BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PTNT HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THỊ MINH HIỀN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG IN VITRO CÂY SÂM NAM NÚI DÀNH CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC MÃ SỐ: 60.42.02.01 NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS ĐINH TRƯỜNG SƠN PGS.TS NGUYỄN THỊ LÝ ANH HÀ NỘI, NĂM 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực, khách quan, nghiêm túc chưa công bố công trình khác Nếu có sai sót, xin chịu hoàn toàn trách nhiệm Tác giả Nguyễn Thị Minh Hiền Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Hoàn thành luận văn này, trước hết xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Lý Anh TS Đinh Trường Sơn, quan tâm giúp đỡ hướng dẫn tận tình Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới cán bộ, giảng viên Viện Sinh học Nông nghiệp Khoa Công nghệ Sinh học Học viện Nông nghiệp Việt Nam giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn ông Vũ Văn Tĩnh, Giám đốc Trung tâm Khoa học Công nghệ Môi trường huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang, ông Trần Đình Dũng, Phó Giám đốc Trung tâm Khoa học Công nghệ Môi trường huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang nhiệt tình giúp đỡ, cung cấp thông tin, hạt giống giống Sâm nam núi Dành để thực đề tài Tôi xin cảm ơn đồng nghiệp, bạn bè nhiệt tình động viên, hỗ trợ hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn đến người thân gia đình đóng góp phần không nhỏ việc hoàn thành luận văn Hà Nội, ngày 02 tháng năm 2015 Tác giả Nguyễn Thị Minh Hiền Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục cụm từ kí hiệu viết tắt viii MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục đích, yêu cầu 2.1 Mục đích 2.2 Yêu cầu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Sâm nam núi Dành 1.1.1 Điều tra Sâm nam núi Dành tự nhiên 1.1.2 Sơ phân loại thực vật Sâm nam núi Dành 1.2 Công nghệ nuôi cấy mô, tế bào thực vật 1.2.1 Khái niệm nuôi cấy mô, tế bào thực vật 1.2.2 Cơ sở kĩ thuật nuôi cấy mô, tế bào thực vật 1.2.3 Các bước nhân giống vô tính in vitro 1.2.4 Các phương thức nhân giống vô tính in vitro 10 1.2.5 Ý nghĩa nhân giống trồng phương pháp nuôi cấy mô, tế bào 11 1.2.6 Một số nhân tố ảnh hưởng tới trình nuôi cấy mô, tế bào thực vật 13 1.2.7 Ứng dụng nhân giống in vitro nhân giống thuốc số loại trồng khác 1.3 18 Một số kết bật nghiên cứu thành phần hoạt chất nhân giống vô tính in vitro số loài thuộc chi Millettia Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 22 2.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 22 2.1.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu 22 2.1.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu 23 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iii 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 2.2.2 23 Nghiên cứu ảnh hưởng độ pH môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 2.2.3 23 Nghiên cứu ảnh hưởng đất núi Dành đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 2.2.4 24 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm nam núi Dành 2.2.5 24 Nghiên cứu phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 25 2.2.6 Nghiên cứu phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 26 2.2.7 Nghiên cứu hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành 28 2.2.8 Nghiên cứu ảnh hưởng αNAA đến tái sinh tạo củ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 29 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 2.3.1 Khử trùng mẫu tạo nguồn mẫu ban đầu từ hạt 29 2.3.2 Bố trí thí nghiệm 30 2.3.3 Điều kiện nuôi cấy 30 2.3.4 Các tiêu theo dõi 30 2.3.5 Phương pháp xử lý số liệu 31 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 32 Nghiên cứu ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 3.2 32 Nghiên cứu ảnh hưởng độ pH môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 3.3 34 Nghiên cứu ảnh hưởng đất núi Dành đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành 3.4 35 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm nam núi Dành 3.5 37 Nghiên cứu phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 38 Page iv 3.5.1 Nghiên cứu ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 3.5.2 Nghiên cứu ảnh hưởng αNAA đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 3.5.3 39 40 Nghiên cứu ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 42 3.6 Nghiên cứu phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 43 3.6.1 Nghiên cứu ảnh hưởng picloram đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 3.