuốc Ủ MTS/PMS Đo mật độ quang học Mẫu C1 C2 C3 C4 C5 (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) (µg/mL) H, M, D 5 10 20 40 50 Taxol 0,003 0,03 0,3 3 30 2 Phương pháp MTS Rã đông và nuôi cấy Tra tế bào và. .. Tác động của H lên quá trình tạo spheroid MCF7 5 ngày ĐCSH 9 ngày H 20µg/mL H 5µg/ml H 10µg/ml 7 ngày 3 Tác động của H lên sự tăng trưởng spheroid MCF7 9 ngày H 20µg/mL ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml 5 ngày 17 ngày 20µg/mL ĐồDthị biểu diễn sự tăng trưởngthể tích khối spheroid MCF7 ở mẫu ĐCSH và mẫu ủ H NĐ 10 µg/ml và 20 µg/ml 3 Tác động của H lên... ngày H NĐ 10ug/ml H NĐ 20ug/ml D 20µg/mL 15 ngày 3 9 ngày H 20µg/mL Tác động của H lên vi sợi actin ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL H 50µg/mL 13 ngày H 10ug/ml 5 ngày ĐCSH 17 ngày H 10µg/ml Các tế bào HeLa ủ H 10µg/ml có dạng dài, nối với nhau bởi vi sợi actin Actin Nhân 3 9 ngày H 20µg/mL Tác động của H lên vi sợi actin ĐCSH ĐCSH ĐCSH ĐCDM ĐCDM ĐCDM H 20µg/mL HH 50µg/mL 5µg/mL