HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN KHẮC HẢI PHÂN LẬP TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VI KHUẨN HÒA TAN PHOSPHATE VÀ KALI KHÓ TAN TỪ ĐẤT LUẬN VĂN THẠC SĨ HÀ NỘI, NĂM 2015 HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN KHẮC HẢI PHÂN LẬP TUYỂN CHỌN CÁC CHỦNG VI KHUẨN HÒA TAN PHOSPHATE VÀ KALI KHÓ TAN TỪ ĐẤT Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Văn Giang HÀ NỘI, NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng tôi, kết nghiên cứu trình bày luận văn trung thực, khách quan chưa dùng để bảo vệ lấy học vị Tôi xin cam đoan giúp đỡ cho việc thực luận văn cám ơn, thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nguyễn Khắc Hải Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn, nhận hướng dẫn, bảo tận tình thầy cô giáo, giúp đỡ, động viên bạn bè, đồng nghiệp gia đình Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Văn Giang tận tình hướng dẫn, dành nhiều công sức, thời gian tạo điều kiện cho suốt trình học tập thực đề tài Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới Ban Giám đốc, Ban Quản lý đào tạo, Bộ môn Công nghệ Vi sinh, Khoa Công nghệ Sinh học - Học viện Nông nghiệp Việt Nam tận tình giúp đỡ trình học tập, thực đề tài hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Xuân Cảnh, ThS Trần Thị Đào thầy cô giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt trình thực đề tài Xin chân thành cảm ơn gia đình, người thân, bạn bè tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ mặt, động viên khuyến khích hoàn thành luận văn Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Tác giả luận văn Nguyễn Khắc Hải Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii MỤC LỤC Lời cam đoan ii Lời cảm ơn iii Mục lục iv Danh mục chữ viết tắt vii Danh mục bảng viii Danh mục hình ix Trích yếu luận văn x Thesis abstract xi Phần Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Yêu cầu Phần Tổng quan tài liệu 2.1 Các dạng phosphate kali đất vòng tuần hoàn phosphate kali tự nhiên 2.1.1 Các dạng phospho đất 2.1.2 Vòng tuần hoàn phosphate tự nhiên 2.1.3 Sự chuyển hóa phosphate đất 2.1.2 Các dạng tồn kali chuyển hóa kali đất 2.2 10 Tổng quan vi sinh vật phân giải phosphate kali đất 12 2.2.1 Vi sinh vật phân giải phosphate đất 12 2.2.2 Vi sinh vật phân giải kali đất 15 2.3 Tình hình nghiên cứu vi sinh vật có khả phân giải phosphate kali khó tan đất 15 2.3.1 Tình hình nghiên cứu giới 15 2.3.2 Tình hình nghiên việt nam 17 Phần Vật liệu phương pháp nghiên cứu 20 3.1 Địa điểm nghiên cứu 20 3.2 Thời gian nghiên cứu 20 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 3.3 Đối tượng/vật liệu nghiên cứu 20 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 20 3.3.2 Dụng cụ, thiết bị thí nghiệm 20 3.3.3 Hóa chất 20 3.4 Nội dung nghiên cứu 21 3.5 Phương pháp nghiên cứu 21 3.5.1 Phương pháp lấy mẫu 21 3.5.2 Phương pháp nghiên cứu vi khuẩn 21 3.5.3 Phương pháp nhận diện vi khuẩn có khả phân giải kali khó tan đất 24 3.5.4 Phương pháp xác định hoạt độ phân giải phosphate khó tan chủng vi khuẩn 24 3.5.5 Phương pháp xác định lượng ion kali dung dịch sử dụng phương pháp tetraphenylborate 25 3.5.6 Khảo sát biến thiên ph môi trường chủng vi khuẩn tuyển chọn ngày nuôi cấy 26 3.5.7 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phân giải phosphate kali khó tan chủng vi khuẩn tuyển chọn 26 3.5.8 Khảo sát ảnh hưởng ph môi trường đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi khuẩn tuyển chọn 26 3.5.9 Khảo sát ảnh hưởng nguồn carbon nitơ đến khả phân giải phosphate khó tan chủng vi khuẩn tuyển chọn 27 3.5.10 Phương pháp xác định khả sinh indole acetic acid (iaa) chủng vi khuẩn tuyển chọn 27 3.5.11 Phương pháp xác định khả đối kháng