HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM NGUYỄN THU TRANG KHẢO SÁT MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA CHỦNG VI RÚT NHƯỢC ĐỘC PRRS HANVET1.VN Chuyên ngành : THÚ Y Mã số : 60.64.01.01 Người hướng dẫn khoa học:PGS.TS Nguyễn Bá Hiên HÀ NỘI - 2015 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu Các kết quả, số liệu nêu luận văn hoàn toàn trung thực chưa bảo vệ học vị khác Tôi cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, cố gắng thân, nhận giúp đỡ tận tình nhiều cá nhân tập thể Nhân dịp cho phép bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới: PGS.TS Nguyễn Bá Hiên – Nguyên trưởng môn Vi sinh vật – truyền nhiễm, khoa Thú y, trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, thầy trực tiếp hướng dẫn, bảo tận tình cho suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Các thầy cô giáo khoa Thú y, trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Trung tâm nghiên cứu sản xuất sinh phẩm, công ty Hanvet tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, động viên suốt trình thực luận văn tốt nghiệp Hà Nội, Ngày 15 tháng 11năm 2015 Tác giả Nguyễn Thu Trang Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page ii MỤC LỤC Lời cam đoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục bảng vi Danh mục hình vii Danh mục chữ viết tắt viii MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Ý nghĩa đề tài CHƯƠNG ITỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (PRRS) 1.1.1 Mầm bệnh 1.1.2 Dịch tễ học bệnh PRRS 1.1.3 Cơ chế gây bệnh 10 1.1.4 Về nghiên cứu sản xuất vacxin 12 1.2 Tình hình dịch bệnh nghiên cứu việt nam 19 1.2.1 Tình hình dịch bệnh 19 1.2.2 Một số đặc điểm dịch tễ bệnh Tai xanh Việt Nam 19 1.2.3 Nghiên cứu bệnh PRRS Việt Nam 21 CHƯƠNG II NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Nội dung nghiên cứu 23 2.1.1 Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử chủng vi rút nhược độc PRRSHanvet1.VN 2.1.2 23 Nghiên cứu đặc tính sinh học chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 23 Page iii 2.2 Đối tượng, vật liệu sử dụng nghiên cứu 23 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 23 2.2.2 Nguyên vật liệu sử dụng nghiên cứu 23 2.2.3 Các loại môi trường hóa chất sử dụng nghiên cứu 23 2.3 Thời gian, địa điểm nghiên cứu 24 2.4 Bố trí thí nghiệm 24 2.4.1 Đặc tính nhân lên chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN tế bào Marc – 145 2.4.2 24 Tính an toàn khả sinh miễn dịch chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN 25 2.4.3 Tính ổn định chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN 26 2.5 Phương pháp nghiên cứu 26 2.5.1 Phương pháp RT–PCR giải trình tự gen 26 2.5.2 Phương pháp nuôi cấy tế bào Marc – 