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng phối hợp BA, αNAA ABA đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 3.6.3 45 Nghiên cứu ảnh hưởng nguồn mẫu nuôi cấy nồng độ đường đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 3.6.4 44 47 Nghiên cứu ảnh hưởng AgNO3 đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành 49 3.7 Nghiên cứu hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành 51 3.7.1 Nghiên cứu ảnh hưởng αNAA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành 3.7.2 Nghiên cứu ảnh hưởng αNAA IBA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành 3.7.3 51 52 Nghiên cứu ảnh hưởng αNAA đến tái sinh tạo củ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 54 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 Kết luận 57 Kiến nghị 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC 62 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC BẢNG STT 3.1 Tên bảng Trang Ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.2 33 Ảnh hưởng độ pH môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.3 35 Ảnh hưởng đất núi Dành đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành (sau 12 tuần nuôi cấy) 3.4 36 Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.5 37 Ảnh hưởng 2,4-D đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.6 39 Ảnh hưởng αNAA đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.7 41 Ảnh hưởng BA đến phát sinh hình thái lớp mỏng tế bào từ mô Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.8 42 Ảnh hưởng picloram đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.9 44 Ảnh hưởng phối hợp BA, αNAA ABA đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.10 46 Ảnh hưởng nguồn mẫu nuôi cấy nồng độ đường đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.11 48 Ảnh hưởng AgNO3 đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.12 50 Ảnh hưởng αNAA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.13 51 Ảnh hưởng αNAA IBA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.14 53 Ảnh hưởng αNAA đến tái sinh tạo củ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành (sau 12 tuần nuôi cấy) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 55 Page vi DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 1.1 Hoa Sâm nam núi Dành 1.2 Củ Sâm nam núi Dành 1.3 Tiêu Callerya nitida (Benth.) Geesink vườn thực vật Kew nước Anh 1.4 Hình thái số loài thuộc chi Callerya 3.1 Cây Sâm nam núi Dành môi trường nuôi cấy (sau tuần nuôi cấy) 3.2 33 Sự tái sinh tạo callus lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành môi trường có bổ sung 2,4-D (sau tuần nuôi cấy) 40 3.3 Các hình thái callus tái sinh từ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành 41 3.4 Sự tái sinh tạo callus lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành môi trường có bổ sung BA (sau tuần nuôi cấy) 3.5 43 Ảnh hưởng picloram đến phát sinh hình thái callus Sâm nam núi Dành (sau tuần nuôi cấy) 3.6 45 Callus Sâm nam núi Dành từ nguồn mẫu khác (sau tuần nuôi cấy) 48 3.7 Sự hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành (sau 12 tuần nuôi cấy) 53 3.8 Sự tái sinh tạo củ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành môi trường có bổ sung αNAA (sau 12 tuần nuôi cấy) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 55 Page vii DANH MỤC CÁC CỤM TỪ VÀ KÍ HIỆU VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ ABA Abscisic acid BA (6-BA) Benzyladenine (6-Benzyladenine) cs Cộng CT Công thức DCR Douglas-fir cotyledon revised medium 2,4-D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid ĐC Đối chứng IAA Indole-3- acetic acid IBA Indole-3-butyric acid l lít LM LM: Lloyd and McCown MS Murashige Skoog (1962) NXB Nhà xuất αNAA Anpha-Naphthaleneacetic acid TB Trung bình TN Thí nghiệm Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Trong dân gian, sâm tên gọi khái quát số loài mà củ rễ sử dụng làm thuốc từ lâu đời nhiều nước châu Á Chính vậy, có nhiều loài sâm thuộc nhiều chi, họ khác chủ yếu loài thuộc chi Sâm (Panax) Rất nhiều loại củ sâm có hình dáng hao hao giống hình người, đặc biệt nhân sâm; số vị thuốc khác không thuộc chi, họ sâm có hình dáng củ tương tự thường gọi sâm Thêm vào đó, sâm vị thuốc bổ nên nhiều vị thuốc khác có tác dụng bổ gọi