chủng vi khuẩn số chủng nấm gây bệnh thực vật 28 3.5.12 Phương pháp định danh việc giải trình tự vùng 16s 29 Phần Kết thảo luận 30 4.1 30 Kết 4.1.1 Phân lập xác đinh đặc điểm hình thái vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan 30 4.1.2 Xác định khả phân giải phosphate kali khó tan chủng vi 4.1.3 khuẩn tiềm 32 Khảo sát đánh giả số đặc tính tiềm chủng vi khuẩn 33 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v 4.1.4 Kết nghiên cứu ảnh hưởng yếu tố môi trường đến khả phân giải phosphate kali khó tan chủng vi khẩn tiềm 36 4.1.5 Nghiên cứu số đặc điểm chủng vi khuẩn 591 40 4.2 44 Thảo luận 4.2.1 Phân lập tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả hòa tan phosphate kali khó tan 44 4.2.2 Ảnh hưởng yếu tố môi trường đến khả phân giải phosphate kali khó tan chủng vi khẩn tiềm 44 4.2.3 Chủng vi khuẩn 591 46 Phần Kết luận kiến nghị 48 5.1 Kết luận 48 5.2 Kiến nghị 48 Tài liệu tham khảo 49 Phụ lục 57 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Từ viết tắt Giải nghĩa µl Microliter DNA Deoxyribonucleic acid RNA Ribonucleic Acid ĐC Đối chứng IAA Indole-3-acetic acid LB Luria and Bertani ml Milliliter nm Nanometer NXB Nhà xuất PDA Potato dextro agar sp Species UV Ultra Violet Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Hàm lượng phosphate hữu tầng đất mặt loại đất khác mối quan hệ với thành phần giới đất Bảng 3.1 Thành phần hóa chất sử dụng để dựng đường chuẩn PO43- 25 Bảng 3.2 Thành phần hóa chất sử dụng để dựng đường chuẩn 26 Bảng 4.1 Bảng thống kê số lượng chủng vi khuẩn theo nguồn mẫu 31 Bảng 4.2 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc, tế bào chủng vi khuẩn phân giải phosphate kali khó tan 32 Bảng 4.3 Kết đối kháng 10 chủng vi khuẩn với số chủng nấm gây bệnh thực vật 36 Bảng 4.4 Kết so sánh phân tích trình tự chủng 591 41 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Vòng tuần hoàn phosphate tự nhiên Hình 2.2 Sơ đồ trình chuyển hóa phosphate đất Hình 2.3 Sơ đồ chuyển hóa dạng kali đất 11 Hình 2.4 Sơ đồ trình phân giải nucleoprotein 13 Hình 4.1 Vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan 30 Hình 4.2 31 Vi khuẩn có khả phân giải kali khó tan môi trường Aleksandrov Hình 4.3 Sự phân giải phosphate (A) kali (B) chủng vi khuẩn 33 Hình 4.4 Sự chuyển màu môi trường bổ xung thuốc thử 34 Hình 4.5 Đồ thị biểu diễn nồng độ sinh IAA chủng vi khuẩn sau ngày nuôi cấy 34 Hình 4.6 Khả đối kháng chủng 591, NH4, 836, 831 với chủng nấm Fusarium oxysporum sau ngày nuôi cấy 35 Hình 4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ, đến khả phân giải phosphate (A) kali (B) chủng vi khuẩn tuyển chọn 37 Hình 4.8 Ảnh hưởng pH môi trường đến khả phân giải phosphate (A) kali (B) khó tan chủng vi khuẩn tuyển chọn 38 Hình 4.9 Ảnh hưởng nguồn carbon đến khả phân giải phosphate (A) kali (B) chủng vi khuẩn 39 Hình 4.10 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả phân giải phosphate (A) kali (B) chủng vi khuẩn 40 Hình 4.11 Một số đặc điểm chủng 591 41 Hình 4.12 Kết xây dựng phân loại chủng 591 42 Hình 4.12 Sự thay đổi pH môi trường phân giải phosphate (a) kali (b) khó tan chủng 591 trình nuôi cấy 43 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ix khả phân giải P- K- khó tan Nghiên cứu xác định trình nuôi cấy pH môi trường giảm dần đồng thời nồng độ PO43- K+ dung dịch tăng dần Trong nghiên cứu mình, Nagaraja et al (1970) trình hòa tan phosphate kali đất diễn axit hữu tiết môi trường rễ thực vật vi khuẩn vùng rễ Khi kiểm tra mẫu rễ-đất kính hiển vi điện tử Nagaraja quan sát thấy lớp gel nhớt rễ hạt keo đất (được gọi "mucigel") Nó xác định bao gồm chất pectic, có thành phần chủ yếu axit polygalacturonic methyl hóa Như kết luận khả hòa tan phosphate