145 lớp 26 2.5.3 Phương pháp gây nhiễm vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN tế bào Marc – 145 27 2.5.4 Phương pháp chuẩn độ hiệu giá vi rút xác định số TCID50 27 2.5.5 Phương pháp IPMA xác định hiệu giá kháng thể 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 29 Kết nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN 3.1.1 29 Kết khuếch đại vùng gen thuộc genome PRRSV phương pháp RT-PCR 29 3.1.2 Kết giải trình tự gen phân tích gen 30 3.2 Kết kiểm tra đặc tính sinh học chủng vi rút PRRS nhược độcHanvet1.VN 3.2.1 32 Kết nghiên cứu đặc tính nhân lên chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN tế bào Marc – 145 32 3.2.2 Kết kiểm tra tính an toàn vi rút PRRS nhược độc Hanvet1.VN 35 3.2.3 Tính sinh miễn dịch chủng vi rút nhược độc PRRSHanvet 1.VN 37 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page iv 3.2.4 Kết nghiên cứu tính ổn định chủng giống vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN 47 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 52 4.1 Kết luận 52 4.2 Đề nghị 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO 53 PHẦN PHỤ LỤC 56 Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page v DANH MỤC BẢNG Số bảng Tên bảng Trang 1.1 So sánh đặc điểm hệ gen chủngPRRSVtrên giới 1.2 Bộ gen vi rút PRRS thông tin có liên quan 1.3 Sự phát kháng thể đặc hiệu PRRS 13 1.4 Tổng hợp tình hình dịch PRRS năm (2007-2010) 19 2.1 Kiểm tra tính an toàn khả sinh miễn dịch chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.vn 2.2 25 Kiểm tra khả bảo hộ chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.vn công cường độc cho lợn 25 3.1 Kết tiến triển bệnh tích tế bào sau nhiễm vi rút 32 3.2 Kết hiệu giá vi rút thu thời điểm thu hoạch 34 3.3 Tỷ lệ tăng trọng lợn thí nghiệm 36 3.4 Kết phân lập vi rút huyết sau tiêm vi rút PRRS nhược độc chủng Hanvet1.VN cho lợn 3.5 37 Hiệu giá kháng thể lợn sau tiêm vi rút PRRS chủng Hanvet1.VN, xác định IPMA 38 3.6 Kết kiểm tra hiệu giá kháng thể lợn trước công cường độc 40 3.7 Biểu lâm sàng lợn sau công cường độc 41 3.8 Kết phân lập vi rút PRRS máu lợn sau công cường độc 42 3.9 Hàm lượng vi rút PRRS huyết lợn đối chứng sau công cường độc thời điểm lấy máu 43 3.10 Kết kiểm tra vi rút huyết kỹ thuật RT-PCR 44 3.11 Kết theo dõi khả tăng trọng lợn thí nghiệm 46 3.12 Kết hiệu giá vi rút PRRS Hanvet1.VN qua đời cấy chuyển tế bào 3.13 48 Kết kiểm tra độ ổn định tính an toàn vi rút PRRS Hanvet1.VN tiếp truyền liên tục lợn 3.14 49 Kết kiểm tra độ ổn định đặc tính sinh miễn dịch vi rút nhược độc PRRS Hanvet1.VN cấy chuyển qua đời Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 50 Page vi DANH MỤC HÌNH Số hình 1.1 Tên hình Trang Quan hệ nguồn gốc di truyền virus PRRS