sâm gắn với chữ sâm Ở Việt Nam có nhiều loại thảo dược có tên sâm sử dụng từ lâu đời với công dụng khác Sâm nam núi Dành - loại sâm quý sản vật tiến vua triều đại phong kiến xưa, nhân dân vùng thường dùng thuốc dân gian chữa nhiều bệnh Trong sách “Đại Nam thống chí” có ghi: “Tên nỏ sản xuất Yên Thế Cát sâm sẵn đỉnh núi Chung Sơn…” Núi Chung Sơn nhắc tới núi Dành thuộc xã Việt Lập Liên Chung, huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Ngoài tên Sâm nam núi Dành, sâm có tên gọi khác Cát sâm hay Sâm Bảo Sơn (Kim Sa, 2012) Tuy nhiên, việc nhân giống Sâm nam núi Dành tự nhiên gặp nhiều khó khăn, hầu hết hạt đem gieo không nảy mầm, giâm cành cho tỷ lệ sống thấp, lại giống sâm quý bị nhiều người săn tìm Do đó, Sâm nam núi Dành lại đứng trước nguy bị tuyệt chủng Từ năm 2009, Trung tâm Khoa học Công nghệ Môi trường huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang thực đề án nhân giống loại sâm quý gia đình sống khu vực núi Dành, đến bước đầu cho kết khả quan Mặc dù vậy, kết điều tra thực tế cho thấy số lượng Sâm nam núi Dành nhân chưa tới ngàn Xuất phát từ yêu cầu thực tiễn đó, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu quy trình nhân giống in vitro Sâm nam núi Dành” nhằm góp phần xây dựng quy trình nhân nhanh giống, bảo tồn phát triển giống Sâm nam núi Dành Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 18 Nguyễn Văn Uyển (1993) Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội: 23-44 19 Nguyễn Văn Uyển (2000) Những phương pháp công nghệ sinh học thực vật – Tập 1, NXB Nông nghiệp: 34-37 20 Bùi Trang Việt (2000) Sinh lý Thực vật Đạicương, Phần II: Phát triển, NXB Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh 21 Đỗ Năng Vịnh (2002) Công nghệ sinh học trồng, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 22 Vũ Văn Vụ (1999) Sinh lý thực vật ứng dụng, NXB Giáo dục, Hà Nội 23 Vũ Văn Vụ, Vũ Thanh Tâm Hoàng Minh Tấn (2007) Sinh lý học thực vật, NXB Giáo dục, Hà Nội Tài liệu tiếng nước 24 Arnason, J T., Mata, R and Romeo, J T (1995) Phytochemistry of medicinal plants, Plenum Press, New York 25 Bammi, R K and Randhava, G S (1975) Dioscorea Improvement Project - Status Report IJHR Bangalore 26 Bhojwani, S S (1980) Factors affecting in vitro stage of micropropagation, Plant physiol., 65 (Suppel) 90 27 Chaher, N., Atmani, D., Berboucha, D., Berboucha, M and Boudaoud, H (2009) Flavonoids in human health: from structure to biological activity, Curr Nutr and Food Sci., 5(4): 225-237 28 Chaturvedi, H C and Sinha, M (1979) Mass propagation of Dioscorea floribunda by tissue culture, Ext Bull No NBRI Lucknow, India 29 Cui, Y J and Chen, R Y (2002) Progress of chemistry and pharmacology of Caulis spatholobi, Nat Prod Res Dev., 15(4): 72-78 30 Gautam, P L., Raina, R., Srivastava, U., Raychaudhuri, S P and Singh, B B (1998) Prospects of medicinal plants, Indian Society of Plant Genetic Resources, NBPGR, New Delhi 31 Gunter, E A and Ovodo, Y S (2003) Production of polysaccharides by Silene vugaris callus culture depending on carbohydrate of the medium, Nauka Interperiodica, 68(6): 882-889 32 Huang, B et al (2008) Study on Tissue Culture Techniques for Stem Segment of Millettia speciosa Champ., Journal of Anhui Agricultural Sciences, 32 33 Ishizaki, T., Fuminori, K., and Kiyoshi, M (2000) Exogenous Ethylene Enhances Formation of Embryogenic Callus and Inhibits Embryogenesis in Cultures of Explants of Spinach Roots, J AMER SOC HORT SCI 125(1): 21–24 2000 34 Mohan, S., Praraod, K and Ronald, J (1995) Somatic embryogenesis in woody plants (1995) Volume 2, Springer 35 Kumar, V., Giridhar, P and Gokare, A R (2009) AgNO3 - a potential regulator of ethylene activity and plant growth modulator, Electronic Journal of Biotechnology ISSN, 12 (2): 0717-3458 36 Lee, E J., Mobin, M., Hahn, E J and Paek, K Y (2006) Effects of sucrose, inoculum density, auxin, and aeretion volume on cell grow of Gymnema sylvestre, Plant Biology,49 (6): 427-431 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 59 37 Li, R R., Chen, Z K., Gao, S., and Liang, S W (2010) Study progress of Millettia speciosa, Asia-Pacific Traditional Medicine, 6: 165-167 38 Limasset cad Cornel (1949) C.R Acad Sci Paris, 228: 1888-1890 39 Ye, M., Yang, W Z., Liu, K D., Qiao, X., Li, B J., Cheng, J., Feng, J., Guo, D A and Zhaon, Y Y (2012)., Journal of Pharmaceutical Analysis, 2(1): 35-42 40 Morel and Martin (1952) C R Acad Sci., 