kali khó tan chủng 591 có liên quan chặt chẽ với việc giảm pH môi trường trình nuôi cấy Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 47 PHẦN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Nghiên cứu phân lập 10 chủng vi khuẩn có khả hoà tan phosphate kali khó tan từ đất Đồng thời chọn chủng vi khuẩn tiềm cao là: 591, 831, NH4 (≥8,86 mgPO43-/l; ≥1,49 mgK+/ml;≥110 µgIAA /ml) tiến hành khảo sát anh hưởng điều kiện nuôi cấy tới khả phân giải phosphate kali chủng vi khuẩn Nghiên cứu khả hòa tan phosphate kali cao pH 7, nhiệt độ tối ưu khoảng 30-35oC, nguồn nitơ bon tối ưu (NH4)2SO4 D-glucose.Trong điều kiện tối ưu, chủng 591 thể khả phân giải phosphate kali cao Chủng 591 sơ định danh thuộc chi Micrococus dựa kết đặc điềm hình thái khuẩn lạc, hình thái vi thể phân tích trình tự gene mã hóa ribosome 16S Nghiên cứu mối tương quan khả phân giả phosphate kali khó tan chủng 591 với khả sinh axit thể việc làm giảm pH môi trường qua trình nuôi cấy 5.2 KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu sâu khả phân giải dạng khoáng phosphate kali tự nhiên chủng 591 nói riêng chủng vi khuẩn tiềm nói chung - Nghiên cứu phương pháp bảo quản chủng 591 để tiến tới sử dụng chủng chế phẩm phân bón Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Đỗ Trung Bình (2002) Khả cố định giải phóng kali số loại đất miền nam Việt Nam Nông nghiệp PTNT số 10: 874-875 Trần Văn Chính (2010) Giáo trình thổ nhưỡng học NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Dơn, Nguyễn Thị Kiều Diễm Cao Ngọc Điệp (2012) P dơn, nguyễn thị, nguyễn thị kiều diễm cao, and ngọc điệp "phân lập nhận diện vi khuẩn hòa tan lân kali từ mẫu vật liệu phong hóa đá hoa cương núi sập, tỉnh an giang Tạp chí Khoa học ĐH Cần Thơ 24a 179-186 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (2000) Vi sinh vật học NXB Giáo dục Nguyễn Như Hà (2005) Giáo trình thổ nhưỡng, nông hóa NXB Hà Nội Phạm Thanh Hà, Nguyễn Thị Phương Chi (1999) Ảnh hưởng nguồn nitơ lên khả phân giải photphat khó tan chủng nấm sợi MN1 ĐT1, Hội nghị công nghệ Sinh học toàn quốc, Nxb Khoa học kỹ thuật, Hà Nội, tr 434 – 440 Trần Thị Thu Hà (2009) Khoa học phân bón, Nhà xuất Nông nghiệp Hà Nội Hoàng Thị Thái Hòa (2011) Giáo trình phân bón Đại học Nông lâm Huế NXB Nông Nghiệp Phạm Thị Ngọc Lan (2003) Ảnh hưởng số điều kiện nuôi cấy đến sinh trưởng phát triển vi khuẩn phân giải phosphate khó tan, Tạp chí sinh học 10 Bạch Phương Lan (2004) Giáo trình vi sinh học ứng dụng, NXB trường đại học Đà Lạt 11 Phạm Thị Ngọc Lan, Trần Thị Thanh Nhàn (2008) Điều kiện nuôi cấy tối ưu cho sinh trưởng phát triển số chủng nấm mốc hòa tan phosphate vô cơ, Tạp chí khoa học, đại học Huế, số 48 12 Vũ Thúy Nga, Nguyễn Ngọc Quyên, Trần Tú Thủy, Phạm Văn Toàn (2003) Nghiên cứu khả sinh tổng hợp IAA phân giải phosphate vô khó tan vi khuẩn Bradyrhizobium Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống Báo cáo hội nghị CNSH toàn quốc NXB KH&CN Hà Nội, tr.349-352 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 49 13 Nguyễn Thị Huỳnh Như, Nguyễn Hữu Hiệp, Nguyễn Minh Đời, Trần Nguyễn Nhật Khoa Thái Trần Phương Minh (2013) Phân lập dòng vi khuẩn nội sinh có khả tổng hợp IAA cố định đạm chuối Tạp chí khoa học trường Đại học Cần Thơ 14 Trương Thị Cẩm Nhung (2008) Giáo trình Dinh dưỡng trồng, NSB ĐH Nông lâm Tp Hồ Chí Minh 15 Trần Thị Ngọc Sơn, Trần Thị Anh Thư, Cao Ngọc Điệp, Lưu Hồng Mẫn Nguyễn Ngọc Nam (2011) Hiệu phân hữu phân vi sinh sản xuất lúa trồng cạn Đồng sông Cửu Long, Hội thảo – Colloque – Đại học Mở HCM – Université Ouverte de HCM ville 16 Võ Đình Quang (1999) Trạng thái lân đất Việt Nam Kết nghiên cứu khoa học, – Viện thổ nhưỡng nông hóa, NXB Nông nghiệp Hà Nội 17 Nguyễn Xuân Thành (2007) Thực tập vi sinh vật chuyên ngành, NXB ĐH Nông nghiệp Hà Nội 18 Phạm Thị Phương Thúy, Dương Thị Bích Huyền Nguyễn Mỹ Hoa (2012) Khả hấp phụ lân đất trồng rau màu chủ yếu đồng sông Cửu Long Tạp chí Khoa học ĐH Cần Thơ :22a 222-232 " 19 Phan Tuấn Triều (2009), Giáo trình tài nguyên Đất Môi trường, NXB ĐH Bình Dương Tài liệu tiếng Anh 20 Abd-Alla, M H (1994) Use of organic phosphorus byRhizobium leguminosarum biovarviceae phosphatases Biology and fertility of soils, 18(3), 216-218 21 Alagawadi, A.R., and A.C Gaur (1992) Inoculation of Azospirillum brasilense and phosphate solubilizing bacteria on yield of {Sorghum bicolor (L.) Moench} in dry land Trop Agric 69:00:00 347-350 22 Aleksandrov, V G., R N Blagodyr, & I P Ilev (1967) Liberation of phosphoric acid from apatite by silicate bacteria Mikrobiol Z (Kiev), 29, 111-114 23 Alexander M (1977) Introduction to Soil Microbiology John Wiley and Sons Inc., New York, USA 24 Mohite B (2013) Isolation and characterization of indole acetic acid (IAA) producing bacteria from rhizospheric soil and its effect on plant growth, Journal of Soil Science and Plant Nutrition Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 50 25 Balamurugan A., T Princy, R Vidhya Pallavi, P Nepolean, R Jayabthi and R Premkumar (2010) Isolation and characterization of phosphate solubilizing bacteria in tea J Biosci Res 26 Banik, S., & Dey, B K (1982) Available phosphate content of an alluvial soil as influenced by inoculation of some isolated phosphate-solubilizing microorganisms Plant and Soil, 69(3), 353-364 27 Becker E W (1994), Microalgae: biotechnology and microbiology, Cambridge Universiti Press, pp – 42 28 Belimov, A A., A P Kojemiakov and C V Chuvarliyeva (1995) Interaction between barley and mixed cultures of nitrogen fixing and phosphate-solubilizing bacteria Plant Soil 173:29-37 29 Brady, N C., & R R Weil (1996) The nature and properties of soils (No Ed 11) Prentice-Hall Inc 30 Burns, R G (1983) Extracellular enzyme-substrate interactions in soil InSymposia of the Society for General Microbiology (Cambridge) [SYMP SOC GEN MICROBIOL (CAMB.).] 1983 31 Capper, A L., & R Campbell (1986) The effect of artificially inoculated antagonistic bacteria on the prevalence of take‐all disease of wheat in field experiments Journal of applied bacteriology, 60(2), 155-160 32 Chabot R., H Antoun and M P Cescas (1993) Grotwh stimulation of corn and romiane lettuce by microorganisms solubilizing inorganic phosphorous Can J Microbiol 39, 941-947 33 Chen, H H., G Z Zhao, D J Park, Y Q Zhang, L H Xu, J C Lee, & W J Li (2009) Micrococcus endophyticus sp nov., isolated from surface-sterilized Aquilaria sinensis roots International journal of systematic and evolutionary microbiology, 59(5), 1070-1075 34 Cresser M., K Killham and T Edwards (1993) Soil chemistry and its applications Cambridge Environmental Chemistry Series Cambridge University Press Cambridge 35 Dhanasekaran, D., K Ambika, N Thajuddin, A Panneerselvam (2012) Allelopathic effect of actinobacterial isolates against selected weeds Arch Phytopathol Plant Prot., 45 (2012), pp 505–521 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 51 36 Datta, M., S Banik, & R K Gupta (1982) Studies on the efficacy of a phytohormone producing phosphate solubilizingBacillus firmus in augmenting paddy yield in acid soils of Nagaland Plant and Soil, 69(3), 365-373 37 Deng S., R Bai, X Hu, & Q Luo (2003) Characteristics of a bioflocculant produced by Bacillus mucilaginosus and its use in starch wastewater treatment Applied microbiology and biotechnology, 60(5), 588-593 38 Dickman, S R., & R H Bray (1940) Colorimetric determination of phosphate Industrial & Engineering Chemistry Analytical Edition, 12(11), 665-668 39 Dulf R B., D M Webley (1959) 2-Ketogluconic acid as a natural chelator produced by soi; bacteria Chem ind (London) 1376-1377 40 Friedrich S., N P Platonova, G I Karavaiko, E Stichel, F Glombitza (1991) Chemical and microbiological solubilization of silicates Acta Biotechnol., 11: 187–196 41 Garcia, C., T Hernandez, F Costa, B Ceccanti, & G Masciandaro (1993) Kinetics of phosphatase activity in organic wastes Soil Biology and Biochemistry, 25(5), 561-565 42 Gaur, A C., & K P Ostwal (1972) Influence of phosphate dissolving bacilli on yield & phosphate uptake of wheat crop Indian journal of experimental biology 10, 393-4 43 Glick, B.R., Y Bashan (1997) Genetic manipulation of plant growth-promoting bacteria to enhance biocontrol of phytophatogens Biotechnol Adv 15, 353–378 44 Glick, B R (1995) The enhancement of plant growth by free-living bacteria Canadian Journal of Microbiology, 41(2), 109-117 45 Glickmann, E and Y Dessaux (1995) A critical examination of the specificity of the salkowski reagent for indolic compounds produced by phytopathogenic bacteria Appl Environ Microbiol, 61(2):793-796 46 Goldstein, A H (1986) Bacterial solubilization of mineral phosphates: historical perspective and future prospects American Journal of Alternative Agriculture, 1(02), 51-57 47 Greaves M P., D M Webley (1965) A study of the breakdown of organic phosphates by microorganisms from the root region of certain pasture grasses J Appl Bacteriol ;28:454–465 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 52 48 Gügi, B., N Orange, F Hellio, J F Burini, C Guillou, F Leriche, & J F Guespin-Michel (1991) Effect of growth temperature on several exported enzyme activities in the psychrotrophic bacterium Pseudomonas fluorescens.Journal of bacteriology, 173(12), 3814-3820 49 Gupta, G N., S Srivastava, S K Khare, & V Prakash (2014) Role of Phosphate Solubilizing Bacteria in Crop Growth and Disease Management Journal of pure and applied microbiology Vol.8(1), p 461-47 50 Halder, A K., A K Mishra, P Bhattacharyya & P K Chakrabartty (1990) Solubilization of rock phosphate by Rhizobium and Bradyrhizobium The Journal of General and Applied Microbiology, 36(2), 81-92 51 Harrison, A F (1987) Soil organic phosphorus: a review of world literature Wallingford: Cab International (p 257) 52 Hopkins C G., A L Whiting (1916) Soil bacteria and phosphates III Agric Exp Stn Bull 190:395-406 53 Hu X., J Chen & J Guo (2006) Two phosphate-and potassium-solubilizing bacteria isolated from Tianmu Mountain, Zhejiang, China World journal of Microbiology and Biotechnology, 22(9), 983-990 54 Mardad, I., Serrano, A., & Soukri, A (2013) Solubilization of inorganic phosphate and production of organic acids by bacteria isolated from a Moroccan mineral phosphate deposit African Journal of Microbiology Research, 7, 626-635 55 Illmer P, F Schinner (1992) Solubilization of inorganic phosphates by microorganisms isolated from forest soils Soil Biol Bioehem 24, 389-395 56 Jones D A., B F L Smith, M J Wilson, & B A Goodman (1991) Solubilizator fungi of phosphate in rise soil Mycol Res, 95, 1090-3 57 Kapoor K K (1995) Phosphorus mobilization through soil microorganisms.Plant microbe interaction in sustainable agriculture Behl RK, Khurana AL and Dogra RC (eds.) CCS HAU, Hisar and MMB, New Delhi, 46-61 58 Kapulnik, E., J Quick, & J E DeVay (1985, January) Germination of propagules of Verticillium dahliae in soil treated with methionine and other substances affecting ethylene production In Phytopathology, Vol 75, No 11, pp 1348-1348 59 Karnwal A (2009) Production of indole acetic acid by fluorescent Pseudomonas in the