với vi rút khác Nidovirales họ Picornaviridae 1.2 Vi rút PRRS 1.3 Cấu trúc thông tin di truyền vi rút PRRS 1.4 Đại thực bào bìnhthường (A), Đại thực bào bệnh lý (B) 11 1.5 Đáp ứng miễn dịch lợn sau nhiễm virus PRRS 15 3.1 Đoạn gen thuộc genome vi rút PRRS chủng nhược độc khuếch đại RT-PCR 3.2 30 Đoạn gen thuộc genome vi rút PRRS khuếch đại RTPCR, sau gắn vào plasmid kiểm tra cắt với EcoRI 30 3.3 Cây phả hệ vi rút PRRS Hanvet1.VN 31 3.4 Đường cong sinh trưởng vi rút PRRS Hanvet1.vn 34 3.5 Thân nhiệt nhóm lợn sau miễn dịch 35 3.6 Tỷ lệ tăng trọng nhóm lợn thí nghiệm 36 3.7 Sự hình thành kháng thể lợn sau tiêm vi rút PRRS Hanvet1.VN 39 3.8 Thân nhiệt lợn sau công cường độc 42 3.9a Viêm kẽ phổi, viêm phế quản phổi 47 3.9b Phổi đặc, mặt cắt lồi 47 3.10 Biểu đồ hiệu giá vi rút nhược độc PRRS qua cácđời cấy chuyển 49 3.11 Biểu đồ hiệu giá kháng thể lợn miễn dịch sau cấy chuyển vi rút đời khác Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 50 Page vii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT cDNA Complementary Deoxyribo Nucleotit Acide CPE Cytopathic Effect DNA Deoxyribo Nucleotide Acide ELISA Enzym Linked Immunosorbent Assay FBS Fetal Bovine Serum GMT Geometric Mean Titer IPMA Immuno Peroxydase Monolayer Assay MEM Minimum Essential Media PBS Phosphate Buffered Saline PCR Polymerase Chain Reaction PRRS Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome RNA Ribo Nucleotide Acide RT - PCR Reverse Trancription - Polymerase Chain Reaction TCID50 Tissue Cullture Infect Dose 50 TPB Tryptose Phosphat Broth Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page viii MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Hội chứng rối loạn sinh sản hô hấp lợn (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome – PRRS), hay gọi bệnh Tai xanh, dịch bệnh nguy hiểm Hàng năm PRRS gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi lợn Việt Nam nhiều nước giới Từ năm 2005 đến nay, 25 nước vùng lãnh thổ có dịch bệnh PRRS (Cục Thú Y, 2007) Kể nước có ngành chăn nuôi phát triển mạnh Pháp, Đan Mạch…hàng năm phải chịu thiệt hại hàng trăm triệu USD để giải vấn đề xung quanh PRRS Năm 2006 Trung Quốc 10 tỉnh có dịch PRRS với triệu lợn mắc bệnh 400 ngàn lợn chết, năm 2007 dịch xảy 26/33 tỉnh Trung Quốc (Han et al., 2006) Đây có lẽ nguồn lây nhiễm mầm bệnh gây ổ dịch Việt Nam PRRS ghi nhận lần Việt Nam vào năm 1997, đàn lợn nhập từ Mỹ vào tỉnh phía nam Khi kiểm tra phát 10/51 lợn giống có huyết dương tính với PRRS Với đặc tính lây lan mạnh, môi trường chăn nuôi manh mún vận chuyển lợn bừa bãi, sau 10 năm xuất PRRS trở thành dịch lớn Việt Nam Thực tế từ 2007 đến dịch PRRS phát triển phức tạp Mở đầu vụ dịch xảy ngày 12/3/2007 Hải Dương, sau dịch lây lan khắp