235: 1324 - 1325 41 Murashige, T and Skoog, F (1962) A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 473-479 42 Murashige, T (1980) Plant Growth, Substances & Commercial Uses of tissues Verlarg, Berlin, Heidelberg, New York 43 Nagella, P and Murthy, H N (2010) Establishment of cell suspension cultures of Withania somnifera for the production of withanolide A, Bioresour Technol., 101(17): 6735-6739 44 Narayanaswany, S (1994) Plant cell and tissue culture, McGraw-Hill Publishing Company, New Dehli 45 Omar, R., Abdullah, M A., Hasan, M A and Marziah, M (2004) Development of growth medium for Centenlla asiatica cell culture via response surface methodology, American Applied Sciences, 1(3): 215-219 46 Pan, Y., Zhang, X., Meng, P., Yu, W., Chen, S., Tang, J., Huang, S and Zou, Y (2010) Tissue culture of medicinal plant Millettia speciosa Champ., Biotechnology Research Institute, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007, China, 06 47 Pierik, R L M (1997) In vitro culture of higher plants Springer Netherlands 48 Rao, S R and Ravishankar, G A (2002) Plant cell cultures: chemical factories of secondary metabolites, Biotechnology Advances, 20: 101-153 49 Roberta, H S (2013) Plant Tissue Culture Techniques and Experiments (Third edition), Elsevier 50 Sheper, T (2001) Advances in biochemical engineering biotechnology plantcells (Vol 72), Springer-Verlag, Berlin Heideberg 51 Staritsky, G (1970) Tissue culture of the oil palm (Elaeis guineensis Jacq) as a tool for its vegetative propagation, Euphytica, 288 - 292 52 Taiz, L and Zeiger, E (2006) Plant physiology, Sinauer Associates, IncPublishers, Massachusetts, 315-344 53 Yin, T., Tu, G Z., Zhang, Q Y., Wang, B., and Zhao, Y Y (2008) Three new phenolic glycosides from the caulis of Millettia speciosa, Published online in Wiley Interscience 54 Thanh, N T., Ket, N V., Yoeup, P.K (2007) Effecting of medium composition on biomass and ginsenoside production in cell suspension culture of Panax vietnamensis Ha et Grushv, VNU Journal of sicenceNatural and Technology, 23: 269-274 55 Villarreal, M L., Arias, C., Feria-Velasco, A., Ramirez, O T., Quintero, R (1997) Cell suspension culture of Solanum chrysotrichum (Schldl)- A plant producing an antifungal spirostanol saponin, Plant Cell Tissueand Organ Culture, 50: 39-44 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 60 56 Huang, W., Wan, C., Luo, Q., Huang, Z and Luo, Q (2014) Genistein - Inhibited Cancer Stem Cell - Like Properties and Reduced Chemoresistance of Gastric Cancer, Int J Mol Sci., 15(3): 3432-43 57 Wink, M (1999) Biochemistry of plant secondary metabolism Annualplant reviews, vol 2, Sheffield Academic Press 58 Xu, C H., Wang, M and Zhang, W J (1990) Effects of Chinese herbs on DNA duplication of hepatocytes in vitro, China J Chin Mater Med, 15(11): 51–53 59 Yu, Y Y., Zhang, L H and Cao, S W (2007) Investigation on free radical scavenging activity of flavonoid extracts from Millettia nitida Benth var hirsutissima Z Wei, Nat Prod Res Dev., 19(5): 741-744 60 Zhong, J J and Yoshida, T (1995) High-density cultivation of Perilla frutescens cell suspensions for anthocyanin production: Effects ofsucrose concentration and inoculum size, Enzyme and MicrobialTechnology,17: 1073-1079 61 Zhao, D., Xing J., Li, M., Lu, D and Zhao, Q (2001) Optimization of growth and jaceosidin production in callus and cell suspension cultures of Saussurea medusa, Plant Cell Tissue and Organ Culture, 67: 227-234 62 Zong, X K., Lai F L., Wang Z N and Wang J R (2009) Studies on chemical constituents of root of Millettia speciosa, Journal of Chinese Medicinal Materials, 32: 520 - 521 63 Zong, X., Lai, F., Wang, Z and Wang, J (2009) Studies on Chemical Constituents of Root of Millettia speciosa, Journal of Chinese Medicinal Materials, 62 (12): 99910021 Tài liệu internet 64 Kim Sa (2012) Săn lùng sâm quý tiến vua, Phóng báo An ninh Thủ Đô, ngày 30/8/2012, Truy cập ngày 20/4/2014 từ http://www.anninhthudo.vn/phong-su/sanlung-sam-quy-tien-vua/462669.antd 65 www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24573253 66 http://www.bioone.org/doi/abs/10.3732/apps.1200345 67 http://en.cnki.com.cn/Article_en/CJFDTOTAL-GXNY201006003.htm 68 http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2095177911000360 69 http://vietnamnet.vn/vn/kinh-te/221026/noi-cu-sam-to-bang cu-san.html 70 http://vi.wikipedia.org Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 