presence of L-tryptophan and rice root exudates Journal of Plant Pathology, Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 53 91(1):61-63 60 Katznelson H and B Bose (1959) Metabolic activity and phosphate lving capability of bacterial isolates from wheat roots, rhizosphere and non-rhizosphere soil Can J.Microbiol 5, 79–85 61 Kirchner M J., A G Wollum & L D King (1993) Soil microbial populations and activities in reduced chemical input agroecosystems Soil Science Society of America Journal, 57(5), 1289-1295 62 Kloepper J W., K Lifshitz, M N Schroth (1988) Pseudomonas inoculants to benefit plant production ISI Atlas Sci Anim Plant Sci pp 60–4 63 Kloepper, J W., R Lifshitz, & R M Zablotowicz (1989) Free-living bacterial inocula for enhancing crop productivity Trends in Biotechnology, 7(2), 39-44 64 Kloepper J W (1994) Plant growth promoting bacteria (other systems), In: Okon J, editor, Azospirillum/Plant Association, Boca Raton FL, CRC Press, 137-54 65 Lane, D J (1991) 16S/23S rRNA sequencing In Nucleic Acid Techniques in Bacterial Systematics, pp 115–175 Edited by E Stackebrandt & M Goodfellow London: Wiley 66 Lapeyrie, F., Ranger, J., & Vairelles, D (1991) Phosphate-solubilizing activity of ectomycorrhizal fungi in vitro Canadian Journal of Botany, 69(2), 342-346 67 Lemanceau, P (1992): Effects benefiques de rhizobacteries sur les plantes: exemple des Pseudomonasspp fluorescent Agronomie 12, 413–437 68 Li, F.C., S Li, Y.Z Yang and L.J Cheng, (2006) Advances in the study of weathering products of primary silicate minerals, exemplified by mica and feldspar Acta Petrologica Mineralogica, 25: 440-448 69 Lian, B., P.Q Fu, D.M Mo and C.Q Liu, (2002).A comprehensive review of the mechanism of potassium releasing by silicate bacteria Acta Mineralogica Sinica, 22: 179-183 70 Lindsay W L (1979) Chemical equilibria in soils John Wiley & Sons,New York, USA 71 Liu, D., B Lian and H Dong (2012) Isolation of Paenibacillus sp and assessment of its potential for enhancing mineral weathering Geomicrobiol J., 29: 413-421 72 Lynch, J M (1990) Introduction: some consequences of microbial rhizosphere competence for plant and soil.The rhizosphere., 1-10 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 54 73 Nautiyal C S., S Bhadauria, P Kumar, H Lal,R Mondal, & D Verma (2000) Stress induced phosphate solubilization in bacteria isolated from alkaline soils FEMS Microbiology Letters, 182(2), 291-296 74 Nagar A C N V (2012) Media optimization for inorganic phosphate solubilizing bacteria isolated from anand argiculture soil Life, 50, 245 75 Nagarajah, S., Posner, A M., & Quirk, J P (1970) Competitive adsorption of phosphate with polygalacturonate and other organic anions on kaolinite and oxide surfaces Nature 228, 83 - 85 76 Perez E., M Sulbarán, M M Ball and L A Yarzabál (2007) Isolation and characterization of mineral phosphate-solubilizing bacteria naturally colonizing a limonitic crust in the southeastern Venezuelan region Soil Biol Biochem 39:2905-2914 77 Pflaum, R T., & L C.Howick (1956) Spectrophotometric determination of potassium with sodium tetraphenylborate Analytical Chemistry, 28(10), 15421544 78 Pikovskaya R I (1948) Mobilization of phosphorous in soil in the connection with vital activity of some microbial species, Microbiologiya, 17, 362-370 79 Raghu, K., & I C MacRae (1966) Occurrence of Phosphate‐dissolving Micro‐organisms in the Rhizosphere of Rice Plants and in Submerged Soils Journal of Applied Bacteriology, 29(3), 582-586 80 Rajan, S S S., J H Watkinson, & A G Sinclair (1996) Phosphate rocks for direct application to sboils Advances in agronomy, v 57 p 77-15 81 Richardson, A E (2001) Prospects for using soil