nước gây thiệt hại lớn cho ngành chăn nuôi Theo số liệu thống kê Cục Thú Y, năm 2007 Việt Nam có khoảng vạn lợn bị mắc PRRS, khoảng 1,2 vạn lợn chết (Cục Thú Y, 2007) Những năm dịch PRRS không giảm mà diễn biến phức tạp, khó kiểm soát Năm 2010 dịch lại nổ làm hai đợt vào tháng ba tháng mười, nói PRRS ngày trở thành vấn đề thời Trước tình trạng nghiêm trọng dịch PRRS Chính Phủ tiến hành nhiều biện pháp khác để khống chế dịch, quan trọng việc nhập phân phối loại vacxin phòng bệnh Tuy nhiên, vacxin nhập từ nước khác tính kháng nguyên khác nhau, đặc biệt từ nước châu Âu Ngoài ra, giá loại vacxin nhập Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page GAATTGAACT AGGCTTTTGC GCCACACGCC AAGCCATTGA CAACCCCCGC ACGGTCCCAA AAGCCGTCGG CCGGTGATGT CTGGCGACCC AAGACAAGGT ACCCCGAGAA GTATGATGAA TTGACAAACT GACCCGCTGT TCACAACCGG AAAAGACGCG GCTCCTGCGC TCCTAAGTTA TTTTGAGGCC TGATATTAGG GGGCAACCCT CAAAACCCCC TACTCCGGTG GTATGTGCCG TAAACAGTTA TTTGTCCACC CGCCCACGTG TATGGCTGGA CGACGTTCTG CAAGAAACAG TGCGTTGGCC CAACTCGCCC CAGGTGCCTT GTTTGCTGCC GCTGAACTGC CCTGTCGTCT TGCACAGCAC GCAAGACCAG CGACCTTGTG TCTGAATCTT ATCATTCCTA CCTCGCGGCC GGCTGCAATA GCTCGTGGTT GTTCTTGTTG GTGCGGGTAC TTACCACACC TTCTGGTTCT GGTGTTAGAA TCTCACCCCT TGGCATCAGG CCCTACTTGT TATCATCGGC TGATGTCATT GTGCCGGTTC CCCATGGGTT AGCGGCGTAT CCTAGGGGAC CATCATGCCT TGCTCAGTTG CGATACCGTG TGTTGGCAGC GACTAGAGTC ACCCCCACCC TGCCTGGGGG CATTTTTGTA GTTTTATGAG TGTCGACTTT TTACAATGTC TAGAAGAGCT CGTCGACGGC CCAGGGCCTG GGTCGCGGCG ACCTTCACCC GTTGAGCACA TCTGCAGTTC CTCGCCCGCC GAGGCTACTA CGCGGCGACG GAGCGGGTAA AGTGACACTG ACTGATGGGC ACCATTCCAG ACGGAACACG CAAGGCTTTG GGTAAGTGCC ATAAATGGGA TGCGCACAGG TACTGTGGGA CATCGGGCAG ATCGCCCTCG GAAGCTGATC AATCTTCTTT TGCCACGACT GGCGACCCGA ATGGTGCTCA CTAAAGTTTG CTGTATGCCG ATGCTGGGTT GGTTGCAGGA CTCGCCTACC CTCATGGACA GGGATAGCGC TCCATGTGGG TGCGGGGCCC CACTTCCACC TGTAGTGAGT CAAGTTCCGT CTTGACCCAG GGAAATGAAG AAAGAGATCA CCACCCGGTG TACACACCAA AACGTTCCAG CGCATCTTGG TGCAATCACC TTCAAACAAC CAGACCCAAT GTACAGGTTG GCACCCCAAC ATCTTCGACC CTTGCCGGGT GTACCTGTGC GATGAGGACC ATGGACGGGA GAGGTCCATA GATCCTGAGA TTCACCTCCC CAGTGGGAAG GAACTGACTG ACTAAGGAGC GCTTAGTTGT TAGGACCTGT ACCAACATCC CTTCGCTTAT ACGGGCCGGG AAGAGGAAGT CGCCTGAAAT AAGGAGTTTT GAAGCCCGGT GCTCCGTCTT CGTCCGTCCT GTTGTGAGGA TTTTGCCTGG CGCCCGTTCA ACAGGTTTCC CTGTGCGGGA AGAAGAAGAC CGTTGAGTGG GGAAAAACAA TTGCGTCCTG ATGAACTCGC TACTGGTCAC TTACCTCTGT GTTACTTCAA AGGACATGCT AGTCTCCCTC TCCAGACGGA TAATAAATGG ACATGAAGGC GCTGTGCTTG AGTGCGCCCG AAAAACTCAG CGGCTCCGTA AGCATTGTCC GCGAACCCCC ACAAGCCTCC GTAGATACCA TCGACCTACC ACATGGTCGC CTGGGAAGAC CTCACCAGAC CAGGTACAAT CCGGCGGTTG TTGATGTCTT TCCACCCTGT TAAAGACCAT ATAAGGTCCG TCTCGCCCGG TAAAGGTTGG CCAAAATGAC CCATCCCTCT GTTTGAACAA AAAAGTACCA TTAGCACAGA CAGGGATTCA