61 PHỤ LỤC Thành phần loại môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) DCR (Douglas-fir cotyledon revised medium) LM (Lloyd and McCown) Khoáng đa lượng MS (mg/l) DCR (mg/l) LM (mg/l) NH4NO3 1650,0 400,0 400,0 KNO3 1900,0 340,0 - CaCl2.2H2O 440,0 64.14 96,0 MgSO4.7H2O 370,0 180,7 370,0 KH2PO4 170,0 170,0 170,0 Ca(NO3)2.4H2O - 386,31 556,0 K2SO4 - - 990,0 MnSO4.4H2O 22,3 - - MnSO4.H2O - 22,3 29,43 ZnSO4.7H2O 8,6 8,6 8,6 H3BO3 6,2 6,2 6,2 KI 0,83 0,83 - Na2MoO4.2H2O 0,25 0,25 0,25 CuSO4.5H2O 0,025 0,25 0,25 CoCl2.6H2O 0,025 0,025 - Na2EDTA 37,3 37,3 37,3 FeSO4.7H2O 27,8 27,8 27,8 NiCl2.6H2O - 0,025 - Thiamine HCl (B1) 0,1 1,0 1,0 Nicotinic Acid (B5) 0,5 0,5 0,5 Pyridoxine HCl (B6) 0,5 0,5 0,5 Glyxine 2,0 2,0 2,0 Myo-inositol 100 198 200 Khoáng vi lượng Các hợp chất hữu bổ sung Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 62 Tóm lược số thông tin điều tra Sâm nam núi Dành khu vực núi Dành thuộc xã Liên Chung Việt Lập, huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang Nội dung câu hỏi Người vấn Ông Lư Ông Đông Ông Cẩm Ông Thành giống giống sâm Chỉ có giống Sâm nam núi Dành bố ông ông Được phát Trồng giống, sâm sâm Hơn 10 nhà trồng, không thống kê diện tích Có gốc núi Dành Hơn 10 nhà trồng, không thống kê diện tích, khoảng 100 gốc sâm Không thống kê Mỗi năm cho củ/1 Không thống kê Bán cho Bán cho Bán cho Bán cho Ngâm rượu dùng tươi Ngâm rượu Dùng tươi, ngậm Nhà bác trồng giống? giống, sâm sâm Bác có biết có nhà vùng trồng không? Mỗi nhà có cây, diện tích bao nhiêu?) Bác có biết sản lượng hàng năm? Củ sâm bác bán hay cho? Bác dùng củ sâm tươi hay chế biến? Hơn 10 nhà trồng Không thống kê diện tích Tổng số hoảngk 600 gốc sâm Không thống kê Bác có biết cách nhân giống không? Đổ đất vào phần thân, cho đốt thân rễ tách Gieo hạt không nảy mầm Thời vụ trồng, tỉ lệ nảy mầm hạt? Mùa xuân, tháng 1-2 (âm lịch) Thời gian hoa, đậu quả, thu hạt? Ra hoa: T6-9 Đậu quả: cuối tháng Thu hạt: tháng 12 Bác có biết thời gian thu hoạch củ tốt không? Trên năm, để lâu tốt Đổ đất vào phần thân, cho đốt thân rễ tách Gieo hạt không nảy mầm Mùa xuân, tết, ấm áp trồng Ra hoa: T7 -9 Đậu quả: cuối tháng Thu hạt: tháng 12 Trên năm, để lâu tốt Không biết Ngâm rượu, dùng làm trà Đổ đất vào phần thân, cho đốt thân rễ tách Gieo hạt không nảy mầm Không biết Mùa xuân, tết, ấm áp trồng Không biết Ra hoa: T 6-9 Đậu quả: cuối tháng Thu hạt: tháng 12 Không rõ, nghe bố nói năm củ Trên 10 năm tốt Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 63 Sơ đồ tóm tắt quy trình nhân nhanh tạo củ in vitro Sâm nam núi Dành Hạt Sâm nam núi Dành Tạo nguồn mẫu ban đầu từ hạt (Hạt sau khử trùng gieo môi trường DCR + 20 gram đất núi Dành, pH môi trường =5,5-6,0, nhiệt độ nuôi cấy 25 ± 2oC, cường độ ánh sáng 2500 lux, quang chu kỳ 16 sáng/8 tối) Thời gian nuôi cấy: tuần Tạo củ nuôi cấy lớp mỏng tế bào (Lớp mỏng tế bào cắt theo chiều ngang cấy môi trường DCR; pH=5,5-6,0; 20g/l đất núi Dành; 3,0mg/l αNAA, nhiệt độ nuôi cấy 25 ± 2oC, cường độ ánh sáng 2500 lux, quang chu kỳ 16 sáng/8 tối) Thời gian nuôi cấy: 12 tuần Nhân nhanh chồi (Chồi nhân cấy môi trường DCR; pH=5,5-6,0; 20g/l đất núi Dành; 3,0mg/l BA, nhiệt độ nuôi cấy 25 ± 2oC, cường độ ánh sáng 2500 lux, quang chu kỳ 16 sáng/8 tối) Thời gian nuôi cấy: tuần Tạo hoàn chỉnh (Chồi kích thích rễ môi trường DCR; pH=5,5-6,0; 20g/l đất núi Dành; 3,0mg/l IBA, 15 mg/l αNAA, nhiệt độ nuôi cấy 25 ± 2oC, cường độ ánh sáng 2500 lux, quang chu kỳ 16 sáng/8 tối) Thời gian nuôi cấy: tuần Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 64 Kết xử lý số liệu * Ảnh hưởng môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 9:48:57 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 30 R² 0.22 Adj R² 0.09 CV 51.41 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 3.13 0.78 1.75 0.1699 3.13 0.78 1.75 0.1699 11.17 25 0.45 14.30 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.79470 Error: 0.4467 df: 25 Cong thuc Means n S.E CT1 1.00 0.27 A CT4 1.00 0.27 A CT3 1.17 0.27 A B CT2 1.50 0.27 A B CT5 1.83 0.27 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table_1 : 5/14/2015 - 9:51:19 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable Chieu cao choi Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total N 30 R² 0.04 Adj R² 0.00 CV 44.12 variance table (Partial SS) df MS F p-value 0.20 0.05 0.29 0.8821 0.20 0.05 0.29 0.8821 4.39 25 0.18 4.60 