microorganisms to improve the acquisition of phosphorus by plants Functional Plant Biology, 28(9), 897-906 82 Rodrı;guez, H., & Fraga, R (1999) Phosphate solubilizing bacteria and their role in plant growth promotion Biotechnology advances, 17(4), 319-339 83 Satyanarayana, T., B N Johri, & A Prakash (2012) Microorganisms in sustainable agriculture and biotechnology Springer Science & Business Media p35 84 Sheng, X F., L Y., He, & W Y Huang (2002) The conditions of releasing potassium by a silicate dissolving bacterial strain NBT Agric Sci China, 85 Sheng, X.F., (2005).Growth promotion and increased potassium uptake of cotton Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 55 and rape by a potassium releasing strain of Bacillus edaphicus Soil Biol Biochem., 37: 1918-1922 86 Spaepen, S., J Vanderleyden, & R Remans (2007) Indole-3-acetic acid in microbial and microorganism-plant signaling FEMS microbiology reviews,31(4), 425-448 87 Sperberg, J I (1958) The incidence of apatite-solubilizing organisms in the rhizosphere and soil Crop and Pasture Science, 9(6), 778-781 88 Subba Rao, N S (1982) Advances in agricultural microbiology Butterworth Scientific, 295-303 89 Tamura K., D Peterson, N Peterson, G Stecher, M Nei, & S Kumar (2011) MEGA5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods Molecular biology and evolution, 28(10), 2731-2739 90 Tarafdar, J C., & A Jungk (1987) Phosphatase activity in the rhizosphere and its relation to the depletion of soil organic phosphorus Biology and Fertility of Soils, 3(4), 199-204 91 Thaller, M C., F Berlutti, S Schippa, P Iori, C Passariello, & G M Rossolini (1995) Heterogeneous patterns of acid phosphatases containing low-molecularmass polypeptides in members of the family Enterobacteriaceae.International journal of systematic bacteriology, 45(2), 255-261 92 Toro, M., R Azcon, , J & Barea (1997) Improvement of Arbuscular Mycorrhiza Development by Inoculation of Soil with Phosphate-Solubilizing Rhizobacteria To Improve Rock Phosphate Bioavailability ((sup32) P) and Nutrient Cycling Applied and environmental microbiology, 63(11), 4408-4412 93 World Weather Information Service - Hanoi(bằng tiếng Anh) World Meteorological Organization Truy cập ngày 02 tháng 10 năm 2012 (http://worldweather.wmo.int/en/city.html?cityId=308) 94 Yadav, B.K & J.C Tarafdar (2010) Studies on Phosphatase Activity and Clusterbean Production as Influenced by the P Mobilizing Organism Emericella Rugulosa Legume Research, Vol 33, No 2, (June 2010), pp.118-220, ISSN 0250-5371 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 56 PHỤ LỤC Phụ lục Đường chuẩn cho phép phân tích hàm lượng PO43- theo phương pháp Xanh molipdate (Dickman and Bray, 1940 Phụ lục Đường chuẩn cho phép phân tích hàm lượng K+ theo phương pháp Tetraphenylborate Phụ lục Đồ thị đường chuẩn số OD nồng độ IAA Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 57 Phụ lục Các chủng vi khuẩn có khả phân giải phosphate khó tan TT Ký hiệu chủng Ký hiệu giữ giống YB 1.1 YB 1.7 YB 2.12 YB 2.14 YB 3.1 YB 3.4 YB 3.6 YB 1.1 YB 1.7 YB 2.12 YB 2.14 YB 3.1 YB 3.4 YB 3.6 Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Yên Bái Yên Bái Yên Bái Yên Bái Yên Bái Yên Bái Yên Bái YB 3.7 YB 3.7 Đồi chè Yên Bái 10 11 12 13 14 15 YB 3.8 YB 3.9 YB 3.11 YB 3.12 HB HB HB YB 3.8 YB 3.9 YB 3.11 YB 3.12 HB HB HB Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Đồi chè Yên Bái Yên Bái Yên Bái Yên Bái Hòa Bình Hòa Bình Hòa Bình Khô bóng Trơn ướt Trơn ướt Khô bóng Trơn ướt Trơn ướt Khô bóng Khô ráp, xù xì Khô bóng Khô bóng Khô bóng Khô Khô bóng Khô bóng Khô bóng 16 HB HB Đồi chè Hòa Bình Khô nhăn 17 18 HB HB HB HB Đồi chè Đồi chè Hòa Bình Hòa Bình 19 