CATCTGGTAG CCGCCAAGCT CCAAAGAACT AGTGTTTAAA TACTGAGACA GAACTTAAAA GGTTGCCAGA AGATGTCTTG AAACACTGGG TGCACTCAGT TGGTCTCCCT ACAGAATACA GCACGCGGCT GGCTACAACC TGATTATCTT TGCTGCATTA AGTTCTTCGC TCGGCCTTCC AACCAAGGAC AAACTGGCAA TAGGACAATA TGTTACCCAG ATTTAAGGAG CGATCGATCC CTGTGCTGAG GCAGTCCGGC GTCAAACACC AAGTGGTCAC CAAGGTTCAA CATGCCAAAC CCCAAAGAAG GCGCCAGCTA AAGTAATGTT TTTAGAGTAT CAAGGACGGC GTCCAATCAT CGCCACTGCC TGTTATAATC CCTAGGAAAA GCGGACTGTG GACTCGCCGC AGACGGTGAT TGTCGCCTCT ACACTGGCTT CATGCTCGAC GCTGCAATTC GTGTCCTGGC GAGGCTTCTC GGGTTTTGAC CTGGAGGTTC Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp AGGCACCATG TGACATTGTT TAGCACCAAG TGTGGCGCGT CCCACCGAAA GAAGAAGAGG GAAATTTTGG CGAGTGGGAG GTGTGGGCAT GAGATTCTTG TTCCGTGGAG GGAGAAACTG CTGCTAGCCG GCGGTAAAAA GTGGCCAGTG CCGGTTGATG ATCTCCGGCG ATTGATGGCA GCGCAAATAA TATAAGTTGT AGGTTTGGAG GCCTGCCTCA ATGCCCTCTG GATTCTAGGC AGAGACCTCT CTCGTGCGGA ACTTACCCTG ATTCAGAGCG ACTGTTACCC CTTGGCACCA GGCTTCATGA CTACAAGCCC ACACCCGCAA GAGCATCTAC GCGGTGACTA ATTTACAGCT CCTCATGGCC CCCCTGATCG TACCACTGGT ACAACCATCA GTCCCTAACC TCTGAATACT GATCCTGAAT TACAGCTTTC GAGGGGAAGA TGTGGTCTCG TGGTGTGGCC GGCACAAGCC ATCATGCATG GGATTAATCT TACGCTAGTA AACGTGTTGC CTTCAACAAG ATGATTAGGG CCTGCCCCCT AAGAACTCCT AGTAAAACAA TCCCATTGCT GGGCAGAATA GCCAAACTCG GTTGCCCTTG CATACTCTCC GTCGTTGACC GTTCTGGAGA CGCAGGATGG GACAAGAATT TGCCTTAGAA ATCACCATTG GTCCCCGCCA CAAGCCCTTG AAAAGAATAA CCAGCGGCTT TAGTCAAATT AGGTTGAGCT GTGGTGTTGT CTGATGCATC CGCTTTGGGA TACAGGCTTG ACCCTGTTAG ACATACCTTA CGCCTAATGC GCTTTGAGTT CTGACTGCCC CCAAGTATGA AGTACCTGTT CTAAGAATTC TCCCTGAAAT CTTGTACCCT ATAACTTCAT AAAAAGCGTT CGGTCCTAGG TTGTCCGCTG CGTCGTACGT AGAGAGGTGG TAGTGATATA TTCTGTTTCT TCTATTCGGA GGGTTGAACA CAGACTCACC GTGACAGGCT ACGCCTCGGC GGTTTGAGGA CTGGCCCACC AGTCCAGAAT ATGTCTGTGT ACCCGGCGGG CTCTAGATGA TGGAGCAGGG CCGTTAGGCG CCGCCTTGCT GCAACAGGTT TCCAGGATGG CTTTGGGGAC CCCGTACCGG TCCTGGATGA CTCTCACTTG ATGTATTTGA TCTGTGATGC Page 64 CATTCAACCA CGTGGAAAAA CGGCGCCATT GCCCACTAAA TGCTATCTTC AGGCACACCC CAACAGAGAA GATTACAGGG CCTGTCAGGT ACTATCGACT GATTCACTCA GTGTATGACC GTCAACCTCG ATCACGGTTG ACAAACTTAT ATGGGCAAGT CCAGTCAAGG ACAGGCAAAG CACACAGGCA CAGTGCACCG CTCAGGCTCT GTCCATGGTC CCTCACCCCC CGCCACATTT AGCTCTTGTT ACTGCAGAGC TGACGAACAG AGGCAATGGA AACACGACCC TACCACAGGG GATGTGGTTA GCTATCACCA ATGTTTGATC CTGATCGTAT GATAAATTCA GTGTGACCTA ACCGAGAGGA CACTGCATTT GGGCAAGACA TTCCCGCGAA TAGACAGAAA GGGCCACAGA // Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 65 Phụ lục Cấu trúc hệ gen chủng nhược độc Hanvet1 Cấu trúc genome chủng Hanvet1 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain Hanvet1, complete genome complete genome 15276 bp RNA linear VRL 04-March-2013 DEFINITION Porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain Hanvet1, complete genome ORGANISM Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Viruses; ssRNA positive-strand viruses, no DNA stage; Nidovirales; Arteriviridae; Arterivirus REFERENCE (bases to 15276) AUTHORS Dinh Duy Khang, Ha Thi Thu, Dong Van Quyen, Dau Huy Tung, Nguyen Thi Hoa, Tran Minh Duc, Vu Thi Hien,Bui Hoang Tien, Nguyen Huu Vu, To Long Thanh TITLE Genomic sequencing reveals mutations potentially related to the over-attenuation of a highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus FEATURES Location/Qualifiers source 15276 /organism="Porcine reproductive and respiratory syndrome virus" /mol_type="genomic RNA" /strain="Hanvet1" /isolation_source="Marc-145" /host="swine" /country="Viet Nam" /collection_date= ??? /note="genotype: II" 185 5'UTR 186 7607 gene /gene="ORF1a" CDS 186 7607 /gene="ORF1a" /codon_start=1 /product="nonstructural proteins ORF1a" /protein_id="AGC08757.1" /db_xref="GI:440495608" /translation= MSGILDRCTC LPRAFPTVEC VYERGCRWYP ADVYDIGRGA TLMTPGSGVS VPGKYLQRRL PNTSPLAGKD NKAEHLKRYS LRLPAALDRN VEISGFDPAC HHDQVCLGKI PPSAADTSFD YYPAQGDEVH LTNTQATSEM RKVRSDCGSP SGSAPVPAPR EISDILNDTN CDASKLGDPA FVMLPRTPAP TPNARVFVAE SPAGACWLSA IVGPVPGVGV VMYVAGGKVS MRVEYQHGCL QVNGLRAVTD EKIFRFGSHK PPAEGNCGWH GACGSAKYVL LDRLAKVMHL ISLCQVIEDC WNVVLPGVEA HRERLNSVLS MAWAAEQVDL VLMGDNVPNG RTVTTTLTHQ PAPVSSSSSL TQEWLSRMWD SVSAESDLTI GQVYCTRCLS IFPIARMTSG YANSLHVSDK WAPRGGNEVK PADTVPEGNC THGPIVIQYF WYGAGKRARK CISAIANRMV KLEGEHWTVS PSSTIPAALA CCHQNKTNRA ANQTTDQPHV KLEEVVLEEY KAWVKSYPRW SEETVGGPLN DEPLDLSVSS SSVKITRPKY RVDMLTWRNT GSVATEDVPR ARSLLPLNLQ NLNFQQRMVR PFPGATHVLT FEPVPKELKL WWRLFDSLPP SVKESWIRHL TRSGATTMVA NSNFETTLPE VIPGMSPTLL ESSDDSNRPV TPEEVAAKID NSCCTLVPPV GLMSTGLGPR TPPPPPPRVQ FPTPSEPMTP QTEYEAFPLA SAQAIIDSGG SAYQAFRILN ILGKIGDTDE VPELGVLGLF VAAEIYRAGQ NLPLPQRPKP VANRLHTSFP EVQYKEIRHA KLVEEPSLPG HHASSAHETR RVRPSDDWAT PLECVQGCCE SPAATTWTVS QYLRGATSLE TQEPLGKDSV PVLPSGLDEL PRRTKSVKSL MSEPVLVPAS PSQNMGILEA PCSGHLQKEK GMFEFLPKMI LLDRGPSAPS Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp YRPEEPLRWT LTPTVLKTLQ EDFCACECAM PHHVVDMSKF NQFGYQTKHG FEDLLRIRVE QATKHEGAGA DEDLVNTIQI HKGGLVSPDA QFYARHRGGD ECLAKLERVS PLTAFSLSNC KDQMEEDLLQ PEGKPVPAPR RRVPKLMTPL RGQEVEGVLS EACLSIMREA LETPPPHPCG KGEPVCDQPA Page 66 KDPRMSPRES DESMIAPPAD TGGVGSFTDL PSSDGVDVDG GGPLRTVKTK AGRLLDQLSC QVFSLVSHLP IFFSHLFKSD SGYSPGDWGF AAFTLFCLFL CYSYPFFGFA PLLGVFSGSS RRVRMGVFGC WLAFAVGLFK PVSDPVGTAC EFDSPECRNV LHSFELLKPW DPVRSLVVGP VGLGLAILGR LLGGARYIWH FLLRLGIVAD CILAGAYVLS QGRCKKCWGS CVRTAPNEIA FNVFPFTRAT RLSLIDLCDR FCAPKGMDPI FLATGWRGCW TGRSPIEQPS EKPIAFAQLD EKRITARTVV TQPYDPNQAV KCLRVLQAGG AMVAEAVPKV VKVSAIPFRA PFFPAGVKVD PECRIVVDPD TFTTALRSGY STANLVLGTG