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.49837 Error: 0.1757 df: 25 Cong thuc Means n S.E CT4 0.85 0.17 A CT2 0.87 0.17 A CT1 0.95 0.17 A CT3 1.03 0.17 A CT5 1.05 0.17 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 9:52:56 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So la N 30 R² 0.36 Adj R² 0.26 CV 30.06 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 11.67 2.92 3.59 0.0192 11.67 2.92 3.59 0.0192 20.33 25 0.81 32.00 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=1.07237 Error: 0.8133 df: 25 Cong thuc Means n S.E CT3 2.33 0.37 A CT1 2.67 0.37 A CT4 2.83 0.37 A CT2 3.00 0.37 A CT5 4.17 0.37 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) * Ảnh hưởng độ pH môi trường đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 9:55:23 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 24 R² 0.24 Adj R² 0.13 CV 32.53 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 1.46 0.49 2.16 0.1245 1.46 0.49 2.16 0.1245 4.50 20 0.23 5.96 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.57126 Error: 0.2250 df: 20 Cong thuc Means n S.E CT4 1.17 0.19 A CT1 1.33 0.19 A B CT3 1.50 0.19 A B CT2 1.83 0.19 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 9:56:43 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable Chieu cao choi Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total N 24 R² 0.52 Adj R² 0.45 CV 22.90 variance table (Partial SS) df MS F p-value 1.41 0.47 7.36 0.0016 1.41 0.47 7.36 0.0016 1.28 20 0.06 2.69 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.30448 Error: 0.0639 df: 20 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 66 Cong thuc CT4 CT1 CT2 CT3 Means n 0.82 0.95 1.20 1.45 S.E 0.10 0.10 0.10 0.10 A A B B C C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 9:58:10 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable N R² So la 24 0.48 Adj R² 0.40 CV 32.55 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 8.12 2.71 6.13 0.0039 Cong thuc 8.13 2.71 6.13 0.0039 Error 8.83 20 0.44 Total 16.96 23 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.80037 Error: 0.4417 df: 20 Cong thuc Means n S.E CT4 1.33 0.27 A CT1 1.67 0.27 A B CT3 2.33 0.27 B CT2 2.83 0.27 C C Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) * Ảnh hưởng đất núi Dành đến sinh trưởng phát triển Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 10:00:11 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 12 R² 0.30 Adj R² 0.23 CV 41.83 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS Model Cong thuc Error Total df MS 3.00 3.00 7.00 10 10.00 11 F 3.00 3.00 0.70 p-value 4.29 0.0653 4.29 0.0653 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=1.07629 Error: 0.7000 df: 10 Cong thuc DC CT1 Means n 1.50 2.50 S.E 0.34 0.34 A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:07:00 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable N R² Adj R² CV Chieu cao choi 12 0.53 0.49 46.92 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 67 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS df MS F p-value Model 5.74 5.74 11.46 0.0069 Cong thuc 5.74 5.74 11.46 0.0069 Error 5.01 10 0.50 Total 10.75 11 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.91039 Error: 0.5008 df: 10 Cong thuc Means n S.E DC 0.82 0.29 A CT1 2.20 0.29 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:08:19 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So la N 12 R² 0.18 Adj R² 0.10 CV 63.19 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 3.20 3.20 2.22 0.1669 3.20 3.20 2.22 0.1669 14.42 10 1.44 17.62 11 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=1.54459 Error: 1.4417 df: 10 Cong thuc Means n S.E DC 1.38 0.49 A CT1 2.42 0.49 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) * Ảnh hưởng BA đến khả nhân nhanh chồi Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 10:11:49 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 30 R² 0.19 Adj R² 0.06 CV 42.25 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS Model Cong thuc Error Total df MS 2.20 2.20 9.17 25 11.37 29 F 0.55 0.55 0.37 p-value 1.50 0.2324 1.50 0.2324 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.72002 Error: 0.3667 df: 25 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 68 Cong thuc DC CT1 CT4 CT2 CT3 Means n 1.00 1.33 1.50 1.50 1.83 S.E 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 A A A A B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:13:47 