LC1 LC1 Đất đồi Lào Cai Trơn ướt Khô bóng Khô ráp, xù xì Mẫu đất Xuất xứ Bề mặt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Đặc tính Viền quang Màu sắc khuẩn lạc học Đục Tròn Trắng Đục Tròn Vàng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Không Đục Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Xám Đục Tròn Trắng đục Tròn trắng Đục Tròn Vàng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Dạng tròn, Đục rìa Trắng cưa Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Rìa lượn Đục Trắng sóng Hình thái tế bào Nhuộm Gram Lồi Lồi Lồi Lồi Lồi Lồi Lồi Hình cầu Hình cầu Hình que Hình que Hình cầu Hình que Hình que + + + + + _ Lồi Hình que + Lồi Lồi Lồi lồi Lồi Lồi Lồi Hình cầu Hình cầu Hình cầu Hình cầu Hình que Hình que Hình cầu + + + + + + + - Hình que + Lồi Lồi Hình que Hình que + + Lồi Hình que + Mặt cắt ngang Page 58 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Đặc tính Viền quang Màu sắc khuẩn lạc học Rìa lượn Đục Trắng sóng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng Đục Tròn Trắng TT Ký hiệu chủng Ký hiệu giữ giống Mẫu đất Xuất xứ 20 LC2 LC2 Đất đồi Lào Cai Trơn ướt 21 22 23 24 25 LC3 LC6 LC8 NH1 NH2 LC3 LC6 LC8 NH1 NH2 Đất đồi Đất đồi Đất đồi Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Lào Cai Lào Cai Lào Cai Hà Nội Hà Nội 26 NH3 NH3 Đất ruộng lúa Hà Nội 27 28 29 30 31 32 33 34 NH4 TB1 TB2 TB3 TB4 D4 590 591 NH4 834 835 836 837 D4 590 591 Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Đất ruộng lúa Đất đá ong Đất đá ong Hà Nội Thái Bình Thái Bình Thái Bình Thái Bình Hà Nội Hà Nội Hà Nội Trơn ướt Khô bóng Trơn ướt Khô bóng Khô bóng Khô ráp, xù xì Khô bóng Khô bóng Khô bóng Trơn ướt Khô bóng khô bóng Khô Khô 35 592 592 Đất đá ong Hà Nội khô nhăn đục 36 593 593 Đất đá ong Hà Nội Khô đục 37 38 39 594 CB 1.4 CB 2.1 594 830 831 Đất đá ong Đất đồi Đất đồi Hà Nội Cao Bằng Cao Bằng Khô Khô Khô Đục đục đục Bề mặt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Hình thái tế bào Nhuộm Gram Lồi Hình que + Lồi Lồi Lồi Lồi Lồi Hình que Hình que Hình cầu Hình cầu Hình cầu + + + + Mặt cắt ngang Đục Tròn Xanh Lồi Hình cầu + Đục Đục Đục Đục Đục Đục đục đục Tròn Tròn Tròn Rìa nhăn Tròn Tròn Tròn Tròn Rìa xẻ thùy Trắng Trắng Trắng Trắng Trắng trắng trắng vàng Lồi Lồi Lồi Lồi Lồi lồi lồi lồi Hình que Hình que Hình que Hình que Hình cầu Hình cầu Hình que Hình cầu + + + + + + Trắng - Hình que + Tròn trắng tạp sắc tố nâu Hình que + Tròn Tròn Tròn trắng trắng trắng Hình cầu Hình cầu Hình cầu + + + lồi lồi Page 59 TT Ký hiệu chủng Ký hiệu giữ giống Mẫu đất Xuất xứ 40 CB 2.2 832 Đất đồi Cao Bằng Bề mặt Khô Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Đặc điểm hình thái khuẩn lạc Đặc tính Viền quang Màu sắc khuẩn lạc học đục Tròn trắng Mặt cắt ngang lồi Hình thái tế bào Nhuộm Gram Hình cầu + Page 60 1500 bp Phụ lục Kết điện di kiểm tra sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 27f-1525r Phụ lục Dannh sách chủng nấm mốc sử dụng đề tài Chủng nấm Kí hiệu Nguồn gốc Aspergillus oryzae VTCC 040 Bảo tàng VSV chuẩn ĐHQG Hà Nội Aspergillus niger VTCC 035 Bảo tàng VSV chuẩn ĐHQG Hà Nội Aspergillus flavus VTCC 032 Bảo tàng VSV chuẩn ĐHQG Hà Nội Rhizoctonia sp (TT Bệnh Nhiệt đới) Sclerotinia sp (TT Bệnh Nhiệt đới) Fusarium oxysporum (TT Bệnh Nhiệt đới Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 61 [...]... phúng kali di dng mui tan, cõy trng s dng c Hỡnh 2.3 S chuyn húa gia cỏc dng kali trong t (Ngun: Watson et al., 2008) Dng kali kh dng i vi cõy trng bao gm dng kali hũa tan v dng kali trao i trong dung dch t Dng kali hũa tan l ngun K sn cú nht i vi thc vt cng nh vi sinh vt, ng thi õy cng l dang kali d b ra trụi nht Hm lng kali trong dung dch t núi chung thp (