DFAQLNGLKI RQISKPSGGG PHLIAALHVA CSMALHMLAG VYVTAVGSCG TGTNDPWCTN PFAVPGYGPG SLCTSRLCIS QHGLTLPLTA LVAGFGLQDI ALVVLIFVSI GGMAHRLSCK ADMLCILLAI ASYVWVPLTW LLCVFPCWLR WFSLHPLTIL WLVFFLISVN IPSGILAVVL LVSLWLLGRY TNIAGLVTPY DIHHYTSGPR GVAALATAPD GTYLAAVRRA ALTGRTMLFT PSQLGSLLEG AFRTQKPSLN TVNVVGSSMG SGGVFTIDGK IKCVTAAHVL TGNSARVSGV GFNQMLDFDV KGDFAIADCP NWQGVAPKAQ FCEDGWTGRA YWLTSSGVEP GVIGNGFAFC FTACGDSGSP VITEAGELVG VHTGSNKQGG GIVTRPSGQF CNVKPIKLSE LSEFFAGPKV PLGDVKIGSH IIKDTCEVPS DLCALLAAKP ELEGGLSTVQ LLCVFFLLWR MMGHAWTPLV AVGFFILNEI LPAVLVRSVF SFGMFVLSWL TPWSAQVLMI RLLTAALNRN RWSLGFYSLG AVTSFVADLA VTQGHPLQVV MNLSTYAFLP RMMVVTSPVP VIACGVVHLL AIILYLFKYR CLHNVLVGDG VFSSAFFLRY FAEGKLREGV SQSCGMSHES LTGALAMRLT DEDLDFLTKW TDFKCFVSAS NMRNAAGQFI EAAYAKALRI ELAQLVQVDK VRGTMAKLEA FADTVAPQLS PGDIVVALGH TPVGSIFDLK VGSTKHTLQA IETRVLAGSK MTVARVVDPT PAPPPVPVPI PLPPKVLENG PNAWGDEDRL SKKKRRRMEA VGIFVMDGKK YQKFWDKNSG DVFYEEVHIS TDEWECLRTG DPVDFDPETG IQCGHITIED KVYNVFTSPS GRRFLVPANP ENRRAQWEAA KLSVEQALGM MNVDGELTAK ELEKLKRIID KLQGLTKEQC LNC gene[...]... tra tính sinh miễn dịch d) Nghiên cứu tính ổn định của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN Ổn định về tính an toàn của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN trên động vật Ổn định về tính sinh miễn dịch của chủng của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN khi cấy chuyển qua các đời 2.2 Đối tượng, vật liệu sử dụng trong nghiên cứu 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu Chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. vn ở các... Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 22 CHƯƠNG II NỘI DUNG, ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nội dung nghiên cứu 2.1.1 Nghiên cứu đặc tính sinh học phân tử của chủng vi rút nhược độc PRRSHanvet1 .VN 2.1.2 Nghiên cứu đặc tính sinh học của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN a) Đặc tính nhân lên trên tế bào Marc 145 b) Kiểm tra tính an toàn c) Kiểm tra tính. .. cho vi c tiêm vacxin phòng bệnh Trước tình hình trên, Công ty Hanvet đã tập trung nghiên cứu, chế tạo được chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. vn với mong muốn tạo ra vacxin có chất lượng tốt, giá thành hạ Để đảm bảo chất lượng giống vi rút cho quá trình sản xuất vacxin chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Khảo sát một số đặc tính sinh học của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN. ” 1.2 Mục tiêu của. .. theo đường nhỏ mũi Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp - Sau khi công: + Biểu hiện lâm sàng + Thân nhiệt + Vi rút huyết tại các thời điểm 3, 5, 7, 10, 14, 21 ngày sau khi công cường độc + Tăng trọng + Bệnh tích Page 25 2.4.3 Tính ổn định