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable Chieu cao choi Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total N 30 R² 0.09 Adj R² 0.00 CV 26.70 variance table (Partial SS) df MS F p-value 0.17 0.04 0.65 0.6338 0.17 0.04 0.65 0.6338 1.61 25 0.06 1.78 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.30160 Error: 0.0643 df: 25 Cong thuc Means n S.E CT1 0.83 0.10 A DC 0.93 0.10 A CT4 0.95 0.10 A CT3 0.97 0.10 A CT2 1.07 0.10 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:15:49 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So la N 30 R² 0.20 Adj R² 0.07 CV 42.41 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 4.87 1.22 1.53 0.2229 4.87 1.22 1.53 0.2229 19.83 25 0.79 24.70 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=1.05910 Error: 0.7933 df: 25 Cong thuc Means n S.E CT1 1.50 0.36 A DC 1.83 0.36 A B CT3 2.17 0.36 A B CT4 2.33 0.36 A B CT2 2.67 0.36 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 69 * Ảnh hưởng αNAA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 10:20:48 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 30 R² 0.32 Adj R² 0.21 CV 31.58 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 1.87 0.47 2.92 0.0415 1.87 0.47 2.92 0.0415 4.00 25 0.16 5.87 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.47563 Error: 0.1600 df: 25 Cong thuc Means n S.E DC 1.00 0.16 A CT4 1.00 0.16 A CT3 1.33 0.16 A B CT1 1.33 0.16 A B CT2 1.67 0.16 B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:22:05 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable Chieu cao choi N 30 R² 0.16 Adj R² 0.03 CV 21.74 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS Model Cong thuc Error Total df 0.20 0.20 1.05 1.25 MS 4 25 29 F 0.05 0.05 0.04 p-value 1.20 0.3352 1.20 0.3352 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.24388 Error: 0.0421 df: 25 Cong thuc CT1 DC CT4 CT3 CT2 Means n 0.80 0.93 0.95 0.98 1.05 S.E 0.08 0.08 0.08 0.08 0.08 A A A A B B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:24:58 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So la N 30 R² 0.19 Adj R² 0.06 CV 28.28 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 70 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 3.00 0.75 1.50 0.2324 3.00 0.75 1.50 0.2324 12.50 25 0.50 15.50 29 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.84080 Error: 0.5000 df: 25 Cong thuc CT3 CT1 DC CT4 CT2 Means n 2.00 2.33 2.50 2.83 2.83 S.E 0.29 0.29 0.29 0.29 0.29 A A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) * Ảnh hưởng αNAA IBA đến hình thành rễ chồi Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 10:26:48 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So choi N 23 R² 0.15 Adj R² 0.01 CV 30.30 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 0.38 0.13 1.08 0.3812 0.38 0.13 1.08 0.3812 2.23 19 0.12 2.61 22 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.42695 Error: 0.1173 df: 19 Cong thuc Means n S.E CT2 1.00 0.15 A CT1 1.00 0.14 A DC 1.20 0.15 A CT3 1.29 0.13 A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:28:24 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable Chieu cao choi Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total N 23 R² 0.34 Adj R² 0.23 CV 43.03 variance table (Partial SS) df MS F p-value 1.29 0.43 3.23 0.0457 1.29 0.43 3.23 0.0457 2.53 19 0.13 3.82 22 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=0.45485 Error: 0.1331 df: 19 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 71 Cong thuc CT1 CT2 DC CT3 Means n 0.55 0.80 0.80 1.17 S.E 0.15 0.16 0.16 0.14 A A A B B B Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) New table : 5/14/2015 - 10:30:00 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So la N 23 R² 0.16 Adj R² 0.03 CV 66.39 Analysis of S.V SS Model Cong thuc Error Total variance table (Partial SS) df MS F p-value 3.44 1.15 1.19 0.3401 3.44 1.15 1.19 0.3401 18.30 19 0.96 21.74 22 Test:Fisher LSD Alpha:=0.05 LSD:=1.22346 Error: 0.9632 df: 19 Cong thuc CT2 DC CT1 CT3 Means n 1.00 1.20 1.50 2.00 S.E 0.44 0.44 0.40 0.37 A A A A Means with a common letter are not significantly different (p > 0.05) * Ảnh hưởng αNAA đến tái sinh tạo củ lớp mỏng tế bào mô Sâm nam núi Dành New table : 5/14/2015 - 10:33:06 AM - [Version : 3/31/2015] Analysis of variance Variable So cu N 24 R² 0.76 Adj R² 0.72 CV 53.40 Analysis of variance table (Partial SS) S.V SS Model Cong thuc Error Total df MS 21.15 21.15 6.82 20 27.98 23 F 7.05 7.05 0.34 p-value 20.67 0.05) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 73 [...]... thiệu về cây Sâm nam núi Dành Hình 1.1 Hoa và quả Sâm nam núi Dành Hình 1.2 Củ Sâm nam núi Dành (Hình ảnh được cung cấp bởi tác giả Trần Đình Dũng, Trung tâm Khoa học Công nghệ và Môi trường huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang) Thông thường, để có thể có được phương pháp nghiên cứu cũng như cách tiếp cận hợp lý nhằm xây dựng được quy trình nhân giống in vitro thì việc tham Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận... Agar: 5,5 g/l + Đất núi Dành: 20,0 g/l Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp BA (mg/l) 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 Page 24 Bốn thí nghiệm trên được thực hiện với nguồn mẫu ban đầu là các đoạn thân chứa mắt ngủ của chồi Sâm nam núi Dành in vitro 2.2.5 Nghiên cứu sự phát sinh hình thái của lớp mỏng tế bào mô lá Sâm nam núi Dành Nguồn mẫu là lá Sâm nam núi Dành in vitro, lá được cắt... Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 23 Thành phần môi trường Công thức Môi trường nền Giá trị pH CT1 DCR 5,0 CT2 + Sucrose: 30,0 g/l 5,5 CT3 + Agar: 5,5 g/l 6,0 CT4 6,5 2.2.3 Nghiên cứu ảnh hưởng của đất núi Dành đến sự sinh trưởng và phát triển của cây Sâm nam núi Dành Sâm nam núi Dành là loại cây dược liệu mới, có tính đặc hữu ở khu vực núi Dành Vì vậy, đề tài tiến hành nghiên cứu. .. gặp tác giả Trần Đình Dũng và đến núi Dành trực tiếp điều tra, tìm hiểu sự tồn tại với những câu chuyện về tác dụng của cây Sâm nam núi Dành tại gia đình ông Lư, ông Đông, ông Cẩm và ông Thành, những gia đình trồng Sâm nam núi Dành có tiếng ở vùng Kết quả điều tra (bảng phụ lục 2) cho thấy, do Sâm nam núi Dành là một giống sâm quý, bị nhiều người săn tìm, lại khó nhân giống ở ngoài tự nhiên nên một thời... khi cây giống cấy mô được trồng trên giá thể là hỗn hợp chất đất và cát ở tỷ lệ (3:1) (Pan et al., 2010) Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 21 Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng, vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu 2.1.1 Đối tượng và vật liệu nghiên cứu * Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của đề tài là cây Sâm nam núi Dành. .. và sơ bộ phân loại thực vật cây Sâm nam núi Dành nhằm mục đích định hướng nghiên cứu cho có hiệu quả hơn 1.1.1 Điều tra cây Sâm nam núi Dành ngoài tự nhiên Sâm nam núi Dành được biết đến qua một số bài báo của tác giả Trần Đình Dũng, Trung tâm Khoa học Công nghệ và Môi trường huyện Tân Yên, tỉnh Bắc Giang, trong đó có bài “Săn lùng sâm quý tiến vua” trên báo điện tử An ninh Thủ Đô ra ngày 30/8/2012,... 2006) 1.2.3 Các bước chính trong nhân giống vô tính in vitro Theo George (1993) quá trình nhân giống vô tính in vitro bao gồm các bước sau: Bước 1: Chọn lọc và chuẩn bị cây mẹ Trước khi tiến hành nhân giống in vitro cần chọn lọc cẩn thận cây mẹ (nguồn mẫu nuôi cấy) Các cây này cần phải sạch bệnh, đặc biệt là sạch vi rút và ở giai đoạn sinh trưởng mạnh Việc trồng các cây mẹ trong điều kiện môi trường... cũng gây ra hiện tượng thủy tinh hóa, cây biến dạng Khả năng ngậm nước của thạch khá cao Nồng độ của thạch dùng trong nuôi cấy thường dao động từ 6 – 12 g/l môi trường 1.2.7 Ứng dụng của nhân giống in vitro trong nhân giống cây thuốc và một số loại cây trồng khác Khi lĩnh vực sản xuất giống cây trồng được thực hiện trên quy mô công nghiệp thì phương pháp nhân giống in vitro ngày càng được khai thác... Vì vậy, đề tài tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của đất núi Dành đến sự sinh trưởng và phát triển của cây Sâm nam núi Dành Công thức thí nghiệm như sau: Thành phần môi trường Công thức CT1 Môi trường nền DCR Đất núi Dành (g/l) 0,0 + Sucrose: 30,0 g/l CT2 20,0 + Agar: 5,5 g/l 2.2.4 Nghiên cứu ảnh hưởng của BA đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm nam núi Dành Nhằm xác định nồng độ BA thích hợp nhất cho sự tạo... Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 22 - Tủ sấy - Nồi hấp vô trùng - Box cấy vô trùng 2.1.2 Địa điểm và thời gian nghiên cứu * Địa điểm nghiên cứu: Viện Sinh học Nông nghiệp – Học viện Nông nghiệp Việt Nam * Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 3 năm 2014 đến tháng 6 năm 2015 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu ảnh hưởng của môi trường nền đến sự sinh trưởng và phát triển của cây Sâm nam