của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN Độ ổn định về đặc tính nhân lên của vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN khi cấy chuyển liên... có đánh giá trung bình Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 24 2.4.2 Tính an toàn và khả năng sinh miễn dịch của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN Bảng 2.1 Kiểm tra tính an toàn và khả năng sinh miễn dịch của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. vn Nhóm TN Liều tiêm (TCID50/lợn) 1 103 2 104 3 105 4 106 5 3x106 Đối chứng Không tiêm Số lợn thí nghiệm/nhóm Chỉ... liều 106 TCID50 vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN, sau 7 ngày lấy máu 04 lợn, mỗi con 1ml tiêm truyền tiếp sang 04 lợn khác Quá trình tiếp truyền được tiến hành lặp lại liên tục 5 lần (Lần 01 Lần 05) Độ ổn định của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN về đặc tính sinh miễn dịch khi cấy chuyển qua các đời Để đánh giá tính ổn định về đặc tính sinh miễn dịch, chúng tôi chọn ra nguyên dịch vi rút thu được... những chủng vi rút PRRS có độc lực cao như ở Trung Quốc và Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 12 Vi t Nam, nó có thể được bảo tồn vì giữ vai trò chủ yếu về độc lực của vi rút PRRS (Tianet al., 2007) Sau khi nghiên cứu về dịch tễ học và phân tích hơn 300 chủng vi rút PRRS có độc lực cao ở Trung Quốc, các tác giả đã kết luận, vi rút PRRS có sự tiến hóa từ chủng CH... các chủng vi rút PRRS Đây cũng chính là tính phức tạp về mặt bệnh nguyên của PRRS 1.1.1.2 Hình thái cấu trúc của PRRSV Vi rút có hình cầu, có vỏ bọc và có các gai nhô ra Kích thước của vi rút vào khoảng 45-80nm, nhân nucleocapside 25-35nm, bề ngoài của vi rút được bao bọc bởi lớp vỏ Sự phát triển của vi rút bị dừng lại khi dùng chloroform hay ether chứng tỏ rằng vỏ của vi rút có chứa lipid Hình 1.2 .Vi. .. Đưa chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN vào sản xuất để tạo ra vacxin Tai Xanh phòng bệnh cho lợn với hiệu lực cao, giá thành hạ 1.3 Ý nghĩa của đề tài - Đề tài hoàn thành sẽ có được một chủng vi rút nhược độc PRRS đủ tiêu chuẩn để sản xuất vacxin Học vi n Nông nghiệp Vi t Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 2 CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Một số hiểu biết về hội chứng rối loạn sinh. .. lên của chủng vi rút nhược độc PRRS Hanvet1. VN trên tế bào Marc – 145 Tiến triển bệnh tích tế bào (CPE) sau khi nhiễm vi rút: Sau khi gây nhiễm vi rút trên tế bào một lớpMarc-145, tiến hành theo dõi các chỉ tiêu: thời gian xuất hiên CPE, tiến triển của CPE tại thời điểm 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ sau gây nhiễm Đường cong sinh trưởng, phát triển của vi rút trên tế bào Tiến hành gây nhiễm vi rút nhược